NLRP3 inflammasomes
NLR family, pyrin domain-containing 3 (NLRP3) inflammasome: MCC950 sodium is a potent and selective small-molecule inhibitor of NLRP3; it blocks canonical and noncanonical NLRP3 activation at nanomolar concentrations (no specific IC₅₀/Ki values provided) and does not inhibit AIM2, NLRC4, or NLRP1 inflammasomes[1]

在纳摩尔剂量下，MCC950 可抑制常规和非经典 NLRP3 激活。 MCC950 选择性阻止 NLRP3 激活，但不阻止 AIM2、NLRC4 或 NLRP1 激活。使用人单核细胞源性巨噬细胞 (HMDM) 和小鼠骨髓源性巨噬细胞 (BMDM)，研究了 MCC950 对 NLRP3 炎性体激活的影响。 MCC950 在 HMDM 中表现出 8.1 nM 的抑制能力，而在 BMDM 中的 IC50 约为 7.5 nM。此外，MCC950 剂量依赖性地减少 IL-1β 分泌，但不减少 TNF-α 分泌。 MCC950 在刺激由 caspase-11 引起的非经典途径时选择性抑制 NLRP3 激活和 IL-1β 释放。即使剂量为 10 μM，MCC950 也不能阻止鼠伤寒沙门氏菌刺激 NLRC4 产生 IL-1β 和 TNF-α。当存在鼠伤寒沙门氏菌血清型时，MCC950 不会阻止 caspase-1 激活或 IL-1β 加工。 MCC950处理对细胞裂解物中pro-caspase-1和pro-IL-1β的产生基本上没有影响[1]。

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抑制骨髓来源巨噬细胞（BMDM）中NLRP3炎性小体激活：MCC950 sodium（1-1000 nM）可剂量依赖性降低LPS+ATP或LPS+尼日利亚菌素（经典NLRP3刺激剂）刺激的BMDM中IL-1β的产生，对TNF-α产生无显著影响。Western blot证实，MCC950 sodium可抑制LPS+ATP处理的BMDM中caspase-1剪切和IL-1β成熟，而格列本脲（非特异性NLRP3抑制剂）抑制作用较弱。对于非经典NLRP3激活（Pam3CSK4+转染LPS），MCC950 sodium可降低C57BL/6 BMDM中IL-1β产生，但对Nlrp3⁻/⁻或casp11⁻/⁻ BMDM无作用，证实其NLRP3特异性。MCC950 sodium不影响BMDM中LDH释放（细胞死亡标志物），表明无细胞毒性[1]
- 对NLRP3炎性小体的选择性：MCC950 sodium对LPS+鼠伤寒沙门氏菌（NLRC4炎性小体激活剂）或LPS+转染Poly(dA:dT)（AIM2炎性小体激活剂）刺激的BMDM中IL-1β产生无抑制作用，而小白菊内酯（非特异性炎性小体抑制剂）和拜耳化合物（AIM2抑制剂）可有效阻断上述模型中IL-1β产生。MCC950 sodium也不抑制TLR信号通路（LPS或Poly(A:U)诱导的TNF-α产生）或NLRP3启动（LPS诱导的BMDM中NLRP3蛋白表达）[1]
- NLRP3抑制机制：MCC950 sodium可阻断LPS+尼日利亚菌素刺激的BMDM中NLRP3依赖的ASC寡聚化（交联实验和Western blot检测），并减少尼日利亚菌素、LeuLeu-Ome或致死毒素处理的ASC-cerulean报告细胞中ASC斑点形成（活细胞成像和流式细胞术检测）。该药物不阻断K⁺外流、Ca²⁺内流（FLIPR TETRA检测BMDM中ATP诱导的Ca²⁺流），也不直接抑制NLRP3与ASC的相互作用（HEK-293T细胞中FLAG-NLRP3/HA-NLRP3和ASC的免疫共沉淀实验）[1]
- 抑制人外周血单个核细胞（PBMC）中NLRP3激活：MCC950 sodium可降低穆克-威尔士综合征（MWS，E313K NLRP3突变）患者PBMC经LPS刺激后的IL-1β产生，Western blot证实其可减少caspase-1剪切和IL-1β成熟[1]

MCC950 减少白细胞介素-1p (IL-1β) 的产生，并减轻多发性硬化症模型实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 的严重程度。 MCC950预处理降低了血清IL-1β和IL-6水平，但没有显着降低TNF-α水平。使用 MCC950 治疗的小鼠 EAE 发作延迟且严重程度降低。第22天处死的小鼠脑单核细胞进行细胞内细胞因子染色和FACS分析，结果显示MCC950处理的小鼠比PBS处理的小鼠具有更多产生IL-17和IFN-γ的CD3+T细胞。频率略有下降。 CD3+ T 细胞的 CD4+ 和 γδ+ 亚群产生 IFN-γ（尤其是 IL-17）的细胞数量也有所减少 [1]。

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改善小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）：经MCC950 sodium处理的EAE小鼠（多发性硬化模型）临床评分显著低于PBS处理对照组。EAE诱导后22天分离小鼠脑单核细胞，流式细胞术显示MCC950 sodium可降低活IL-17⁺/IFN-γ⁺ CD3⁺ T细胞、CD3⁺CD4⁺ T细胞和CD3⁺γδ TCR⁺细胞比例，提示神经炎症被抑制[1]
- 减轻小鼠全身性炎症：预先给予MCC950 sodium的C57BL/6小鼠，腹腔注射LPS后2小时血清IL-1β水平降低（TNF-α和IL-6无变化）（Mann-Whitney检验，P ≤ 0.05，n=3）[1]
- 挽救CAPS小鼠模型新生致死性：Nlrp3A³⁵⁰VneoR×LysMCre小鼠（NLRP3功能获得性突变，CAPS模型）从出生后第9天开始给予MCC950 sodium，其体重和存活率（观察至45天，药物于28天停用）显著高于PBS处理的突变小鼠（第9天体重：非配对双尾t检验，P ≤ 0.005；存活率：MCC950组n=5 vs PBS组n=9）。MCC950 sodium处理的突变小鼠第9天血浆IL-18水平（NLRP3炎性小体产物）降低，停药14天后IL-18水平回升。该药物对NLRP1突变（Nlrp1aQ593P）小鼠无作用，证实NLRP3特异性[1]
- 改善db/db小鼠糖尿病脑病（DEP）：8周龄db/db小鼠（2型糖尿病模型）经MCC950 sodium处理8周后，胰岛素敏感性改善（空腹血糖降低，口服葡萄糖耐量试验[OGTT]和胰岛素耐量试验[ITT]曲线改善，OGTT/ITT中葡萄糖曲线下面积[AUC]降低）。行为学实验显示，MCC950 sodium可逆转db/db小鼠的焦虑样行为（明暗箱实验中亮箱停留时间和穿梭次数增加）、抑郁样行为（强迫游泳实验[FST]和悬尾实验[TST]中不动时间减少）和认知功能障碍（莫里斯水迷宫[MWM]隐藏平台实验中逃避潜伏期缩短，探索实验中穿越目标平台次数和目标象限停留时间增加）。Western blot和caspase-1活性实验证实，MCC950 sodium可降低db/db小鼠海马中NLRP3、ASC、IL-1β蛋白水平，减少caspase-1活性。MCC950 sodium处理的db/db小鼠血浆IL-1β水平降低，胰岛素水平升高；血浆和海马TNF-α水平无显著变化[2]

炎症小体活化测定[1]
将BMDM以5×0 105/ml或1×0 6/ml接种，HMDM以5倍10 5/ml接种，PBMC以2×10 6/ml或5×0 6 g/ml接种于96孔板中。第二天，更换过夜培养基，并用来自大肠杆菌血清型EH100（ra）TLRgrade™的10 ng/ml LPS刺激细胞3小时。取出培养基，用含有二甲基亚砜（1:1000）、MCC950（0.001-10µM）、格列本脲（200µM），孤雌内酯（10µM）或拜耳半胱氨酰白三烯受体拮抗剂1-（5-羧基-2{3-[4-（3-环己基丙氧基）苯基]丙氧基}苯甲酰基）哌啶-4-羧酸（40µM）的无血清培养基（SFM）代替。然后用炎症小体激活剂刺激细胞30分钟：5 mM腺苷5’-三磷酸二钠盐水合物（ATP）（1小时）、用Lipofectamine 2000™（Invitrogen）转染的1µg/ml聚脱氧腺苷酸胸苷酸钠盐（Poly dA:dT）（3-4小时）、200µg/ml MSU（过夜）和10µM尼格瑞金（1小时。细胞也用25µg/ml聚腺苷酸-多ridylic acid刺激（4小时）。对于非典型炎症小体激活细胞，用100 ng/ml Pam3CSK4引发4小时，移除培养基并用含有DMSO或MCC950的SFM代替，并使用0.25%FuGENE®转染2µg/ml LPS 16小时。根据制造商的说明，移除上清液并使用ELISA试剂盒分析。使用Cytox96®非放射性细胞毒性测定法测量LDH释放。[1]

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飞行时间炎症小体评估（TOFIE）测定[1]
使用Lipofectamine 2000™在24孔板中用以下质粒转染HEK293T细胞（4×105/ml）：pEF6人ASC-GFP、pEF6人类C-mCherry或空载体对照。转染后1小时，用DMSO或MCC950（0.1–50µM）处理细胞。将转染后15小时的细胞移除并悬浮在含有1%FCS和2mM EDTA的DPBS中。使用Gallios™流式细胞仪和FlowJo软件对细胞进行分析。在GFP和Cherry表达上对活细胞进行门控（当共转染时）。通过分析GFP脉冲区域的高度和宽度（低宽度：区域和高高度：区域）来确定含有ASC斑点的细胞的百分比。Sester et al。

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细胞/组织裂解物中caspase-1活性实验：将细胞裂解物（BMDM、海马组织）或上清与caspase-1特异性底物（含对硝基苯胺）在37℃孵育特定时间（如1-2小时），通过分光光度法（405 nm）检测对硝基苯胺释放量，以蛋白浓度或对照组吸光度为参照计算caspase-1活性。MCC950 sodium处理可降低NLRP3激活的BMDM和db/db小鼠海马中caspase-1活性，反映其对NLRP3炎性小体介导的caspase-1剪切的抑制作用[1, 2]

蛋白质印迹[1]
通过在50µl 5中直接裂解制备细胞裂解物ィ 莱姆利样品缓冲液。根据制造商的说明，使用StrataClean™树脂浓缩上清液的蛋白质含量。将蛋白质样品在15%SDS-PAGE凝胶上解析，并使用湿转移系统转移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。在室温（RT）下，将膜封闭在TBS-T（50mM Tris/HCL，pH 7.6，150mM NaCl和0.1%（v/v）Tween-20）中的5%（w/v）奶粉中1小时。将膜与稀释在TBS-T中的5%（w/v）奶粉中的一级抗体一起孵育，然后与适当的辣根过氧化物酶（HRP）偶联的二级抗体在TBS-T中稀释在5%（w/v）奶粉中孵育1小时。使用20ィ LumiGLO®化学发光试剂。在重新处理之前，使用Restore™PLUS蛋白质印迹剥离缓冲液剥离膜。[1]
将患有CAPS的个体的PBMC以2×0 106/ml的剂量接种在12孔板中，然后用1µg/ml LPS预处理3小时。用含有MCC950（5–1000 nM）的SFM代替培养基。45分钟后，收集细胞培养上清液和细胞裂解物。使用Novex®Tris-Glycine凝胶系统解析样品。[1]

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荧光成像平板阅读器（FLIPR）Ca2+分析[1]
将BMDM（3×104/孔）在37°C下用不洗涤的钙染料（Molecular Devices）在含有0.1%BSA的生理盐水溶液（PSS；成分NaCl 140 mM，葡萄糖11.5 mM，KCl 5.9 mM，MgCl2 1.4 mM，NaH2PO4 1.2 mM，NaHCO3 5 mM，CaCl2 1.8 mM，HEPES 10 mM）中加载30分钟。然后将细胞转移到FLIPRETTRA荧光板读取器上，并使用冷却的CCD相机测量Ca2+响应，激发为470–495 nM，发射为515–575 nM。调节每个板的相机增益和强度，以产生至少1000个任意荧光单位（AFU）的基线荧光。在添加MCC950之前，采集10个基线荧光读数，然后在添加样品后300秒内每秒读取荧光读数，并在添加PSS或ATP（500µM）后再读取300秒。

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BMDM培养及NLRP3激活实验：从C57BL/6、Nlrp3⁻/⁻、casp11⁻/⁻小鼠分离骨髓细胞，在含M-CSF的完全培养基中培养7天分化为BMDM。BMDM经LPS（100 ng/mL）预刺激3-4小时后，加入经典NLRP3激动剂（ATP 5 mM、尼日利亚菌素10 μM）或非经典激动剂（Pam3CSK4预刺激24小时后转染LPS 1 μg/mL）刺激。MCC950 sodium（1-1000 nM）在激动剂刺激前30分钟加入。刺激6-24小时后，收集细胞上清用于ELISA（IL-1β、TNF-α、IL-1α）和LDH实验；制备细胞裂解物用于Western blot（NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、GAPDH）[1]
- ASC寡聚化实验：BMDM经LPS预刺激后，在MCC950 sodium或小白菊内酯存在下用尼日利亚菌素刺激。用去垢剂裂解细胞，胞质组分与双琥珀酰亚胺辛二酸酯（DSS）室温交联30分钟，交联蛋白经SDS-PAGE分离后，用抗ASC抗体通过Western blot检测ASC寡聚体[1]
- ASC斑点形成实验：将稳定表达ASC-天蓝荧光蛋白融合蛋白的ASC-cerulean报告细胞接种于96孔板，加入MCC950 sodium（0.05-10 μM）预处理30分钟，再用尼日利亚菌素、LeuLeu-Ome或致死毒素刺激2-4小时。采用共聚焦显微镜（×40倍）进行活细胞成像，计数ASC斑点阳性细胞；流式细胞术分析时，收集细胞并定量活细胞中ASC斑点阳性细胞比例[1]
- K⁺外流和Ca²⁺内流实验：K⁺外流实验中，Nlrp3⁻/⁻ BMDM经LPS预刺激后，在MCC950 sodium存在下用尼日利亚菌素、ATP或SiO₂刺激，裂解细胞后通过电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-OES）检测细胞内K⁺浓度。Ca²⁺内流实验中，LPS预刺激的C57BL/6或Ice⁻/⁻ BMDM负载Fluo-4 AM，加入MCC950 sodium后，采用FLIPR TETRA系统实时检测ATP诱导的Ca²⁺内流（激发光488 nm，发射光525 nm）[1]
- HEK-293T细胞转染及免疫共沉淀实验：采用转染试剂将FLAG-NLRP3、HA-NLRP3、ASC或空载体质粒转染至HEK-293T细胞。24小时后，细胞经MCC950 sodium处理4小时，用免疫沉淀缓冲液裂解。用抗FLAG抗体和蛋白G磁珠免疫沉淀FLAG标签蛋白，通过抗ASC抗体Western blot检测共沉淀的ASC。ASC斑点分析实验中，HEK-293T细胞共转染GFP-ASC和NLRP3-mCherry质粒，经MCC950 sodium处理后，流式细胞术检测活细胞中ASC斑点阳性细胞比例[1]
- 人PBMC实验：通过密度梯度离心从穆克-威尔士综合征（E313K突变）患者分离PBMC，经LPS（1 μg/mL）预刺激3小时后，加入MCC950 sodium预处理30分钟，继续培养24小时。收集细胞上清和裂解物，Western blot检测caspase-1剪切和IL-1β成熟[1]

体内LPS攻击[1]
C57BL/6小鼠腹腔注射50 mg/kg MCC950或载体对照（DMSO/PBS），1小时后腹腔注射10 mg/kg LPS大肠杆菌O55:B5或PBS。2小时后处死小鼠，采用ELISA法检测血清中IL-1β、TNF-α和IL-6的水平。[1]

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EAE的诱导和评估[1]
C57BL/6小鼠皮下注射150 µg MOG肽35-55（GenScript），该肽乳化于含有4 mg/ml（0.4 mg/只）热灭活结核分枝杆菌（Chondrex）的完全弗氏佐剂（CFA）中。小鼠于第0天和第2天腹腔注射500 ng百日咳毒素（PT：百日咳杆菌）。在疾病诱导时、第0天、第1天和第2天以及之后每2天腹腔注射MCC950（10 mg/kg）。对照组小鼠在相同时间点注射载体（PBS）。每日观察小鼠的临床症状（非盲法）。疾病严重程度评分如下：无临床症状，0分；尾巴无力，1分；共济失调步态，2分；后肢无力，3分；后肢瘫痪，4分；四肢瘫痪，5分。实验已获得爱尔兰药品管理局的许可（BI00/2412）和都柏林圣三一学院生物资源伦理委员会的批准。[1]

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EAE 的 FACS 分析[1]
免疫后第 22 天，将灌注 EAE 小鼠的全脑组织匀浆后，经 Percoll 梯度离心分离，得到单核细胞。将单核细胞 (MNC) (2 × 10⁶/ml) 在布雷菲德菌素 A (5 µg/ml) 存在下，用 PMA (10 ng/ml) 和离子霉素 (1 µg/ml) 刺激 4 小时。用 PBS 洗涤细胞，并重悬于 50 µL PBS 中，加入 1:1000 的 LIVE/DEAD® Fixable Aqua 死细胞染色试剂盒，孵育 20 分钟。加入 CD3 (145-2c11) (0.5 µl/10⁶ 个细胞)、CD4 (RM4-5) (0.5 µl/10⁶ 个细胞) 和 γδ TCR (GL3) (1 µl/10⁶ 个细胞) (eBioscience) 的表面染色剂，细胞继续孵育 20 分钟。然后用 2% 多聚甲醛固定细胞，并用 PBS 洗涤两次，之后在透化缓冲液（0.2% 皂苷 PBS + 1% FBS）中进行 IL-17 或 IFN-γ 的胞内染色。使用 BD LSRFortessa™ 流式细胞仪进行 MNC 的流式细胞术分析，并使用 FlowJo 软件进行数据分析。首先对 MNC 进行设门，筛选出活的 CD3⁺ T 细胞，然后根据 CD4 表达、γδ TCR 表达或细胞因子产生情况进行设门。[1]

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NLRP3 和 NLRP1 激活突变小鼠[1]
小鼠已回交至 C57BL/6 至少 10 次。 Nlrp3A350VneoR小鼠由美国加州大学圣地亚哥分校的Hal M. Hoffman提供，并与LysMCre小鼠（B6.129P2-Lyz2tm1(cre)Ifo/J）杂交。从出生后第4天开始，每隔一天腹腔注射MCC950（20 mg/kg）。NLRP1激活突变小鼠（Nlrp1aQ593P）的构建方法如前所述，在C57BL/6背景下进行，并每隔一天腹腔注射MCC950（20 mg/kg），持续9天。在指定时间点采集血液，用于通过ELISA分析血浆细胞因子。IL-18 ELISA的检测方法参照Westwell-Roper等人的描述。所有实验均在AEC项目2013.011下进行，并已获得沃尔特和伊丽莎·霍尔医学研究所动物伦理委员会的批准。研究.

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小鼠EAE诱导和治疗：将MOG₃₅₋₅₅肽乳化于弗氏完全佐剂(FCA)中，并添加结核分枝杆菌，于免疫后第0天和第2天腹腔注射百日咳毒素(200 ng)以诱导EAE。将MCC950钠溶于PBS中，从免疫当天开始，每日一次腹腔注射特定剂量（未详细说明）的MCC950钠。连续22天每日记录临床评分（0-5分制，基于麻痹严重程度）。第22天处死小鼠，分离脑单核细胞，进行流式细胞术检测IL-17/IFN-γ分泌型T细胞[1]
- LPS诱导的小鼠全身炎症：C57BL/6小鼠在腹腔注射LPS（10 mg/kg）前1小时预先注射MCC950钠（腹腔注射，剂量未详细说明）或载体（PBS）。LPS注射后2小时采集血样，采用ELISA法检测血清IL-1β、TNF-α和IL-6水平（每组n=3）[1]
- CAPS小鼠模型治疗：Nlrp3A³⁵⁰VneoR × LysMCre小鼠（NLRP3功能获得性突变体）及其野生型（WT）同窝小鼠，从出生后第9天开始分别注射MCC950钠（溶于PBS，腹腔注射，剂量未详细说明）或PBS。在第9天测量体重，并监测存活情况至第45天（第28天停用MCC950）。停药后第9天和第14天，采用ELISA法检测血浆IL-18水平（每组n=3-6）。NLRP1突变体（Nlrp1aQ593P）小鼠作为对照，分别接受MCC950钠或PBS处理[1]
- db/db小鼠糖尿病脑病（DEP）模型：将8周龄雄性db/db小鼠及其同窝db/m小鼠随机分为三组：db/m + 载体组、db/db + 载体组和db/db + MCC950钠组。MCC950钠溶于PBS，以10 mg/kg的剂量腹腔注射，每日一次，持续8周；载体组注射PBS。每周测量小鼠体重和空腹血糖。口服葡萄糖耐量试验（OGTT）：小鼠禁食12小时后，通过灌胃给予葡萄糖（2 g/kg），并在 0、30、60、90 和 120 分钟时测量血糖。胰岛素耐量试验 (ITT)：小鼠禁食 4 小时后，腹腔注射胰岛素（0.75 U/kg），并在 0、15、30、60 和 90 分钟时测量血糖。治疗 8 周后进行行为学测试（明暗箱、强迫游泳试验、悬尾试验、莫里斯水迷宫）。行为学测试后，处死小鼠，收集海马组织进行蛋白质印迹分析（NLRP3、ASC、IL-1β）和 caspase-1 活性测定；收集血浆进行 ELISA 检测（胰岛素、IL-1β、TNF-α）（每组 n=3-8）[2]

[1]. A small-molecule inhibitor of the NLRP3 inflammasome for the treatment of inflammatory diseases. Nat Med. 2015 Mar;21(3):248-55.

[2]. Inhibiting the NLRP3 Inflammasome Activation with MCC950 Ameliorates Diabetic Encephalopathy in db/db Mice. Molecules. 2018 Feb 27;23(3). pii: E522.

NOD样受体（NLR）家族的含吡啶结构域蛋白3（NLRP3）炎症小体是炎症过程的组成部分，其异常激活在遗传性疾病（如冷吡啶相关周期性综合征（CAPS））和复杂疾病（如多发性硬化症、2型糖尿病、阿尔茨海默病和动脉粥样硬化）中具有致病性。我们描述了MCC950的研发，MCC950是一种高效、选择性的小分子NLRP3抑制剂。MCC950在纳摩尔浓度下即可阻断经典和非经典NLRP3的激活。MCC950特异性抑制NLRP3的激活，但不抑制AIM2、NLRC4或NLRP1炎症小体的激活。MCC950在体内可降低白细胞介素-1β（IL-1β）的产生，并减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE，一种多发性硬化症的疾病模型）的严重程度。此外，MCC950治疗挽救了CAPS小鼠模型的新生儿死亡率，并且对Muckle-Wells综合征患者的离体样本也有效。因此，MCC950有望成为NLRP3相关综合征（包括自身炎症性疾病和自身免疫性疾病）的潜在治疗药物，并可作为进一步研究NLRP3炎症小体在人类健康和疾病中作用的工具。[1]

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糖尿病与认知功能障碍和神经精神疾病的高风险相关，这些疾病症状被称为糖尿病脑病（DEP）。炎症参与了DEP的发生发展。促炎细胞因子白细胞介素（IL）-1β的裂解和成熟受NLRP3炎症小体的调控。肥胖和2型糖尿病db/db小鼠表现出焦虑和抑郁样行为以及与海马炎症相关的认知障碍。本研究旨在探讨NLRP3炎症小体在糖尿病性抑郁（DEP）中的作用。结果显示，糖尿病db/db小鼠海马中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、caspase-1等炎症小体组分以及IL-1β的表达水平均高于非糖尿病db/m小鼠。NLRP3炎症小体抑制剂MCC950治疗db/db小鼠可改善其焦虑和抑郁样行为以及认知功能障碍，并逆转海马中NLRP3、ASC和IL-1β表达水平及caspase-1活性的升高。此外，MCC950治疗还显著提高了db/db小鼠的胰岛素敏感性。这些结果表明，抑制 NLRP3 炎症小体的激活可能是一种潜在的 DEP 治疗方法。[2]

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MCC950 钠（化学名称：N-(1,2,3,5,6,7-六氢-S-茚并[n-茚]-4-基氨基甲酰基)-4-(2-羟基-2-丙酰基)-2-呋喃磺酰胺钠盐）是一种强效、选择性的小分子 NLRP3 炎症小体抑制剂[1, 2]
- NLRP3 炎症小体是炎症反应的关键介质，其异常激活与冷吡啉相关周期性综合征 (CAPS)、多发性硬化症、2 型糖尿病、阿尔茨海默病和动脉粥样硬化有关[1]
- MCC950 钠 通过阻断 ASC 寡聚化来抑制 NLRP3 炎症小体的激活（ MCC950钠在NLRP3组装的关键步骤中发挥作用，且不影响上游事件（K⁺外流、Ca²⁺内流、NLRP3启动或TLR信号传导）[1]
- MCC950钠在NLRP3相关疾病的临床前模型中具有活性：它能减轻EAE（多发性硬化症模型），挽救CAPS小鼠的新生儿死亡率，并通过减少海马NLRP3激活和神经炎症来改善db/db小鼠的糖尿病脑病[1, 2]
- MCC950钠对Muckle-Wells综合征（CAPS的一种亚型）患者的离体样本有效，表明其在人类NLRP3相关自身炎症和自身免疫性疾病中具有潜在的临床应用价值[1]

C20H23N2O5S.NA

426.46

426.122

C, 56.33; H, 5.44; N, 6.57; Na, 5.39; O, 18.76; S, 7.52

256373-96-3

MCC950;210826-40-7

91826093

Off-white to yellow solid

4.977

119.85

2

6

4

29

690

0

S(C1=C([H])C(=C([H])O1)C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])O[H])([N-]C(N([H])C1=C2C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C2=C([H])C2C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C=21)=O)(=O)=O.[Na+]

LFQQNXFKPNZRFT-UHFFFAOYSA-M

InChI=1S/C20H24N2O5S.Na/c1-20(2,24)14-10-17(27-11-14)28(25,26)22-19(23)21-18-15-7-3-5-12(15)9-13-6-4-8-16(13)18;/h9-11,24H,3-8H2,1-2H3,(H2,21,22,23);/q;+1/p-1

sodium ((1,2,3,5,6,7-hexahydro-s-indacen-4-yl)carbamoyl)((4-(2-hydroxypropan-2-yl)furan-2-yl)sulfonyl)amide

CP-45677; CP45677; CP 45677; 256373-96-3; MCC950 sodium; CRID3 sodium salt; CP-456773 sodium; MCC950 (sodium); MCC950 sodium salt; CP-456773 sodium salt; MCC-950 sodium salt; MCC950; MCC 950; MCC-950; CRID-3; CRID3; CRID 3; CP-456773 sodium

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (11.72 mM) (饱和度未知) in 5%DMSO 95%PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。<

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.86 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: 2％DMSO 98％PBS

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配方 6 中的溶解度: 6.25 mg/mL (14.66 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。