MCC950

别名: CP-45677; CP45677; CP 45677; MCC950; MCC 950; MCC-950; CRID-3; CRID3; CRID 3; CP-456773
目录号: V3786 纯度: ≥98%
MCC950(也称为 MCC-950、CP-456773 或 CRID3)是一种有效的、选择性的 NLRP3 小分子抑制剂,具有治疗炎症性疾病和糖尿病脑病 (DEP) 的潜力。
MCC950 CAS号: 210826-40-7
产品类别: NLR
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
Other Sizes

Other Forms of MCC950:

  • MCC950 sodium
点击了解更多
InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
纯度/质量控制文件

纯度: ≥98%

产品描述
MCC950(也称为 MCC-950、CP-456773 或 CRID3)是一种有效的、选择性的 NLRP3 小分子抑制剂,具有治疗炎症性疾病和糖尿病脑病 (DEP) 的潜力。 MCC950 在纳摩尔浓度下阻断典型和非典型 NLRP3 激活。 MCC950 特异性抑制 NLRP3 的激活,但不抑制 AIM2、NLRC4 或 NLRP1 炎症小体的激活。 MCC950 减少体内白细胞介素 1β (IL-1β) 的产生,并减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)(一种多发性硬化症疾病模型)的严重程度。此外,MCC950 治疗可挽救 CAPS 小鼠模型中的新生儿死亡率,并且在 Muckle-Wells 综合征个体的离体样本中具有活性。因此,MCC950 是治疗 NLRP3 相关综合征(包括自身炎症和自身免疫性疾病)的潜在疗法,也是进一步研究 NLRP3 炎症小体在人类健康和疾病中的作用的工具。此外,用 MCC950 抑制 NLRP3 炎症小体激活可能会改善 db/db 小鼠的糖尿病脑病 (DEP)。
生物活性&实验参考方法
靶点
NLRP3
体外研究 (In Vitro)
在纳摩尔剂量下,MCC950 可防止传统和非规范的 NLRP3 激活。 MCC950 不会特异性抑制 AIM2、NLRC4 和 NLRP1 的激活,而 NLRP3 则会被抑制。使用小鼠骨髓源性巨噬细胞 (BMDM) 和人单核细胞源性巨噬细胞 (HMDM),研究了 MCC950 对 NLRP3 炎性体激活的影响。 MCC950 在 BMDM 中表现出约 7.5 nM 的抑制能力,在 HMDM 中表现出约 8.1 nM 的抑制能力。此外,MCC950 以剂量依赖性方式减少 IL-1β 分泌,但不减少 TNF-α 分泌。 MCC950 首先刺激非经典途径,然后选择性抑制 caspase-11 介导的 NLRP3 激活和 IL-1β 释放。即使剂量为 10 µM,MCC950 也无法抑制鼠伤寒沙门氏菌诱导的 NLRC4 刺激的 IL-1β 和 TNF-α 产生。 MCC950 对鼠伤寒沙门氏菌响应的 IL-1β 或 caspase-1 激活过程没有影响。 MCC950 处理不会对细胞裂解物中的 pro-caspase-1 和 pro-IL-1β 产生显着影响 [1]。
体内研究 (In Vivo)
MCC950 可减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)(一种多发性硬化症疾病模型)的严重程度,并减少白介素-1p (IL-1β) 的产生。 MCC950 预处理可降低 IL-1β 和 IL-6 的血清浓度,但不会显着降低 TNF-α 水平。 MCC950 治疗可减轻小鼠 EAE 的严重程度并推迟其发展。将 MCC950 处理的动物与 PBS 处理的小鼠进行比较时,第 22 天处死小鼠的脑单核细胞的细胞内细胞因子标记和 FACS 分析显示,产生 IL-17 和 IFN-γ 的 CD3+ T 细胞的频率略低。产生 IFN-γ 的 CD3+ T 细胞的 CD4+ 和 γδ+ 亚群数量减少,特别是产生 IL-17 的细胞[1]。
酶活实验
炎症小体活化测定[1]
将BMDM以5×0 105/ml或1×0 6/ml接种,HMDM以5倍10 5/ml接种,PBMC以2×10 6/ml或5×0 6 g/ml接种于96孔板中。第二天,更换过夜培养基,并用来自大肠杆菌血清型EH100(ra)TLRgrade™的10 ng/ml LPS刺激细胞3小时。取出培养基,用含有二甲基亚砜(1:1000)、MCC950(0.001-10µM)、格列本脲(200µM),孤雌内酯(10µM)或拜耳半胱氨酰白三烯受体拮抗剂1-(5-羧基-2{3-[4-(3-环己基丙氧基)苯基]丙氧基}苯甲酰基)哌啶-4-羧酸(40µM)的无血清培养基(SFM)代替。然后用炎症小体激活剂刺激细胞30分钟:5 mM腺苷5’-三磷酸二钠盐水合物(ATP)(1小时)、用Lipofectamine 2000™(Invitrogen)转染的1µg/ml聚脱氧腺苷酸胸苷酸钠盐(Poly dA:dT)(3-4小时)、200µg/ml MSU(过夜)和10µM尼格瑞金(1小时。细胞也用25µg/ml聚腺苷酸-多ridylic acid刺激(4小时)。对于非典型炎症小体激活细胞,用100 ng/ml Pam3CSK4引发4小时,移除培养基并用含有DMSO或MCC950的SFM代替,并使用0.25%FuGENE®转染2µg/ml LPS 16小时。根据制造商的说明,移除上清液并使用ELISA试剂盒分析。使用Cytox96®非放射性细胞毒性测定法测量LDH释放。[1]

飞行时间炎症小体评估(TOFIE)测定[1]
使用Lipofectamine 2000™在24孔板中用以下质粒转染HEK293T细胞(4×105/ml):pEF6人ASC-GFP、pEF6人类C-mCherry或空载体对照。转染后1小时,用DMSO或MCC950(0.1–50µM)处理细胞。将转染后15小时的细胞移除并悬浮在含有1%FCS和2mM EDTA的DPBS中。使用Gallios™流式细胞仪和FlowJo软件对细胞进行分析。在GFP和Cherry表达上对活细胞进行门控(当共转染时)。通过分析GFP脉冲区域的高度和宽度(低宽度:区域和高高度:区域)来确定含有ASC斑点的细胞的百分比。Sester et al。
细胞实验
蛋白质印迹[1]
通过在50µl 5中直接裂解制备细胞裂解物ィ 莱姆利样品缓冲液。根据制造商的说明,使用StrataClean™树脂浓缩上清液的蛋白质含量。将蛋白质样品在15%SDS-PAGE凝胶上解析,并使用湿转移系统转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上。在室温(RT)下,将膜封闭在TBS-T(50mM Tris/HCL,pH 7.6,150mM NaCl和0.1%(v/v)Tween-20)中的5%(w/v)奶粉中1小时。将膜与稀释在TBS-T中的5%(w/v)奶粉中的一级抗体一起孵育,然后与适当的辣根过氧化物酶(HRP)偶联的二级抗体在TBS-T中稀释在5%(w/v)奶粉中孵育1小时。使用20ィ LumiGLO®化学发光试剂。在重新处理之前,使用Restore™PLUS蛋白质印迹剥离缓冲液剥离膜。[1]
将患有CAPS的个体的PBMC以2×0 106/ml的剂量接种在12孔板中,然后用1µg/ml LPS预处理3小时。用含有MCC950(5–1000 nM)的SFM代替培养基。45分钟后,收集细胞培养上清液和细胞裂解物。使用Novex®Tris-Glycine凝胶系统解析样品。[1]

荧光成像平板阅读器(FLIPR)Ca2+分析[1]
将BMDM(3×104/孔)在37°C下用不洗涤的钙染料(Molecular Devices)在含有0.1%BSA的生理盐水溶液(PSS;成分NaCl 140 mM,葡萄糖11.5 mM,KCl 5.9 mM,MgCl2 1.4 mM,NaH2PO4 1.2 mM,NaHCO3 5 mM,CaCl2 1.8 mM,HEPES 10 mM)中加载30分钟。然后将细胞转移到FLIPRETTRA荧光板读取器上,并使用冷却的CCD相机测量Ca2+响应,激发为470–495 nM,发射为515–575 nM。调节每个板的相机增益和强度,以产生至少1000个任意荧光单位(AFU)的基线荧光。在添加MCC950之前,采集10个基线荧光读数,然后在添加样品后300秒内每秒读取荧光读数,并在添加PSS或ATP(500µM)后再读取300秒。
动物实验
In vivo LPS challenge[1]
C57BL/6 mice were injected intraperitoneally (i.p.) with 50 mg/kg MCC950 or vehicle control (DMSO/PBS) 1 h h before i.p. injection of 10 mg/kg LPS Escherichia coli 055:B5 or PBS. After for 2 h mice were sacrificed and serum levels of IL-1β, TNF-α and IL-6 were measured by ELISA.[1]

Induction and Assessment of EAE[1]
C57BL/6 mice were immunized subcutaneously with 150 µg of MOG peptide 35–55 (GenScript) emulsified in CFA containing 4 mg/ml (0.4.mg/mouse) of heat-killed MTB (Chondrex). Mice were injected i.p. with 500 ng pertussis toxin (PT: kaketsuken) on days 0 and 2. MCC950 was administered i.p. to mice (10 mg/kg) at induction of the disease, day 0, 1 and 2 and every 2 days thereafter. Control mice were administered vehicle (PBS) at the same time points. Mice were observed for clinical signs of disease daily (unblinded). Disease severity was scored as follows: no clinical signs, 0; limp tail, 1; ataxic gait, 2; hind limb weakness, 3; hind limb paralysis, 4; and tetra paralysis, 5., Experiments were performed under license (BI00/2412) from The Irish Medicine Board and with approval from the Trinity College Dublin BioResources Ethics Committee.[1]

FACS analysis of EAE[1]
On day 22 post immunization mononuclear cells were isolated from whole brains of perfused mice with EAE, following homogenisation and centrifugation on a Percoll gradient. Mononuclear cells (MNC) (2 × 106/ml) were stimulated for 4 h with PMA (10 ng/ml) and ionomycin (1 µg/ml) in the presence of brefeldin A (5 µg/ml). Cells were washed in PBS and re-suspended in 50 µL PBS with 1:1,000 LIVE/DEAD® Fixable Aqua Dead Cell Stain kit for 20 min. Surface stains for CD3 (145-2c11) (0.5 µl/106 cells), CD4 (RM4-5) (0.5 µl/106 cells) and γδ TCR (GL3) (1 µl/106 cells) (eBioscience) were added and cells were incubated for a further 20 mins. Cells were then fixed with 2% paraformaldehyde and washed in PBS twice, before being intracellularly stained for IL-17 or IFN-γ in permeabilization buffer (0.2% saponin in PBS + 1% FBS). Flow cytometric analysis of MNC was performed using a BD LSRFortessa™ and analysed with FlowJo software. MNC were first gated on live CD3+ T cells followed by CD4 expression, γδ TCR expression or cytokine production.[1]

NLRP3 and NLRP1 activating mutation mice[1]
Mice were backcrossed to C57BL/6 at least ten times. Nlrp3A350VneoR mice were provided by Hal M. Hoffman, The University of California, San Diego, U.S.A. and crossed with LysMCre mice (B6.129P2-Lyz2tm1(cre)Ifo/J. MCC950 was administered i.p. (20 mg/kg) every second day starting at day 4 after birth. Mice with an activating mutation in NLRP1, Nlrp1aQ593P were generated on a C57BL/6 background as described previously and administered MCC950 i.p. (20 mg/kg) every second day for 9 days. Blood was collected at the timepoints indicated for analysis of plasma cytokines by ELISA. IL-18 ELISA was performed as described by Westwell-Roper et al. Experiments were performed under AEC Project 2013.011 and were approved by the Animal Ethics Committee of The Walter and Eliza Hall Institute of Medical Research.
参考文献
[1]. Coll RC, et al. A small-molecule inhibitor of the NLRP3 inflammasome for the treatment of inflammatory diseases. Nat Med. 2015 Mar;21(3):248-55
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C20H24N2O5S
分子量
404.48
精确质量
404.14059
CAS号
210826-40-7
相关CAS号
MCC950 sodium;256373-96-3
外观&性状
White to light yellow solid
LogP
3.2
tPSA
106Ų
SMILES
O=S(C1=CC(C(C)(O)C)=CO1)([N-]C(NC2=C3CCCC3=CC4=C2CCC4)=O)=O
InChi Key
LFQQNXFKPNZRFT-UHFFFAOYSA-M
InChi Code
InChI=1S/C20H24N2O5S.Na/c1-20(2,24)14-10-17(27-11-14)28(25,26)22-19(23)21-18-15-7-3-5-12(15)9-13-6-4-8-16(13)18;/h9-11,24H,3-8H2,1-2H3,(H2,21,22,23);/q;+1/p-1
化学名
sodium;1,2,3,5,6,7-hexahydro-s-indacen-4-ylcarbamoyl-[4-(2-hydroxypropan-2-yl)furan-2-yl]sulfonylazanide
别名
CP-45677; CP45677; CP 45677; MCC950; MCC 950; MCC-950; CRID-3; CRID3; CRID 3; CP-456773
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: >25 mg/mL
Water:N/A
Ethanol:N/A
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.18 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.4723 mL 12.3616 mL 24.7231 mL
5 mM 0.4945 mL 2.4723 mL 4.9446 mL
10 mM 0.2472 mL 1.2362 mL 2.4723 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
+
+

计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片
  • MCC950
    MCC950 blocks NLRP3 dependent ASC oligomerization2015 Mar;21(3):248-55.

  • MCC950
    MCC950 does not inhibit NLRC4, AIM2, TLR signalling or priming of NLRP32015 Mar;21(3):248-55.

  • MCC950
    MCC950 does not block K+ efflux, Ca2+ flux or direct NLRP3 and ASC interactions2015 Mar;21(3):248-55.
相关产品
联系我们