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MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)

别名: MI2 ; Menin-MLL inhibitor 2;MI 2 ; Menin MLL inhibitor 2;MI-2 ; Menin-MLL inhibitor-2; 4-[4-(4,5-二氢-5,5-二甲基-2-噻唑基)-1-哌嗪基]-6-丙基噻吩并[2,3-D]嘧啶;MI-2
目录号: V0396 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
MI-2（MI2，Menin-MLL 抑制剂）是一种新型、有效、选择性的 menin-MLL 相互作用抑制剂，具有抗肿瘤活性。
MI-2 (Menin-MLL Inhibitor) CAS号: 1271738-62-5
产品类别: Epigenetic Reader Domain
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
2mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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产品说明书
产品描述
MI-2（MI2，Menin-MLL 抑制剂）是一种新型、有效、选择性的 menin-MLL 相互作用抑制剂，具有抗肿瘤活性。它抑制 menin-MLL 相互作用，IC50 为 446 nM。 MI-2 通过与野生型 menin 结合发挥作用，但不结合 M278K 和 Y323K menin 突变体。在转染Flag-MLL-AF9的HEK293细胞中，MI-2有效抑制menin-MLL-AF9相互作用，而不影响menin和MLL-AF9的表达水平。
生物活性&实验参考方法
靶点
Interaction between Menin (encoded by MEN1 gene) and Mixed Lineage Leukemia (MLL, encoded by KMT2A gene) protein (Ki: ~64 nM, determined via Surface Plasmon Resonance (SPR) binding assay; IC50: ~125 nM for inhibition of Menin-MLL complex formation, measured via Homogeneous Time-Resolved Fluorescence (HTRF) assay). No significant binding to other related proteins (e.g., Menin-MLL5, Menin-JUND) at concentrations up to 10 μM, confirming selective targeting of Menin-MLL interaction [1]
体外研究 (In Vitro)
menin-MLL 抑制剂 MI-2 的 GI50 值约为 5 μM，非常有效地抑制 MLL-AF9 和 MLL-ENL 转导的 BMC 的增殖。通过评估 R1 处的各种疏水基团，开发了几种 IC50 值在纳摩尔范围内的化合物。这些化合物包括 MI-2 (IC50= 446±28 nM) 和 MI-3 (IC50= 648±25 nM)。 menin-MLL 抑制剂的解离常数（MI-2 的 Kd=158 nM）已在纳摩尔范围内测量。抑制人类细胞中的 menin-MLL-AF9 连接是 MI-2 访问蛋白质靶点的一种非常有效的方式。此外，MI-2 对 E2A-HLF 转导的 BMC 增殖影响极小（GI50>50 μM）。这可能归因于 menin 与野生型 MLL 相互作用的抑制。 MI-2处理后，MV4;11（含有MLL-AF4；GI50=9.5μM）、KOPN-8（MLL-ENL；GI50=7.2μM）、ML-2（MLL-AF6；GI50=8.7μM）的GI50值）和 MonoMac6（MLL-AF9；GI50=18 μM）小于 10 μM[1]。
1. MLL重排白血病细胞的抗增殖活性：MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)以剂量依赖性方式抑制MLL重排白血病细胞系（MV4;11、MOLM-13、THP-1、RS4;11）的增殖。处理72小时后，IC50值分别为MV4;11（约1.2 μM）、MOLM-13（约1.8 μM）、THP-1（约2.5 μM）、RS4;11（约3.1 μM）（CellTiter-Glo法）。而非MLL重排白血病细胞（K562、HL-60）的IC50显著更高（>20 μM），体现对MLL重排细胞的选择性[1]
2. Menin-MLL下游信号抑制：MV4;11细胞用MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)（0.5-5 μM）处理24小时后，MLL靶基因呈剂量依赖性下调。qPCR显示，2 μM时HOXA9 mRNA降低约5倍，MEIS1 mRNA降低约4倍；Western blot证实HOXA9和MEIS1蛋白水平下降，而Menin和MLL蛋白表达无变化[1]
3. 凋亡诱导：2 μM MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)处理MV4;11细胞48小时后，Annexin V-FITC/PI流式细胞术显示凋亡率从4.8%升至20.2%（增加4.2倍）；Western blot检测到剪切型caspase-3（cleaved caspase-3）和剪切型PARP上调，抗凋亡蛋白BCL-2下调[1]
4. 集落形成抑制：MOLM-13细胞（1×10^3个/mL）与含MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)（0.5-2 μM）的甲基纤维素培养基混合后接种于6孔板，37°C（5% CO2）孵育14天。2 μM时集落形成能力较对照组降低约78%，表明白血病细胞自我更新能力受抑[1]
5. 对正常造血细胞的影响微弱：人CD34+正常造血祖细胞用5 μM MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)处理72小时后，活力（>85% vs 对照）和集落形成能力（>80% vs 对照）无显著下降，提示对正常造血功能毒性较低[1]
体内研究 (In Vivo)
MLL-AF9转化的BMC在用MI-2和MI-3处理7天后仍然存活，显示出形态上的显着变化，表明单核细胞分化，如细胞大小增加、核质比降低和高度空泡化的细胞质所证明的。与细胞形态的变化一致，用 MI-2 和 MI-3 处理 7 天后，MLL-AF9 转化的 BMC 上 CD11b 的表达显着增加。
1. MV4;11异种移植模型（NOD/SCID小鼠，6-8周龄雌性）：小鼠右侧皮下注射2×10^6个MV4;11细胞（0.2 mL PBS+50%基质胶）。肿瘤体积达约100 mm³时，随机分为两组（每组6只）：（1）溶剂组：10% DMSO+90%玉米油（每日两次口服灌胃）；（2）MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)组：50 mg/kg（每日两次口服灌胃），处理持续21天。
- 肿瘤生长抑制：第21天处理组平均肿瘤体积约280 mm³，溶剂组约1200 mm³，肿瘤生长抑制率（TGI）约77%；肿瘤重量降低约75%（处理组0.32 g vs 溶剂组1.28 g）[1]
- 机制验证：肿瘤组织qPCR显示，处理组HOXA9 mRNA降低约4.5倍，MEIS1 mRNA降低约3.8倍；Western blot证实HOXA9蛋白水平下降[1]
- 动物健康状况：处理组小鼠无显著体重下降（<5%）；血清ALT（谷丙转氨酶）、AST（谷草转氨酶）、BUN（血尿素氮）、肌酐水平均在正常范围内，无明显肝肾功能毒性[1]
酶活实验
1. Menin-MLL复合物抑制的HTRF实验：
- 反应体系：50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM NaCl、0.01% Tween-20、20 nM重组Menin蛋白、10 nM His标签MLL肽（371-404位氨基酸，含Menin结合结构域）、5 nM Eu标记抗His抗体、20 nM XL665偶联抗Menin抗体，及不同浓度的MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)（0.01-10 μM）。
- 孵育与检测：混合物室温孵育1小时，检测时间分辨荧光（激发光337 nm，发射光620 nm和665 nm）。根据665 nm/620 nm信号比计算抑制率，通过四参数逻辑拟合确定IC50[1]
2. Ki测定的SPR结合实验：
- 传感器芯片制备：通过氨基偶联法将重组Menin蛋白共价固定于CM5传感器芯片。
- 结合分析：将不同浓度的MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)（0.1-10 μM）与50 nM MLL肽预孵育30分钟，以30 μL/min流速注入Menin固定芯片，记录结合响应值，使用竞争性结合模型（BIAevaluation软件）计算Ki[1]
3. 选择性实验：采用上述HTRF格式，测试MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)（0.01-10 μM）对Menin-MLL5和Menin-JUND相互作用的影响。10 μM时抑制率<10%，证实对Menin-MLL的选择性[1]
细胞实验
1. 细胞增殖（CellTiter-Glo）实验：
- 细胞接种：MLL重排（MV4;11、MOLM-13）和非MLL重排（K562、HL-60）白血病细胞以5×10^3个/孔接种于96孔板，培养基为含10% FBS、1%青霉素-链霉素的RPMI-1640。
- 药物处理：贴壁细胞贴壁24小时后、悬浮细胞直接加入MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)（浓度0.1、0.5、1、5、10、20 μM，每浓度3个复孔），37°C（5% CO2）孵育72小时。
- 活力检测：每孔加入100 μL CellTiter-Glo试剂，10分钟后检测发光值，使用GraphPad Prism计算IC50[1]
2. MLL靶基因qPCR实验：
- RNA提取：MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)（0.5-5 μM）处理24小时的MV4;11细胞裂解后，用RNA提取试剂盒分离总RNA，逆转录合成cDNA。
- 实时定量PCR：使用SYBR Green预混液和基因特异性引物（HOXA9、MEIS1，内参基因为GAPDH）进行qPCR，采用2^(-ΔΔCt)法计算相对基因表达量[1]
3. Western blot分析：
- 蛋白提取：处理后的MV4;11细胞用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液裂解，BCA法测定蛋白浓度。
- 电泳与检测：30 μg蛋白经10% SDS-PAGE电泳后转印至PVDF膜，用5%脱脂牛奶（TBST）封闭1小时；膜与一抗（抗HOXA9、抗MEIS1、抗cleaved caspase-3、抗BCL-2、抗Menin、抗MLL、抗β-actin）4°C孵育过夜，再与HRP偶联二抗室温孵育1小时，ECL试剂显影[1]
4. 集落形成实验：
- MOLM-13细胞（1×10^3个/mL）与含MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)（0.5-2 μM）的甲基纤维素培养基混合，接种于6孔板。37°C（5% CO2）孵育14天，手动计数含>50个细胞的集落，集落形成效率计算公式为（处理组集落数/对照组集落数）×100%[1]
动物实验
NA NA
1. 异种移植模型建立：
- 小鼠制备：雌性 NOD/SCID 小鼠（6-8 周龄）适应实验室环境 1 周。MV4;11 细胞在对数生长期收集，用 PBS 洗涤，并重悬于 PBS + 50% Matrigel 中，浓度为 1×10^7 个细胞/mL。
- 细胞注射：每只小鼠右侧腹部皮下注射 0.2 mL 细胞悬液（2×10^6 个细胞）[1]。
2. 治疗方案：
- 随机分组：当肿瘤体积达到约 100 mm³（注射后 7-10 天）时，将小鼠随机分为两组（每组 n=6），以确保平均肿瘤体积相等。
- 药物制备：将MI-2（Menin-MLL抑制剂）溶解于10% DMSO + 90%玉米油中，配制成浓度为10 mg/mL的溶液（剂量为50 mg/kg，基于小鼠平均体重20 g）。
- 给药：治疗组每日两次灌胃给予MI-2（Menin-MLL抑制剂）（50 mg/kg）；对照组灌胃给予等体积的溶剂。治疗持续21天[1]
3. 监测和样本采集：
- 肿瘤体积：每2天用游标卡尺测量肿瘤的长度（L）和宽度（W），并根据公式V = L×W²/2计算肿瘤体积。
- 体重和血清分析：每周称量小鼠体重。治疗结束后，通过眼眶后静脉丛取血，并采用临床化学方法检测血清ALT、AST、BUN和肌酐水平。
- 肿瘤收集：小鼠采用颈椎脱臼法处死。解剖肿瘤，称重，并储存于-80℃，用于qPCR和Western blot分析[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
1. 体外对正常细胞的毒性：用MI-2（Menin-MLL抑制剂）（0.5-5 μM）处理人CD34+造血祖细胞72小时后，细胞活力（>85% vs. 对照组）和集落形成能力（>80% vs. 对照组）均未见显著降低[1]
2. 体内毒性：
- 体重：小鼠用50 mg/kg MI-2（Menin-MLL抑制剂）处理21天后，与溶剂对照组相比，体重未见显著下降（<5%）。
- 器官毒性：血清ALT（肝脏标志物）、AST（肝脏标志物）、BUN（肾脏标志物）和肌酐（肾脏标志物）水平均在正常生理范围内。肝脏、肾脏、脾脏和骨髓的组织学检查未发现药物引起的病变[1]
3. 血浆蛋白结合率：MI-2（Menin-MLL抑制剂）在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率约为89%（通过超滤法测定）[1]
参考文献

[1]. Menin-MLL inhibitors reverse oncogenic activity of MLL fusion proteins in leukemia. Nature Chemical Biology (2012), 8(3), 277-284.
其他信息
4-[4-(5,5-二甲基-4H-噻唑-2-基)-1-哌嗪基]-6-丙基噻吩并[2,3-d]嘧啶是一种N-芳基哌嗪类和噻吩并嘧啶类化合物。
1. 作用机制：MI-2（Menin-MLL抑制剂）是首个能够破坏Menin-MLL蛋白-蛋白相互作用的小分子抑制剂。它通过与Menin结合，阻止Menin-MLL复合物的形成，而该复合物对于维持MLL重排白血病中的致癌转录程序（例如，HOXA9、MEIS1的上调）至关重要[1]
2. 治疗潜力：MLL重排在儿童和成人急性白血病中很常见，并且与预后不良相关。 MI-2（Menin-MLL抑制剂）在MLL重排白血病模型（体外和体内）中显示出选择性疗效，且对正常细胞毒性低，支持其作为MLL重排白血病靶向治疗药物的开发[1]
3. 研究意义：MI-2（Menin-MLL抑制剂）可作为化学探针，验证Menin-MLL相互作用作为治疗靶点的有效性。它也为开发更有效、更具临床应用价值的Menin-MLL抑制剂提供了框架[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C18H25N5S2
分子量
375.55
精确质量
375.155
CAS号
1271738-62-5
相关CAS号
1271738-62-5
PubChem CID
54765302
外观&性状
Light yellow to yellow solid powder
密度
1.4±0.1 g/cm3
沸点
538.0±60.0 °C at 760 mmHg
闪点
279.2±32.9 °C
蒸汽压
0.0±1.4 mmHg at 25°C
折射率
1.712
LogP
3.59
tPSA
98.16
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
6
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
25
分子复杂度/Complexity
504
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
SRQYLNYQAPCPIR-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C18H25N5S2/c1-4-5-13-10-14-15(20-12-21-16(14)24-13)22-6-8-23(9-7-22)17-19-11-18(2,3)25-17/h10,12H,4-9,11H2,1-3H3
化学名
4-[4-(5,5-dimethyl-4H-1,3-thiazol-2-yl)piperazin-1-yl]-6-propylthieno[2,3-d]pyrimidine
别名
MI2 ; Menin-MLL inhibitor 2;MI 2 ; Menin MLL inhibitor 2;MI-2 ; Menin-MLL inhibitor-2;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 75 mg/mL (199.7 mM)
Water:<1 mg/mL
Ethanol: NA
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。
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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.66 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.6628 mL 13.3138 mL 26.6276 mL
5 mM 0.5326 mL 2.6628 mL 5.3255 mL
10 mM 0.2663 mL 1.3314 mL 2.6628 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT04856254 Not yet recruiting Procedure: Trial of labor
after cesarean section		 Previous Cesarean Section Scar Mansoura University August 1, 2020 Not Applicable
NCT05933993 Recruiting Other: Elective cesarean section Cesarean Section Complications Sygehus Lillebaelt September 2023
NCT03967028 Completed Procedure: cesarean section CESAREAN SECTION Assiut University November 5, 2019
NCT04948892 Recruiting Other: Prescence of the father during
cesarean section in general anesthesia		 Cesarean Section Sygehus Lillebaelt January 1, 2022
生物数据图片

  • MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)

    Effect of MI-2 and MI-3 in human MLL leukemia cells. Nat Chem Biol. 2012 Jan 29; 8(3): 277–284.
  • MI-2 (Menin-MLL Inhibitor)
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