Leishmania; Akt1 E17K mutant; Akt1 (IC50 = 2.7 nM); Akt3 (IC50 = 8.1 nM); Akt2 (IC50 = 174 nM)

Miransertib（ARQ-092；化合物 21a）在具有 PIK3CA/PIK3R1 突变的细胞系中表现出比在具有野生型 (wt) PIK3CA/PIK3R1 或 PTEN 缺失的细胞系中更强的抗增殖活性，这些细胞系来自多种来源的细胞系。肿瘤类型。在 AN3CA 和 A2780 细胞中，miransertib 对 p-Akt (S473) 和 p-Akt (T308) 表现出优异的抑制作用。使用 Miransertib (IC50=0.31 M)，下游蛋白 p-PRAS40 (T246) 被抑制[1]。 Miransertib 对杜氏乳杆菌或亚马逊乳杆菌感染的巨噬细胞的细胞内无鞭毛体显着有效。此外，在利什曼原虫感染的巨噬细胞中，miransertib 增加了 mTOR 依赖性自噬。 [2]

在大鼠 (5 mg/kg) 和猴子 (10 mg/kg) 中，miransertib（ARQ-092；化合物 21a）表现出良好的绝对口服生物利用度，F 值分别为 62% 和 49%。大鼠的 t1/2 值为 17 小时，而猴子为 7 小时，表明大鼠的半衰期比猴子更长。大鼠和猴子的 Cmax 值分别为 198 ng/mL 和 258 ng/mL，AUCinf 值分别为 5496 hng/mL 和 2960 hng/mL[1]。 Miransertib（ARQ-092；化合物 21a）可抑制人类异种移植小鼠子宫内膜腺癌模型中的肿瘤生长[1]。

Miransertib (ARQ-092) 是一种口服生物可利用的、选择性的、有效的变构 Aktin 抑制剂，对 Akt1、Akt2、Akt3 的 IC50 值分别为 2.7 nM、14 nM 和 8.1 nM。

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AKT1（1–480）、AKT2（1–481）和AKT3（1–479）阿尔法筛查分析[4]
使用GSK3衍生的生物素化肽底物、crosstide（生物素GRPRTSSFAEG）和AlphaScreen（扩增发光邻近均匀测定）技术测定AKT活性。在10%DMSO中以所需终浓度的10倍制备试验化合物和对照，并将每种化合物2.5μL加入反应板（Corning 96孔半面积固体白色非结合表面板）的每个孔中。将全长未磷酸化的AKT在测定缓冲液（50 mM Tris，pH 8.0，0.02 mg/mL BSA，10 mM MgCl2，1 mM EGTA，10%甘油，0.2 mM Na3VO4，1 mM DTT，0.1 mMβ-甘油磷酸盐和0.2 mM NaF）中稀释，并以17.5μL的体积加入每个孔中，使25μL反应中的终浓度为8 nM（AKT1）、63 nM（AK T2）或13 nM（AKT3）。在室温下预孵育20分钟后，通过加入5μL在测定缓冲液中稀释的活化混合物来启动激酶反应，该混合物含有生物素化的交叉肽、PDK1、MAPKAPK2、DOPS/DOPC、PtdIns（3,4,5）P3和ATP，最终浓度为60 nM生物素化交叉肽、0.1 nM（AKT1、AKT3）或0.3 nM M（AKT1、AKT2）或18μM（AKT3）ATP。将平板在室温下孵育30分钟，通过加入10μL在测定缓冲液中制备的停止/检测混合物在黑暗中停止反应，该混合物含有EDTA、AlphaScreen链霉抗生物素供体和蛋白A受体珠，以及终浓度为10mM EDTA的磷酸化AKT底物抗体，500 ng/孔的AlphaScreen链霉素供体珠和蛋白A接收器珠，以及最终稀释度为1:350的磷酸化AK T底物抗体。在室温下在黑暗中孵育测定板90分钟，并在PerkinElmer Envision多标记板阅读器上读取板（激发波长，640 nm；发射波长，570 nm）。所有报告的IC50值均为至少n=2次测定的几何平均值。

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CYP450抑制试验[4]
将人肝微粒体（0.25 mg/mL）、探针底物[3μM咪达唑仑（3A4）、5μM丁咯洛尔（2D6）、100μM甲磺丁脲（2C9）、10μM紫杉醇（2C8）、80μM S-美芬妥英（2C19）和50μM非那西丁（1A2）]、3.3 mM MgCl2、1 mM NADPH和溶解在DMSO（0.1%终浓度）中的化合物（0.1-10μM）孵育10分钟，然后使用含利血平（内标）的乙腈停止反应。在35°C的恒定氮气流下蒸发溶剂，将所得化合物溶解在100μL水中进行LC/MS/MS分析。使用由0.5μM酮康唑（3A4）、1μM磺胺苯唑（2C9）、1µM奎尼丁（2D6）、2μM槲皮素（2C8）、1微米诺卡酮（2C19）和0.5μMα-萘黄酮（1A2）组成的抑制剂混合物作为阳性对照。仅含有DMSO（无化合物）的培养基作为100%活性对照。基于100%活性对照的信号计算抑制百分比，并使用XLfit4中的拟合模型205（单部位剂量反应）估算或确定IC50值。

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跨物种NADPH依赖性微粒体稳定性测定[4]
将人、CD-1小鼠和比格犬肝微粒体（0.25 mg/mL）、3.3 mM MgCl2和NADPH再生系统（0.4单位/mL G6PDH、1.3 mM NADP+和3.3 mM G6P）与1μM化合物一起孵育0、3、6、10、15或30分钟。用含华法林的乙腈（内标）停止孵育，并通过LC/MS/MS分析样品。峰面积比用于确定每个时间点与时间零点相比的剩余百分比。使用单指数衰变方程估算半衰期值。咪达唑仑和普萘洛尔（仅雌性小鼠）用作阳性对照。

将细胞（MDA-MB-453：1.5 106；NCI-H1650：1 106；KU-19-19：0.7 106）接种到 6 孔板中，孵育过夜，然后暴露于含有不同浓度AKT 抑制剂（ARQ 092、ARQ 751、MK-2206、GDC-0068）2 小时。在预定条件下处理细胞后获得裂解物。 SDS-PAGE 后，使用免疫印迹从提取物中分离蛋白质。

雄性SCD小鼠
100 mg/10ml/kg
口服给药

化合物 9a、9b、21a–c 和 23 对 CYP450 1A2、2C8、2D6 和 3A4 的抑制作用不显著。化合物 9a 和 9b 对 CYP450 2C9 的抑制作用 IC50 值低于微摩尔级，而 9a 还抑制 CYP450 2C19（IC50 ≤ 1 μM）。所有化合物在肝微粒体（人、小鼠和犬）中均具有良好的稳定性。总的来说，我们发现该系列化合物具有良好的体外 ADME 特性，其中化合物 ARQ 092 (21a) 尤其表现出良好的生化抑制活性、细胞内 AKT 磷酸化抑制活性以及良好的 ADME 特性。在小鼠药代动力学研究中（口服100 mg/kg，静脉注射5 mg/kg），化合物ARQ 092 (21a)的口服生物利用度为23%。我们近期发表的文章报道了使用植入AN3CA肿瘤异种移植瘤的NCr-M裸鼠对ARQ 092 (21a)进行体内药效学评估的结果。在荷瘤小鼠口服100 mg/kg化合物21a后，p-AKT (S473)、p-AKT (T306)和p-PRAS40 (T246)的水平分别降低了99%、95%和58%（表8）。磷酸化抑制作用可持续8小时。化合物 21a 在血浆中的浓度在 1 小时为 2.1 μM，8 小时降至 0.26 μM；而在肿瘤组织中，其浓度在 1 小时为 21.0 μM，8 小时为 9.6 μM。肿瘤组织中的浓度显著高于血浆浓度，表明该化合物更倾向于在组织中蓄积，而非血管内。[1]

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在大鼠和猴子中进行了明确的单剂量药代动力学研究（表 9）。ARQ 092 (21a) 在大鼠和猴子中均显示出良好的绝对口服生物利用度，F 值分别为 62% 和 49%。与猴子相比，该化合物在大鼠中的吸收速度较慢，大鼠的 Tmax 值为 8.0 小时，而猴子为 4.3 小时。此外，该化合物在大鼠中的半衰期也长于猴子，大鼠的 t1/2 值为 17 小时，而猴子为 7 小时。大鼠和猴子的 Cmax 分别为 198 和 258 ng/mL，AUCinf 分别为 5496 和 2960 h·ng/mL。

[1]. PLoS One. 2015 Oct 15;10(10):e0140479.

[2]. Haematologica. 2017 Feb;102(2):246-259.

[3]. Sci Rep. 2015 Dec 11;5:17162.

[4]. J Med Chem . 2016 Jul 14;59(13):6455-69.

Miransertib 正在临床试验 NCT01473095（ARQ 092 在晚期实体瘤和复发性恶性淋巴瘤成人患者中的 I 期剂量递增研究）中进行研究。Miransertib 是一种口服生物利用度高的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 AKT（蛋白激酶 B）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。Miransertib 以非 ATP 竞争性方式与 AKT 结合并抑制其活性，这可能导致 PI3K/AKT 信号通路的抑制。这可能导致肿瘤细胞增殖减少和肿瘤细胞凋亡的诱导。AKT 信号通路在癌症中经常失调，并与肿瘤细胞的增殖、存活和迁移密切相关。本文描述了3-(3-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺类化合物作为强效、选择性AKT激酶变构抑制剂的优化过程，并由此发现了化合物ARQ 092 (21a)。化合物21a与全长AKT1的共晶结构证实了该类化合物的变构抑制模式以及环丁胺部分的作用。化合物21a对AKT1、AKT2和AKT3均表现出高酶活性，并能有效抑制AKT的激活及其下游靶标PRAS40的磷酸化。化合物 21a 也是 AKT1-E17K 突变蛋白的强效抑制剂，并在人子宫内膜腺癌异种移植小鼠模型中抑制肿瘤生长。[1]

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利什曼病是最重要的被忽视疾病之一，影响着 88 个国家的 1200 多万人。迫切需要安全、口服生物利用度高且经济有效的利什曼病治疗药物。最近的研究表明，利什曼原虫会激活宿主巨噬细胞丝氨酸/苏氨酸激酶 Akt，从而促进寄生虫和受感染细胞的存活。在此，我们旨在评估一种化合物 Miransertib (ARQ 092)，它是一种口服生物利用度高的选择性变构 Akt 抑制剂，目前正在进行针对 PI3K/Akt 驱动型肿瘤或普罗特斯综合征患者的临床试验。 Miransertib 已针对内脏利什曼病和皮肤利什曼病的病原体——杜氏利什曼原虫和亚马逊利什曼原虫进行了测试。培养的前鞭毛体对 Miransertib 敏感。此外，Miransertib 对感染杜氏利什曼原虫或亚马逊利什曼原虫的巨噬细胞内的无鞭毛体也具有显著的杀灭作用。Miransertib 还增强了利什曼原虫感染的巨噬细胞中 mTOR 依赖性自噬，这可能是 Miransertib 介导杀灭细胞内利什曼原虫的机制之一。虽然 Miransertib 治疗组小鼠脾脏中感染杜氏利什曼原虫的寄生虫清除率与米替福新治疗组相当，但 Miransertib 更能降低肝脏中的寄生虫载量。在皮肤利什曼病感染模型中，与假治疗组小鼠相比，Miransertib 治疗组小鼠的病变减少了 40%。这些结果共同提供了直接证据，支持Miransertib是一种优秀的先导化合物，可用于开发治疗内脏和皮肤利什曼病的新型口服药物疗法。[2]

C27H25CLN6

468.99

468.182

C, 69.15; H, 5.37; Cl, 7.56; N, 17.92

1313883-00-9

Miransertib;1313881-70-7

67305743

Light yellow to brown solid powder

95.6

3

5

4

34

653

0

Cl.NC1(C2C=CC(=CC=2)N2C(C3=CC=CN=C3N)=NC3C=CC(C4C=CC=CC=4)=NC2=3)CCC1

DRHSWSSVIKDJME-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H24N6.ClH/c28-24-21(8-4-17-30-24)25-32-23-14-13-22(18-6-2-1-3-7-18)31-26(23)33(25)20-11-9-19(10-12-20)27(29)15-5-16-27;/h1-4,6-14,17H,5,15-16,29H2,(H2,28,30);1H

3-[3-[4-(1-aminocyclobutyl)phenyl]-5-phenylimidazo[4,5-b]pyridin-2-yl]pyridin-2-amine;hydrochloride

ARQ092 hydrochloride; MK-7075; ARQ-092 hydrochloride; MK7075; Miransertib HCl; Miransertib (ARQ 092) HCl; Miransertib hydrochloride; Miransertib (hydrochloride); CHEMBL4523032; 3-(3-(4-(1-aminocyclobutyl)phenyl)-5-phenyl-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)pyridin-2-amine hydrochloride; ARQ 092

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。