Leishmania; Akt1 E17K mutant; Akt1 (IC50 = 2.7 nM); Akt3 (IC50 = 8.1 nM); Akt2 (IC50 = 174 nM)
AKT1 (biochemical IC50 = 5.0 nM; Kd binding to full-length unphosphorylated AKT1-WT = 7.1 nM; Kd to AKT1-E17K mutant = 42 nM)[1]
AKT2 (biochemical IC50 = 4.5 nM)[1]
AKT3 (biochemical IC50 = 16 nM)[1]
Selectivity: inhibits >50% of only 6 out of 303 kinases at 5 µM (MARK4 IC50 = 129 nM; MARK3 IC50 = 173 nM; MARK1 IC50 = 180 nM; DYRK2 IC50 = 386 nM; IRAK1 IC50 = 806 nM; Haspin IC50 = 1160 nM)[1]

在多种肿瘤类型的细胞系中，Miransertib（ARQ-092；化合物 21a）在 PIK3CA/PIK3R1 突变细胞系中表现出比野生型 (wt) PIK3CA/PIK3R1 或 PTEN 缺失细胞系更强的抗增殖活性。在 AN3CA 和 A2780 细胞中，Miransertib 对 p-Akt (S473) 和 p-Akt (T308) 均表现出优异的抑制作用。Miransertib (IC50=0.31 M) 可抑制下游蛋白 p-PRAS40 (T246)[1]。Miransertib 对感染利什曼原虫 (L. donovani) 或亚马逊利什曼原虫 (L. amazonensis) 的巨噬细胞内的无鞭毛体具有显著的杀灭作用。此外，在利什曼原虫感染的巨噬细胞中，Miransertib 可增强 mTOR 依赖性自噬。 [2]

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Miransertib 与未磷酸化的全长 AKT1-WT 和 AKT1-E17K 突变体结合，其 Kd 值分别为 7.1 nM 和 42 nM，通过内源性色氨酸荧光猝灭法测定。在瞬时转染 AKT1-E17K-GFP 的 293T 细胞中，ARQ 092（0.012–1 µM，处理 2 小时）以浓度依赖的方式抑制 pAKT(S473)。在 AN3CA 子宫内膜癌细胞中，经 EGF/胰岛素刺激 2 小时后，ARQ 092 抑制 pAKT(T308) (IC50 = 62 nM)、pAKT(S473) (IC50 = 40 nM) 和 pPRAS40(T246) (IC50 = 310 nM)。在MDA-MB-453 (PIK3CAH1047R)、NCI-H1650 (PTEN 缺失) 和 KU-19-19 (AKT1-E17K+E49K) 细胞中，ARQ 092（0.012–1 µM，处理 2 小时）呈剂量依赖性地抑制 pAKT、pPRAS40、pGSK3β、pFOXO、pBAD、pAS160、pS6 和 p4E-BP1 的表达，但不影响 pERK 的表达。在增殖实验中，ARQ 092 抑制 MDA-MB-453 细胞的生长，IC50 = 0.371 µM（相比之下，MK-2206 为 0.966 µM，GDC-0068 为 3.71 µM）。在包含 240 种癌细胞系的样本中，乳腺癌（61% 敏感）、白血病（50%）和结直肠癌（41%）的敏感性最高（GI50 <1 µM）。PIK3CA/PIK3R1 突变与敏感性相关（53% 的突变体敏感，而野生型仅为 24%，p=0.0002），而 PTEN 状态则与敏感性无关。[1] Miransertib 可抑制 NIH 3T3 细胞中 AKT1-WT 和 AKT1-E17K 的质膜转位（1 µM，2 小时），且不受 PDGF-BB 刺激的影响，这可通过 GFP 标记的 AKT 和荧光显微镜观察到。[1]

在大鼠（5 mg/kg）和猴子（10 mg/kg）中，miransertib（ARQ-092；化合物 21a）表现出良好的绝对口服生物利用度，F 值分别为 62% 和 49%。大鼠的 t1/2 值为 17 小时，而猴子为 7 小时，表明大鼠的半衰期比猴子长。大鼠和猴子的 Cmax 值分别为 198 ng/mL 和 258 ng/mL，AUCinf 值分别为 5496 hng/mL 和 2960 hng/mL[1]。 Miransertib（ARQ-092；化合物 21a）可抑制人子宫内膜腺癌异种移植小鼠模型中的肿瘤生长[1]。
在 AN3CA 小鼠异种移植模型中，每日一次口服 Miransertib 100 mg/kg，连续 10 天，可抑制肿瘤生长约 55% (p<0.001)；50 mg/kg 的剂量可抑制 15%；隔日一次口服 200 mg/kg 可抑制 60%。在 KPL-4 乳腺癌异种移植模型中，每日一次口服 ARQ-092 120 mg/kg，连续 8 天，可抑制 84% 的肿瘤生长 (p<0.001)。在 ZR-75-1 乳腺癌异种移植模型中，ARQ 092 以 40 mg/kg 的剂量（连续用药 5 天，停药 2 天，持续 4 天）抑制率达 85%（p<0.001）。在携带 AKT1-E17K 突变的子宫内膜异种移植模型中，ARQ 092 以 50、75 和 100 mg/kg 的剂量（连续用药 5 天，停药 2 天，持续 20 天）分别抑制肿瘤生长 48%、75% 和 78%，并延缓肿瘤复发。在携带 BRAF V600E 和 PIK3CA H1047R 突变的维莫非尼耐药黑色素瘤异种移植模型中，ARQ 092 单药治疗（100 mg/kg）的肿瘤生长抑制率为 16%，但与曲美替尼（3 mg/kg）联合用药的肿瘤生长抑制率可达 73%（p<0.05）。在 KPL-4 异种移植模型中，ARQ 092（60 mg/kg QD）与曲妥珠单抗（15 mg/kg 每 3 天一次）或紫杉醇（15 mg/kg 每 6 天一次）联合用药，分别抑制了 92% 和 85% 的肿瘤生长，而单药治疗的抑制率分别为 50%、38% 和 41%。[1]

Miransertib (ARQ-092) 是一种口服生物利用度高、选择性强、效力强的变构 Akt 抑制剂，对 Akt1、Akt2、Akt3 的 IC50 分别为 2.7 nM、14 nM 和 8.1 nM。

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\n\nAKT1 (1–480)、AKT2 (1–481) 和 AKT3 (1–479) AlphaScreen 检测[4]
\n使用 GSK3 衍生的生物素化肽底物 crosstide (生物素-GRPRTSSFAEG) 和 AlphaScreen (放大发光邻近均相检测) 技术检测 AKT 活性。测试化合物和对照品均配制于 10% DMSO 中，浓度为所需最终浓度的 10 倍，并将每种化合物 2.5 μL 加入反应板（Corning 96 孔半面积白色非结合表面板）的每个孔中。全长未磷酸化 AKT 用检测缓冲液（50 mM Tris，pH 8.0，0.02 mg/mL BSA，10 mM MgCl2，1 mM EGTA，10% 甘油，将 0.2 mM Na3VO4、1 mM DTT、0.1 mM β-甘油磷酸钠和 0.2 mM NaF 的溶液以 17.5 μL 的体积加入到每个孔中，使 AKT1、AKT2 或 AKT3 的最终浓度分别为 8 nM、63 nM 或 13 nM（25 μL 反应体系）。室温预孵育 20 分钟后，加入 5 μL 用检测缓冲液稀释的激活混合物启动激酶反应。该激活混合物包含生物素标记的交联肽、PDK1、MAPKAPK2、DOPS/DOPC、PtdIns(3,4,5)P3 和 ATP，使生物素标记的交联肽的最终浓度为 60 nM，PDK1 的最终浓度为 0.1 nM（AKT1、AKT3）或 0.3 nM（AKT2），PDK1 的最终浓度为 0.7 nM。 （AKT1）、1.3 nM（AKT2）或 0.4 nM（AKT3）MAPKAPK2、5.5 μM DOPS、5.5 μM DOPC、0.5 μM PtdIns(3,4,5)P3 以及 50 μM（AKT1、AKT2）或 18 μM（AKT3）ATP。将反应板在室温下孵育 30 分钟，然后在黑暗中通过加入 10 μL 终止/检测混合物终止反应。该混合物由检测缓冲液配制而成，其中包含 EDTA、AlphaScreen 链霉亲和素供体珠和蛋白 A 受体珠，以及磷酸化 AKT 底物抗体，最终浓度分别为 10 mM EDTA、500 ng/孔的 AlphaScreen 链霉亲和素供体珠和蛋白 A 受体珠，以及磷酸化 AKT 底物抗体（最终稀释度为 1:350）。检测板为在室温下避光孵育 90 分钟后，使用 PerkinElmer Envision 多功能酶标仪读取结果（激发波长 640 nm；发射波长 570 nm）。所有报告的 IC50 值均为至少 n = 2 次测定的几何平均值。

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\n\nCYP450 抑制试验[4]
\n人肝微粒体 (0.25 mg/mL)、探针底物 [3 μM 咪达唑仑 (3A4)、5 μM 布呋洛尔 (2D6)、100 μM 甲苯磺丁脲 (2C9)、10 μM 紫杉醇 (2C8)、80 μM S-美芬妥英 (2C19) 和 50 μM 非那西汀 (1A2)]、3.3 mM MgCl2、1 mM NADPH 以及溶于 DMSO 的化合物 (0.1–10 μM)。将终浓度为0.1%的化合物孵育10分钟后，加入含有利血平（内标）的乙腈终止反应。在35℃下，用氮气流吹干溶剂，并将所得化合物用100 μL水复溶，用于LC/MS/MS分析。以0.5 μM酮康唑（3A4）、1 μM磺胺苯唑（2C9）、1 μM奎尼丁（2D6）、2 μM槲皮素（2C8）、1 μM诺卡酮（2C19）和0.5 μM α-萘黄酮（1A2）组成的抑制剂混合物作为阳性对照。仅含DMSO（不含化合物）的孵育液作为100%活性对照。抑制率基于100%活性对照的信号计算，IC50值通过估算或测定获得。在 XLfit4 中拟合模型 205（单一位点剂量反应）。

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\n\n跨物种 NADPH 依赖性微粒体稳定性测定[4]
\n将人、CD-1 小鼠和比格犬肝微粒体（0.25 mg/mL）、3.3 mM MgCl2 和 NADPH 再生系统（0.4 单位/mL G6PDH、1.3 mM NADP+ 和 3.3 mM G6P）与 1 μM 化合物孵育 0、3、6、10、15 或 30 分钟。用含华法林（内标）的乙腈终止孵育，并用 LC/MS/MS 分析样品。峰面积比用于确定每个时间点相对于零时间点的剩余百分比。半衰期值使用单指数衰减方程估算。咪达唑仑和普萘洛尔（仅限雌性小鼠）用作阳性对照。

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内源性色氨酸荧光猝灭测定：将未磷酸化的全长 AKT1-WT 或 AKT1-E17K (100 nM) 与系列稀释的 Miransertib（两倍稀释）在缓冲液（25 mM Tris pH 7.5、0.1 M NaCl、2% DMSO）中于室温孵育 30 分钟。测量 345 nm 处的荧光发射（激发波长 280 nm）。数据拟合二次方程以计算 Kd 值。[1]
生化激酶活性测定 (ADP-Glo)：将全长失活的 AKT1、AKT2 或 AKT3 与 Miransertib（10 个剂量，3 倍系列稀释，起始浓度为 100 nM）孵育。在 10 µM ATP 存在下，测定了 1 µM 的 ARQ 092 的 IC50 值。对 303 种激酶进行了激酶选择性分析，ARQ 092 的浓度为 5 µM（Carna Biosciences 公司）；测定了抑制率，并确认了抑制率 >50% 的激酶的 IC50 值。[1]

将细胞（MDA-MB-453：1.5×10⁶；NCI-H1650：1×10⁶；KU-19-19：0.7×10⁶）接种于6孔板中，过夜培养后，用含有不同浓度AKT抑制剂（ARQ 092、ARQ 751、MK-2206、GDC-0068）的完全培养基处理2小时。在预定条件下处理细胞后，收集细胞裂解液。 SDS-PAGE 电泳后，采用免疫印迹法分离提取物中的蛋白质。

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Western blot 分析：将细胞（MDA-MB-453：1.5×10⁶；NCI-H1650：1×10⁶；KU-19-19：0.7×10⁶）接种于 6 孔板中，用浓度分别为 0、0.012、0.037、0.11、0.33 和 1 µM 的 Miransertib 处理 2 小时，然后裂解细胞。通过 SDS-PAGE 电泳分离蛋白质，并进行免疫印迹分析，检测 pAKT(T308)、pAKT(S473)、总 AKT、pPRAS40、pGSK3β、pFOXO1/3a、pAS160、pBAD、pS6、p4E-BP1 和 pERK 的表达。进行密度分析。[1]
抗增殖试验（OncoPanel 240）：将细胞接种于384孔板中，24小时后用Miransertib（10个浓度，3.16倍稀释，0.1% DMSO）处理。72小时后，固定细胞并用荧光抗体和核染料染色。通过自动荧光显微镜（IN Cell Analyzer 1000）定量相对细胞数量。GI50通过非线性回归计算。[1]
质膜转位试验：将NIH 3T3细胞转染AKT1-WT-GFP或AKT1-E17K-GFP。 48 小时后，细胞饥饿 24 小时，然后用 1 µM Miransertib 处理 2 小时，用 PDGF-BB (50 ng/mL) 刺激 10 分钟，固定，并通过荧光显微镜成像。[1]

雄性SCD小鼠
100 mg/10ml/kg
口服给药

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急性药效学研究：荷瘤AN3CA或BT-474的雌性NCR裸鼠口服给予Miransertib，剂量分别为100或200 mg/kg（AN3CA）或200 mg/kg（BT-474）。分别于给药后1、8或2小时收集肿瘤。提取蛋白质，并通过Western blot（pAKT、pPRAS40）和免疫组化进行分析。[1]
疗效研究（多种异种移植瘤）：
将AN3CA细胞（5×10⁶）皮下接种到雌性NCR裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 250 mm³ 时，小鼠经口给予赋形剂（10% DMA 水溶液）或 Miransertib，剂量分别为 50、100、150 mg/kg QD 或 200 mg/kg QD。用游标卡尺测量肿瘤体积；计算 TGI。
将 KPL-4 细胞 (1.5×10⁷) 移植到雌性裸鼠体内；当肿瘤体积 >100 mm³ 时，经口给予 ARQ 092，剂量分别为 10、20、40、80、120 mg/kg QD，连续 8 天。
将 ZR-75-1 肿瘤碎片移植到 NOD/scid 小鼠体内；当肿瘤体积约为 300 mm³ 时，口服 ARQ 092，剂量为 20 或 40 mg/kg（用药 5 天/停药 2 天，持续 4 天）。
子宫内膜 PDX（ST1061，AKT1-E17K）：将肿瘤碎片皮下植入无胸腺裸鼠体内；当肿瘤体积约为 200 mm³ 时，分别给予 ARQ 092 50、75 和 100 mg/kg 的剂量（用药 5 天，停药 2 天，持续 20 天）。
黑色素瘤 PDX 模型（ST052C、BRAF V600E、PIK3CA H1047R）：小鼠接受 ARQ 092 100 mg/kg（用药 5 天，停药 2 天）、曲美替尼 3 mg/kg（每日一次，之后改为用药 5 天，停药 2 天）或联合治疗。
KPL-4 研究中的联合治疗方案：ARQ 092 60 mg/kg，每日一次口服；曲妥珠单抗 15 mg/kg，每 3 天静脉注射；紫杉醇 15 mg/kg，每 6 天静脉注射。
所有制剂：ARQ 092 溶于 10% DMA 水溶液或 0.5% 甲基纤维素 400 cP 溶液。[1]

化合物 9a、9b、21a–c 和 23 对 CYP450 1A2、2C8、2D6 和 3A4 没有显著的抑制活性。化合物 9a 和 9b 对 CYP450 2C9 的抑制 IC50 值低于微摩尔级，而 9a 还能抑制 CYP450 2C19（IC50 ≤ 1 μM）。所有化合物在肝微粒体（人、小鼠和犬）中均表现出良好的稳定性。总体而言，我们发现该系列化合物具有良好的体外 ADME 性质，其中化合物 ARQ 092 (21a) 表现出特别优异的生化抑制活性、细胞内 AKT 磷酸化抑制活性以及良好的 ADME 性质。在小鼠药代动力学研究中（口服 100 mg/kg，静脉注射 5 mg/kg），化合物 ARQ 092 (21a) 的口服生物利用度为 23%。我们最近发表的文章报道了 ARQ 092 (21a) 在植入 AN3CA 肿瘤异种移植瘤的 NCr-M 裸鼠体内的药效学评价结果。给荷瘤小鼠口服 100 mg/kg 化合物 21a 后，p-AKT (S473)、p-AKT (T306) 和 p-PRAS40 (T246) 的水平分别下降了 99%、95% 和 58%（表 8）。磷酸化抑制作用持续了 8 小时。化合物 21a 的血浆浓度在 1 小时时为 2.1 μM，在 8 小时时下降至 0.26 μM。在肿瘤组织中，1 小时浓度为 21.0 μM，8 小时浓度为 9.6 μM。肿瘤组织中的浓度显著高于血浆中的浓度，表明该化合物倾向于在组织中而非血管中蓄积。[1]

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在大鼠和猴子中进行了明确的单剂量药代动力学研究（表 9）。ARQ 092 (21a) 在大鼠和猴子中均显示出良好的绝对口服生物利用度，F 值分别为 62% 和 49%。该化合物在大鼠中的吸收速度比猴子慢，大鼠的 Tmax 为 8.0 小时，猴子为 4.3 小时。此外，该化合物在大鼠中的半衰期比猴子长，大鼠的 t1/2 为 17 小时，猴子为 7 小时。大鼠和猴子的Cmax分别为198和258 ng/mL，AUCinf分别为5496和2960 h·ng/mL。

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AN3CA异种移植小鼠的药代动力学：Miransertib以5 mg/kg的剂量静脉注射或以100 mg/kg的剂量口服给药。分别于5、15、30分钟和1、2、4、8小时（静脉注射）或0.5、1、2、4、8、16小时（口服）采集血样。采用LC/MS/MS法测定血浆浓度。静脉注射5 mg/kg后，未直接测定Cmax；口服100 mg/kg后，Cmax约为2 µM（来自S7A图）。文中未报告详细的药代动力学参数（半衰期、生物利用度等）。[1]

未报告正式的毒性数据。在小鼠中，当Miransertib剂量≥100 mg/kg时观察到体重减轻（通常≤10%），但在任何体内研究中均未发生与化合物相关的动物死亡。一项人体临床试验（已引用但未详细说明）中，三名志愿者在使用吉非贝齐+瑞舒伐他汀（并非ARQ 092）时出现无症状的ALT升高（<2.5×ULN）。未提供ARQ 092的具体毒代动力学参数（LD50、器官毒性、蛋白结合率）。[1]

[1]. PLoS One. 2015 Oct 15;10(10):e0140479.

[2]. Haematologica. 2017 Feb;102(2):246-259.

[3]. Sci Rep. 2015 Dec 11;5:17162.

[4]. J Med Chem . 2016 Jul 14;59(13):6455-69.

Miransertib 正在临床试验 NCT01473095（ARQ 092 I 期剂量递增研究，针对晚期实体瘤和复发性恶性淋巴瘤成人患者）中进行研究。Miransertib 是一种口服生物利用度高的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 AKT（蛋白激酶 B）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。Miransertib 以非 ATP 竞争性方式结合并抑制 AKT，这可能导致 PI3K/AKT 信号通路的抑制。这可能导致肿瘤细胞增殖减少和肿瘤细胞凋亡的诱导。AKT 信号通路在癌症中经常发生异常调控，并且与肿瘤细胞的增殖、存活和迁移密切相关。本文描述了3-(3-苯基-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡啶-2-胺类化合物作为强效、选择性AKT激酶变构抑制剂的优化过程，最终发现了化合物ARQ 092 (21a)。化合物21a与全长AKT1的共晶结构证实了此类化合物的变构抑制模式以及环丁胺部分的作用。化合物21a对AKT1、AKT2和AKT3均表现出高酶活性，并能有效抑制AKT的活化及其下游靶标PRAS40的磷酸化。此外，化合物21a也是AKT1-E17K突变蛋白的强效抑制剂，并在人子宫内膜腺癌异种移植小鼠模型中抑制肿瘤生长。 [1]

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利什曼病是最重要的被忽视疾病之一，影响着88个国家的1200多万人。目前迫切需要安全、口服生物利用度高且经济有效的利什曼病治疗方法。近期研究表明，利什曼病可激活宿主巨噬细胞丝氨酸/苏氨酸激酶Akt，从而促进寄生虫和受感染细胞的存活。本文旨在评估一种化合物Miransertib（ARQ 092），它是一种高生物利用度、选择性的变构Akt抑制剂，目前正在PI3K/Akt驱动的肿瘤或Protes综合征患者中进行临床试验。Miransertib已针对内脏利什曼病和皮肤利什曼病的病原体——杜氏利什曼原虫和锯齿利什曼原虫进行了测试。培养的前乳突细胞对Miransertib敏感。此外，Miransertib 对感染杜氏利什曼原虫或锯齿利什曼原虫的巨噬细胞内的乳突状细胞也表现出显著的杀灭活性。Miransertib 还能增强利什曼原虫感染巨噬细胞中 mTOR 依赖性自噬，这可能是 Miransertib 介导杀灭细胞内利什曼原虫的机制之一。虽然 Miransertib 治疗组小鼠脾脏中杜氏利什曼原虫的清除率与米替福宁治疗组小鼠相当，但 Miransertib 在降低肝脏寄生虫载量方面更有效。在皮肤利什曼病模型中，Miransertib 治疗组小鼠的病变较假治疗组减少了 40%。这些结果共同提供了直接证据，表明 Miransertib 是一种极佳的先导化合物，可用于开发治疗内脏利什曼病和皮肤利什曼病的新型口服疗法。 [2]

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Miransertib (ARQ 092) 是一种变构、ATP 非依赖性 AKT 抑制剂，它与 PH 激酶结构域界面结合，稳定 AKT 的自身抑制构象。它通过阻断野生型和 E17K 突变型 AKT 的质膜转位来抑制 AKT 的激活。该化合物具有口服生物利用度，对 AKT 的选择性远高于其他 300 种激酶，并且在乳腺癌、子宫内膜癌和黑色素瘤模型中显示出临床前疗效。PIK3CA/PIK3R1 突变是预测敏感性的指标，而 PTEN 缺失则不是。ARQ 092 正在进行针对携带 AKT1-E17K 和 PIK3CA 突变患者的 I 期临床试验。它对 Proteus 综合征（一种由 AKT1-E17K 嵌合突变引起的疾病）也显示出活性。[1]

C27H25CLN6

468.99

468.182

C, 69.15; H, 5.37; Cl, 7.56; N, 17.92

1313883-00-9

Miransertib;1313881-70-7

67305743

Light yellow to brown solid powder

95.6

3

5

4

34

653

0

Cl.NC1(C2C=CC(=CC=2)N2C(C3=CC=CN=C3N)=NC3C=CC(C4C=CC=CC=4)=NC2=3)CCC1

DRHSWSSVIKDJME-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H24N6.ClH/c28-24-21(8-4-17-30-24)25-32-23-14-13-22(18-6-2-1-3-7-18)31-26(23)33(25)20-11-9-19(10-12-20)27(29)15-5-16-27;/h1-4,6-14,17H,5,15-16,29H2,(H2,28,30);1H

3-[3-[4-(1-aminocyclobutyl)phenyl]-5-phenylimidazo[4,5-b]pyridin-2-yl]pyridin-2-amine;hydrochloride

ARQ092 hydrochloride; MK-7075; ARQ-092 hydrochloride; MK7075; Miransertib HCl; Miransertib (ARQ 092) HCl; Miransertib hydrochloride; Miransertib (hydrochloride); CHEMBL4523032; 3-(3-(4-(1-aminocyclobutyl)phenyl)-5-phenyl-3H-imidazo[4,5-b]pyridin-2-yl)pyridin-2-amine hydrochloride; ARQ 092

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。