Chk1 (IC50 = 3 nM); Chk2 (IC50 = 1500 nM); CDK2 (IC50 = 160 nM)

体外活性：SCH 900776 是一种效力较低的 Chk2 和 CDK2 抑制剂，IC50 分别为 1.5 μM 和 0.16 μM。 SCH 900776 对细胞色素 P450 人肝微粒体亚型 1A2、2C9、2C19、2D6 和 3A4 无显着抑制作用。接触羟基脲 24 小时后，SCH 900776 会导致 DNA 复制能力出现剂量依赖性丧失。 SCH 900776 增强羟基脲、5-氟尿嘧啶和阿糖胞苷的 γ-H2AX 反应。与抗代谢药结合使用，SCH 900776 可在 2 小时内诱导 γ-H2AX 积累，表明复制叉崩溃和双链 DNA 断裂。此外，SCH 900776 以剂量依赖性方式抑制 Chk1 pS296 自磷酸化的积累。增殖的 WS1 细胞暴露于 SCH 900776 与 Chk1 pS345 的快速、剂量依赖性积累相关，表明正常细胞的循环群体在暴露于 SCH 900776 后诱导 Chk1 pS345 作为无效循环的一部分，可能是由 AT 家族激酶驱动的和DNA-PK。激酶测定：激酶分析器服务用于生成 SCH 900776 针对各种丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸激酶的一般选择性数据。测定通常在两种浓度的 SCH 900776（0.5 和 5 μM）和固定浓度（10 μM）的 ATP 下进行。细胞测定：在体外，SCH 900776 以剂量依赖性方式阻断 Chk1 pS296 自磷酸化的积累。研究发现，用 SCH 900776 处理增殖的 WS1 细胞与 Chk1 pS345 的快速、剂量依赖性积累相关，这表明正常细胞的循环群体会响应 SCH 900776 的抑制而诱导 Chk1 pS345，作为无效周期 1 的一部分。

吉西他滨给药 30 分钟后，4 mg/kg SCH 900776 足以诱导 γ-H2AX 生物标志物，而相对于单独使用吉西他滨或 SCH 900776，8 mg/kg 则可增强肿瘤药效学和消退反应。 SCH 900776 的剂量递增（16 mg/kg 和 32 mg/kg）可导致肿瘤反应逐渐改善。重要的是，SCH 900776 的剂量与稳健的生物标志物激活和改善的肿瘤反应相关，但与吉西他滨对 BALB/c 小鼠血液学参数的毒性增强无关。

SCH 900776 针对各种丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸激酶的一般选择性数据是通过激酶分析器服务生成的。 SCH 900776 通常用于两种浓度（0.5 和 5 μM）以及固定浓度 (10 μM) ATP 的测定。

为了进行细胞生长测定，将 500-1000 个细胞以低密度接种到 96 孔板中，然后用药物处理细胞一整天（每个浓度 8 个孔）。处理后，冲洗细胞并在37°C的新培养基中培养5至7天。在细胞达到汇合之前，将细胞裂解、清洗并用 Hoechst 33258 染色。使用微孔板分光荧光计测量荧光。用抑制50%生长的药物浓度的平均值和标准误来表示结果。

Certain cell lines are grown in vitro, once they have been washed with PBS, they are resuspended in 50% Matrigel in PBS to a final concentration of 4×10⁷ to 5×10⁷ cells per mL for tumor implantation. A subcutaneous injection of 0.1 mL of this suspension is given to naked mice in the flank area. Tumor length (L), width (W), and height (H) are measured twice a week on each mouse using a caliper. The tumor volume is then determined using the formula (L×W×H)/2. Ten animals are randomly assigned to treatment groups and given intraperitoneally either SCH 900776 (formulated in 20% hydroxypropyl β-cyclodextrin) or specific chemotherapeutic agents, prepared in accordance with recommended guidelines. Measurements are taken both during and after the treatment phases of the tumor volumes and body masses. Prior to normalization to starting volume, data are recorded as means±SEM. In some experiments, time to progression to 10x starting volume, or TTP 10x, is recorded. The tumor and surrounding skin are removed during necropsy, preserved for an overnight period in 10% formalin, and then cleaned and preserved in 70% ethanol for pharmacodynamic marker analyses in mice. Shave an area about 4 square inches in size in order to perform skin punch biopsies. In order to induce local anesthesia in dogs, lidocaine is administered subcutaneously, while inhaled isofluorane is used for anesthesia in rats. Using a 4 mm biopsy punch, samples are obtained. Before being cleaned or stored in 70% ethanol, skin punches are fixed in 10% formalin for an entire night.

[1]. Mol Cancer Ther . 2011 Apr;10(4):591-602.

[2]. Mol Cancer Ther . 2012 Feb;11(2):427-38.

[3]. Clin Cancer Res . 2012 Oct 1;18(19):5364-73.

[4]. Nat Genet . 2021 Aug;53(8):1207-1220.

C15H18BRN7

376.25

375.08

C, 47.88; H, 4.82; Br, 21.24; N, 26.06

891494-63-6

SCH900776 (S-isomer);891494-64-7

white to off-white Solid powder

CN1C=C(C=N1)C2=C3N=C(C(=C(N3N=C2)N)Br)[C@@H]4CCCNC4

GMIZZEXBPRLVIV-SECBINFHSA-N

InChI=1S/C15H18BrN7/c1-22-8-10(6-19-22)11-7-20-23-14(17)12(16)13(21-15(11)23)9-3-2-4-18-5-9/h6-9,18H,2-5,17H2,1H3/t9-/m1/s1

6-bromo-3-(1-methylpyrazol-4-yl)-5-[(3R)-piperidin-3-yl]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-7-amine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

4%DMSO+30%Propylene glycol: 5 mg/mL

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。