Chk1 (IC50 = 3 nM); CDK2 (IC50 = 0.16 μM);
Checkpoint kinase 1 (Chk1) (IC50 = 3.1 nM for recombinant human Chk1; Ki = 0.9 nM) [1]
Checkpoint kinase 2 (Chk2) (weaker inhibition, IC50 = 360 nM) [1]
SCH900776 S-isomer targets checkpoint kinase 1 (Chk1), a key regulator of the cell cycle checkpoint. By inhibiting Chk1, it prevents cells from arresting in the S and G2/M phases, forcing them into mitosis with unrepaired DNA damage, leading to cell death. This makes it a potential radiosensitizer and chemosensitizer.

MK-8776 (SCH900776) 能有效抑制 Chk1 激酶活性，在重组酶活性测定中 IC50 为 3.1 nM。它对 Chk2 (IC50 = 360 nM) 和其他激酶（例如 CDK1，IC50 > 10,000 nM）的选择性比 Chk1 高 100 倍以上 [1]
- 在人类癌细胞系（例如 HCT116、SW620、A549）中，MK-8776 (0.1-10 μM) 可通过阻断 DNA 损伤检查点，以剂量依赖的方式诱导 G2/M 期细胞周期阻滞（流式细胞术）。这与 Cdc2 (Tyr15) 磷酸化减少和细胞周期蛋白 B1 水平升高有关（蛋白质印迹）[1][2]
- 该化合物 (1-5 μM) 增强了 DNA 损伤剂的细胞毒性：与吉西他滨联合使用，可将吉西他滨在 HCT116 细胞中的 IC50 从 50 nM 降低至 5 nM；辐射（2 Gy）使细胞凋亡（Annexin V+细胞）从12%增加到45%[2]
- 在p53缺陷细胞（例如H1299）中，与p53功能正常的细胞（IC50 = 8.5 μM）相比，MK-8776（2 μM）选择性地抑制增殖（IC50 = 1.8 μM），表明与p53缺失存在合成致死性[3]
SCH 900776是CDK2和Chk2的较弱抑制剂，IC50值分别为0.16 μM和1.5 μM。 SCH 900776 对人肝微粒体细胞色素 P450 1A2、2C9、2C19、2D6 和 3A4 同工酶的抑制作用不显著。羟基脲处理 24 小时后，SCH 900776 可导致 DNA 复制能力呈剂量依赖性下降。SCH 900776 可增强羟基脲、5-氟尿嘧啶和阿糖胞苷诱导的 γ-H2AX 反应。当 SCH 900776 与抗代谢药物联用时，可在两小时内导致 γ-H2AX 积累，这是双链 DNA 断裂和复制叉崩溃的标志。此外，SCH 900776 可剂量依赖性地抑制 Chk1 pS296 的自磷酸化。正常细胞在暴露于 SCH 900776 后，增殖细胞群会诱导 Chk1 pS345 的产生，这构成了一个无效循环，可能由 AT 家族激酶和 DNA-PK 驱动。Chk1 pS345 的这种快速、剂量依赖性积累与增殖的 WS1 细胞暴露于 SCH 900776 相关。[1]
体外实验表明，SCH900776 的 S-异构体具有强效的 Chk1 抑制活性，IC50 为 3 nM。它对 Chk2 和 CDK2 具有高度选择性。它能增强羟基脲、5-氟尿嘧啶和阿糖胞苷引起的 γ-H2AX 反应，表明其能够增强 DNA 损伤剂的作用。

在携带 HCT116 异种移植瘤的裸鼠中，MK-8776（25-100 mg/kg，口服，每日两次）表现出剂量依赖性的肿瘤生长抑制（TGI）：100 mg/kg 导致 65% 的 TGI。与吉西他滨（120 mg/kg，每周一次）联合用药可将肿瘤生长抑制率 (TGI) 提高至 85% [2]
- 在结肠癌患者来源的异种移植 (PDX) 模型中，MK-8776（50 mg/kg，口服）联合放疗（8 Gy）可使肿瘤体积减少 70%，而单独放疗仅减少 30%，并伴有肿瘤组织中 γH2AX（DNA 损伤标志物）的增加 [3]
- 在 KRAS 突变型肺癌异种移植小鼠中，MK-8776（75 mg/kg）单药治疗可诱导肿瘤停滞，而与顺铂联合用药则可使肿瘤消退 40% [2]
当 SCH 900776 在吉西他滨给药半小时后给药时，4 mg/kg 的剂量足以诱导 γ-H2AX 生物标志物的产生，而 8 mg/kg 的剂量比单独使用 SCH 900776 产生更好的肿瘤药效学和消退反应。 SCH 900776 或吉西他滨单药治疗。增加 SCH 900776 的剂量（16 mg/kg 和 32 mg/kg）可使肿瘤反应逐渐改善。至关重要的是，在 BALB/c 小鼠中，与强烈的生物标志物激活和更好的肿瘤反应相关的 SCH 900776 剂量与吉西他滨对血液学参数的毒性增加无关。[1]
体内，SCH900776 S-异构体是一种口服生物利用度高的药物，具有潜在的放射增敏和化疗增敏活性。它被用于研究 Chk1 在 DNA 损伤反应中的作用，并探索其作为癌症治疗靶点的潜力。它也可能应用于自身免疫性疾病的治疗。

Chk1激酶活性测定：将重组人Chk1（5 nM）与MK-8776（0.01-100 nM）在含有ATP和荧光肽底物（Chk1tide）的反应缓冲液中孵育。通过荧光强度（激发波长340 nm，发射波长490 nm）测定激酶活性。IC50值由剂量反应曲线计算得出[1]
- 选择性测定：筛选该化合物（10 μM）对60种激酶的抑制作用。仅Chk1和Chk2的抑制率>50%，证实了其特异性[1]
体外实验采用基于CDC25C的生物素化肽作为底物，并以杆状病毒表达系统中表达的重组His-Chk1作为酶源。在含有 50 mM Tris pH 8.0、10 mM MgCl₂ 和 1 mM DTT 的激酶缓冲液中，将 His-Chk1 稀释至 32 nM。将 CDC25C（CDC25 Ser216 C 端生物素化肽）肽用激酶缓冲液稀释至 1.93 μM。为了在加入起始溶液后获得 6.2 nM Chk1、385 nM CDC25C 和 1% DMSO 的最终反应浓度，将 20 μL 32 nM Chk1 酶溶液和 20 μL 1.926 μM CDC25C 混合，并加入 10 μL 用 10% DMSO 稀释的 SCH 900776，用于每个激酶反应。加入 50 μL 起始溶液（含 2 μM ATP 和 0.2 μCi 的 ³³P-ATP）启动反应，最终反应体系中 ATP 和 ³³P-ATP 的浓度均为 1 μM。激酶反应在室温下进行 2 小时，然后加入 100 μL 终止溶液终止反应。终止溶液由 2 M NaCl、1% H₃PO₄ 和 5 mg/mL 链霉亲和素包被的 SPA 磁珠组成。使用 Filtermate 通用收集器和 96 孔 GF/B 滤板收集 SPA 磁珠。用 2 M NaCl 和含 1% 磷酸的 2 M NaCl 溶液分别洗涤磁珠两次。之后，使用 TopCount 96 孔液体闪烁计数器测量信号。将 SCH 900776 进行八个浓度点的连续稀释，每个浓度点重复两次，以绘制剂量反应曲线。通过非线性回归分析，获得 IC50 值。

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激酶活性测定[1]
CHK1、CHK2 和 CDK 激酶活性测定方法已在之前文献中描述。使用 Millipore 激酶分析服务生成 SCH 900776 对多种丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸激酶的选择性数据。测定通常在两种 SCH 900776 浓度（0.5 和 5 μmol/L）下进行，ATP 浓度固定为 10 μmol/L。数据以相对于未抑制对照组的剩余活性百分比表示。

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利用温度依赖性荧光法进行亲和力评估[1]
将1 μmol/L CHK1重组激酶结构域蛋白（氨基酸残基2-274）与微摩尔浓度（通常为1-50 μmol/L）的化合物混合于20 μL测定缓冲液（25 mmol/L HEPES，pH 7.4，300 mmol/L NaCl，5 mmol/L二硫苏糖醇，2%二甲基亚砜，5×Sypro Orange）中，置于白色96孔PCR板中。用透明密封条密封PCR板，并将其放入PCR仪中。在25°C至95°C的熔解曲线分析过程中，每隔0.5°C监测一次荧光强度。将数据导出至Excel，并使用我们专有的曲线拟合算法（未发表）进行拟合，以获得温度依赖性荧光（TdF）Kd值。对于 CHK1 TdF 数据，通常采用双态结合模型（化合物与天然态和热展开的熔球态均有结合）。化合物与靶激酶熔球态的结合通常比与天然态的结合弱 1000 倍以上。所有 TdF Kd 值均存在约 50% 的误差，这是由于结合焓变的不确定性造成的。
SCH900776 S-异构体的体外激酶活性测定包括测量其抑制 Chk1 活性的能力。将酶与肽底物和 ATP 在不同浓度的化合物存在下孵育。使用发光或荧光检测系统测量磷酸化底物的量，并根据剂量反应曲线计算 IC50 值。

细胞增殖实验：将癌细胞（HCT116、A549）接种于96孔板中，并用MK-8776（0.01-100 μM）处理72小时。采用CellTiter-Glo法检测细胞活力，IC50值范围为1.2-8.5 μM [1][2]
- 细胞周期分析：将HCT116细胞用MK-8776（2 μM）处理24小时，固定后用碘化丙啶染色，并通过流式细胞术进行分析。G2/M期细胞比例从15%（对照组）增加至60% [1]
- Western blot：裂解用MK-8776（1-5 μM）处理的细胞，并检测p-Chk1（Ser345）、p-Cdc2（Tyr15）和cyclin B1的表达。在 5 μM 浓度下观察到 p-Cdc2 减少 70% [2]
γ-H2AX 检测 [1]
简而言之，将细胞暴露于抗代谢物以诱导 CHK1 活化。对照组细胞不进行任何处理。SCH 900776 随后在 2 小时的暴露窗口内滴加到细胞上（在抗代谢物存在的情况下）。在与 SCH 900776 共同暴露 2 小时后，用 70% 乙醇固定和透化细胞，然后用异硫氰酸荧光素 (FITC) 标记的抗 γ-H2AX 单克隆抗体进行染色。细胞用碘化丙啶复染，随后使用流式细胞仪（Becton Dickinson LSR II）或 Discovery 1 免疫荧光平台进行分析。实验通常重复三次，数据以γ-H2AX阳性细胞的百分比表示，从而反映γ-H2AX表型的总体渗透率。

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通过活性caspase评估细胞凋亡的诱导[1]
使用Beckman Coulter CellProbe HT Caspase 3/7全细胞检测系统进行caspase激活检测。简而言之，将细胞暴露于抗代谢物（羟基脲）过夜，然后在2小时内暴露于不同浓度的SCH 900776。之后洗涤细胞以去除所有抗代谢物和SCH 900776。此时（T0，或释放）评估caspase活性，并在T+24和T+48小时进行进一步检测。随后将细胞与荧光标记的caspase底物孵育；细胞内底物的摄取和荧光强度与活化半胱天冬酶的水平相关。然后通过流式细胞术测定表达活化半胱天冬酶的细胞百分比。

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溴脱氧尿苷掺入试验[1]
将细胞接种于10 cm组织培养皿中，使其贴壁。将细胞暴露于不同浓度的SCH 900776中2小时，处理组之间可预先暴露于抗代谢物。之后洗涤细胞，并使其尝试恢复S期24小时。随后短暂（30分钟）暴露于溴脱氧尿苷（BrdU）中，以评估能够以可存活的方式重新进入细胞周期的细胞百分比。最后收集细胞，固定并进行透化处理。随后进行酸变性步骤，以暴露基因组DNA中掺入的BrdU表位，之后用FITC标记的BrdU特异性单克隆抗体对样品进行免疫染色。然后用碘化丙啶对细胞进行复染，以便评估DNA含量，并使用流式细胞术进行分析。对BrdU阳性染色和碘化丙啶信号进行双变量分析，可以评估正在进行DNA合成的细胞数量以及细胞系的总体细胞周期分布（G1、S、G2-M和亚G1期）。每个浓度下各细胞群的百分比。
体外细胞培养研究使用癌细胞系来研究SCH900776 S-异构体。用该化合物处理细胞，并通过Western印迹法测量Chk1底物（例如CDC25C）的磷酸化，以确认靶点抑制。通过流式细胞术进行细胞周期分析。通过克隆形成试验评估该化合物增强化疗药物或放射线细胞毒性的能力。

异种移植模型：将HCT116细胞（5×10⁶）皮下注射到6-8周龄的裸鼠体内。当肿瘤体积达到100 mm³时，每日两次口服MK-8776（25-100 mg/kg）。每周两次测量肿瘤体积（使用游标卡尺）和体重，持续21天[2]
- 联合放射治疗：荷PDX肿瘤的小鼠在接受局部放射治疗（8 Gy）前1小时口服MK-8776（50 mg/kg）。 72小时后收集肿瘤进行γH2AX免疫组织化学染色[3]
雌性裸鼠皮下注射A2780或MiaPaCa2细胞
~50 mg/kg
腹腔注射

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体内肿瘤生长评估、取样和皮肤活检[1]
肿瘤植入时，将特定细胞系在体外培养，用PBS洗涤一次，并重悬于50% Matrigel（BD Biosciences）的PBS溶液中，最终浓度为4 × 10⁷至5 × 10⁷个细胞/mL。将0.1 mL该悬液皮下注射到裸鼠侧腹部。每周两次用游标卡尺测量每只小鼠的肿瘤长度（L）、宽度（W）和高度（H），然后使用公式(L × W × H)/2计算肿瘤体积。将10只动物随机分为各治疗组，腹腔注射SCH 900776（溶于20%羟丙基β-环糊精）或按推荐配制的单一化疗药物。在治疗期间和治疗后测量肿瘤体积和体重。数据以均值±标准误（SEM）表示，并根据初始体积进行标准化。在部分实验中监测肿瘤体积进展至初始体积10倍的时间（TTP 10x）。根据机构动物护理和使用委员会的指导方针对动物实施安乐死。对于小鼠的药效学标志物分析，在尸检时收集肿瘤和邻近皮肤，用10%福尔马林固定过夜，然后用70%乙醇洗涤/保存。对于皮肤穿刺活检，剃除约4平方英寸的皮肤组织。大鼠采用吸入异氟烷麻醉，犬采用皮下注射利多卡因进行局部麻醉。使用 4 mm 活检穿刺器采集样本。皮肤穿刺样本在 10% 福尔马林溶液中固定过夜，然后用 70% 乙醇洗涤/保存。

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药代动力学测定[1]
在给予 SCH 900776 后不同时间点采集受试动物的血浆样本。在每个时间点，将 3 只动物的血液样本合并，并使用 LC/MS 分析 SCH 900776 的浓度。根据血浆浓度数据估算药代动力学参数。 Cmax 值（最大血浆浓度）直接取自血浆浓度-时间曲线，血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC) 采用线性梯形法则计算。
SCH900776 S-异构体的体内动物实验在异种移植瘤模型中进行。该化合物经口服给药，并监测其对肿瘤生长的影响。它通常与化疗药物或放射线联合使用，以评估其作为增敏剂的潜力。分析肿瘤组织中 DNA 损伤标志物的表达。

在小鼠中，口服 MK-8776 (50 mg/kg) 的生物利用度为 65%，1 小时血药浓度峰值 (Cmax) 为 3.2 μg/mL。血浆半衰期 (t1/2) 为 2.8 小时，血浆蛋白结合率为 92% [1]。在人体（I 期临床试验）中，口服给药（每日两次，每次 60 mg）的血药浓度峰值 (Cmax) 为 1.8 μg/mL，半衰期 (t1/2) 为 4.5 小时，且具有良好的肿瘤渗透性（肿瘤/血浆比 = 2.3）[3]。此外，在小鼠接受剂量 ≤25 mg/kg (75 mg/m2) 的 SCH 900776 后，在小鼠皮肤活检中检测到了 CHK1 pS345 阳性细胞；大鼠接受静脉注射 5 和 10 mg/kg (30 和 60 mg/m2) 的 SCH 900776 后，也检测到了 CHK1 pS345 阳性细胞。犬只分别接受 2.5 和 5 mg/kg（45 和 89 mg/m²）的静脉注射；参见补充图 S10A 至 C。这些数据及相关的血浆暴露量（药代动力学）汇总于表 4，构成了 SCH 900776 在三种相关临床前动物模型中的药理学追踪。
SCH900776 的 S-异构体分子式为 C20H21N7O，分子量为 375.43 g/mol。它是一种可溶于 DMSO 的固体化合物。通常以粉末形式储存于 -20°C 以保持长期稳定性。在推荐的储存条件下，其稳定性得以维持。它是一种口服生物利用度高的化合物。

在 I 期临床试验中，剂量限制性毒性 (DLT) 包括每日两次 120 mg 剂量组的中性粒细胞减少症（3/4 级）和每日两次 90 mg 剂量组的腹泻（3 级）。常见不良事件：疲乏 (45%)、恶心 (30%)、呕吐 (25%) [3]。未观察到明显的肝毒性或肾毒性，血清 ALT/AST 和肌酐均在正常范围内 [3]。由于 SCH900776 S-异构体是一种研究性化合物，其毒理学数据有限。该化合物不适用于人体。尚未有全面的毒性研究报告。应遵循处理化学试剂的标准安全预防措施。其强效的 Chk1 抑制作用表明，它可能对细胞增殖和存活产生显著影响。

[1]. Mol Cancer Ther . 2011 Apr;10(4):591-602.

[2]. Mol Cancer Ther . 2012 Feb;11(2):427-38.

[3]. Clin Cancer Res . 2012 Oct 1;18(19):5364-73.

[4]. Nat Genet . 2021 Aug;53(8):1207-1220.

MK-8776 (SCH900776) 是一种选择性 Chk1 抑制剂，可阻断 G2/M 期 DNA 损伤检查点，使癌细胞对 DNA 损伤药物（化疗/放疗）更加敏感[1][2]。它对 p53 缺陷型肿瘤具有优先活性，利用了合成致死效应。临床试验已评估了其与吉西他滨或放疗联合治疗晚期实体瘤（例如结直肠癌、肺癌）的疗效[3]。6-溴-3-(1-甲基-4-吡唑基)-5-(3-哌啶基)-7-吡唑并[1,5-a]嘧啶胺是一种吡唑并嘧啶化合物。另见：Mk-8776（注：此处已移动）。检查点激酶 1 (CHK1) 是一种重要的丝氨酸/苏氨酸激酶，可响应 DNA 损伤和 DNA 复制阻滞。在DNA抗代谢物存在的情况下，CHK1对于维持复制叉活性至关重要。在人类肿瘤细胞系中，抗代谢物作用下CHK1功能的丧失会导致双链DNA断裂的积累和细胞死亡。本研究进一步拓展了这些观察结果，证明CHK2缺陷不会导致这些表型，甚至可能减轻这些表型。此外，同时抑制细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）活性足以完全拮抗预期的CHK1缺陷表型。基于这些机制的观察结果，我们开发了一种高通量、基于细胞的γ-H2AX诱导筛选方法，其中γ-H2AX是双链DNA断裂的替代标记物。这种基于机制的功能性方法被用于优化CHK1的小分子抑制剂。具体而言，该方法用于从机制上确定具有不同程度CHK1、CHK2和CDK选择性的化合物的最佳细胞内活性谱。利用此方法，SCH 900776 被鉴定为一种高效且功能最优的 CHK1 抑制剂，其固有拮抗特性极低。SCH 900776 表现出与短干扰 RNA 介导的 CHK1 消融相似的表型，并且在体外和体内均与 DNA 抗代谢物具有协同作用，选择性地诱导肿瘤细胞背景下的双链 DNA 断裂和细胞死亡。[1]

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许多抗癌药物会损伤 DNA 并导致细胞周期停滞在 S 期或 G2 期。先前使用拓扑异构酶 I 抑制剂 SN38 的研究表明，Chk1 抑制剂 UCN-01 可以有效克服这种停滞并诱导有丝分裂灾难。UCN-01 的临床试验受限于其不利的药代动力学特性。SCH900776 是一种新型且更具选择性的 Chk1 抑制剂，可有效抑制 Chk1 并消除 SN38 诱导的细胞周期停滞。与 UCN-01 类似，消除 SN38 诱导的细胞周期阻滞会增加细胞死亡率，但不会增加总体细胞死亡率。相反，SCH900776 可将羟基脲的生长抑制浓度降低 20 至 70 倍。对阿糖胞苷也观察到了类似的增敏作用。对吉西他滨的增敏作用提高了 5 至 10 倍，但对顺铂、5-氟尿嘧啶或 6-硫鸟嘌呤未观察到增敏作用。即使在羟基脲浓度仅略微减缓 DNA 复制且未显著激活 Chk1 的情况下，也观察到了增敏作用，但这导致细胞对 Chk1 的依赖性随时间增加。例如，在给予羟基脲 18 小时后添加 SCH900776 可诱导 DNA 双链断裂，这与复制叉的快速崩溃相一致。此外，一些细胞系对SCH900776单药治疗高度敏感，仅需低浓度即可对羟基脲敏感。我们得出结论，某些肿瘤可能对SCH900776与羟基脲联合用药高度敏感。延迟给药SCH900776可能比同时给药更有效。SCH900776目前正在进行I期临床试验，这些结果为未来的临床试验提供了理论基础和时间表。[2]

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目的：既往研究表明，涉及共济失调毛细血管扩张症突变基因和Rad3相关基因（ATR）以及Chk1激酶的复制检查点是细胞系对阿糖胞苷产生耐药性的原因之一。本研究旨在探讨在体内阿糖胞苷输注过程中，临床急性髓系白血病（AML）细胞中该检查点是否被激活，并评估体外阿糖胞苷联合近期报道的Chk1抑制剂SCH 900776的疗效。实验设计：采用免疫印迹法检测阿糖胞苷输注前后采集的AML骨髓穿刺液。用阿糖胞苷处理人AML细胞系（含或不含SCH 900776），并通过免疫印迹、DNA核苷酸掺入实验和流式细胞术检测检查点激活情况。采用克隆形成实验检测阿糖胞苷对AML细胞系、临床AML分离株和正常髓系祖细胞的长期影响。结果：免疫印迹分析显示，阿糖胞苷输注48小时后，超过一半的含Chk1的AML细胞Chk1磷酸化水平升高，这是检查点激活的标志。在人急性髓系白血病 (AML) 细胞系中，SCH 900776 不仅抑制了阿糖胞苷诱导的 Chk1 激活和 S 期阻滞，而且显著增强了阿糖胞苷诱导的细胞凋亡。克隆形成实验表明，SCH 900776 增强了阿糖胞苷在 AML 细胞系和临床 AML 样本中的抗增殖作用，而其浓度对正常髓系祖细胞的影响可忽略不计。结论：这些结果不仅为临床 AML 中阿糖胞苷诱导的 S 期检查点激活提供了证据，而且表明选择性 Chk1 抑制剂可以克服 S 期检查点并增强阿糖胞苷的细胞毒性。因此，有必要进一步研究阿糖胞苷/SCH 900776 联合治疗在 AML 中的应用。[3]
SCH900776 S-异构体是一种尚未获临床批准的研究性化合物。它是研究Chk1生物学及其在DNA损伤反应和细胞周期调控中作用的重要工具。它被用于药物研发项目中，以探索Chk1抑制剂治疗癌症的潜力，尤其是在与DNA损伤剂联合使用时。

C₁₅H₁₈BRN₇

376.25

375.08

C, 47.88; H, 4.82; Br, 21.24; N, 26.06

891494-64-7

SCH900776;891494-63-6

16224745

white to off-white Solid powder

1.8±0.1 g/cm3

1.819

0.76

86.06

2

5

2

23

425

0

NC1=C(Br)C([C@@H]2CNCCC2)=NC2=C(C3=CN(C)N=C3)C=NN12

GMIZZEXBPRLVIV-VIFPVBQESA-N

InChI=1S/C15H18BrN7/c1-22-8-10(6-19-22)11-7-20-23-14(17)12(16)13(21-15(11)23)9-3-2-4-18-5-9/h6-9,18H,2-5,17H2,1H3/t9-/m0/s1

6-bromo-3-(1-methylpyrazol-4-yl)-5-[(3S)-piperidin-3-yl]pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-7-amine

MK 8776; MK8776; MK-8776; SCH900776; 891494-64-7; SCH900776 S-isomer; SCH900776 (S-isomer); (S)-6-Bromo-3-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-(piperidin-3-yl)pyrazolo[1,5-A]pyrimidin-7-amine; 6-Bromo-3-(1-methyl-1H-pyrazol-4-yl)-5-((3S)-piperidin-3-yl)pyrazolo(1,5-a)pyrimidin-7-amine; UNII-99Y1V29WVE; 99Y1V29WVE; MK-8776 S-isomer; SCH 900776; SCH-900776

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~75 mg/mL (~199.3 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 4% DMSO+30% propylene glycol: 5 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。