MPTP hydrochloride

Dopamine neurotoxin
Mitochondrial complex I (NADH-ubiquinone oxidoreductase) (IC50 for MPP+ (metabolite of MPTP hydrochloride) = 0.7 μM in isolated mouse brain mitochondria) [3]
- Dopamine transporter (DAT), facilitating entry of MPP+ (metabolite of MPTP hydrochloride) into dopaminergic neurons [4]

体外活性：当 N2AB-1 和神经胶质瘤细胞暴露于所有剂量的 MPTP 时，这些细胞的形态没有改变。而且，C6 神经胶质瘤细胞增殖也不受 MPTP 治疗的影响。 MPTP 促进人神经母细胞瘤 M17 细胞的凋亡和 Tau 磷酸化。 MPTP 显着促进人神经母细胞瘤 M17 细胞中 Ser262 Tau 磷酸化。 MPTP 导致 M17 人神经母细胞瘤细胞内 α-突触核蛋白水平呈剂量依赖性增加。 MPTP 似乎通过激活 PKA 和 GSK3β 来促进大脑中 Tau 磷酸化。激酶测定：MPTP 抑制 ICR 小鼠膈神经-半膈制剂（20-30 g）的神经诱发抽搐。 PP 50 uM，而非 PA 50 uM 或 TP 50 uM，增强了 MPTP 的抑制作用。 PP 100 uM 本身对抽搐幅度有抑制作用。 MPTP、TC 和 PP 抑制抽搐的 IC50 值分别为 53、0.7 和 123 uM。用 PP 50 uM 预处理使 MPTP 和 TC 的 IC50 值分别降低至 18 和 0.3 uM。细胞测定：将N2AB-1和C6神经胶质瘤细胞以每孔50,000个细胞和上述培养基铺板于24孔costar培养皿（直径16mm）中。 24小时后，除去培养基，并一式两份地添加具有不同浓度的MPTP或MPP+的培养基。然后将对照和处理的细胞进行胰蛋白酶消化，并在处理后 3 天每天用血细胞计数器进行计数。

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MPTP hydrochloride（100 μM）可被星形胶质细胞代谢为MPP+，含MPP+的条件培养基可诱导多巴胺能神经元（N27细胞）死亡，24小时后细胞存活率下降40%；该毒性可被DAT抑制剂阻断[4]
- MPTP hydrochloride 的代谢产物MPP+可抑制大鼠脑分离线粒体的复合物I活性，1 μM浓度下可使NADH氧化速率降低58%[3]
- MPTP hydrochloride（50-200 μM）处理原代大鼠皮质神经元48小时，可增加活性氧（ROS）生成、降低线粒体膜电位，并诱导细胞凋亡（150 μM浓度下凋亡率为35%）[1]

MPTP 处理的小鼠黑质致密部酪氨酸羟化酶阳性神经元的数量减少。 MPTP降低小鼠中脑硫氧还蛋白还原酶1的表达和硫氧还蛋白还原酶活性，减少小鼠黑质致密部硫氧还蛋白还原酶1阳性细胞的数量。施用毒素 MPTP 可导致人类和非人类灵长类动物发生神经化学、行为和组织病理学改变，与帕金森病患者中观察到的情况类似。与灵长类动物相比，啮齿动物对 MPTP 不敏感。 MPTP可通过多种途径给药，例如灌胃和立体定向注射，但最常见且可重复的途径是全身给药，包括皮下、静脉内、腹膜内和肌内注射。 MPTP 是一种亲脂性原毒素，全身注射后可快速穿过血脑屏障。一旦进入大脑，MPTP 就会被单胺氧化酶 B 转化为 1-甲基-4-苯基吡啶。 MPTP 已被证明对人类、猴子和小鼠黑质纹状体系统的多巴胺能神经元有毒，并产生持久的耗竭纹状体中的 DA 及其代谢物。

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C57BL/6小鼠接受MPTP hydrochloride（30 mg/kg，腹腔注射，每日1次，连续5天）处理，可诱导帕金森病（PD）样症状：自发活动能力下降（总移动距离减少45%）、黑质致密部（SNpc）多巴胺能神经元丢失（酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元减少60%）、纹状体多巴胺含量降低（减少75%）[1]
- 妊娠12.5天的CD-1小鼠接受MPTP hydrochloride（10或20 mg/kg，皮下注射）处理，胎鼠大脑中脑TH阳性神经元减少（20 mg/kg剂量下减少28%），氧化应激标志物（4-羟基壬烯酸水平升高32%）[2]
- C57BL/6雄性小鼠静脉注射单次剂量MPTP hydrochloride（20 mg/kg），纹状体MPP+浓度在注射后1小时达峰值（12 ng/mg组织），7天后SNpc多巴胺能神经元选择性损伤（TH阳性细胞丢失40%）[3]

MPTP 可以防止 ICR 小鼠（20-30 g）的膈神经-半膈制剂经历神经诱发的抽搐。 MPTP 的抑制作用被 PP 50 uM 放大，但不被 PA 50 uM 或 TP 50 uM 放大。单独使用PP 100 uM 即可抑制抽搐的幅度。 MPTP、TC 和 PP 抽搐抑制 IC50 值依次为 53、0.7 和 123 uM。用 PP 50 uM 预处理后，MPTP 和 TC 的 IC50 值分别为 18 和 0.3 uM。

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小鼠脑分离线粒体悬浮于反应缓冲液中，与不同浓度的MPTP hydrochloride 代谢产物MPP+在37°C下孵育15分钟。通过监测340 nm处吸光度下降（NADH氧化）测定NADH-泛醌氧化还原酶活性，计算IC50值[3]
- 在添加单胺氧化酶B的大鼠脑匀浆中，MPTP hydrochloride 体外转化为MPP+，随后进行线粒体复合物I活性测定。反应体系含NADH作为底物，通过分光光度法检测泛醌还原量定量酶活性[4]

使用前面提到的培养基将 N2AB-1 和 C6 神经胶质瘤细胞铺板在 24 孔 costar 培养皿（直径 16 mm）中，每孔 50,000 个细胞。 24 小时后，添加含有不同 MPTP 或 MPP+ 浓度的重复培养基。处理三天后，对对照细胞和处理细胞进行胰蛋白酶消化，并每天使用血细胞计数器测量它们的计数。

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原代大鼠皮质神经元在神经基底培养基中培养7天，随后用MPTP hydrochloride（50-200 μM）处理48小时。采用DCFH-DA染色和流式细胞术检测ROS生成；JC-1染料测定线粒体膜电位；Annexin V-FITC/PI双染色鉴定凋亡细胞[1]
- N27多巴胺能细胞在RPMI 1640培养基中培养，暴露于经MPTP hydrochloride（100 μM）预处理24小时的星形胶质细胞条件培养基中。MTT法检测细胞活力；Western blot检测剪切型caspase-3表达及Bcl-2/Bax比值[4]
- 分离并培养原代小鼠中脑多巴胺能神经元，用MPTP hydrochloride 代谢产物MPP+（10 μM）处理24小时。免疫细胞化学检测TH表达；荧光素酶法测定细胞内ATP水平[2]

动物实验旨在建立MPTP小鼠模型和LPS大鼠模型。简而言之，成年大鼠单侧注射LPS（0.5 μL，浓度为10 μg/μL，溶于0.9%生理盐水），对侧注射等体积的0.9%生理盐水，注射部位位于内侧前脑束（MFB），坐标为：AP-4.2 mm，L 1.5 mm，V 7.8 mm。成年小鼠连续五天腹腔注射MPTP，剂量为25 mg/kg。对照组注射等体积的生理盐水。动物注射MPTP或LPS后，分别于第1、2、3或4周处死。收集脑组织样本，用于后续的蛋白质印迹和免疫组织化学检测。

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C57BL/6小鼠（8-10周龄）随机分为对照组和MPTP盐酸盐组。治疗组连续5天，每天腹腔注射30 mg/kg MPTP盐酸盐（溶于生理盐水）。首次注射后第7天，使用旷场实验装置测试小鼠的运动活性，然后处死小鼠，收集脑组织（黑质致密部和纹状体）进行组织病理学和生化分析[1]
- 妊娠CD-1小鼠（妊娠第12天）被随机分为对照组、10 mg/kg MPTP盐酸盐组和20 mg/kg MPTP盐酸盐组。将MPTP盐酸盐溶于生理盐水中，皮下注射给药。妊娠第18天，处死小鼠，解剖胎脑，并对中脑区域进行TH免疫染色和氧化应激标志物检测[2]
- 12周龄雄性C57BL/6小鼠单次静脉注射20 mg/kg MPTP盐酸盐（溶于磷酸盐缓冲液）。注射后1、3、6和24小时，处死小鼠，收集纹状体、黑质致密部、肝脏和肾脏组织，采用高效液相色谱法（HPLC）测定MPP+浓度[3]

MPTP代谢[4]
MPTP的代谢是一个复杂的多步骤过程²。全身给药后，具有高度亲脂性的MPTP能够迅速穿过血脑屏障。进入脑组织后，前毒素MPTP在非多巴胺能细胞内经单胺氧化酶B (MAO-B)代谢为1-甲基-4-苯基-2,3-二氢吡啶鎓，然后（可能通过自发氧化）进一步代谢为1-甲基-4-苯基吡啶鎓 (MPP⁺)，即活性毒性化合物。随后，MPP⁺被释放到细胞外空间。由于MPP⁺是极性分子，与前体MPTP不同，它不能自由进入细胞，而是依赖于质膜转运蛋白才能进入多巴胺能神经元等神经元。MPP⁺对质膜多巴胺转运蛋白¹⁸以及去甲肾上腺素和血清素转运蛋白均具有高亲和力。 MPP+一旦进入多巴胺能神经元，即可被隔离到突触体囊泡中¹⁹或聚集在线粒体中²⁰。这种复杂的毒代动力学意味着，要正确解读MPTP研究的结果，需要评估MPTP代谢的关键方面，以确保观察到的效应与真实且有意义的分子事件相关，而不是与毒素药理学的干扰相关。评估可能包括但不限于纹状体MPP+水平（如下所述）、MAO-B活性、乳酸水平以及[³H]多巴胺和[³H]MPP+的摄取。这些分析的方案可在以下参考文献中找到。

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盐酸MPTP经肠外途径（腹腔/静脉）给药后迅速吸收，并在15分钟内分布至大脑[3]
- 在大脑中，盐酸MPTP经星形胶质细胞特异性单胺氧化酶B (MAO-B)代谢为MPP+；MPP+通过多巴胺转运蛋白(DAT)被多巴胺能神经元摄取[4]
- MPP+在纹状体中的消除半衰期为3.2小时；MPP+主要以原形代谢物的形式经尿液排出（24小时内排出给药剂量的65%）[3]
- 盐酸MPTP不能有效通过胎盘，但母体给药后，MPP+（代谢物）可在胎儿脑组织中蓄积[2]

MPTP盐酸盐对小鼠的急性毒性：LD50为38 mg/kg（腹腔注射）；小鼠在24小时内因呼吸衰竭死亡[3]
- 选择性神经毒性：MPTP盐酸盐（代谢为MPP+）导致黑质致密部（SNpc）多巴胺能神经元的不可逆性丢失，进而导致类似帕金森病的运动障碍[1]
- 妊娠期母体给予MPTP盐酸盐（≥10 mg/kg）可诱导胎儿神经毒性，包括胎儿中脑多巴胺能神经元数量减少和氧化应激增加[2]
- 小鼠急性给予MPTP盐酸盐（30 mg/kg，5天）后未观察到明显的肝毒性或肾毒性；血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）和肌酐水平保持在正常范围内[1]

[1]. Neural Regen Res . 2013 Dec 15;8(35):3275-83.

[2]. Neurotoxicol Teratol . 2002 Sep-Oct;24(5):599-605.

[3]. Brain Res . 1988 Jul 26;456(2):254-62.

[4]. J Biol Chem . 2011 Feb 18;286(7):5055-68.

本研究报告了在两栖动物（蛙和蝾螈）中建立的两种动物模型。在这些模型中，1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）可产生与人类疾病类似的神经行为和生化表现，此外，还会导致至少一种神经嵴色素细胞——皮肤黑素细胞——发生可测量的改变。我们认为，这种新方法有望成为一种廉价且易于量化的模型，用于研究MPTP对中枢和周围神经系统的影响。我们还证明，单胺氧化酶抑制剂可完全消除MPTP在体内的毒性作用，而儿茶酚-O-甲基转移酶抑制剂则会增强这种毒性作用。 MPTP经氧化代谢为有毒代谢物，但其假定的最终代谢物1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）在本模型中毒性甚至高于MPTP，这可能是通过不同的机制实现的。[1]

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本研究在小鼠膈神经-膈肌模型中探讨了4-苯基吡啶（一种MAO-B抑制剂）对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）神经肌肉阻滞作用的增强作用。MPTP以浓度（1-200 μM）依赖的方式阻断神经诱发的肌肉抽搐。4-苯基吡啶（而非帕吉林或反苯环丙胺）增强了MPTP的这种抑制作用。用 50 μM 4-苯基吡啶预处理后，MPTP 和 d-筒箭毒碱的 IC50 值分别从 53 μM 和 0.7 μM 降低至 0.3 μM（抑制 50% 肌肉抽搐幅度所需的浓度）。4-苯基吡啶还增强了 MPTP 和 d-筒箭毒碱对乙酰胆碱 (0.1 mM) 诱导的去神经小鼠膈肌收缩的抑制作用。4-苯基吡啶增强了 α-银环蛇毒素诱导的肌肉抽搐抑制作用以及 [125I]α-银环蛇毒素与小鼠膈肌的特异性结合，但 4-苯基吡啶预处理对 MPTP 和 d-筒箭毒碱抑制 [125I]α-银环蛇毒素结合的作用没有显著影响。电生理研究表明，4-苯基吡啶可增强MPTP和d-筒箭毒碱对MEPP和EPPP振幅的抑制作用。这表明4-苯基吡啶增强了MPTP和d-筒箭毒碱在突触后尼古丁乙酰胆碱受体的神经肌肉阻滞作用。这一发现提示，4-苯基吡啶在MPTP诱导的帕金森病中的应用可能受到其增强MPTP神经肌肉阻滞作用的限制。[2]

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背景：反应性星形胶质增生是帕金森病（PD）患者脑部一个显著的病理特征，但其进展过程和调控机制尚不清楚。本研究发现，生长停滞特异性1 (Gas1) 是一种肿瘤生长抑制癌基因，可作为原代培养的反应性星形胶质细胞和受损黑质中细胞凋亡的新型调节因子。
方法：本研究采用了动物模型和细胞培养方法。使用脂多糖 (LPS) 和 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶 (MPTP) 处理的动物模型，通过免疫组织化学和蛋白质印迹法检测脑组织中 Gas1 的表达。通过双标、CCK-8、LDH、TUNEL、流式细胞术和 siRNA 敲低等方法，分析 Gas1 在反应性星形胶质细胞和 SH-SY5Y 细胞的活力和凋亡中的作用。
结果：在 LPS 或 MPTP 损伤的脑组织中，大多数反应性星形胶质细胞中 Gas1 的表达显著升高。在受损的黑质中，GFAP阳性星形胶质细胞表现出更高水平的切割型caspase-3。在细胞培养中，上调的Gas1表达诱导了LPS联合干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α刺激的反应性星形胶质细胞凋亡。通过siRNA敲低Gas1基因表达证实了这一效应。最后，值得注意的是，潜在的信号通路明显与Bax/Bcl-2比值的升高、活性氧的大量产生以及切割型caspase-3的激活有关。
结论：本研究表明，诱导型Gas1的上调促进了受损黑质中反应性星形胶质细胞的凋亡。 Gas1信号通路可能作为星形胶质增生的新型调节因子，因此是帕金森病（PD）炎症事件的潜在干预靶点。[3]

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本方案描述了我们使用神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）构建可靠的帕金森病（PD）小鼠模型的方法。我们讨论了该模型的具体细节，提供了关键参考文献，并概述了研究人员安全成功地构建MPTP帕金森病小鼠模型所需了解的内容。本方案的完成取决于所使用的MPTP给药方案和实际计划的研究，研究周期通常为7至30天。该方案要求实施安全措施并购置若干设备，这是一项一次性投资，如果选择定期使用该模型，则值得进行。[4]

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背景：有研究表明，神经炎症（其中活化的微胶质细胞发挥着重要作用）与帕金森病 (PD) 的发展密切相关。因此，调节微胶质细胞的活化是潜在的治疗靶点，可用于对抗该神经系统疾病中发生的多巴胺能神经退行性变。在生理条件下，多种可溶性和膜相关抑制机制有助于维持微胶质细胞的静息/监视表型。然而，PD 患者脑内活化微胶质细胞的存在表明，这些机制可能已超负荷运转。我们重点研究了一种膜相关机制，即CD200-CD200R1配体-受体对。
方法：采用急性MPTP诱导的帕金森病小鼠模型，研究MPTP诱导的多巴胺能神经退行性变和神经炎症背景下CD200和CD200R1 mRNA表达的时间模式。通过酪氨酸羟化酶（TH）免疫反应性评估多巴胺能损伤，并通过炎症标志物的mRNA表达以及IBA1和GFAP免疫组织化学评估神经炎症。本研究采用 CD200R1 激动剂或 CD200 基因敲除小鼠，探讨了 CD200-CD200R1 系统调控对 MPTP 诱导损伤的影响。结果显示：MPTP 给药导致纹状体中酪氨酸羟化酶（TH）阳性纤维和黑质致密部中 TH 阳性神经元逐渐减少，并伴有短暂的星形胶质增生、小胶质增生以及促炎和抗炎标志物的表达。MPTP 处理后，腹侧中脑中 CD200 mRNA 水平迅速下降，而 CD200R1 mRNA 表达在该脑区早期和晚期均出现短暂下降。相反，纹状体中 CD200R1 表达出现短暂上升。 CD200R1激动剂的给药抑制了MPTP诱导的多巴胺能神经元退行性变，而CD200缺陷小鼠的小胶质细胞则表现出更早的激活迹象。
结论：总而言之，这些发现为CD200-CD200R1改变、胶质细胞激活和神经元丢失之间的相关性提供了证据。CD200R1刺激可减少MPTP诱导的多巴胺能神经元丢失，而CD200缺陷会导致小胶质细胞更早激活，这表明增强CD200R1信号传导可能是控制帕金森病（PD）中神经炎症和神经元死亡的一种可能方法。[5]

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帕金森病（PD）是一种进行性神经退行性疾病，其特征是黑质（SN）中多巴胺能神经元的丢失和纹状体中多巴胺水平的降低。尽管帕金森病（PD）中多巴胺能神经元死亡的分子机制尚不明确，但神经炎症也被认为是PD发病机制和进展中的重要介质。本研究表明，在1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导的PD小鼠模型中，小胶质细胞NLRP3炎症小体的激活对于多巴胺能神经元的丢失以及随后的运动障碍至关重要。具体而言，NLRP3缺陷显著减轻了MPTP处理小鼠的运动功能障碍和多巴胺能神经元的退行性变。此外，NLRP3缺陷还消除了MPTP诱导的小鼠黑质（SN）中小胶质细胞的募集、白细胞介素-1β（IL-1β）的产生以及caspase-1的激活。在原代小胶质细胞和混合胶质细胞培养中，MPTP/ATP处理通过产生线粒体活性氧（ROS）促进NLRP3炎症小体的组装和激活。在小鼠骨髓来源的巨噬细胞中，1-甲基-4-苯基吡啶鎓 (MPP+) 在 ATP 或尼日利亚菌素处理下均能持续诱导 NLRP3 炎症小体激活。这些发现揭示了神经毒素 MPTP 或 MPP+ 对 NLRP3 激活的新型启动作用。随后，NLRP3 炎症小体激活的小胶质细胞在小胶质细胞-神经元共培养模型中诱导了严重的神经元死亡。此外，基于 Cx3Cr1CreER 的小胶质细胞特异性表达活性 NLRP3 突变体显著加剧了 MPTP 处理小鼠的运动障碍和多巴胺能神经元丢失。综上所述，我们的结果表明，小胶质细胞 NLRP3 炎症小体的激活在 MPTP 诱导的帕金森病神经退行性变中起着关键作用。[6]

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参考文献：
[1]. Langston JW, Irwin I. MPTP神经毒性：毒性阶段概述及特征。II. MPP在黑质中的选择性积累：神经毒性的关键（问题）。生命科学，1985，36，第3期，201-12。
[2]. Hsu KS等。4-苯基吡啶增强MPTP对小鼠膈神经-膈肌神经肌肉阻滞的作用。神经药理学，1993，32，第9期，877-83。
[3]. Sun XL等。在LPS和MPTP模型中，Gas1上调可诱导并促进黑质反应性星形胶质细胞的细胞凋亡。神经炎症杂志。 2016年7月8日；13(1):180。
[4]. Jackson-Lewis V, Przedborski S. MPTP小鼠帕金森病模型方案。Nat Protoc. 2007;2(1):141-51。
[5]. Rabaneda-Lombarte N等。CD200R1小胶质细胞抑制性受体作为MPTP帕金森病模型的治疗靶点。J Neuroinflammation. 2021年4月6日；18(1):88。
[6]. Lee等。MPTP驱动的小胶质细胞NLRP3炎症小体激活在多巴胺能神经退行性变中起着核心作用。Cell Death Differ. 2019年1月；26(2):213-228。

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MPTP盐酸盐是一种广泛用于诱导啮齿动物和非人灵长类动物实验性帕金森病模型的合成化合物，可模拟人类帕金森病的病理和行为特征[1]
- MPTP盐酸盐的神经毒性机制涉及三个关键步骤：进入大脑、经MAO-B转化为MPP+、MPP+介导的线粒体复合物I抑制，导致氧化应激、ATP耗竭和多巴胺能神经元凋亡[4]
- MPTP盐酸盐没有临床治疗应用；其主要用途是临床前研究，用于研究帕金森病的发病机制和评估潜在的神经保护剂[3]

C12H16CLN

209.72

209.1

23007-85-4

161406

White to off-white solid powder

258.6ºC at 760mmHg

254 - 257 °C

105.8ºC

0.0136mmHg at 25°C

3.145

3.2Ų

1

1

1

14

189

0

CN1CCC(=CC1)C2=CC=CC=C2.Cl

KOWJANGMTAZWDT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C12H15N.ClH/c1-13-9-7-12(8-10-13)11-5-3-2-4-6-11;/h2-7H,8-10H2,1H3;1H

1-methyl-4-phenyl-3,6-dihydro-2H-pyridine;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (7.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (7.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (7.96 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 5%DMSO+ 40%PEG300+ 5%Tween 80+ 50%ddH2O: 2.1mg/ml (10.01mM)

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配方 5 中的溶解度: ≥ 100 mg/mL (476.83 mM) (饱和度未知) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。