MRS1845

store-operated calcium (SOC) channel

当应用 MRS1845 (10 μM) 时，β-甘油磷酸盐对储存吸附的 Ca2+ 进入 (SOCE) 的影响几乎完全消除 [2]。胎盘生长因子 (PlGF) 治疗后，MRS1845 (10 μM) 几乎完全消除了 SOCE 的增加并大大降低了 [3]。

某些二氢卟吩似乎会导致SOC通道依赖性钙升高的不完全阻断，这表明HL-60细胞中存在多种此类通道。N-甲基尼群地平（IC（50）2.6微M，MRS 1844）和N-炔丙基尼群地平。[1]

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ORAI1抑制剂MRS1845或SGK1抑制剂GSK650394的额外治疗几乎破坏了β-甘油磷酸对SOCE的影响。此外，在ORAI1抑制剂存在和ORAI1沉默的情况下，β-甘油磷酸诱导的HAoSMCs中MSX2、CBFA1、SOX9和ALPL mRNA的表达和活性受到抑制。总之，增强的磷酸盐上调了ORAI1和STIM1的表达，并储存了Ca2+进入，这参与了VSMCs骨/软骨生成信号的协调。关键信息：•在主动脉SMC中，磷酸供体β-甘油磷酸上调Ca2+通道ORAI1。•在主动脉SMC中，β-甘油磷酸上调ORAI1激活剂STIM1在主动脉SMC中，β-甘油磷酸上调了储存操作的Ca2+进入（SOCE）β-甘油磷酸对SOCE的作用被ORAI1抑制剂MRS1845破坏MRS1845和ORAI1沉默会干扰成骨信号的刺激。 [2]

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在重新添加细胞外Ca2+后，PlGF显著增加了储存操作的Ca2+进入，这一作用几乎被Orai1抑制剂MRS1845（10μM）所抵消。PlGF进一步增加了HIF1α转录物和蛋白质水平，MRS1845（10μM）再次显著减弱了这一作用。总之，PlGF上调Orai1和STIM1的表达，从而增强储存操作的Ca2+进入，随后上调HIF1α。[3]

[1]. Dihydropyridines as inhibitors of capacitative calcium entry in leukemic HL-60 cells. Biochem Pharmacol. 2003 Feb 1;65(3):329-38.

[2]. Phosphate-induced ORAI1 expression and store-operated Ca2+ entry in aortic smooth muscle cells. J Mol Med (Berl). 2019 Oct;97(10):1465-1475.

[3]. Upregulation of Orai1 and STIM1 expression as well as store-operated Ca2+ entry in ovary carcinoma cells by placental growth factor. Biochem Biophys Res Commun. 2019 May 7;512(3):467-472.

本研究考察了一系列1,4-二氢吡啶类化合物（DHPs）作为储库操纵性钙（SOC）通道容积性钙内流抑制剂的作用。这类通道在白血病HL-60细胞中，ATP诱导的肌醇三磷酸（IP₃）敏感钙库释放后被激活。活性最强的DHPs是那些在4-苯基上带有吸电子取代基的化合物，例如间位或对位硝基甲基或间位三氟甲基（IC₅₀值：3-6 μM）。与通常作为L型钙通道阻滞剂开发的DHPs的乙酯/甲酯对应的苄酯类化合物，以及N-取代的DHPs，均保持了对SOC通道的活性。N-甲基化使DHPs对L型通道的活性降低了几个数量级，最终得到的DHPs对SOC和L型通道的活性几乎相同。含有N-乙基、N-烯丙基和N-炔丙基的二氢吡啶类化合物（DHP）对SOC通道和L型通道的活性相似。用更大的基团（例如环丁基或苯基）取代DHP中常见的6-甲基后，其对SOC通道的活性消失；这些DHP反而会诱导肌醇磷酸酯的生成和IP₃敏感钙库的释放。其他DHP也能引起钙库的释放，但通常需要比抑制容积性钙内流所需的浓度高得多的浓度。某些DHP似乎对SOC通道依赖性钙离子浓度升高的阻断并不完全，这表明HL-60细胞中存在不止一类此类通道。 N-甲基硝苯地平（IC50 2.6 μM，MRS 1844）和N-丙炔基硝苯地平（IC50 1.7 μM，MRS 1845）是开发选择性SOC通道抑制剂的潜在先导化合物。[1]

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慢性肾脏病（CKD）中肾脏磷酸盐清除受损会导致高磷血症，进而触发血管平滑肌细胞（VSMC）中的成骨/成软骨信号传导和血管钙化。VSMC的成骨/成软骨转分化导致转录因子MSX2、CBFA1和SOX9以及组织非特异性碱性磷酸酶（ALPL）的上调，ALPL通过降解钙化抑制剂焦磷酸盐来促进钙化。血管平滑肌细胞 (VSMC) 中的成骨/成软骨信号传导涉及血清和糖皮质激素诱导激酶 SGK1。与其他细胞类型一样，SGK1 是 ORAI1 的强效激活剂，ORAI1 是一种钙离子通道，可介导储存操纵性钙离子内流 (SOCE)。钙离子传感器 STIM1 在细胞内钙库耗竭后激活 ORAI1。本研究探讨了磷酸盐是否调节 VSMC 中 ORAI1 和/或 STIM1 的表达，从而影响 SOCE。为此，我们用磷酸盐供体 β-甘油磷酸盐处理原代人主动脉平滑肌细胞 (HAoSMC)。采用 qRT-PCR 检测转录水平，Western blotting 检测蛋白丰度，比色法检测 ALPL 活性，茜素红 S 染色检测钙化，Fura-2 荧光法检测胞内 Ca2+ 浓度 ([Ca2+]i)，并通过在用毒胡萝卜素耗竭胞内钙库后重新添加胞外 Ca2+ 来检测 [Ca2+]i 的增加，从而评估 SOCE。结果表明，β-甘油磷酸酯处理可增加 HAoSMC 中 ORAI1 和 STIM1 的转录水平和蛋白丰度，并增强 SOCE。使用 ORAI1 抑制剂 MRS1845 或 SGK1 抑制剂 GSK650394 进行额外处理，几乎完全消除了 β-甘油磷酸酯对 SOCE 的影响。此外，在ORAI1抑制剂存在或ORAI1基因沉默的情况下，β-甘油磷酸诱导的HAoSMC中MSX2、CBFA1、SOX9和ALPL mRNA的表达和活性均受到抑制。总之，磷酸盐水平升高可上调ORAI1和STIM1的表达以及胞内钙库操纵性钙离子内流（SOCE），从而参与调控血管平滑肌细胞（VSMC）的成骨/成软骨信号通路。关键信息：• 在主动脉平滑肌细胞中，磷酸盐供体β-甘油磷酸可上调钙离子通道ORAI1。• 在主动脉平滑肌细胞中，β-甘油磷酸可上调ORAI1激活因子STIM1。• 在主动脉平滑肌细胞中，β-甘油磷酸可上调胞内钙库操纵性钙离子内流（SOCE）。• ORAI1抑制剂MRS1845可阻断β-甘油磷酸对SOCE的影响。 MRS1845 和 ORAI1 沉默会破坏成骨信号传导的刺激。[2]

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胎盘生长因子 (PlGF) 由肿瘤细胞产生，部分通过上调缺氧诱导因子 HIF1α 来刺激肿瘤生长和转移。肿瘤细胞增殖和迁移的调控涉及胞质 Ca2+ 活性 ([Ca2+]i) 的振荡。[Ca2+]i 振荡可通过触发细胞内 Ca2+ 释放，随后发生储存操纵性 Ca2+ 内流 (SOCE) 来实现。实现 SOCE 的机制包括孔道形成离子通道单元 Orai1 及其调节因子 STIM1。本研究探讨了 PlGF 是否影响 Orai1 和 STIM1 的表达以及 SOCE，以及这种影响是否会影响 HIF1α 的表达。为此，将卵巢癌细胞在有或无PlGF（10 ng/ml）的条件下培养24小时。采用RT-PCR定量分析Orai1、STIM1和HIF1α的转录水平，并采用Western blotting定量分析Orai1、STIM1和HIF1α的蛋白水平。通过Fura-2荧光法估算细胞内钙离子浓度[Ca2+]i，并通过胞外钙离子耗竭后重新添加钙离子来检测胞内钙离子内流[SOCE]i的增加。胞外钙离子耗竭的实验方法包括去除细胞外钙离子和使用肌浆网钙泵（SERCA）抑制剂thapsigargin（1 μM）。结果表明，PlGF处理后，卵巢癌细胞中Orai1和STIM1的转录和蛋白水平均显著升高。PlGF显著增加了重新添加胞外钙离子后发生的胞内钙离子内流，而Orai1抑制剂MRS1845（10 μM）几乎完全阻断了这种作用。 PlGF进一步提高了HIF1α的转录本和蛋白水平，而MRS1845（10 μM）则显著抑制了这一作用。总之，PlGF上调Orai1和STIM1的表达，从而增强了胞内钙库操纵性Ca2+内流，并随后上调HIF1α。[3]

C₂₁H₂₂N₂O₆

398.40918

398.148

C, 63.31; H, 5.57; N, 7.03; O, 24.09

544478-19-5

11538542

Typically exists as Off-white to light yellow solids at room temperature

1.318g/cm3

530.8ºC at 760 mmHg

274.8ºC

1.595

3.372

101.66

0

7

7

29

798

0

CCOC(C1=C(C)N(CC#C)C(C)=C(C(OC)=O)C1C1C=CC=C([N+]([O-])=O)C=1)=O

BITHABUTZRAUGT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H22N2O6/c1-6-11-22-13(3)17(20(24)28-5)19(18(14(22)4)21(25)29-7-2)15-9-8-10-16(12-15)23(26)27/h1,8-10,12,19H,7,11H2,2-5H3

3-ethyl 5-methyl 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1-(prop-2-yn-1-yl)-1,4-dihydropyridine-3,5-dicarboxylate

MRS 1845; MRS1845; MRS-1845; N-Propargylnitrendipene; N-Propargylnitrendipene; MRS-1845; 5-O-ethyl 3-O-methyl 2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1-prop-2-ynyl-4H-pyridine-3,5-dicarboxylate; Lopac0_000763; MLS002172491;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 83.33 mg/mL (~209.16 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (12.55 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (12.55 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (12.55 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。