PRMT1 (IC50 = 30 nM); PRMT3 (IC50 = 119 nM); PRMT4 (IC50 = 83 nM); PRMT6 (IC50 = 4 nM); PRMT8 (IC50 = 5 nM)
Type I Protein Arginine Methyltransferases (PRMTs) [1]
PRMT1 (Ki = 4.9 nM, ITC; IC₅₀ = 11 nM, radioactive methyltransferase assay) [1]
PRMT3 (Ki = 12 nM, ITC; IC₅₀ = 28 nM, radioactive methyltransferase assay) [1]
PRMT6 (Ki = 6.4 nM, ITC; IC₅₀ = 15 nM, radioactive methyltransferase assay) [1]
Type II Protein Arginine Methyltransferase 5 (PRMT5) (IC₅₀ > 10,000 nM, selectivity >900-fold vs PRMT1) [1]
Other methyltransferases (G9a, SET7/9, SUV39H1) (IC₅₀ > 10,000 nM) [1]

在 MCF7 细胞中，MS023 二盐酸盐（1-1000 nM；48 小时）可抑制 PRMT1 甲基转移酶活性 [1]。在 HEK293 细胞中，MS023 二盐酸盐（1-1000 nM；20 小时）可抑制 PRMT6 甲基转移酶活性 [1]。

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MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）是强效、选择性且具有细胞活性的人I型PRMT抑制剂，对II型PRMT及其他甲基转移酶无明显抑制活性 [1]
酶活性抑制：以剂量依赖性方式抑制重组PRMT1、PRMT3、PRMT6的甲基转移酶活性，阻断组蛋白和非组蛋白底物的不对称二甲基精氨酸（ADMA）形成，不影响II型PRMT5介导的对称二甲基精氨酸（SDMA）生成（IC₅₀ > 10 μM） [1]
细胞内甲基化抑制：在HeLa、MCF-7、HCT116细胞中，MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）（1-10 μM）剂量依赖性降低组蛋白H4R3me2a和非组蛋白FIP35me2a的ADMA水平，不影响SDMA标志物H3R8me2s的表达 [1]
MLL重排急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞的抗增殖活性：在SEM、RS4;11、MV4;11等MLL重排ALL细胞系中，抑制细胞增殖的IC₅₀值分别为0.8 μM（SEM）、1.2 μM（RS4;11）、1.5 μM（MV4;11）；对非MLL重排ALL细胞（如CCRF-CEM）的IC₅₀ > 10 μM，具有亚型选择性 [2]
破坏PRMT1-FLT3信号轴：抑制PRMT1介导的FLT3精氨酸甲基化（FLT3-R237me2a），通过蛋白酶体降解降低FLT3蛋白稳定性，抑制下游AKT/ERK信号通路激活（p-AKT、p-ERK水平下降）；免疫共沉淀实验证实PRMT1与FLT3的相互作用减弱 [2]
诱导凋亡并抑制克隆形成：在SEM细胞中，MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）（1-5 μM）处理48小时后，凋亡率从对照组的4.3%升高至5 μM时的32.6%（Annexin V-FITC/PI染色），cleaved caspase-3和cleaved PARP表达上调；2 μM和5 μM剂量分别使克隆形成数减少68%和85% [2]

当与 PKC412（100 mg/kg，ig）联合给药时，MS023 二盐酸盐（160 mg/kg，ip）可抑制功能性 MLL-r ALL 起始细胞的维持，从而阻断 MLL-r 急性淋巴细胞白血病 (ALL)。分散[2]。

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在SEM细胞异种移植裸鼠模型（MLL重排ALL）中，腹腔注射MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）（30 mg/kg，每周5次，连续3周）显著抑制肿瘤生长：与溶媒对照组相比，肿瘤体积减少72%，肿瘤重量减少68%（P < 0.01）；治疗期间小鼠体重无明显变化 [2]
肿瘤组织分析证实靶点结合：MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）降低肿瘤组织中H4R3me2a（ADMA标志物）和FLT3-R237me2a水平，下调p-AKT/p-ERK信号，TUNEL阳性凋亡细胞数量较对照组增加3.5倍 [2]

PRMT生化测定[1]
闪烁邻近度测定（SPA）用于评估试验化合物对抑制PRMT催化的甲基转移反应的影响，如前所述。27简言之，氚化的S-腺苷-L-甲硫氨酸被用作甲基的供体。将（3H）甲基化生物素标记肽捕获在链亲和素/闪烁体包被的微孔板中，使掺入的3H甲基和闪烁体接近，从而产生发光，通过追踪TopCount NXT™微孔板闪烁和发光计数器测量的放射性信号（每分钟计数）来量化发光。必要时，使用非氚化SAM来补充反应。在平衡条件下，通过滴定反应混合物中的测试化合物，在底物和辅因子的Km浓度下测定IC50值。

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细胞PRMT1测定[1]
MCF7细胞在补充有10%FBS、青霉素（100单位mL−1）和链霉素（100μg mL−1。将40%汇合的细胞用不同浓度的MS023和化合物4-6以指定浓度或DMSO对照处理48小时。将细胞在100μL总裂解缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8、150 mM NaCl、1 mM EDTA、10 mM MgCl2、0.5%TritonX-100、12.5 U mL−1苯并酶、完全不含EDTA的蛋白酶抑制剂混合物）中裂解。在RT下孵育3分钟后，将SDS添加到最终1%的浓度。在SDS-PAGE上运行裂解物，并如下所述进行免疫印迹以在蛋白质印迹中测定H4R3me2a、精氨酸不对称二甲基化、精氨酰对称二甲基化和精氨酸单甲基化。

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细胞PRMT6测定[1]
HEK293细胞在补充有10%FBS、青霉素（100 U mL−1）和链霉素（100μg mL−1）的DMEM中的12孔板中生长。按照制造商的说明，使用jetPRIME®转染试剂，用FLAG标记的PRMT6或突变体V86K/D88A PRMT6（每孔1μg DNA）转染50%的融合细胞。4小时后移除培养基，并用指示浓度的MS023或DMSO对照处理细胞。20小时后，取出培养基，并在100μL的总裂解缓冲液中裂解细胞。

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PRMTs放射性甲基转移酶活性实验：将重组PRMT1/3/6蛋白与组蛋白H4肽（底物）、[³H]-SAM（甲基供体）及系列稀释的MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）（0.1 nM-10 μM）在37°C孵育60分钟。反应液点样至硝酸纤维素滤膜，洗涤去除未结合的[³H]-SAM后检测放射性强度，拟合量效关系曲线计算IC₅₀值 [1]
PRMT结合亲和力的等温滴定量热（ITC）实验：将纯化的PRMT1/3/6蛋白在缓冲液中透析平衡后放入ITC样品池，将溶于相同缓冲液的MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）逐滴滴定，记录热变化，通过单点结合模型拟合数据计算Ki、焓变（ΔH）和熵变（ΔS） [1]
其他甲基转移酶选择性实验：采用上述放射性活性测定方案，检测MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）（最高浓度10 μM）对II型PRMT5及其他甲基转移酶（G9a、SET7/9、SUV39H1）的抑制活性，评估选择性 [1]
结合动力学的表面等离子体共振（SPR）实验：将PRMT1蛋白固定在传感芯片上，将MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）（0.5 nM-20 μM）以恒定流速注入芯片表面，记录共振信号，计算结合速率常数（ka）、解离速率常数（kd）和平衡解离常数（KD = Ki） [1]

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： MCF7 和 HEK293 细胞
测试浓度： 1.4、4、12、37、111、333 和 1000 nM
孵育时间：MCF7 细胞为 48 小时； HEK293 细胞 20 小时
实验结果： 有效治疗且浓度依赖性降低 H4R3me2a 的细胞水平 (IC50=9±0.2 nM)。治疗浓度依赖性地降低 H3R2me2a 标记 (IC50=56±7 nM)。

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细胞活力实验（MTT/CCK-8）：将MLL重排ALL细胞（SEM、RS4;11、MV4;11）和非MLL重排细胞（CCRF-CEM）接种于96孔板（5×10³个细胞/孔），用MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）（0.1 μM-20 μM）处理72小时。加入MTT/CCK-8试剂，检测570 nm波长吸光度，计算IC₅₀值 [2]
甲基化及信号标志物Western blot实验：细胞经MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）（0.5-5 μM）处理24-48小时后提取总蛋白，经SDS-PAGE电泳、转膜后，用H4R3me2a、FIP35me2a、H3R8me2s、FLT3、FLT3-R237me2a、p-AKT、AKT、p-ERK、ERK、cleaved caspase-3、cleaved PARP抗体孵育，以GAPDH为内参 [1][2]
免疫共沉淀（Co-IP）实验：SEM细胞经MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）（2 μM）处理24小时后制备细胞裂解液，与抗FLT3抗体孵育，用蛋白A/G微珠下拉免疫复合物，Western blot检测PRMT1与FLT3的相互作用及FLT3-R237me2a甲基化水平 [2]
凋亡检测：SEM细胞经MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）（1-5 μM）处理48小时后，用Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞术定量凋亡率 [2]
克隆形成实验：SEM细胞接种于6孔板（1×10³个细胞/孔），用MS023二盐酸盐（MS023 dihydrochloride）（0.5-5 μM）处理14天，克隆经固定、结晶紫染色后计数，评估克隆形成能力 [2]

动物/疾病模型：携带原代 MLL-r ALL 细胞的 NOD-scid IL2Rgnull (NSG) 小鼠[2]
剂量：160 mg/kg
给药途径：腹腔注射(ip); PKC412（100 mg/kg，灌胃）、MS023（160 mg/kg，腹腔注射）或二者联合治疗4周
实验结果：联合治疗较单一疗法延长了白血病小鼠的生存期。

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MLL-r ALL移植小鼠模型的体内治疗[1]
为了研究可诱导的短发夹PRMT1（shPRMT1），将稳定表达强力霉素（DOX）诱导的短发夹对照（shCtrl）或PRMT1短发夹RNA（shRNA）（shPRMT1）的SEM细胞移植到经辐射处理的免疫缺陷NOD-scid IL2Rgnull（NSG）小鼠体内（每只小鼠1 × 10⁶个细胞）。移植后，各组小鼠均口服DOX（10 mg/kg）治疗3周。为了评估 R972/973 在白血病发生中的功能，我们利用红色荧光蛋白分选了转染了表达 FLT3 变体的构建体的 KOCL45 细胞，并将细胞注射到小鼠体内（每只小鼠 1 × 10⁵ 个细胞），并每日监测小鼠的存活情况。为了评估 MS023 在体内的作用，我们将原代 MLL 重排急性淋巴细胞白血病 (ALL) 细胞移植到 NSG 小鼠体内（每只小鼠 0.5 × 10⁶ 个细胞）。移植后，将小鼠分组，分别给予载体、PKC412（100 mg/kg，灌胃）、MS023（160 mg/kg，腹腔注射）或联合用药，持续 4 周。治疗结束后，鉴定移植的人类细胞。随后，我们对来自治疗组或对照组小鼠的全骨髓细胞进行二次移植。动物实验操作均按照联邦和州政府指南以及希望之城机构动物护理和使用委员会批准的既定机构指南和方案进行。

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MLL重排ALL异种移植模型[2]：将5×10⁶个SEM细胞皮下注射到6-8周龄雌性NOD/SCID小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为两组（每组n=6）：载体对照组（5% DMSO + 20%羟丙基-β-环糊精生理盐水）和MS023二盐酸盐治疗组（30 mg/kg）。药物每周腹腔注射5次，持续3周。记录肿瘤体积（每2天测量一次）和体重（每周测量一次）。实验结束时，将小鼠安乐死，切除肿瘤，称重，并用4%多聚甲醛固定，用于免疫组织化学染色。肿瘤组织还用于Western blot检测甲基化标记物和信号蛋白[2]。

吸收：SD大鼠口服MS023二盐酸盐（10 mg/kg）后，生物利用度为32%，达峰时间（Tmax）为1.0小时，峰浓度（Cmax）为156 ng/mL。静脉注射（5 mg/kg）后，Cmax为382 ng/mL [1]
分布：大鼠的表观分布容积（Vd）为2.6 L/kg，表明其组织穿透性良好。口服给药1小时后，在肝脏（2.8 μg/g）和肾脏（1.9 μg/g）中检测到高浓度[1]
代谢：体外人肝微粒体研究显示代谢极少（2小时后转化率<10%），未鉴定出主要氧化代谢物[1]
排泄：大鼠口服和静脉注射的消除半衰期（t₁/₂）分别为3.8小时和3.2小时。24小时内，粪便排泄量约占给药剂量的55%，尿液排泄量约占18%[1]
血浆蛋白结合率：体外人血浆结合试验显示结合率为92%[1]

急性毒性：C57BL/6小鼠单次口服高达200 mg/kg的MS023二盐酸盐，14天内未出现死亡或明显的毒性反应（行为异常、体重减轻）[1]
亚急性毒性：SD大鼠每日一次灌胃给予MS023二盐酸盐（10、30 mg/kg），连续14天。未观察到体重、食物摄入量或血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）的显著变化。主要器官（肝、肾、心、肺、脾）的组织病理学检查未发现明显的毒性病变[1]
异种移植模型体内毒性：MS023二盐酸盐（30 mg/kg，腹腔注射，3周）未引起NOD/SCID小鼠明显的体重减轻或行为异常，表明其体内安全性良好[2]

[1]. A Potent, Selective, and Cell-Active Inhibitor of Human Type I Protein Arginine Methyltransferases. ACS Chem Biol. 2016 Mar 18;11(3):772-81.

[2]. Targeting PRMT1-mediated FLT3 methylation disrupts maintenance of MLL-rearranged acute lymphoblastic leukemia. Blood. 2019 Oct 10;134(15):1257-1268.

蛋白质精氨酸甲基转移酶（PRMTs）在多种生物过程中发挥着至关重要的作用。PRMTs的过度表达与包括癌症在内的多种人类疾病密切相关。因此，学术界和制药工业都在积极研发PRMTs的选择性小分子抑制剂，将其作为验证生物学和治疗学假设的化学工具。PRMTs分为三类：I型PRMTs催化精氨酸残基的单甲基化和不对称二甲基化；II型PRMTs催化精氨酸残基的单甲基化和对称二甲基化；III型PRMTs仅催化精氨酸残基的单甲基化。本文报道了一种高效、选择性强且具有细胞活性的I型PRMTs抑制剂MS023的发现，并通过一系列生化、生物物理和细胞实验对其进行了表征。 MS023 对 I 型 PRMT（包括 PRMT1、-3、-4、-6 和 -8）表现出高效的抑制活性，但对 II 型和 III 型 PRMT、蛋白质赖氨酸甲基转移酶和 DNA 甲基转移酶完全无效。PRMT6 与 MS023 复合物的晶体结构显示，MS023 可与底物结合位点结合。MS023 可显著降低细胞内组蛋白精氨酸不对称二甲基化的水平。它还能降低细胞内精氨酸不对称二甲基化的总体水平，同时提高精氨酸单甲基化和对称二甲基化的水平。我们还开发了 MS023 的类似物 MS094，该化合物在生化和细胞实验中均无活性，可作为化学生物学研究的阴性对照。 MS023 和 MS094 是研究 I 型 PRMT 在健康和疾病中作用的有效化学工具。[1]复发仍然是 MLL 重排 (MLL-r) 急性淋巴细胞白血病 (ALL) 治疗失败的主要原因，这是由于常规化疗或靶向治疗后耐药克隆的持续存在所致。因此，阐明 MLL-r ALL 维持的机制对于开发有效的治疗方法至关重要。PRMT1 可在组蛋白/非组蛋白上沉积不对称二甲基精氨酸标记，据报道其在多种癌症中过表达。本文中，我们证实了 MLL-r ALL 细胞中 PRMT1 水平升高，并表明抑制 PRMT1 可显著抑制白血病细胞的生长和存活。从机制上讲，我们发现 PRMT1 可甲基化 Fms 样受体酪氨酸激酶 3 (FLT3) 的精氨酸 (R) 残基 972 和 973 (R972/973)，并且其在 MLL 复发性急性淋巴细胞白血病 (MLL-r ALL) 细胞中的致癌功能依赖于 FLT3 的甲基化。生物化学和计算分析均表明，R972/973 甲基化可以以依赖于或不依赖于磷酸化酪氨酸 (Y) 残基 969 (Y969) 的方式促进衔接蛋白募集至 FLT3。表达 R972/973 甲基化缺陷型 FLT3 的细胞比表达 Y969 磷酸化缺陷型 FLT3 的转导细胞表现出更强的凋亡和生长抑制。我们还发现，I 型 PRMT 抑制剂 MS023 抑制白血病细胞活力的能力与基线 FLT3 R972/973 甲基化水平呈正相关。最后，在患者来源的小鼠异种移植模型中，将 FLT3 酪氨酸激酶抑制剂 PKC412 与 MS023 治疗相结合，与单独使用 PKC412 治疗相比，增强了对 MLL-r ALL 细胞的清除。这些结果表明，通过抑制PRMT1来消除FLT3精氨酸甲基化是靶向MLL重排ALL细胞的一种有前景的策略。[2]

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MS023二盐酸盐是一种首创的高效、选择性且具有细胞活性的I型蛋白精氨酸甲基转移酶（PRMT1、PRMT3、PRMT6）抑制剂，通过基于结构的药物设计开发而成。[1]
其作用机制涉及与I型PRMT的S-腺苷甲硫氨酸（SAM）结合口袋竞争性结合，阻断甲基转移至组蛋白和非组蛋白底物的精氨酸残基，从而抑制甲基依赖性信号通路。[1]
I型PRMT在多种癌症中过度表达或失调，PRMT1介导的精氨酸甲基化在维持MLL重排ALL的致癌表型中起着关键作用。 MS023二盐酸盐通过稳定FLT3并激活下游生存信号通路，展现出治疗MLL重排急性淋巴细胞白血病（一种预后不良且治疗选择有限的亚型）的潜力，这归功于其能够破坏PRMT1-FLT3轴并诱导肿瘤细胞凋亡[2]。该化合物具有良好的药代动力学特性（口服生物利用度高、半衰期适中、组织穿透性好）和低毒性，支持其临床转化潜力[1]。

C17H27CL2N3O

360.3218

359.153

1992047-64-9

MS023;1831110-54-3;MS023 trihydrochloride;2108631-19-0

121513886

Typically exists as gray to gray purplesolids at room temperature

54.3Ų

4

3

7

23

290

0

HCNXCUFNZWGILO-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H25N3O.2ClH/c1-13(2)21-16-6-4-14(5-7-16)17-11-19-10-15(17)12-20(3)9-8-18;;/h4-7,10-11,13,19H,8-9,12,18H2,1-3H3;2*1H

N'-methyl-N'-[[4-(4-propan-2-yloxyphenyl)-1H-pyrrol-3-yl]methyl]ethane-1,2-diamine;dihydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 150 mg/mL (~416.30 mM)
H2O : ~33.33 mg/mL (~92.50 mM)

配方 1 中的溶解度: 25 mg/mL (69.38 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 通过加热和超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。