| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
CerK (IC50 = 12 nM); apoptosis
Ceramide kinase (CerK) (Ki = 7.4 nM for ceramide binding; in vitro IC50 = 12 ± 2 nM; cellular IC50 = 59.7 ± 12 nM in MCF-7 cells overexpressing CerK) [1][2] Diacylglycerol kinase α (DAGKα) (IC50 = 5 μM, approximately 500-fold less potent than CerK) [1] Sphingosine kinase 1 (SphK1) (IC50 > 100 μM, >10,000-fold selectivity) [1] Sphingosine kinase 2 (SphK2) (IC50 > 100 μM, >10,000-fold selectivity) [1] Phosphoinositide 3-kinase α (PI3Kα), phosphatidylinositol 4-kinase β (PI4Kβ), Vps34, glucosylceramide synthase (GCS), sphingomyelin synthase 1 (SMS-1), ceramide transfer protein (CERT) (all IC50 >10-25 μM, >1000-fold selectivity) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
NVP-231可导致癌细胞死亡，从而降低细胞活力和DNA合成。与G2/M期交界处阻滞相比，NVP-231处理的细胞表现出M期阻滞。NVP-231处理可导致MCF-7和NCI-H358细胞中细胞周期蛋白B1 Ser133位点磷酸化水平呈浓度依赖性上调，而CDK1 Tyr15位点磷酸化水平呈浓度依赖性下调。NVP-231抑制NCI-H358和MCF-7细胞中Wee1的表达。NVP-231处理的癌细胞表现出CDK4蛋白表达水平呈浓度和时间依赖性下调。在同步细胞中，这种效应更为显著[2]。
NVP-231在体外抑制重组人CerK，IC50为12 ± 2 nM，Ki为7.4 nM（与神经酰胺竞争性抑制，与ATP非竞争性抑制）。抑制作用是瞬时的，并且完全可逆。[1] 在基于细胞的实验中，使用过表达人CerK (COS-CerK) 和荧光标记的NBD-神经酰胺的COS-1细胞，NVP-231抑制NBD-C1P的生成，IC50约为60 nM，并在100 nM时达到完全抑制。它不抑制葡萄糖基神经酰胺 (GlcCer) 或鞘磷脂 (SM) 的生成；相反，它增加了这些代谢物的生成。 [1]在小鼠腹腔巨噬细胞和骨髓来源的肥大细胞中，NVP-231 (50-100 nM) 将 C1P 的生成降低至与 CerK(-/-) 细胞相似的背景水平。[1]NVP-231 (100 nM) 可抑制小鼠骨髓来源的巨噬细胞 (BMDM) 中内源性神经酰胺的磷酸化，这已通过 33P-正磷酸盐标记和二维薄层色谱 (2D-TLC) 证实，而其非活性类似物 NVP-995 则无此作用。液相色谱-质谱 (LC/MS) 分析表明，NVP-231 (100 nM) 可迅速将 COS-CerK 细胞中的 C16-C1P 水平降低至对照组的 20% 以下。 [1] 在MCF-7乳腺癌细胞和NCI-H358肺癌细胞中，NVP-231呈浓度依赖性地降低细胞活力（MCF-7的IC50约为1 μM，NCI-H358的IC50约为500 nM）、DNA合成（BrdU掺入）和克隆形成（在500 nM-1 μM浓度下完全抑制）。[2] 1 μM的NVP-231可诱导细胞死亡，通过碘化丙啶摄取量测定（72小时后MCF-7细胞死亡20%，NCI-H358细胞死亡>40%），并增加裂解的caspase-3和caspase-9（细胞凋亡）。 [2] 流式细胞术分析显示，NVP-231（24 小时）可降低两种细胞系中 S 期细胞的比例，并增加 G2/M 期细胞的比例（4N DNA 含量）。磷酸化组蛋白 H3 (Ser10) 染色显示细胞停滞在 M 期（有丝分裂指数增加 3-4 倍）。蛋白质印迹分析显示细胞周期蛋白 B1 (Ser133) 磷酸化水平升高，CDK1 Tyr15 磷酸化水平降低，wee1 和 CDK4 的表达均降低。[2] NVP-231 (100 nM) 与星形孢菌素 (20 nM) 联用可协同增强 DNA 片段化和 G2/M 期阻滞。CerK 的 siRNA 敲低可使细胞对星形孢菌素诱导的细胞凋亡更加敏感，而 CerK 过表达则可保护细胞。 [2] NVP-231对中性粒细胞、巨噬细胞或成纤维细胞中PLA2G4A依赖的花生四烯酸或PGE2释放没有影响。它既不加速人外周血中性粒细胞的自发性凋亡，也不影响巨噬细胞在有或无M-CSF存在下的存活。[1] |
| 酶活实验 |
高通量筛选实验：将一种测量ATP消耗的均相发光检测方法（Kinase-Glo）微型化至1536孔板形式。将重组全长人CerK（16 ng/μl）与1 mM含神经酰胺的胶束、10 μM ATP和待测化合物（100 nl，0.5 mM中间稀释度）在反应缓冲液（25 mM MOPS pH 7.2、6.25 mM CaCl₂、62.5 mM KCl、2.5 mM EGTA、1.25 mM DTT）中于37°C孵育90-120分钟，随后加入Kinase-Glo试剂并进行发光测量。Z'因子约为0.5。通过8点稀释系列和IC₅₀测定验证筛选结果。 [1]
体外放射性标记的CerK活性测定：将40 ng/ml GST-CerK与180 μM C8神经酰胺和500 μM 32P-ATP在反应缓冲液中孵育。终止反应，提取脂质，并定量C1P。NVP-231的IC50值为12±2 nM。[1] 机制研究：ATP竞争实验（不同ATP浓度与1 μM NVP-231混合）显示对ATP的非竞争性抑制；神经酰胺竞争实验（不同神经酰胺浓度与0.1 μM NVP-231混合）显示对神经酰胺的竞争性抑制。Ki = 7.4 nM。[1] 可逆性实验：将CerK与NVP-231预孵育，然后稀释100倍；活性完全恢复，表明抑制作用是可逆的。[1] |
| 细胞实验 |
将 MCF-7 和 NCI-H358 细胞以每孔 1 × 10⁴ 个细胞的密度接种于 96 孔黑色板中，然后用指定浓度的 NVP-231（nM）处理 48 小时。在处理的最后 4 小时，加入 alamarBlueR，并测量荧光强度。
基于细胞的 CerK 活性测定（NBD-神经酰胺）：将细胞与 5 μM NBD-C6-神经酰胺在 NVP-231 存在下孵育 2 小时。提取脂质，通过薄层色谱分离，并通过荧光成像定量 NBD-C1P、NBD-GlcCer 和 NBD-SM。 [1][2] 细胞活力检测（AlamarBlue）：将96孔板中的细胞用NVP-231处理48小时，然后加入刃天青4小时，在544/590 nm处测量荧光强度。[2] DNA合成（BrdU ELISA）：将细胞用NVP-231处理72小时，在最后24小时加入BrdU，通过ELISA检测BrdU的掺入量。[2] 克隆形成实验：将细胞以1000个/孔的密度接种，用NVP-231处理10-14天，用结晶紫染色并计数克隆。 [2] 细胞死亡（碘化丙啶摄取）：用胰蛋白酶消化处理后的细胞，用碘化丙啶（10 μg/ml）染色，并通过流式细胞术分析碘化丙啶阳性细胞。[2] 细胞凋亡（caspase裂解）：将细胞裂解液进行SDS-PAGE电泳分离，然后用抗裂解型caspase-3和caspase-9抗体进行Western blot分析。[2] 细胞周期分析：将细胞固定于70%乙醇中，用碘化丙啶（10 μg/ml）和RNase A（100 μg/ml）染色，并通过流式细胞术分析DNA含量。有丝分裂指数通过抗磷酸化组蛋白H3（Ser10）染色（Alexa-488二抗）测定。 [2] 蛋白质印迹法：检测磷酸化Ser133细胞周期蛋白B1、总细胞周期蛋白B1、磷酸化Tyr15 CDK1、总CDK1、wee1、CDK4、GAPDH和β-肌动蛋白的抗体。[2] 液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）脂质分析：使用C12-C1P和C17-神经酰胺作为内标，在Q-TOF 6530质谱仪上，以正离子（神经酰胺）或负离子（C1P）电喷雾电离模式定量C16-C1P和神经酰胺亚种。[2] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
NVP-231属于苯并噻唑类化合物。
NVP-231是一种首创的高效特异性神经酰胺激酶抑制剂。它是通过对超过一百万种化合物进行高通量筛选而发现的。该化合物具有细胞渗透性、可逆性，并能与神经酰胺竞争性结合。它是研究CerK生物学的重要工具。在癌细胞中，CerK抑制会导致M期阻滞、CDK4表达降低和细胞凋亡。该化合物与星形孢菌素具有协同作用。CerK过表达可保护细胞免于凋亡。NVP-231已被用于证明CerK参与细胞周期进程，特别是M期调控。[1][2] |
| 分子式 |
C25H25N3O2S
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|---|---|
| 分子量 |
431.5499
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| 精确质量 |
431.166
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| 元素分析 |
C, 69.58; H, 5.84; N, 9.74; O, 7.41; S, 7.43
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| CAS号 |
362003-83-6
|
| 相关CAS号 |
362003-83-6
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| PubChem CID |
4096211
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.743
|
| LogP |
5.34
|
| tPSA |
99.33
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
680
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
S1C(N([H])C(C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])=O)=NC2C([H])=C([H])C(=C([H])C1=2)N([H])C(C12C([H])([H])C3([H])C([H])([H])C([H])(C([H])([H])C([H])(C3([H])[H])C1([H])[H])C2([H])[H])=O
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| InChi Key |
MVSSJPGNLQPWSW-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H25N3O2S/c29-22(18-4-2-1-3-5-18)28-24-27-20-7-6-19(11-21(20)31-24)26-23(30)25-12-15-8-16(13-25)10-17(9-15)14-25/h1-7,11,15-17H,8-10,12-14H2,(H,26,30)(H,27,28,29)
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| 化学名 |
N-(2-benzamido-1,3-benzothiazol-6-yl)adamantane-1-carboxamide
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| 别名 |
NVP231; NVP 231; NVP-231
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ≥41 mg/mL (~95.0 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3172 mL | 11.5861 mL | 23.1723 mL | |
| 5 mM | 0.4634 mL | 2.3172 mL | 4.6345 mL | |
| 10 mM | 0.2317 mL | 1.1586 mL | 2.3172 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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PROTAC IKKβ/NR4A1 degrader-1
IGN523
d-T101 peptide
Ac-DMLD-CMK TFA
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