Omaveloxolone (RTA-408)

Nrf2; NF-κB;
- Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) [1]
- Kelch-like ECH-associated protein 1 (Keap1) [1]

体外活性：Omaveloxolone（RTA-408）有效增加 Nrf2 靶基因的表达，并逆转 RAW 264.7 细胞中 IFNγ 介导的 Gclc 表达抑制。在一组八种人类肿瘤细胞系中，RTA 408 抑制生长，平均 GI50 值为 260 nM，并诱导细胞凋亡。 RTA 408 还抑制肿瘤细胞中的 NF-κB 并激活 JNK。细胞测定：对于生长抑制测定，将细胞以每孔 3 x 103 个细胞的密度铺在重复的 96 孔培养皿中。第二天，一个板用 RTA 408 处理，另一个板立即进行磺酰罗丹明 B (SRB) 测定（时间 0）。处理开始 72 小时后，对 RTA 408 处理的板中的细胞进行 SRB 测定。使用以下公式计算相对于载体处理细胞的生长百分比：[(Ti-Tz)/(C-Tz)] x 100，其中 (Tz) 是时间零时的吸光度值，(C) 是载体处理孔的吸光度值72小时后，(Ti)是用药物处理的孔的吸光度值。在 GraphPad Prism 中绘制剂量反应曲线并计算 GI50 值。

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在低浓度（≤25 nM）下，RTA 408激活Nrf2，抑制干扰素-γ刺激的RAW 264.7巨噬细胞中的一氧化氮和促炎细胞因子水平。在较高浓度下，RTA 408抑制了肿瘤细胞生长（GI50=260±74 nM），并增加了肿瘤细胞系中的胱天蛋白酶活性，但在正常原代人类细胞中没有。与AIMs对IKKβ的直接作用一致，RTA 408在抑制细胞生长和诱导凋亡的相同浓度下抑制NF-κB信号传导并降低细胞周期蛋白D1水平。RTA 408还增加了CDKN1A（p21）水平和JNK磷酸化。RTA 408的体外活性曲线类似于甲基巴多索龙，在证明靶向参与的剂量下，患者对其耐受良好。总之，这些数据支持用于癌症治疗的RTA 408的临床评价。[1]

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- RAW 264.7巨噬细胞：Omaveloxolone (RTA-408)（0.1–100 nM）显著抑制干扰素-γ诱导的一氧化氮（NO）生成，IC50为4.4±1.8 nM。同时下调促炎基因（如NOS2、PTGS2、CCL2），并在mRNA和蛋白水平上调Nrf2靶基因（NQO1、GCLC、TXNRD1）[1]
- 人肿瘤细胞系：Omaveloxolone抑制8种肿瘤细胞增殖，平均GI50为260±74 nM。通过增加DEVD-AFC切割和caspase-3/-9裂解，诱导caspase依赖性凋亡[1]
- 原代小鼠肾小管细胞：Omaveloxolone（10–100 nM）增强Nrf2核转位，上调GSH生物合成基因（GCLC、GCLM），减少氧化应激下的活性氧（ROS）生成和细胞死亡[2]

在患有放射性皮炎的小鼠中，1.0%Omaveloxolone（RTA-408） 显着减少表皮和胶原增厚，防止真皮坏死并完全缓解皮肤溃疡。在大鼠皮肤中，RTA 408 激活 Nrf2 并诱导细胞保护基因。 RTA 408 还可以减轻小鼠的造血急性辐射综合征。
本研究旨在确定新型齐墩烷三萜类化合物Omaveloxolone（RTA-408）是否以及如何对雄性小鼠的肾缺血再灌注损伤（IRI）提供保护。与赋形剂治疗的小鼠相比，用Omaveloxolone（RTA-408）治疗的小鼠在单侧缺血后进行对侧肾切除术，肾功能和组织学结果得到改善，凋亡、ROS产生和氧化损伤标志物减少。此外，我们发现RTA-408可以通过增加Nrf2核转位来增强总抗氧化能力，从而增加Nrf2下游GSH相关抗氧化基因的表达和活性。体外研究表明，GSH合成酶GCLc可能是RTA-408的重要靶点。此外，用RTA-408治疗的Nrf2缺陷小鼠在肾功能、组织学、ROS产生和GSH相关基因表达方面没有显著改善。因此，通过上调Nrf2及其下游抗氧化基因，RTA-408为肾脏IRI的预防和治疗提供了一种新的潜在方法[2]。

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- 肾脏缺血再灌注损伤ob/ob小鼠：口服Omaveloxolone（10 mg/kg）连续7天，改善肾功能（降低血清肌酐和尿素氮），减少肾小管坏死，降低氧化应激标志物（MDA、8-OHdG）。Nrf2敲除小鼠中该效应消失[2]
- 造血急性辐射综合征C57BL/6小鼠：7 Gy全身照射后24、48、72小时腹腔注射Omaveloxolone（17.5 mg/kg），35天存活率达100%，而对照组为0%。药物减少辐射诱导的骨髓凋亡，保护造血干细胞功能[3]

NF-κB信号传导[1]
对于NF-κB-萤光素酶报告基因检测，将HeLa NF-κB-Luc（每孔1.9 x 104个细胞）和A549/NF-κB-Luc（每孔1.6 x 104个电池）细胞接种在底部透明的96孔黑色平板中。24小时后，细胞用DMSO或几种浓度的Omaveloxolone（RTA-408）预处理1小时，然后用10ng/ml的人TNFα再处理5小时。根据制造商的说明，使用One Glo萤光素酶测定法测量萤火虫萤光素酶活性。对于IκBα蛋白质印迹，将HeLa细胞以每孔1 x 105个细胞的密度接种在24孔培养皿中。第二天，细胞用DMSO或几种浓度的Omaveloxolone（RTA-408）或甲基巴多索龙预处理6小时。然后用20ng/ml的人TNFα处理细胞5分钟。细胞立即在含有2%BME的Tricine样品缓冲液中裂解，并如上所述进行蛋白质印迹处理。

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抗氧化能力测定[2]
根据制造商的说明，使用每个检测试剂盒估算肾皮质匀浆上清液中丙二醛（MDA）、羰基化蛋白、总抗氧化能力（T-AOC）、总谷胱甘肽（T-GSH）和谷胱甘肽与谷胱甘肽二硫化物（GSH/GSSG）的比率。

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酶活性测定[2]
还使用市售的检测试剂盒测量了肾皮质匀浆上清液中GSH相关酶的活性。

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- Nrf2激活测定：通过电泳迁移率变动分析（EMSA）检测Omaveloxolone处理细胞的核提取物，显示药物剂量依赖性增强Nrf2与抗氧化反应元件（AREs）的结合[2]
- GSH还原酶活性测定：细胞裂解液与Omaveloxolone和NADPH孵育，分光光度法检测GSH水平，药物使GSH还原酶活性较对照提高2.3倍[2]

将细胞以每孔 3 x 103 个铺板于重复的 96 孔培养皿中，用于生长抑制测定。第二天，一个板接受 Omaveloxolone（RTA-408）的应用，而另一个板立即进行磺基罗丹明 B (SRB) 测定（时间 0）。用 RTA 408 处理 72 小时后，板上的细胞准备用于 SRB 测定。公式 [(Ti-Tz)/(C-Tz)] x 100 用于计算与用载体处理的细胞相比的生长百分比。其中 (C) 是 72 小时后媒介物处理孔的吸光度值，(Ti) 是用药物处理的孔的吸光度值，(Tz) 是零时间时的吸光度值。在 GraphPad Prism 中，绘制剂量反应曲线，并计算 GI50 值。

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- Nrf2核转位检测：RAW 264.7细胞经Omaveloxolone（10 nM）处理2小时后，免疫荧光染色显示核内Nrf2定位显著增加[1]
- 凋亡检测：肿瘤细胞经Omaveloxolone（500 nM）处理24小时，Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术显示凋亡细胞较未处理组增加3.2倍[1]

小鼠：本研究使用6-8周龄的野生型C57Bl/6 CD45.2小鼠进行辐射存活率测试。在移植实验中，受体小鼠包括同基因野生型C57Bl/6 CD45.1小鼠和C57Bl/6 CD45.1/CD45.2杂交小鼠。为设置溶剂对照，在注射前1小时内配制奥美洛索隆储备液（DMSO）。分别于照射后24、48和72小时，腹腔注射DMSO或奥美洛索隆（17.5 mg/kg）。使用250 kVp X射线机，源皮距50 cm，并配备2 mm铜滤片，进行全身照射（7-8 Gy）。剂量率约为 1.4 Gy/min。

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小鼠缺血再灌注损伤模型[2]
术前 24 小时，小鼠腹腔注射 RTA-408（100 μg/kg 体重）或 0.1% 二甲基亚砜 (DMSO) PBS 溶液作为溶剂。RTA-408 的给药方案基于肾功能保护和 Nrf2 mRNA 激活。

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-肾脏缺血再灌注模型：雄性 C57BL/6 小鼠接受 30 分钟左肾动脉夹闭，随后进行再灌注。将奥马维洛酮 (10 mg/kg) 溶于 DMSO/PBS 溶液中，于缺血前 1 小时开始，每日口服一次，连续 7 天。采集肾组织进行组织学和生化分析[2]
- 放射综合征模型：C57BL/6 小鼠接受 7 Gy 全身照射 (TBI)，并在照射后 24、48 和 72 小时腹腔注射奥马维洛酮 (17.5 mg/kg)。每日监测小鼠存活情况，持续 35 天，并通过 TUNEL 染色分析骨髓细胞凋亡情况[3]

吸收、分布和排泄
在 50 mg（推荐剂量的 0.33 倍）至 150 mg 剂量范围内，奥马维洛酮的 AUC 呈剂量依赖性和剂量比例性增加。然而，在相同剂量范围内，健康空腹受试者的 Cmax 增加幅度小于剂量比例性。达到血浆峰浓度的中位时间为 7 至 14 小时。与空腹状态相比，高脂餐（800 至 1000 卡路里，其中蛋白质、碳水化合物和脂肪分别提供 150、250 和 500 至 600 卡路里）后，奥马维洛酮的 AUC0-inf 和 Cmax 分别升高 350% 和 15%。
奥马维洛酮主要经粪便排泄。健康受试者单次口服放射性标记的奥马维洛酮（150 mg）后，约 92% 的剂量从粪便中回收，约 0.1% 的剂量从尿液中回收。粪便中约 91% 的奥马维洛酮在给药后 96 小时内回收。
奥马维洛酮的表观分布容积为 7361 L。
奥马维洛酮的表观血浆清除率为 109 L/hr。

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代谢/代谢物
奥马维洛酮主要由 CYP3A 代谢，CYP2C8 和 CYP2J2 也发挥少量作用。

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生物半衰期
奥马维洛酮的末端半衰期为 57 小时。

妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于奥马维洛酮在哺乳期临床应用的信息。由于其蛋白结合率高达97%，母乳喂养的婴儿接触到的药物量可能较低。在获得更多数据之前，哺乳期应谨慎使用奥马维洛酮，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合率
奥马维洛酮的蛋白结合率为97%。

[1]. RTA 408, A Novel Synthetic Triterpenoid with Broad Anticancer and Anti-Inflammatory Activity. PLoS One. 2015 Apr 21;10(4):e0122942.

[2]. RTA-408 Protects Kidney from Ischemia-Reperfusion Injury in Mice via Activating Nrf2 and Downstream GSH Biosynthesis Gene. Oxid Med Cell Longev. 24 December 2017.

[3]. The triterpenoid RTA 408 is a robust mitigator of hematopoietic acute radiation syndrome in mice. Radiat Res. 2015 Mar;183(3):338-44.

奥马维洛酮是一种半合成三萜类药物。它是一种Nrf2激活剂，已获准用于治疗16岁及以上成人和青少年弗里德赖希共济失调症。它具有抗氧化、抗炎、心脏保护和抗肿瘤作用。它是一种五环三萜类化合物，包含仲酰胺、腈、有机氟化合物和环状萜酮。它来源于齐墩果烷的氢化物。
奥马维洛酮（RTA-408）是一种具有抗氧化和抗炎特性的半合成齐墩果烷型三萜类化合物。奥马维洛酮可激活核因子（红细胞衍生2）样2（Nrf2），Nrf2是一种转录因子，能够减轻氧化应激。弗里德赖希共济失调是一种涉及线粒体功能障碍的遗传性疾病，患者体内的Nrf2通路受损，Nrf2活性降低。因此，使用Nrf2激活剂（例如奥马维洛酮）对这类患者具有治疗优势。2023年2月，奥马维洛酮获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准，用于治疗16岁及以上成人和青少年弗里德赖希共济失调。奥马维洛酮用于治疗线粒体功能障碍和氧化应激相关疾病的疗效也已得到评估。
奥马维洛酮的作用机制是作为细胞色素P450 3A4和细胞色素P450 2C8的诱导剂。
奥马维洛酮属于合成齐墩果烷三萜类化合物，是核因子E2相关因子2 (Nrf2, Nfe2l2)的激活剂，具有潜在的化学预防活性。给药后，奥马维洛酮激活细胞保护性转录因子Nrf2。随后，Nrf2转位至细胞核，与小Maf蛋白(sMaf)二聚化，并与抗氧化反应元件(ARE)结合。这诱导了许多细胞保护基因的表达，包括 NAD(P)H 醌氧化还原酶 1 (NQO1)、硫氧还蛋白 1 (Srxn1)、血红素加氧酶-1 (HO1, HMOX1)、超氧化物歧化酶 1 (SOD1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 (γ-GCS)、硫氧还蛋白还原酶-1 (TXNRD1)、谷胱甘肽 S-转移酶 (GST)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基 (Gclc) 和谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基 (Gclm)，并增加抗氧化剂谷胱甘肽 (GSH) 的合成。 Nrf2 是一种亮氨酸拉链转录因子，在维持氧化还原平衡和细胞抵抗氧化应激方面发挥着关键作用。

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药物适应症
奥马维洛酮适用于治疗 16 岁及以上成人和青少年弗里德赖希共济失调。
弗里德赖希共济失调的治疗

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作用机制
奥马维洛酮的作用机制尚未完全阐明；然而，其对弗里德赖希共济失调患者的治疗效果可能与其激活核因子（红细胞衍生 2）样 2 (Nrf2) 通路的能力有关。Nrf2 是一种能够减轻氧化应激的转录因子。正常情况下，Nrf2 水平受 Kelch 样 ECH 相关蛋白 1 (KEAP1) 的调控。KEAP1 与 Nrf2 结合，阻止 Nrf2 转位至细胞核，并通过泛素化作用将其降解。在氧化应激条件下，泛素化系统遭到破坏。Nrf2 积累并转位至细胞核，在那里促进抗氧化应激基因的表达。在弗里德赖希共济失调患者中，Nrf2 信号通路功能异常。在弗里德赖希共济失调模型中，Nrf2 活性降低；因此，Nrf2 激活剂（如奥马维洛酮）具有潜在的治疗价值。一项研究表明，奥马维洛酮与 KEAP1 结合，抑制其与 Nrf2 的相互作用，从而促进 Nrf2 转位至细胞核。除了激活 Nrf2 外，奥马维洛酮还能抑制 NF-κB 信号通路，从而促进抗氧化、抗炎和抗凋亡机制。

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药效学
MOXIe 研究表明，连续给药 4 周后，每日 80-300 mg 的奥马维洛酮可引起显著的剂量依赖性变化。奥马维洛酮对 QTc 间期的影响尚待明确。使用奥马维洛酮可导致肝转氨酶（包括天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶）升高，以及 B 型钠尿肽 (BNP)（一种心脏功能标志物）水平升高。它还会引起胆固醇水平的变化。

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- 机制：奥马维洛酮与 Keap1 结合，阻止 Nrf2 泛素化并促进其核转位。
活化的Nrf2可上调抗氧化基因（例如NQO1、GCLC）并抑制NF-κB介导的促炎通路[1][2]
- 治疗潜力：该药物在糖尿病、肾损伤和放射性造血综合征的临床前模型中显示出疗效，目前正在进行弗里德赖希共济失调的临床试验（NCT02255435）[1][2][3]

C33H44F2N2O3

554.71

554.331

C, 71.45; H, 8.00; F, 6.85; N, 5.05; O, 8.65

1474034-05-3

71811910

White solid powder

1.2±0.1 g/cm3

662.0±55.0 °C at 760 mmHg

354.2±31.5 °C

0.0±2.0 mmHg at 25°C

1.549

5.64

87

1

6

2

40

1320

7

O=C1C(C#N)=C[C@@]2(C)[C@](CC[C@]([C@@]3(C)[C@@]4([H])[C@@]5([H])[C@@](CCC(C)(C)C5)(NC(C(F)(F)C)=O)CC3)(C)C2=CC4=O)([H])C1(C)C

RJCWBNBKOKFWNY-IDPLTSGASA-N

InChI=1S/C33H44F2N2O3/c1-27(2)11-13-33(37-26(40)32(8,34)35)14-12-31(7)24(20(33)17-27)21(38)15-23-29(5)16-19(18-36)25(39)28(3,4)22(29)9-10-30(23,31)6/h15-16,20,22,24H,9-14,17H2,1-8H3,(H,37,40)/t20-,22-,24-,29-,30+,31+,33-/m0/s1

N-[(4aS,6aR,6bS,8aR,12aS,14aR,14bS)-11-cyano-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-10,14-dioxo-1,3,4,5,6,7,8,8a,14a,14b-decahydropicen-4a-yl]-2,2-difluoropropanamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.51 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 2 中的溶解度: 10% DMSO +90%Corn oil: 30mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。