Periplocin   中文名称: 杠柳毒苷

Apoptosis
Periplocin targets the Na/K-ATPase/Src complex receptor. It binds to Na/K-ATPase α1 subunit, which interacts with Src, leading to Src activation and subsequent downstream signaling [1].
Periplocin also targets death receptor 4 (DR4) and Fas-associated death domain (FADD) by inducing their expression, and suppresses inhibitor of apoptosis proteins including cIAP-1, XIAP, and survivin [2].

用periplocin（5–20 μM）处理L929细胞48小时后，细胞增殖增加了131%[1]。Periplocin的剂量和时间可促进成纤维细胞迁移[1]。Periplocin（5–20 μM；30-120分钟；L929细胞）可显著促进成纤维细胞迁移。哌利泊辛（5–20 μM；48 小时）可增加 L929 细胞的增殖。哌利泊辛通过 Na/K-ATPase 激活 PI3K/Akt 和 Src/ERK 信号通路 [1]。

---

哌利泊辛（5、10、20 μM）处理 48 小时后，以浓度依赖的方式显著促进 L929 小鼠成纤维细胞的增殖，MTT 法检测显示细胞活力在 20 μM 时增加至 131%，p<0.001；EdU 掺入法检测显示 EdU 阳性细胞百分比在 20 μM 时从 31% 增加至 48%，p<0.001）也证实了这一点 [1]。
哌利泊辛（5、10、20 μM）处理 48 小时后，划痕实验显示 L929 细胞的迁移能力增强，20 μM 时伤口面积减少至 30%。与对照组相比（p<0.001），在Transwell迁移实验中，12小时后，20 μM处理组的细胞迁移率增加至156%（p<0.001）[1]。
Periplocin（5、10、20 μM）处理48小时后，L929成纤维细胞中可溶性胶原蛋白的生成量增加，20 μM处理组达到101 μg/ml，而未处理组为46 μg/ml（p<0.001）[1]。
Periplocin（5、10、20 μM）激活L929细胞中的Src/ERK和PI3K/Akt信号通路，表现为Src、ERK、PI3K和Akt的磷酸化水平呈剂量依赖性和时间依赖性增加（60分钟达到峰值）。在 20 μM 浓度下，p-Src、p-PI3K、p-Akt 和 p-ERK 的最大增幅分别为 315%、302%、309% 和 331% (p<0.01) [1]。
在 L929 细胞中，使用 shRNA 慢病毒 (mNK1) 敲低 Na/K-ATPase α1 的表达，可消除 Periplocin 诱导的 Src/ERK 和 PI3K/Akt 通路的激活，并抑制 Periplocin 的增殖和迁移作用 [1]。
共免疫沉淀和共免疫染色实验证实，Na/K-ATPase α1 亚基与 L929 细胞中的 Src 相互作用 [1]。
Periplocin (CP-1) 可抑制 HA22T/VGH 肝癌细胞的生长。单独使用时，Periplocin 的 IC50 为 0.027 μM，与 TRAIL (100 ng/ml) 联用时，细胞毒性增强 [2]。
Periplocin (0.03、0.1、0.3、1、3、10 μM) 与 TRAIL (100 ng/ml) 联用或单独使用 TRAIL (100 ng/ml) 处理 48 小时后，结果显示联合处理显著增强了 HA22T/VGH 细胞的生长抑制活性 [2]。
Periplocin (0.3、1 μM) 与 TRAIL (100 ng/ml) 联用可诱导 HA22T/VGH 细胞凋亡，Annexin V/PI 双染（Annexin V 和 PI 阳性细胞增加）和亚 G1 期细胞群分析（剂量依赖性增加）证实了这一点 [2]。
Periplocin (1 μM) 可诱导 DR4 和HA22T/VGH 细胞经 8 小时处理后 FADD 表达上调，但未诱导 DR5 表达 [2]。
如蛋白质印迹所示，Periplocin (1 μM) 和 TRAIL (100 ng/ml) 联合处理 24 小时可增加 HA22T/VGH 和 Huh-7 细胞中 BID、caspase-8、caspase-3 和 PARP 的裂解 [2]。
caspase 抑制剂（caspase-3 抑制剂为 Z-DEVD-FMK，caspase-8 抑制剂为 Z-IETD-FMK，caspase-9 抑制剂为 Z-LEHD-FMK，泛 caspase 抑制剂为 Z-VAD-FMK）可部分或完全恢复 HA22T/VGH 细胞中由 Periplocin 和 TRAIL 联合处理所抑制的细胞活力 [2]。
μM) 和 TRAIL (100 ng/ml) 处理 24 小时后，HA22T/VGH 细胞中 cIAP-1、XIAP 和 survivin 的表达受到抑制，但 Bcl-2、Bax、Bad、Mcl-1 或 apaf-1 的表达没有影响 [2]。
Periplocin 处理 24 小时后，Huh-7 细胞中 cyclin-D1 的表达呈剂量依赖性地受到抑制，免疫荧光结果显示 [2]。

在小鼠异种移植瘤模型中，Periplocin（5–20 mg/kg；腹腔注射；每日一次；持续14天；雌性SCID小鼠）治疗可抑制肝细胞癌（HCC）的生长[2]。在大鼠切除伤口模型中，Periplocin（溶于橄榄油，浓度分别为5、10和20 μg/ml，每日一次，每次50 μl，持续9天）显著加速了伤口愈合。第6天，20 μg/ml组的伤口愈合率约为72%，而溶剂对照组为38%；第9天，20 μg/ml组的伤口面积缩小至7%，而对照组为34%（p<0.001）。第9天的组织学分析（苏木精-伊红染色和马松三色染色）显示，经Periplocin治疗的伤口中上皮再生、肉芽组织形成、成纤维细胞增殖和胶原沉积均增加。Periplocin还减少了伤口组织中的单核炎症细胞浸润，并降低了IL-1β和TNF-α的水平（第5天）[1]。
在异种移植瘤模型中，携带Huh-7皮下肿瘤的SCID小鼠每天腹腔注射Periplocin，连续14天（第15-29天5 mg/kg，第29-35天20 mg/kg）。Periplocin抑制了肿瘤生长，治疗24天后肿瘤生长抑制率（TGI）为51±11%（p<0.05）。免疫组织化学显示，Periplocin显著降低了肿瘤样本中Ki67阳性细胞（载体组为57.3±0.67%，治疗组为22.78±10.09%）和细胞周期蛋白D1阳性细胞（载体组为76.87±2.93%，治疗组为58.85±5.05%）[2]。

细胞活力测定[1]
细胞类型： L929 细胞
测试浓度： 5 μM、10 μM、20 μM
孵育时间： 48 小时
实验结果： 在 20 μM 浓度下，细胞增殖率最高可达 131%。

---

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： L929 细胞
测试浓度： 5 μM、10 μM、20 μM
孵育时间： 30 分钟、60 分钟、120 分钟
实验结果： Src、ERK、PI3K 和 Akt 活性位点的磷酸化呈剂量依赖性，且呈时间依赖性增加。

---

增殖实验中，将 L929 小鼠成纤维细胞以 5000 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中，在无血清培养基中培养 24 小时，然后用 Periplocin (5、10、20 μM) 处理 48 小时。加入 MTT 溶液 (0.5 mg/ml) 孵育 3 小时，将甲臜溶解于 DMSO 中，并在 570 nm 处测量吸光度。EdU 掺入：用 Periplocin 处理细胞 24 小时，然后用 10 μM EdU 孵育 4 小时，固定、透化，与 Click-iT 混合物反应，用 Hoechst 33342 染色，并在荧光显微镜下成像 [1]。
对于迁移实验（划痕实验），将 L929 细胞在培养板中培养至 90% 汇合度，并在无血清培养基中培养 24 小时，用移液器吸头划出一条线性划痕，然后用 Periplocin (5、10、20 μM) 或 Src 抑制剂 (1 μM) 处理细胞。分别在 0 小时和 48 小时拍摄图像，并量化划痕愈合面积。 Transwell迁移实验：将L929细胞（5×10^4个细胞/孔）置于含Periplocin的无血清培养基中，置于上室（孔径8.0 μm），下室含DMEM培养基。12小时后，移除上室细胞，将侵袭细胞用冷甲醇固定，结晶紫染色，并计数[1]。
胶原蛋白生成实验：将L929细胞（1×10^5个细胞/孔）接种于24孔板中，经24小时血清饥饿处理后，用Periplocin（5、10、20 μM）处理48小时。将上清液 (100 μl) 与 Sircol 染料试剂混合 30 分钟，离心，沉淀物用碱性试剂重溶解，并在 540 nm 处测量吸光度 [1]。
Western blot：用 RIPA 裂解缓冲液提取总蛋白，用 BCA 法定量，经 SDS-PAGE 电泳分离，转移至 PVDF 膜，封闭，与针对 p-Src、p-ERK、p-PI3K、p-Akt、总蛋白和 β-actin 的一抗孵育，然后与 HRP 标记的二抗孵育，用 ECL 法显色 [1]。
对于 HCC 细胞活力检测 (MTT)，将 HA22T/VGH 或 Huh-7 细胞以 10^4 个细胞/孔的密度接种于 96 孔板中，用Periplocin (0.03-10 μM) 处理，并加入或不加入 TRAIL (100 μM)。将 ng/ml) 处理 48 小时，加入 MTT (5 mg/ml) 至最终浓度为 0.5 mg/ml，孵育 1-2 小时，然后加入 10% SDS，并在 570 nm 处读取吸光度 [2]。
Annexin V/PI 细胞凋亡定量：用Periplocin单独或与 TRAIL 一起处理 HA22T/VGH 细胞 24 小时，然后用 Annexin V 和碘化丙啶染色，并通过流式细胞术进行分析。亚G1期分析：细胞用70%乙醇固定，经RNase A处理后用碘化丙啶染色，并通过流式细胞术进行分析[2]。
表面受体FACS分析：细胞与针对DR4、DR5、DcR1、DcR2的染料标记单克隆抗体在冰上孵育30分钟，洗涤后通过流式细胞术进行分析[2]。
免疫荧光：将Huh-7细胞接种于载玻片上，用Periplocin处理24小时，固定，用Hoechst 33258、Ki67和cyclin-D1抗体染色[2]。

动物/疾病模型： 注射 Huh-7 细胞的雌性 SCID（严重联合免疫缺陷）小鼠（6-8 周龄）[2]
剂量： 5 mg/kg，20 mg/kg
给药途径： 腹腔注射 (ip)；每日一次；持续 14 天
实验结果： 抑制小鼠异种移植瘤模型中肝细胞癌 (HCC) 的生长。

---

伤口愈合研究：35 只雄性 Sprague-Dawley 大鼠（260-300 g）用水合氯醛 (350 mg/kg) 麻醉，并在背部制造两个全层皮肤伤口（直径 8 mm）。将大鼠随机分为五组，分别每日一次注射50 μl赋形剂（橄榄油）或溶于橄榄油的Periplocin（5、10、20 μg/ml），连续9天。重组牛碱性成纤维细胞生长因子（rb-FGF）水凝胶作为阳性对照。分别于第0、3、6、9天拍摄伤口照片并量化伤口面积。第9天处死动物，收集伤口组织进行组织学分析（苏木精-伊红染色和马松三色染色）[1]。
对于异种移植瘤模型：将Huh-7细胞（3×10^6个细胞/只，溶于等体积的PBS和Matrigel中）皮下注射到6-8周龄雌性SCID小鼠的右侧腹部。待肿瘤生长至100-200 mm^3后进行移植。将Periplocin（5-20 mg/kg）或载体对照（10% NMP、20% Cremophor EL、70% 生理盐水）腹腔注射（IP），每日一次，连续14天（第15-29天5 mg/kg，第29-35天20 mg/kg）。每周两次测量肿瘤体积（V = L×S^2/2）和体重。研究结束时，处死小鼠，收集肿瘤样本进行组织学和免疫组织化学（Ki67和cyclin-D1染色）分析[2]。

Periplocin对正常细胞毒性较低：用300 μg/ml Periplocin处理后，PBMC细胞存活率>80% [2]。
在大鼠伤口愈合研究中，未报告明显的毒性[1]。
在异种移植研究中，小鼠每日腹腔注射20 mg/kg Periplocin后，体重略有下降（维持在对照组的90%左右），但未观察到进一步的体重减轻，表明副作用可耐受[2]。

[1]. Periplocin promotes wound healing through the activation of Src/ERK and PI3K/Akt pathways mediated by Na/K-ATPase. Phytomedicine. 2019 Apr;57:72-83.

[2]. Antitumor Effect of Periplocin in TRAIL-Resistant Human Hepatocellular Carcinoma Cells through Downregulation of IAPs. Evid Based Complement Alternat Med. 2013;2013:958025.

据报道，Periplocin存在于Periploca sepium、Periploca forrestii以及其他有相关数据的生物体中。

---

Periplocin是一种强心甾类化合物，也是Periploca forrestii中最丰富的化合物。它通过激活Na/K-ATPase/Src复合物介导的Src/ERK和PI3K/Akt通路来促进伤口愈合。在L929细胞中，通过免疫共沉淀和免疫共染色证实了Na/K-ATPase α1亚基与Src之间的相互作用。沉默Na/K-ATPase α1可消除Periplocin的伤口愈合作用[1]。
Periplocin通过两种机制使TRAIL耐药的肝细胞癌细胞重新对TRAIL诱导的细胞凋亡敏感：(1)诱导DR4和FADD的表达；(2)抑制IAPs（cIAP-1、XIAP、survivin），从而激活caspase-8、-9、-3并裂解PARP。Periplocin与TRAIL联合使用可协同诱导TRAIL耐药的肝癌细胞凋亡[2]。
在结构上，Periplocin (CP-1)与periplogenin (CP-5)相差一个二糖残基，该糖残基可能影响蛋白质相互作用[2]。

C36H56O13

696.82

682.356

13137-64-9

14463159

White to off-white solid

1.4±0.1 g/cm3

877.4±65.0 °C at 760 mmHg

205°C

272.8±27.8 °C

0.0±0.6 mmHg at 25°C

1.624

-1.36

193.83

6

13

7

49

1280

17

O[C@]12CC[C@H](C3=CC(=O)OC3)[C@@]1(C)CC[C@]1([H])[C@@]3(C)CC[C@@H](C[C@]3(CC[C@@]21[H])O)O[C@H]1C[C@@H]([C@@H]([C@@H](C)O1)O[C@H]1[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@@H](CO)O1)O)O)O)OC

KWBPKUMWVXUSCA-AXQDKOMKSA-N

InChI=1S/C36H56O13/c1-18-31(49-32-30(41)29(40)28(39)25(16-37)48-32)24(44-4)14-27(46-18)47-20-5-9-33(2)22-6-10-34(3)21(19-13-26(38)45-17-19)8-12-36(34,43)23(22)7-11-35(33,42)15-20/h13,18,20-25,27-32,37,39-43H,5-12,14-17H2,1-4H3/t18-,20+,21-,22+,23-,24+,25-,27+,28-,29+,30-,31-,32+,33-,34-,35+,36+/m1/s1

3-[(3S,5S,8R,9S,10R,13R,14S,17R)-5,14-dihydroxy-3-[(2R,4S,5R,6R)-4-methoxy-6-methyl-5-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-10,13-dimethyl-2,3,4,6,7,8,9,11,12,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2H-furan-5-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~143.51 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。