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PF-06260933

别名: PF-06260933; PF 06260933; PF06260933
目录号: V3214 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
PF-06260933 是一种高度选择性的 MAP4K4（丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶 4）小分子抑制剂，无细胞测定（激酶）和细胞测定的 IC50 值分别为 3.7 和 160 nM。
PF-06260933 CAS号: 1811510-56-1
产品类别: MAP4K
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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产品说明书
产品描述
PF-06260933 是一种高度选择性的 MAP4K4（丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶 4）小分子抑制剂，无细胞测定和细胞测定的 IC50 值分别为 3.7 和 160 nM。此外，它的 IC50 值为 8 和 13 nM，可抑制 MINK 和 TNIK。 PF-06260933 已显示可降低小鼠空腹高血糖。最近对丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 MAP4K4（存在于脂肪组织、胰腺、肌肉和巨噬细胞中）的研究表明，它可能是抗糖尿病药物的一个有前景的靶点。 PF-6260933 正在对 MAP4K4 作为潜在的新抗糖尿病靶点进行评估。
生物活性&实验参考方法
靶点
MAP4K4 (IC50 = 3.7 nM)
Mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 4 (MAP4K4) (Ki = 0.4 nM; IC₅₀ for enzyme activity = 1.8 nM) [1]
体外研究 (In Vitro)
PF-6260933 表现出良好的理化特性和中等的 HLM 清除率[1]。
PF-06260933 是一种强效且选择性的ATP竞争性MAP4K4抑制剂。它对440种人类激酶面板表现出>1000倍的选择性，对密切相关的MAP4K家族成员（MAP4K1、MAP4K2、MAP4K3）无显著抑制作用（IC₅₀ > 10 μM）[1]
- 在3T3-L1脂肪细胞中，PF-06260933（1–10 μM）以剂量依赖性方式增强胰岛素刺激的葡萄糖摄取，10 μM浓度下较单独胰岛素组增加2.3倍（通过[³H]-2-脱氧葡萄糖摄取实验评估）。它还可增加胰岛素诱导的Akt在Ser473和Thr308位点的磷酸化（western blot检测），且不影响基础葡萄糖摄取[1]
- 在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中，PF-06260933（0.1–1 μM）抑制TNF-α诱导的促炎粘附分子（VCAM-1、ICAM-1、E-选择素）的mRNA和蛋白表达（分别通过qPCR和流式细胞术定量）。它还可阻断TNF-α诱导的单核细胞（THP-1）与HUVECs的粘附，1 μM浓度下抑制率达80%[2]
- Western blot分析显示，该化合物可抑制HUVECs中TNF-α诱导的NF-κB和JNK信号通路激活，表现为IκBα、p65 NF-κB和JNK的磷酸化水平降低[2]
- 在浓度高达20 μM时，该化合物对3T3-L1脂肪细胞、HUVECs或THP-1细胞无显著细胞毒性（通过MTT实验评估）[1][2]
体内研究 (In Vivo)
PF-6260933 在小鼠模型中口服给药 (10 mg/kg) 后表现出血浆暴露，在约 4-6 小时内提供高于细胞 IC50 值的游离药物浓度。 PF-6260933 在小鼠体内的 PK 特性适合用作体内糖尿病模型的工具[1]。
在饮食诱导肥胖（DIO）的C57BL/6小鼠（高脂饮食喂养16周）中，口服PF-06260933（30 mg/kg，每日两次）连续21天，可改善葡萄糖耐量（AUC₀–120min较载体对照组降低32%）和胰岛素敏感性（胰岛素耐量实验AUC₀–120min降低28%）。它还可增加骨骼肌和脂肪组织的葡萄糖摄取（通过[¹⁸F]-FDG PET成像评估），且不影响体重、食物摄入或血浆脂质水平[1]
- 在高脂胆固醇饮食喂养的载脂蛋白E缺陷（ApoE⁻/⁻）小鼠中，口服PF-06260933（30 mg/kg，每日两次）连续12周，可使主动脉根部动脉粥样硬化病变面积减少42%，胸主动脉病变面积减少38%（通过油红O染色定量）。它还可降低病变部位巨噬细胞含量（CD68免疫组织化学染色）和全身性炎症（血浆TNF-α、IL-6和VCAM-1水平降低）[2]
酶活实验
主动脉在 1% NP-40、50 mM Tris pH 7.4、150 mM NaCl、50 mM EDTA 和 1 × HALT 蛋白酶和磷酸酶抑制剂 (Thermo Scientific) 中裂解。然后使用 B乙基 MAP4K4 抗体（503 A；1 μg）或常规兔 IgG（Cell Signaling 2729；1 μg）进行免疫沉淀。将免疫沉淀物与 1 μg 髓磷脂碱性蛋白 (MBP) 和 10 μCi 的 [γ-32P]ATP 混合，然后在激酶缓冲液（20 mM HEPES、10 nM MgCl2、1 mM 二硫苏糖醇）中于 30 °C 孵育 30 分钟(DTT)、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物。样品在 12% SDS-聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳分离，然后进行放射自显影观察。
MAP4K4激酶活性实验：在激酶 assay 缓冲液中制备包含重组人MAP4K4催化结构域、ATP（10 μM）和生物素化肽底物（源自MAP4K4底物）的反应混合物。加入系列稀释的PF-06260933（0.01 nM–10 μM），在30°C孵育60分钟。用EDTA终止反应，加入链霉亲和素包被的磁珠和磷酸化特异性抗体，通过时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）系统检测底物的磷酸化水平。通过非线性回归分析计算IC₅₀值[1]
- 激酶选择性面板实验：使用重组酶和特异性底物对440种人类激酶进行激酶活性实验。将每种激酶与1 μM PF-06260933 孵育，采用放射测量或荧光检测法测量抑制率。通过比较不同激酶的抑制率确定选择性[1]
- SPR法测定Ki值：将重组MAP4K4固定在传感器芯片上，在不同ATP浓度（0.1–100 μM）存在下注入系列稀释的PF-06260933。使用表面等离子体共振（SPR）测量结合亲和力，并通过竞争结合模型计算Ki值[1]
细胞实验
在 EGM2 培养基中，HUVEC 在 5% CO2 和 37°C 下保持存活。为了确定 MAP4K4 的药理抑制是否会改变响应 TNF-α 的 MAPK 信号转导，在体外用载体或 PF-06260933 处理 HUVEC 或腹膜巨噬细胞。
3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取试验: 将3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞，持续8天。细胞饥饿血清培养4小时，先用PF-06260933（1-10 μM）预处理1小时，然后加入胰岛素（100 nM）刺激30分钟。加入【³H】-2-脱氧葡萄糖，孵育15分钟，洗去未结合的放射性物质，测量放射性活度以量化葡萄糖摄取量。进行Western blot分析以检测Akt磷酸化水平[1]
- HUVEC炎症反应测定: 培养HUVEC至汇合状态，血清饥饿4小时，先用PF-06260933（0.1至1 μM）预处理1小时，然后加入TNF-α（10 ng/mL）刺激6小时（用于mRNA分析）或16小时（用于蛋白质分析）。分离总RNA，进行qPCR定量VCAM-1、ICAM-1和E-选择素mRNA水平。对于蛋白质分析，分离细胞，与针对粘附分子的荧光标记抗体孵育，然后通过流式细胞仪分析[2]
- 单核细胞-内皮细胞粘附试验: 将HUVECs预先处理PF-06260933（0.1至1 μM）1小时，然后用TNF-α（10 ng/mL）刺激16小时。用荧光染料标记THP-1单核细胞，加入HUVEC单层细胞中，并孵育30分钟。洗去未结合的细胞，使用荧光显微镜成像，然后计数粘附细胞，以计算粘附抑制率[2]
- 细胞毒性试验: 将3T3-L1脂肪细胞、HUVECs或THP-1细胞接种于96孔板中，用PF-06260933（0.1 μM至20 μM）处理48小时。加入MTT试剂，孵育4小时，溶解甲臜晶体，然后测量570 nm处的吸光度以评估细胞存活率[1][2]
动物实验
将化合物 PF-06260933（10 mg/kg，溶于去离子水）以口服方式给予 8 至 10 周龄的雄性 Apoe-/- 小鼠，每日两次，持续 6 周。雄性 Ldlr-/- 小鼠在给药前接受高脂饮食 (HFD) 喂养 10 周。8 至 10 周龄的雄性 Ldlr-/- 小鼠接受相同剂量的化合物 PF-06260933 治疗 10 周。所有研究中，溶剂对照组均给予水。采用二氧化碳吸入和双侧气胸麻醉小鼠。
DIO 小鼠葡萄糖代谢测定：雄性 C57BL/6 小鼠喂食高脂饮食（60% 的能量来自脂肪）16 周，以诱导肥胖和胰岛素抵抗。将小鼠随机分为载体组（10% DMSO + 40% PEG400 + 50% 水）和 PF-06260933 组（30 mg/kg）（每组 n=10）。每日两次通过灌胃法给药，持续 21 天。在治疗前后进行口服葡萄糖耐量试验 (OGTT) 和胰岛素耐量试验 (ITT)。在最后一天，经尾静脉注射 [¹⁸F]-FDG，进行 PET 成像以测量骨骼肌和脂肪组织中的葡萄糖摄取。收集血浆以分析胰岛素、脂质和细胞因子水平；收集组织进行蛋白质印迹和基因表达分析。[1]
- ApoE⁻/⁻ 小鼠动脉粥样硬化试验：雄性 ApoE⁻/⁻ 小鼠喂食高胆固醇饮食（1.25% 胆固醇）12 周。将小鼠随机分为载体组和PF-06260933（30 mg/kg）组（每组n=12）。每日两次通过灌胃法给药，持续12周。治疗结束后，处死小鼠，解剖主动脉，并用油红O染色以量化动脉粥样硬化病变面积。使用抗CD68抗体对主动脉根部切片进行免疫组织化学染色，以评估巨噬细胞浸润情况。收集血浆，检测炎症细胞因子（TNF-α、IL-6）和黏附分子（VCAM-1）[2]。
药代性质 (ADME/PK)
在小鼠中，单次口服 10 mg/kg 剂量后，PF-06260933 表现出良好的口服生物利用度（78%）。该化合物的血浆峰浓度 (Cmax) 为 2.4 μg/mL，曲线下面积 (AUC₀–24h) 为 18.6 μg·h/mL，消除半衰期 (t₁/₂) 为 5.2 小时 [1]。该化合物具有良好的组织渗透性，在肝脏、脂肪组织和主动脉（与其治疗靶点相关）中的浓度最高，在脑和睾丸中的蓄积量较低 [1][2]。该化合物主要通过人肝微粒体中的细胞色素 P450 3A4 (CYP3A4) 代谢，在浓度高达 10 μM 时，对主要 CYP 同工酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4）无显著抑制作用 [1]。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
体外实验表明，PF-06260933 具有较高的治疗指数（CC₅₀/EC₅₀ > 100），这归因于其对哺乳动物细胞的低细胞毒性（CC₅₀ > 20 μM）[1][2]。体内实验表明，小鼠连续12周每日两次口服30 mg/kg PF-06260933，未观察到明显的体重减轻、血液学异常或主要器官（肝脏、肾脏、心脏、脾脏）的组织病理学改变[1][2]。在小鼠血浆中，PF-06260933 的血浆蛋白结合率为92%，在人血浆中为94%（通过平衡透析法测定）[1]。
参考文献

[1]. Discovery of an in Vivo Tool to Establish Proof-of-Concept for MAP4K4-Based Antidiabetic Treatment. ACS Med Chem Lett. 2015 Oct 6;6(11):1128-33.

[2]. Endothelial protein kinase MAP4K4 promotes vascular inflammation and atherosclerosis. Nat Commun. 2015 Dec 21;6:8995.
其他信息
PF-06260933 是一种小分子 ATP 竞争性 MAP4K4 抑制剂，开发为体内工具化合物，用于验证 MAP4K4 作为代谢和心血管疾病治疗靶点的可能性 [1]
- MAP4K4 是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，参与调节胰岛素信号传导、葡萄糖代谢和血管炎症。PF-06260933 对 MAP4K4 的抑制作用可改善肥胖小鼠的胰岛素敏感性，并减少 ApoE⁻/⁻ 小鼠的动脉粥样硬化病变形成，支持 MAP4K4 作为 2 型糖尿病和动脉粥样硬化的潜在靶点 [1][2]
- 该化合物对 MAP4K4 的高选择性可最大限度地减少脱靶效应，使其适用于概念验证研究。其良好的药代动力学特性（良好的口服生物利用度、中等半衰期、低毒性）使其能够在耐受剂量下进行体内疗效评估[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C16H13CLN4
分子量
296.08
精确质量
296.08
元素分析
C, 64.76; H, 4.42; Cl, 11.95; N, 18.88
CAS号
1811510-56-1
相关CAS号
1883548-86-4 (2HCl);1811510-56-1;2118243-34-6 (HCl);
PubChem CID
118701008
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
3
tPSA
77.8
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
2
重原子数目
21
分子复杂度/Complexity
332
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
KHPCIHZXOGHCLY-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C16H13ClN4/c17-13-4-1-10(2-5-13)14-7-12(9-21-16(14)19)11-3-6-15(18)20-8-11/h1-9H,(H2,18,20)(H2,19,21)
化学名
5-(6-aminopyridin-3-yl)-3-(4-chlorophenyl)pyridin-2-amine
别名
PF-06260933; PF 06260933; PF06260933
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~30 mg/mL
Water: N/A
Ethanol: N/A
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.42 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.3775 mL 16.8873 mL 33.7747 mL
5 mM 0.6755 mL 3.3775 mL 6.7549 mL
10 mM 0.3377 mL 1.6887 mL 3.3775 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

  • PF-06260933

    Pharmacological MAP4K4 inhibition ameliorates atherosclerosis.2015 Dec 21;6:8995.

  • PF-06260933

    (a) Effects of16(PF-06260933 )on LPS-induced TNFα levels in C57-BL/6J mice). (b) Effects of16on glycemic control inob/obmice.2015 Oct 6;6(11):1128-33.

  • PF-06260933


    Total and free plasma concentration of16(PF-06260933 )after PO dosing (10 mg/kg) to mice.2015 Oct 6;6(11):1128-33.

  • PF-06260933


    Heat map obtained from an Invitrogen selectivity panel (% inhibition of kinases tested @1 μM).2015 Oct 6;6(11):1128-33.

  • PF-06260933

    2015 Oct 6;6(11):1128-33.

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