体外活性：PF-06260933 是一种高度选择性的 MAP4K4 小分子抑制剂，无细胞测定（激酶）和细胞测定的 IC50 值分别为 3.7 和 160 nM。它还抑制 MINK 和 TNIK，IC50 值分别为 8 和 13 nM。据报道，PF-06260933 可改善小鼠的空腹高血糖。最近对脂肪组织、胰腺、肌肉和巨噬细胞的研究表明，丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 MAP4K4 可能是抗糖尿病药物的可行靶点。作为 MAP4K4 作为新型抗糖尿病靶点评估的一部分，PF-6260933。激酶测定：主动脉在 1% NP-40、50 mM Tris pH 7.4、150 mM NaCl、50 mM EDTA 和 1 × HALT 蛋白酶和磷酸酶抑制剂 (Thermo Scientific) 中裂解，并用 B乙基 MAP4K4 抗体（503 A；1 μg）进行免疫沉淀）或正常兔 IgG（Cell Signaling 2729；1 μg）。将髓磷脂碱性蛋白 (MBP) (1 μg) 和 10 μCi 的 [γ-32P]ATP 添加到免疫沉淀物中，并在激酶缓冲液（20 mM HEPES、10 nM MgCl2、1 mM 二硫苏糖醇（ DTT）和蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物）。通过 12% SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品并通过放射自显影观察。细胞测定：HUVEC 保存在 37°C 和 5% CO2 的 EGM2 培养基中。在体外用载体或 PF-06260933 处理 HUVEC 或腹膜巨噬细胞，以确定 MAP4K4 的药理学抑制是否会改变响应 TNF-α 的 MAPK 信号传导

在 6-8 周龄时，雄性 flox/flox 和 flox/flox/cre+ 同窝仔鼠每天注射 1 mg 他莫昔芬的玉米油溶液，持续 5 天。在 5-6 周龄（KD 小鼠）或注射他莫昔芬后 2 周（flox 小鼠）时，给小鼠喂食食物或 WD（0.2% 胆固醇，TD 88137，Harlan Laboratories）16 周。将化合物 PF-06260933（10 mg kg−1，溶解在 dH2O 中）口服给予 8-10 周龄雄性 ApoE−/− 小鼠，每天两次，持续 6 周。 Ldlr−/− 雄性小鼠（B6.129S7-Ldlrtm1Her/J，Jackson Laboratories，8-10 周龄）在给药前接受 HFD（1.25% 胆固醇，TD96121，Harlan Laboratories）10 周。如上所述，将化合物 PF-06260933 给予 8-10 周龄雄性 Ldlr−/− 小鼠，持续 10 周。在所有研究中，口服水用作载体对照。小鼠通过吸入CO 2 并随后双侧气胸而被安乐死。没有使用统计方法来预测样本量，没有进行随机化，并且在基因敲除动物分析期间调查不是盲法，但在药物治疗分析期间是盲法。

ACS Med Chem Lett.2015 Oct 6;6(11):1128-33;Nat Commun.2015 Dec 21;6:8995.

C16H15CL3N4

369.67610001564

1883548-86-4

1883548-86-4 (2HCl);1811510-56-1;2118243-34-6 (HCl);

ClC1C=CC(=CC=1)C1C(N)=NC=C(C2C=NC(=CC=2)N)C=1.Cl.Cl

PF-06260933 2HCl; PF 06260933 2HCl; PF06260933 2HCl;PF-06260933 dihydrochloride; PF 06260933 dihydrochloride; PF06260933dihydrochloride

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Note: Listed below are some common formulations that may be used to formulate products with low water solubility (e.g. < 1 mg/mL), you may test these formulations using a minute amount of products to avoid loss of samples.

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Injection Formulation 1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (i.e. 100 μL DMSO stock solution → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH ₂ O to obtain a clear solution.
Injection Formulation 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL DMSO → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
Injection Formulation 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
Example: Take the Injection Formulation 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) as an example, if 1 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can take 100 μL 25 mg/mL DMSO stock solution and add to 900 μL corn oil, mix well to obtain a clear or suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Injection Formulation 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in saline = 10 : 90 [i.e. 100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in saline)]
*Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.
Injection Formulation 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (i.e. 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin → 500 μL Saline)
Injection Formulation 6: DMSO : PEG300 : castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (i.e. 50 μL DMSO → 100 μLPEG300 → 200 μL castor oil → 650 μL Saline)
Injection Formulation 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (i.e. 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
Injection Formulation 8: Dissolve in Cremophor/Ethanol (50 : 50), then diluted by Saline
Injection Formulation 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
Injection Formulation 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL EtOH → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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Oral Formulation 1: Suspend in 0.5% CMC Na (carboxymethylcellulose sodium)
Oral Formulation 2: Suspend in 0.5% Carboxymethyl cellulose
Example: Take the Oral Formulation 1 (Suspend in 0.5% CMC Na) as an example, if 100 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can first prepare 0.5% CMC Na solution by measuring 0.5 g CMC Na and dissolve it in 100 mL ddH2O to obtain a clear solution; then add 250 mg of the product to 100 mL 0.5% CMC Na solution, to make the suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Oral Formulation 3: Dissolved in PEG400
Oral Formulation 4: Suspend in 0.2% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 5: Dissolve in 0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 6: Mixing with food powders

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Note: Please be aware that the above formulations are for reference only. InvivoChem strongly recommends customers to read literature methods/protocols carefully before determining which formulation you should use for in vivo studies, as different compounds have different solubility properties and have to be formulated differently.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。