| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
recombinant PFKFB3 (IC50 = 110 nM); PFKFB3 activity in cancer cells (IC50 = 20 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性：PFK15 对一系列癌细胞产生有效的生长抑制作用。在 Jurkat T 细胞白血病细胞和 H522 肺腺癌细胞中，PFK15 还可降低 F26BP、葡萄糖摄取和细胞内 ATP 水平。激酶测定：通过将 13 ng 重组人 PFKFB3 蛋白在含有 10 μmol/L ATP、10 μmol/L F6P 和二甲基亚砜 (DMSO) 载体对照、3PO 或 PFK15 的反应混合物中孵育 1 小时来进行激酶反应在室温下。激酶活性按照制造商的细胞测定法使用 Adapta 通用激酶测定法进行测量：使用台盼蓝排除法测定活力。将细胞在 20% 台盼蓝中孵育 5 分钟。使用标准血细胞计数器对不包括台盼蓝的细胞进行计数，以确定活细胞的总数。实验一式三份进行。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，PFK15 具有足够的药代动力学特性。 PFK15 (25 mg/kg ip) 抑制同基因小鼠中 LLC 肿瘤的生长、转移扩散和葡萄糖代谢。在无胸腺小鼠的三种人类异种移植癌症模型中，PFK15 还产生与批准的化疗药物相当的抗肿瘤作用。
PFK15抑制Lewis肺癌（LLC）异种移植物的生长[1] 根据血液、尿液和组织学分析，每三天腹腔注射25mg/kg PFK15可导致体重减轻<10%，且无终末器官毒性。尽管PFK15的溶解度有限，但25mg/kg的PFK15很容易以小体积给药，因此选择这种无毒剂量和时间表进行异种移植物和同基因肿瘤模型的疗效测试。我们首先研究了每天腹腔注射PFK15对体内已建立的LLC肿瘤生长的相对影响。尽管我们没有观察到PFK15给药后肿瘤消退，但我们确实观察到LLC肿瘤生长在统计学上显著减少（图4A），对体重没有重大影响（图4B）。重要的是，尽管LLC细胞已经很好地从皮下肿瘤转移到肺部，但在用PFK15治疗的LLC携带小鼠中没有发现肺部转移（图4C）。然后，我们在开始PFKFB3抑制剂给药四天后检查了一部分肿瘤的F26BP和凋亡细胞（n=4）。我们发现PFK15降低了肿瘤相关的F26BP（图4D），并通过免疫组织化学导致切割胱天蛋白酶3阳性的细胞数量显著增加（图4E和F）。综上所述，这些结果表明，PFK15可以在体内减少肿瘤生长并诱导细胞凋亡，在体重方面具有良好的耐受性，并且具有意想不到的预防转移起始或生长的能力。 PFK15抑制Lewis肺癌（LLC）异种移植物对18F-FDG的摄取[1] 我们假设PFK15会在体内急性减弱异种移植物肿瘤的葡萄糖摄取。我们对携带LLC的C57Bl/6小鼠进行了18F-FDG-PET基线成像，24小时后注射PFK15，然后在45分钟后重新植入携带LLC的小鼠。我们观察到，在PFK15给药后，18F-FDG摄取减少了约50%，与小脑中的FDG摄取正常化（神经元不表达PFKFB3蛋白；图4G和H）。这些数据表明，PFK15在体内选择性抑制肿瘤对葡萄糖的摄取，并表明FDG摄取扫描可能是PFKFB3抑制剂在临床试验中的一个有用的药效学终点。 PFK15显示出与常用化疗药物相似的抗肿瘤活性[1] 最后，我们直接比较了PFK15与FDA批准用于治疗人类癌症的三种化疗药物的抗肿瘤作用。我们发现PFK15分别与伊立替康（图5A）和吉西他滨（图5C）类似地抑制了结肠和胰腺腺癌的生长。然而，PFK15对胶质母细胞瘤生长的抑制活性低于替莫唑胺观察到的活性（图5B）。这些临床前研究提出了PFK15和封闭合成衍生物可能在临床试验中对人类癌症具有细胞毒性活性的前景。 |
| 酶活实验 |
对于激酶反应，将 13 ng 重组人 PFKFB3 蛋白在含有 10 μmol/L ATP、10 μmol/L F6P 和二甲基亚砜 (DMSO) 载体对照、3PO 或PFK15。据制造商介绍，激酶活性是使用 Adapta 通用激酶测定法测定的。
重组PFKFB3检测[1] 激酶反应是通过在室温下将13ng重组人PFKFB3蛋白在含有10μM ATP、10μM F6P和DMSO载体对照、3PO或PFK15的反应混合物中孵育一小时来进行的。根据制造商的说明，使用Adapta通用激酶测定法测量激酶活性，并在Tecan Safire2平板读数器上测量荧光和FRET信号。使用SigmaPlot软件生成图表，使用三参数Hill方程计算IC50值。KINOMEscanEDGE的96种激酶列表可以在以下网址访问http://www.kinomescan.com. |
| 细胞实验 |
2-[1-14C]-脱氧-D-葡萄糖摄取[1]
将Jurkat或H522细胞接种在补充了10%FCS和50μg/ml庆大霉素的RPMI 1640培养基中，浓度为100000/ml，并立即用DMSO载体对照、3PO或PFK-15处理三小时。用预热的无葡萄糖RPMI培养基洗涤细胞两次，并在PFKFB3抑制剂存在下孵育30分钟。细胞用25μl 14C-脱氧葡萄糖（0.1μCi/μl）处理一小时，用冰冷的无葡萄糖RPMI洗涤一次，用冰冷PBS洗涤两次。细胞在500μl 0.5%SDS中裂解。将400μl裂解液加入5ml Microscint 40闪烁液中，在Tri-Carb 2910液体闪烁分析仪上测量计数。根据制造商的说明，用BCA测定法对剩余的裂解物进行定量，并在Powerwave XS平板读数器上测量蛋白质水平。计数标准化为蛋白质浓度。 ATP测定[1] 用冷PBS×1洗涤细胞（同时仍粘附），用直接添加到板中的被动裂解缓冲液（1X）裂解，并立即通过刮擦收获。将裂解物快速冷冻（至-80°C）并解冻（至37°C）一次以完成完全裂解，然后离心（在4°C下）30秒以清除裂解物。使用重组萤火虫荧光素酶及其底物D-荧光素的生物发光测定法测定细胞内ATP水平。在TD-20/20光度计中在560 nm处读取发光。使用ATP标准曲线计算ATP值。使用BCA测定法估算裂解物的蛋白质浓度，ATP表示为nmol/mg蛋白质。 流式细胞术[1] Jurkat细胞被置于RPMI 1640培养基中，该培养基补充了10%FCS和50μg/ml庆大霉素，浓度为100000个细胞/ml，并立即与DMSO载体对照、3PO、PFK-15或依托泊苷一起孵育5小时。用PBS洗涤细胞，用膜联蛋白V和碘化丙啶染色。使用FACSCalibur测量荧光，并使用FloJo进行分析。Annexin V+/PI+（晚期凋亡）和Annexin V+/PI-（早期凋亡）细胞通过荧光标记细胞的频率进行定量，并通过双样本T检验（自变量）评估统计学意义。 台盼蓝排除法用于测定活力。将细胞在 20% 台盼蓝中孵育五分钟。使用标准血细胞计数器对所有活细胞进行计数，不包括台盼蓝细胞。每个实验重复三份。 |
| 动物实验 |
携带 LLC 异种移植瘤的 C57Bl/6 小鼠，以及携带 CT26、U-87 MG 或 BxPC-3 异种移植瘤的 Balb/C 无胸腺小鼠。
25 mg/kg，每 3 天一次 腹腔注射 药代动力学研究 [1] 在雌性 C57Bl/6 小鼠中，通过静脉注射 PFKFB3 抑制剂测定其药代动力学特征。仅使用雌性小鼠可减少获得有意义结果所需的动物数量，且避免潜在的性别暴露差异问题。使用 WinNonLin v5.0 软件计算药代动力学参数（Tmax、Cmax、分布容积、半衰期、清除率、AUC 和 MRT），共设置 8 个时间点，每个时间点 3 只动物。使用乙腈提取血浆样本，并采用液相色谱-串联质谱法 (LC/MS-MS) 进行分析，色谱柱为 PhenomexSynergi Polar-RP 4μm 50×2.0 mm，流动相为双相流动相（0.5% 甲酸乙腈和水）。 FDG-PET 成像 [1] 将荷瘤小鼠用异氟烷麻醉，并通过尾静脉注射 200 μCi FDG。使用 Concorde Microsystems 四环微型 PET 系统，在静脉注射示踪剂 45 分钟后，采用有序子集期望最大化 (OSEM) 算法，以 6 个子集/4 次迭代的迭代次数，对小鼠进行 15 分钟的静态扫描，获取基线 FDG 微型 PET 图像。对肿瘤和小脑的感兴趣区域进行四次定量分析，24 小时后（18F 半衰期为 109.8 分钟），腹腔注射 PFK-15（25 mg/kg），45 分钟后重复进行微型 PET 扫描。 异种移植研究 [1] 从添加 10% FCS 的 DMEM 培养基中收集处于指数生长期的 LLC、CT26、U-87 或 BxPC-3 细胞。细胞洗涤两次后，重悬于 PBS 中（1×107 个细胞/ml）。将 0.1 ml 细胞悬液（1×106 个细胞）皮下注射到 C57Bl6（用于 LLC 细胞）或 Balb/C 无胸腺小鼠（用于 CT26、U-87 MG 或 BxPC-3 细胞）（20 g）中。采用游标卡尺以盲法测量肿瘤质量，计算公式为：质量(mg)=(宽度，mm)²×(长度，mm)/2 (19)，然后每日使用微型卡尺进行监测。携带异种移植瘤（150–200 mg）的小鼠被随机分为四组：DMSO组、PFK-15组（25 mg/kg，腹腔注射，每3天一次，共4组）、伊立替康组（70 mg/kg，静脉注射，每3天一次，共4组）、替莫唑胺组（30 mg/kg，口服，连续用药3天，停药3天）和吉西他滨组（100 mg/kg，每3天一次，共4组），并每日进行微型卡尺测量。所有数据均以两次独立实验的平均值±标准差（SD）表示（每组n = 8）。统计学显著性采用非配对双尾t检验进行评估。在另一系列实验中，仅治疗四天后，就对携带 LLC 肿瘤的小鼠实施安乐死，切除肿瘤，用福尔马林固定，包埋在石蜡中，并使用标准免疫组织化学方法用苏木精和伊红或抗裂解 caspase 3 染色。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
在人类癌症中，PTEN 的缺失、缺氧诱导因子-1α 的稳定以及 Ras 和 AKT 的激活共同导致糖酵解关键调节因子 6-磷酸果糖-2-激酶 (PFKFB3) 的活性增强。该酶合成果糖-2,6-二磷酸 (F26BP)，而 F26BP 是 6-磷酸果糖-1-激酶的激活剂，后者是糖酵解的关键步骤。此前，研究发现 PFKFB3 的一种弱竞争性抑制剂 3-(3-吡啶基)-1-(4-吡啶基)-2-丙烯-1-酮 (3PO) 能够降低癌细胞的葡萄糖代谢和增殖。我们合成了 73 种 3PO 衍生物，并筛选了每种化合物对重组 PFKFB3 的活性。我们选择了一种小分子化合物1-(4-吡啶基)-3-(2-喹啉基)-2-丙烯-1-酮（PFK15）进行进一步的临床前评估，以研究其在体外和体内的药代动力学、抗代谢和抗肿瘤特性。研究发现，PFK15能够快速诱导转化细胞凋亡，具有良好的药代动力学特性，能够抑制同源小鼠Lewis肺癌的葡萄糖摄取和生长，并在三种人源异种移植瘤模型（裸鼠）中展现出与美国食品药品监督管理局（FDA）批准的化疗药物相当的抗肿瘤效果。基于这项研究，我们已对PFK15的合成衍生物及其制剂进行了研究性新药（IND）申报所需的毒理学和安全性研究。一项针对晚期癌症患者的I期临床试验将于2013年启动，我们预期这类新型抗代谢药物将具有可接受的治疗指数，并与干扰肿瘤信号通路的药物产生协同作用。[1]
多项研究表明，通过抑制PFKFB3进行代谢抑制可显著抑制肿瘤生长；然而，在临床试验中，PFKFB3抑制剂并未显示出令人满意的肿瘤抑制效果。PFKFB3是一种关键的代谢酶，在癌细胞中高度上调，并直接影响肿瘤糖酵解。本研究表明，PFKFB3抑制剂可在体外和免疫缺陷异种移植瘤模型中抑制肿瘤生长。然而，这种抑制作用会导致PD-L1水平上调，从而在体外使共培养的T细胞失活，在体内损害抗肿瘤免疫，并在免疫功能正常的鼠模型中降低抗肿瘤疗效。功能上，PD-1 mAb 治疗可增强免疫功能正常小鼠和人外周血单核细胞 (hu-PBMC) NOG 小鼠模型中 PFKFB3 抑制剂的疗效。机制上，PFKFB3 抑制剂可增加 PFKFB3 在 Ser461 位点的磷酸化水平，从而增强其与 HIF-1α 的相互作用，并促进二者共定位至细胞核。在细胞核内，HIF-1α 可转录上调 PD-L1 的表达，进而导致肿瘤免疫逃逸。在食管鳞状细胞癌 (ESCC) 患者中，较高的磷酸化 PFKFB3 水平与较高的 PD-L1 表达、较低的 CD8 和 GRZMB 水平以及较短的生存期相关。Oncoimmunology. 2022 年 5 月 25 日；11(1):2079-182。 |
| 分子式 |
C17H12N2O
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|---|---|---|
| 分子量 |
260.29
|
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| 精确质量 |
260.094
|
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| 元素分析 |
C, 78.44; H, 4.65; N, 10.76; O, 6.15
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| CAS号 |
4382-63-2
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
25142799
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
464.4±45.0 °C at 760 mmHg
|
|
| 闪点 |
233.5±35.1 °C
|
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
|
|
| 折射率 |
1.698
|
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| LogP |
2.62
|
|
| tPSA |
42.85
|
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
3
|
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
20
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| 分子复杂度/Complexity |
360
|
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
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| SMILES |
O=C(/C(/[H])=C(\[H])/C1C([H])=C([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C2N=1)C1C([H])=C([H])N=C([H])C=1[H]
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| InChi Key |
UJJUKZPBUMCSJZ-BQYQJAHWSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H12N2O/c20-17(14-9-11-18-12-10-14)8-7-15-6-5-13-3-1-2-4-16(13)19-15/h1-12H/b8-7+
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| 化学名 |
(E)-1-pyridin-4-yl-3-quinolin-2-ylprop-2-en-1-one
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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|---|---|---|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (7.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2 mg/mL (7.68 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.0mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2 mg/mL (7.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 5% DMSO +45% PEG 300 +1% Tween 80 +ddH2O: 5mg/mL 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.8419 mL | 19.2093 mL | 38.4187 mL | |
| 5 mM | 0.7684 mL | 3.8419 mL | 7.6837 mL | |
| 10 mM | 0.3842 mL | 1.9209 mL | 3.8419 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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