Natural alkaloid; NF-κB

尽管在胰腺癌的治疗方面做出了巨大的努力，但没有一种有效的应用显示出令人满意的临床结果。巨噬细胞增多症在胰腺导管腺癌（PDAC）的持续增殖中起着关键作用。在本研究中，我们建立了一种筛选方法，鉴定出Phellodendrine （PC）是一种潜在的巨噬细胞增多症抑制剂。Phellodendrine 显著抑制KRAS突变型胰腺癌细胞（PANC-1和MiaPaCa-2）的活力，并呈剂量依赖性；但对野生型KRAS胰腺癌细胞（BxPC-3）无影响。进一步的实验表明，PC通过抑制巨噬细胞和降低细胞内谷氨酰胺水平来抑制PANC-1细胞的生长。谷氨酰胺代谢紊乱导致PANC-1细胞活性氧水平升高，线粒体膜电位去极化。Phellodendrine 处理导致Bax表达升高，Bcl-2表达降低，cleaved caspase- 3,7,9和cleaved- parp激活，从而诱导线粒体凋亡。总之，我们证明抑制巨红细胞增多症可能是治疗胰腺癌的有效策略。因此，Phellodendrine 可能是一种潜在的化合物，可以改善胰腺癌患者的治疗效果。[3]

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网络药理学结果显示黄柏碱(PHE)具有药物潜力。黄檗碱直接作用于PTGS1、PTGS2、HTR1A、PIK3CA等12个靶点，进而调节cAMP、雌激素、TNF、血清素能突触等信号通路，发挥抗炎作用。实验结果显示，与LPS组相比，黄柏碱能在24 h内降低IL-6水平，改变PTGS1、PTGS2、HSP90ab1、AKT1、HTR1A、PI3CA、F10 mRNA的表达。 结论：我们的研究初步揭示了黄柏碱对炎症的多靶点、多通路的治疗机制。黄柏碱可能是与cAMP和TNF信号通路相关的炎症相关疾病的潜在治疗方法。［2］

探讨黄柏碱(PHE)通过AMPK/mTOR通路对溃疡性结肠炎（UC）的治疗作用。招募志愿者观察复方黄柏液（黄柏搽剂）的治疗效果。采用网络药理学方法对复方黄柏液的主要成分进行了分析。进一步分析黄柏碱 的靶点。培养Caco-2细胞，用H2 O2刺激体外细胞模型。通过Western blotting和免疫荧光实验检测LC3、AMPK、p-AMPK、mTOR和p-mTOR的表达水平。通过表达谱芯片测序分析黄柏碱的治疗效果。肠道菌群测序进一步阐明了黄柏碱的治疗作用。与对照组相比，复方黄柏液能明显促进肠黏膜的愈合。网络药理学分析表明，复方黄柏液的主要成分为黄柏碱。此外，该生物碱靶向AMPK信号通路。动物实验结果显示，与模型组相比，黄柏碱能减轻UC大鼠肠道损伤。细胞实验结果表明，黄柏碱处理可以激活p-AMPK /mTOR信号通路，并激活自噬。表达谱芯片测序显示，黄柏碱治疗可促进粘膜愈合，减轻炎症反应。肠道菌群检测结果表明，黄柏碱处理可增加肠道菌群的丰度和有益菌的含量。黄柏碱可能通过调节AMPK-mTOR信号通路促进自噬，从而减轻UC引起的肠道损伤。[4]

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此外，Phellodendrine 在体内抑制巨噬细胞增多，有效地抑制了PANC-1异种移植肿瘤的生长。

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黄柏碱（Phellodendrine (PHE)）可明显改善AAPH引起的斑马鱼胚胎存活率下降和心跳率异常升高。特别是200μg/mL的PHE，使72hfp时存活率提高到90.26±1.40%，心跳恢复正常。此外，AAPH引起活性氧（reactive oxygen species， ROS）的产生、脂质过氧化和细胞死亡率显著增加，经过PHE处理后，这些都可以呈剂量依赖性地降低。PHE通过下调斑马鱼胚胎中AKT磷酸化和NF-kB3表达（与IKK磷酸化调控有关），对aaph诱导的氧化应激具有保护作用。 意义：PHE在体内表现出良好的抗氧化作用，其机制已证实可下调AAPH诱导的AKT、IKK、NF-kB磷酸化及COX-2表达。此外，PHE还能改善ros介导的炎症反应。［1］

Phellodendrine (PHE)的类药性等特征[2]
利平斯基五定律（RO5）用于评价口服药物在人体中的药物相似性。参数主要由分子量（MW，小于500 g/mol）、拓扑极性表面积（TPSA，小于140 A2）、辛醇-水分配系数（log P0/W (MLOGP)，小于5）、氢键受体数（nHAcc，小于10）、氢键给体数（nHDon，小于5）和可旋转键数（小于10）组成。其他特征如对数S （ESOL）、胃肠道吸收、血脑屏障渗透、对数Kp（皮肤渗透）和生物利用度评分。黄柏碱的化学结构和典型的smile从PubChem数据库（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）中获得。为了估计黄柏碱的药物相似性质和其他特征，我们导入了规范SMILES C[N+]12CCC3=CC(=C(C=C3C1CC4=CC(=C(C=C4C2)OC)O)O)OC 黄柏碱(PHE)进入SwissADME数据库（http://www.swissadme.ch/） 。

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收集Phellodendrine (PHE)相关靶点和炎症相关靶点[2]
TCMSP （https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）和SwissTargetPrediction （http://www.swisstargetprediction.ch/）需要根据化学名称（黄柏碱）和规范SMILES （C[N+]12CCC3=CC(=C(C=C3C1CC4=CC(=C(C=C4C2)OC)O)O)OC）收集与黄柏碱相关的靶标（概率> 0.09724）。从两个数据库中得到的靶标结合为黄柏碱相关靶标。 以“炎症”为关键词，从OMIM （http://www.omim.org）、Drugbank （https://go.drugbank.com/）和GeneCards （https://www.genecards.org/）数据库中选择炎症相关靶点。利用UniProt数据库（https://www.uniprot.org）将得到的蛋白靶名转换为基因名（office基因符号）。重复基因被删除。 将Phellodendrine (PHE)靶点和炎症靶点导入Venny 2.1软件（https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）中，得到黄柏碱抗炎症的共同靶点。

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网络构建Phellodendrine (PHE)/黄柏碱炎症共同靶点[2]
PPI网络是使用STRING数据库（https://www.string-db.org/）建立的。将常见目标上传至STRING数据库，在生物项中选择智人，仅选取0.400的中等置信度分数。利用Cytoscape （version 3.7.2）软件对从STRING数据库中获取的常见靶标相互作用信息进行整合和可视化。

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GO和KEGG途径富集分析[2]
我们的研究使用DAVID数据库（DAVID Bioinformatics Resources 6.8, https://david.ncifcrf.gov/）进行GO和KEGG通路富集分析，P < 0.05为统计学意义。通过数据分析和可视化的在线平台bioinformatics （http://www.bioinformatics.com.cn）绘制了热图。

细胞活力[2]
MTT法测定细胞活力。简而言之，将RAW 264.7细胞接种到96孔板中，密度为每孔5000个，然后在5% CO2和37°C下孵育过夜。在LPS （1 mg/L）存在或不存在的情况下，分别加入不同浓度的Phellodendrine (PHE)/黄柏碱 （5、10、20、40、80、160 mg/L），孵育24、48、72 h， MTT （20 μL、5 mg/mL）孵育4 h，完全丢弃上清，加入150 μL DMSO溶解形成的甲氧基苯甲酸。最后在492 nm处测量光密度（OD）。

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细胞因子测定[2]
为了检测细胞因子的产生，我们将RAW 264.7细胞接种于96孔板（1 × 104个细胞/孔）过夜。以下组和方案与MTT试验一致。采用IL-1β和IL-6酶联免疫吸附试验试剂盒检测各组细胞因子。

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实时定量PCR [2]
提取各组总RNA，用PrimeScript™RT reagent Kit反转录成cDNA。目的基因和β-肌动蛋白的引物使用如表1所示。采用TB Green®Premix Ex Taq™进行实时定量PCR检测。使用2−ΔΔCT方法计算相对表达水平。

小鼠适应环境一周后，将PANC-1细胞（2 × 10⁶个细胞）与基质胶等体积混合，总体积为200 μl，皮下注射（sc）至小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到60–100 mm³时，将小鼠随机分为4组（每组n = 7）：对照组（溶剂；DMSO和PBS以1:4的比例混合，腹腔注射）、EIPA组（2 mg/kg/天，腹腔注射）和黄柏碱组（PC）（30 mg/kg/天和60 mg/kg/天，腹腔注射）。每两天测量并记录肿瘤体积和体重。肿瘤体积使用数字游标卡尺测量，并根据公式V = 0.52 × ab²计算，其中a代表肿瘤的长径，b代表肿瘤的短径（Zhou et al., 2014）。药物治疗结束后，处死小鼠并切除肿瘤。测量肿瘤重量，并根据切除肿瘤的重量 (W) 使用以下公式计算肿瘤重量抑制率 (%)：肿瘤重量抑制率 (%) = W (载体) – W (治疗) / W (载体) × 100 (Wang et al., 2017)。[3]

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\n\n本研究选用SPF级雌性C57BL/6小鼠（18-22 g）作为动物模型。根据体重，将小鼠随机分为四组，每组五只：正常对照组、模型组、阳性对照组和黄柏碱 (PC) 组。黄柏碱 (PC) 的给药剂量为30 mg/kg。阳性对照组给予柳氮磺胺吡啶（40 mg/mL），剂量为200 mg/kg。正常对照组和模型对照组均给予双蒸水处理。采用5%葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导急性溃疡性结肠炎（UC）模型。适应期内，小鼠自由摄食饮水。实验开始时，将饮用水替换为5% DSS溶液（正常对照组除外），并给予小鼠自由饮水。每只小鼠每日饮水量计算为6 mL，次日添加足量DSS溶液。DSS溶液连续给药8天。首次给药24小时后，若小鼠出现软便、腹泻或血便，则判定小鼠已灌胃给药。正常对照组和模型对照组小鼠每日给予0.1 mL双蒸水。阳性对照组小鼠每日给予0.1 mL柳氮磺胺吡啶（40 mg/mL）。给予黄柏碱（PC）组小鼠30 mg/kg黄柏碱（PC）。采用疾病活动指数（DAI）评估每只小鼠的总体状况，该指数包括体重减轻、粪便性状和粪便带血，每项指标的评分范围为0至4分。将这三项指标的评分相加即为DAI。给药7天后，处死所有小鼠。暴露小鼠腹腔，解剖结肠并测量其长度。沿肠系膜纵向切开结肠，用生理盐水清洗粪便，并用10%中性福尔马林溶液固定。在体视显微镜下观察并评分肉眼可见的损伤，取严重溃疡进行病理学检查。 [4]

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\n\n目的：本研究旨在利用斑马鱼胚胎模型，探讨黄柏碱（PHE）对AAPH诱导的氧化应激的抑制作用，并揭示PHE的生物学机制。[1]
\n主要方法：分别用AAPH或PHE处理斑马鱼胚胎后，记录其死亡率和心跳情况，并采用荧光分光光度法检测活性氧（ROS）的产生、脂质过氧化水平和细胞死亡率。随后，通过筛选抑制剂，探索PHE对抗AAPH诱导的氧化应激的途径，以揭示其生物学机制。采用实时定量逆转录聚合酶链式反应 (qRT-PCR) 和蛋白质印迹法分析相关基因和蛋白质的表达。[1]
\n\n胚胎经水体暴露于黄柏碱 (PHE) 和 AAPH 的研究[1]
\n将胚胎转移至 24 孔板的单个孔中（每孔 50 个胚胎），并在含有 2 mL 浓度分别为 0、50、100、200、500 和 1000 μg/mL PHE 的胚胎培养基中孵育。然后在受精后 24、48、72、96 和 120 小时记录胚胎的存活率，以确定 PHE 的毒性并选择最佳浓度。此外，将胚胎用 12.5 mmol/L AAPH 处理或用 AAPH 和 PHE 共同处理，并在 24 hpf、48 hpf 和 72 hpf 时记录胚胎的存活率。\n

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\n\n斑马鱼胚胎心跳的测量[1]
\n将胚胎在 1 mL 胚胎培养基中分别用 25、50、100 和 200 μg/mL 的黄柏碱 (PHE) 或不加黄柏碱孵育 1 小时，然后用 12.5 mmol/L AAPH 处理 36 小时。随后，用 0.02% 三卡因麻醉胚胎。在显微镜下记录心房和心室的心跳频率3分钟，结果以每分钟平均心跳频率表示[7]。\n

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\n\n斑马鱼胚胎中活性氧（ROS）生成的评估和图像分析[1]
\n荧光探针DCFH-DA是一种氧化敏感的荧光探针染料，可用于分析斑马鱼胚胎中ROS的生成。将胚胎在1 mL胚胎培养基中孵育1小时，培养基中添加或不添加50 μg/mL的黄连素（Vc）以及50、100和200 μg/mL的黄柏碱（PHE），然后用12.5 mmol/L的AAPH处理12小时。接下来，将培养基更换为正常胚胎培养基，使胚胎发育至2日龄（2 dpf）。然后将胚胎转移至96孔板中，用20 μg/mL DCFH-DA溶液处理，并在28.5 °C下避光孵育1小时。孵育后，用新鲜培养基洗涤胚胎，并用0.02%三卡因麻醉，然后在荧光显微镜下拍照。使用Nikon Elements-DR软件对单个胚胎的荧光强度进行定量分析。\n

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\n\n斑马鱼胚胎脂质过氧化抑制活性及图像分析[1]
\n非荧光的DPPP在被脂质过氧化物氧化后会发出荧光，可用于检测斑马鱼胚胎中的脂质过氧化水平。胚胎的给药方法见2.6节。将胚胎置于28.5℃黑暗条件下，用25 μg/mL荧光探针DPPP溶液处理1小时，然后用含0.5% Tween-80溶液的新鲜培养基冲洗，并用0.02%三卡因麻醉。使用荧光显微镜拍摄胚胎照片，并使用Nikon Elements-DR软件分析其荧光强度。\n

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\n\n斑马鱼胚胎中AAPH诱导氧化应激引起的细胞死亡的测量[1]
\n吖啶橙（AO）是一种核酸选择性荧光阳离子染料，可用于检测凋亡细胞。按照2.6节的步骤对胚胎进行处理。将胚胎置于黑暗条件下，用7 μg/mL荧光探针AO溶液处理0.5小时[17]，然后用新鲜培养基冲洗。然后对胚胎进行麻醉，并在荧光显微镜下拍照，分析荧光强度。\n

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\n\n斑马鱼胚胎抑制剂处理[1]
\n为了阐明黄柏碱（PHE）的抗氧化机制，我们选择了五种抑制剂，包括SB203580（5 μg/mL）、BAY 11-7082（0.1 μg/mL）、SP600125（1 μg/mL）、LY294002（2 μg/mL）和U0126-EtOH（1 μg/mL），它们分别靶向p38 MAPK、NF-κB、JNK、AKT和MAPK通路。抑制剂的浓度通过LC50确定，该实验已预先进行。将胚胎置于12孔板中（每孔50个胚胎），并在2 mL胚胎培养基中培养。3-4 hpf后，用黄柏碱（PHE）（100 μg/mL）或抑制剂处理1小时，随后用或不用AAPH处理12小时，之后去除AAPH和抑制剂，继续培养至2 dpf。最后，通过荧光显微镜检测ROS的产生，以筛选AAPH诱导的氧化途径。

如上文“方法”部分所述，我们考察了11项性质。黄柏碱（PHE）的分子量为342.41 g/mol，nHAcc为4，nHDon为2，logP0/W(MLOGP)为-1.71，可旋转键数为2，TPSA为58.92 Ų，log S (ESOL)为-3.82，胃肠道吸收率高，血脑屏障通透性为“是”，log Kp（皮肤渗透性）为-6.54 cm/s，生物利用度评分为0.55（表2）。黄柏碱（PHE）的这些性质符合RO5标准，表明其具有药物潜力。[2]

黄柏碱 (PHE) 或 AAPH 对斑马鱼胚胎的毒性 [1]
研究人员分析了 5 日龄斑马鱼胚胎的存活率（见表 1），发现 PHE 的 LD50 约为 500 μg/mL，因此选择 50、100 和 200 μg/mL 的浓度进行后续实验。当胚胎暴露于 AAPH 时，其存活率 (SR) 随时间推移分别下降至 73.33 ± 3.33%、68.49 ± 2.90% 和 65.12 ± 1.50%，且心跳较对照组 (NC) 明显加快 (P = 0.005)。与 PHE 联合处理后，存活率呈剂量依赖性显著增加（如图 3A 所示）。特别是 200 μg/mL 的 PHE 浓度引起了非常显著的增加。此外，PHE 能以剂量依赖的方式降低异常加速的心跳。如图 3B 所示，200 μg/mL 的 PHE 使胚胎心跳频率降低至 NC 组的 97.80 ± 4.50%。

[1]. The defensive effect of phellodendrine against AAPH-induced oxidative stress through regulating the AKT/NF-κB pathway in zebrafish embryos. Life Sci. 2016 Jul 15;157:97-106.

[2]. Utilizing network pharmacology and experimental validation to investigate the underlying mechanism of phellodendrine on inflammation. PeerJ. 2022 Sep 23:10:e13852.

[3]. Phellodendrine chloride suppresses proliferation of KRAS mutated pancreatic cancer cells through inhibition of nutrients uptake via macropinocytosis. Eur J Pharmacol. 2019 May 5;850:23-34.

[4]. Phellodendrine promotes autophagy by regulating the AMPK/mTOR pathway and treats ulcerative colitis. J Cell Mol Med. 2021;25(12):5707-5720.

黄柏碱（PHE）是一种生物碱。据报道，黄柏碱存在于小花木犀草（Xylopia parviflora）、光叶黄柏（Phellodendron chinense var. glabriusculum）等有相关数据的生物体中。本研究从抗氧化机制入手，旨在进一步探索黄柏碱（PHE）的治疗作用，例如其抗炎作用。PI3K/AKT信号通路在心脏病的发生发展和阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中起着至关重要的作用，而NF-κB信号通路的激活可以促进TNF-α、IL-6和IL-8等炎症因子的释放。既往文献证实黄柏碱具有抗肾炎作用，但尚未研究其对心脏病的影响。因此，本研究可为黄柏碱抗心脏病的研究提供重要的理论基础。但这仅仅是一项初步研究，还需要更多研究来进一步探究。总之，我们的研究表明，从黄柏皮中分离得到的黄柏碱（PHE）具有抗氧化能力，其机制是通过调节斑马鱼胚胎中的AKT/NF-κB通路。此外，黄柏碱还能逆转AAPH诱导的氧化应激引起的AKT、NF-κB3、IKK和COX-2的异常表达。[1] 综上所述，我们通过网络药理学分析和实验验证，揭示了黄柏碱（PHE）抗炎的药理机制。本研究通过网络药理学方法获得了12个常见的抗炎靶点。黄柏碱通过cAMP信号通路、TNF信号通路、5-羟色胺能突触等途径发挥抗炎作用。进一步的实验验证表明，黄柏碱通过调节IL-6、IL-1β、PTGS1、AKT1、HSP90ab1、HTR1A和PI3CA的表达来抑制RAW264.7细胞的炎症。我们的研究可能为炎症相关疾病提供新的治疗方案。然而，黄柏碱抗炎作用的具体机制仍需进一步研究。[2] 综上所述，本研究表明黄柏碱（PC）的抗癌作用可能通过降低巨胞饮作用和改变谷氨酰胺代谢来实现。此外，用PC处理细胞（无论是否添加NAC）也证实，活性氧的产生参与了PC诱导的线粒体凋亡细胞死亡。我们的研究结果表明，抑制巨胞饮作用可能是一种有效的治疗策略，可用于发现和开发治疗胰腺癌的化合物。[3]

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本研究探讨了黄柏碱（PC）在复方黄柏碱溶液中治疗溃疡性结肠炎（UC）的作用及其分子机制。黄柏碱的加工可能通过激活AMPK-mTOR信号通路促进自噬，最终对UC发挥保护作用。然而，黄柏碱是否通过其他信号通路调节自噬仍有待研究。阐明其在UC中的具体作用机制将为黄柏碱的临床应用提供理论基础，并为UC的临床治疗提供新的思路。[4]

C20H24CLNO4

377.86

377.139

C, 63.57; H, 6.40; Cl, 9.38; N, 3.71; O, 16.94

104112-82-5

Phellodendrine;6873-13-8

59818

White to off-white solid powder

249-251℃ (methanol )

58.92

2

5

2

26

488

1

C[N+]12CCC3=CC(=C(C=C3[C@@H]1CC4=CC(=C(C=C4C2)OC)O)O)OC.[Cl-]

DGLDSNPMIYUWGN-OOJQBDKLSA-N

InChI=1S/C20H23NO4.ClH/c1-21-5-4-12-8-19(24-2)18(23)10-15(12)16(21)6-13-7-17(22)20(25-3)9-14(13)11-21;/h7-10,16H,4-6,11H2,1-3H3,(H-,22,23);1H/t16-,21?;/m0./s1

(13aS)-3,10-dimethoxy-7-methyl-6,8,13,13a-tetrahydro-5H-isoquinolino[2,1-b]isoquinolin-7-ium-2,11-diol;chloride

l-(-)-N-Methylcoreximine; Phellodendrine chloride; 104112-82-5; l-(-)-N-Methylcoreximine; Phellodendrine Hydrochloride; 13a-alpha-BERBINIUM, 2,11-DIHYDROXY-3,10-DIMETHOXY-7-METHYL-, CHLORIDE; (13aS)-2,11-dihydroxy-3,10-dimethoxy-7-methyl-5,6,7,8,13,13a-hexahydroisoquinolino[3,2-a]isoquinolin-7-ium chloride; (13aS)-3,10-dimethoxy-7-methyl-6,8,13,13a-tetrahydro-5H-isoquinolino[2,1-b]isoquinolin-7-ium-2,11-diol;chloride; Phellodendrine HCl; Phellodendrine chloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~132.32 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (13.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (13.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (13.23 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。