p110α (IC50 = 3 nM); p110β (IC50 = 33 nM); p110δ (IC50 = 3 nM); p110γ (IC50 = 75 nM); p110α-H1047R (IC50 = 3 nM); p110α-E545K (IC50 = 3 nM); DNA-PK (IC50 = 1.23 μM); mTOR (Ki = 0.58 μM); Autophagy
Class I PI3K (100-fold more selective for class I over class II, III, IV)[1]

与单药治疗相比，Pictilisib (GDC-0941) 和 RP-56976 联合用药可使乳腺癌细胞系中的肿瘤细胞活力降低 80% 或更多。在 Hs578T1.2（PI3K 野生型）、MCF7-neo/HER2（PI3K 突变型）和 MX-1（PTEN 缺失型）肿瘤模型中，GDC-0941 可抑制 Akt 磷酸化及其下游靶点，例如 pPRAS40 和 pS6。Pictilisib (GDC-0941) 可缩短 RP-56976 诱导的细胞凋亡前的有丝分裂阻滞持续时间[1]。Pictilisib (GDC-0941) 在两种 ZD1839 耐药的非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞系 A549 和 H460 中显示出高效的抗肿瘤活性。 Pictilisib (GDC-0941) 与 U0126 联用可有效抑制细胞生长、诱导 G0/G1 期阻滞和促进细胞凋亡。与携带 PIK3CA 激活突变的 H460 细胞相比，Pictilisib (GDC-0941) 对携带野生型 PIK3CA 的 A549 细胞的毒性相对较高[3]。如 pAK 水平下降所示，Pictilisib (GDC-0941) 可降低两种细胞系中的 PI3K 通路活性。缺氧/无氧暴露后，Pictilisib (GDC-0941) 可显著降低所有细胞培养基中分泌的 VEGF 含量[4]。GDC-0941 与多西他赛联用可降低体外培养的乳腺肿瘤细胞系的细胞活力，但药物协同作用的程度不一。与未转化的MCF10A细胞相比，两种药物的联合应用在部分肿瘤细胞系中产生了更强的协同效应，而这些协同效应并非由乳腺癌亚型预测。[1]肺癌是一种预后不良的恶性肿瘤，因此人们一直在寻找新的治疗方法。PI3K/Akt/mTOR和Ras/raf/Erk通路是肿瘤生长和存活的关键调控因子。本研究采用MTT法、流式细胞术和Western blotting法评估了这些通路在肺癌细胞中的作用。我们发现，GDC-0941治疗在两种吉非替尼耐药的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系A549和H460中均显示出较高的抗肿瘤活性。此外，与携带野生型PIK3CA的A549细胞相比，携带PIK3CA激活突变的H460细胞对GDC-0941更为敏感。此外，GDC-0941与U0126联合使用可显著抑制细胞生长、诱导G0/G1期阻滞和促进细胞凋亡。这种联合治疗的抗肿瘤活性可能归因于PI3K/Akt/mTOR和Ras/raf/Erk通路同时阻断所引起的G0/G1期调控因子、凋亡相关蛋白以及真核翻译起始因子4B (eIF4B)的改变。总之，本研究表明多靶点干预是治疗肿瘤最有效的策略。此外，使用 GDC-0941 和 MEK 抑制剂阻断 PI3K、mTOR 和 Erk 显示出治疗吉非替尼耐药性 NSCLC 的希望 [3]。

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GDC-0941 与多西他赛联合使用可降低 25 种代表 HER2+、管腔型和基底型亚型的乳腺肿瘤细胞系的细胞活力，Bliss 协同作用总和范围为 1 至 451；与 MCF10A 细胞相比，在 25 个细胞系中的 11 个细胞系中观察到更强的协同作用（Bliss 总和 >61），但协同作用与乳腺癌亚型、PI3Kα 突变（E545K 或 H1047R）或 PTEN 状态无关[1]。
在 Hs578T1.2、MCF7-neo/HER2 和 MX-1 细胞中，GDC-0941（分别为 0.4、0.5、0.8 μmol/L）在 4 小时内抑制 Akt 磷酸化（Ser473）和下游标志物 pPRAS40（Thr246）、pS6（Ser235/236）、pFOXO1、pGSK3β 和 p70S6K，并持续 24 小时；多西他赛单药治疗不改变PI3K标志物，但增加磷酸化组蛋白H3[1]。
GDC-0941与多西他赛联合用药48小时后，Hs578T1.2细胞中凋亡细胞（Annexin V阳性）增加2.5倍，MCF7-neo/HER2细胞中增加2.7倍，MX-1细胞中增加1.9倍[1]。
在HCC-1954和MCF7-neo/HER2细胞中进行延时显微镜观察显示，与多西他赛单药治疗相比，GDC-0941联合多西他赛显著缩短了细胞分裂停滞至碎片化的时间（P<0.001）。该效应依赖于 caspase，因为 Z-VAD-FMK 减少了碎片化并延长了阻滞[1]。
在同步化的 HCC-1954 细胞中，联合治疗增加了 cleaved PARP，降低了 pAkt (Ser473) 和 pBad (Ser136)，而多西他赛增加了 pBcl-xL (Ser62)；Mcl-1 未发生变化[1]。

Pictilisib (GDC-0941)（150 mg/kg，口服）可使MCF7-neo/HER2荷瘤动物模型的肿瘤生长停滞。Pictilisib (GDC-0941) 和 RP-56976 在治疗期间可导致肿瘤消退，从而增强抗肿瘤反应[1]。当停止 Pictilisib (GDC-0941) 治疗后，试验组小鼠的肿瘤会再次生长[2]。Pictilisib (GDC-0941) 治疗组小鼠的肿瘤表现出显著的非线性缩小。 Pictilisib (GDC-0941) (25 或 50 mg/kg) 可降低 eGFP-FTC133 荷瘤小鼠的肿瘤生长以及 PI3K 和 HIF-1 通路活性[4]。

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\n\nGDC-0941 与多西他赛联合用药可增强体内抗肿瘤疗效和细胞凋亡[1]
\n为了证实我们体外观察到的 GDC-0941 与多西他赛联合用药可增强肿瘤生长抑制的现象，我们评估了 PI3Kα 突变型 (MCF7-neo/HER2)、PTEN 缺失型 (MX-1) 或 PI3Kα 野生型 (MAXF1162) 的肿瘤异种移植模型。用 7.5 mg/kg 多西他赛或 150 mg/kg GDC-0941 治疗携带 MCF7-neo/HER2 乳腺癌异种移植瘤的动物，分别导致肿瘤生长延迟和肿瘤停滞（图 4A）。相反，GDC-0941 与多西他赛联合用药在治疗期间导致肿瘤消退，从而增强了抗肿瘤反应（图 4A）。单药和联合治疗均采用基于动物体重最小变化的最大耐受剂量（图 4B）。与 MCF7-neo/HER2 异种移植瘤模型类似，在 MX-1 异种移植瘤模型中，我们观察到 GDC-0941 与多西他赛联合用药具有大于叠加效应的作用，导致治疗期间肿瘤消退增加（图 4C）。由于Hs578T1.2肿瘤细胞系在体内不具有致瘤性，我们评估了MAXF1162患者来源的乳腺肿瘤异种移植模型，该模型为HER2+/ER+/PR+、PI3Kα野生型和PTEN阳性（Oncotest公司；个人交流）。在体内，使用15 mg/kg多西他赛单药治疗MAXF1162原发性乳腺肿瘤异种移植模型可延缓肿瘤生长（图4D）。然而，100 mg/kg GDC-0941与多西他赛联合治疗可在治疗期间抑制肿瘤生长，且在停药后仍维持抑制状态（图4D）。 GDC-0941 和多西他赛均以最大耐受剂量给药，两种药物联合使用时未观察到动物体重发生额外变化（数据未显示）。\n

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\nGDC-0941 与多西他赛在体内的联合给药方案[1]
\n鉴于 PI3K 活性已被证实是细胞周期 G1、S 和 G2 期进程所必需的，我们研究了 GDC-0941 和多西他赛的联合作用是否依赖于给药顺序。与单独使用多西他赛或 GDC-0941 相比，在 GDC-0941 给药前 1 至 4 小时给予多西他赛可观察到细胞凋亡增加（图 5A）。同样，在 GDC-0941 给药前 4 小时给予多西他赛时，亚 G1 期细胞数量增加，表明细胞死亡增加（补充图 S4）。然而，当GDC-0941在多西他赛给药前4小时给药时，并未观察到与单独使用多西他赛相比细胞凋亡增加（图5A）。\n

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\n抗肿瘤活性[10]
\n一名BRAF V600E突变转移性黑色素瘤患者，但未检测到PI3K通路失调，获得了RECIST确认的部分缓解；她接受了pictilisib治疗，剂量为330mg，每日一次（21/28方案），疗程为9.5个月。她之前曾接受过紫杉醇和达卡巴嗪的序贯治疗，但未接受过BRAF或MEK抑制剂治疗。一名接受过大量预处理、铂类耐药的晚期上皮性卵巢癌患者，PIK3CA 扩增（具有高度多体性，且 >60% 的肿瘤细胞含有 4 个 PIK3CA 拷贝）和 PTEN 缺失，在接受 GCIG-CA125 治疗后，病情放射学稳定 4 个月，部分缓解 13（补充图 3），18max F-FDG-PET 的 SUV 值降低了 36%，肿瘤磷酸化 S6 表达降低了 56%。一名患有 cKIT 外显子 9 突变型胃肠道间质瘤但无 PI3K 通路失调证据的患者，在接受 pictilisib 450mg 每日一次治疗后，病情稳定了 7.5 个月，这与 18max F-FDG-PET 的 SUV 值降低 47% 和肿瘤磷酸化 S6 表达降低 75% 的药效学变化相关。\n\n在 60 名患者中，12 名（20%）继续接受研究超过 3 个月，2 名（3%）继续接受研究超过 6 个月。补充表 2 显示了根据 RECIST、GCIG-CA125 或 18F-FDG-PET EORTC 标准表现出部分缓解的患者的药代动力学-药效学-临床关系。

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在 MCF7-neo/HER2 异种移植瘤（PI3Kα 突变）中，GDC-0941（150 mg/kg 每日口服）作为单药可导致肿瘤停滞，多西他赛（7.5 mg/kg 每周静脉注射）可导致肿瘤生长延迟，联合用药可在 21 天的治疗期内导致肿瘤消退；未观察到额外的体重减轻[1]。
在MX-1异种移植瘤（PTEN缺失）中，GDC-0941（150 mg/kg）联合多西他赛（7.5 mg/kg）在18天内产生了大于叠加效应的肿瘤消退增加[1]。
在MAXF1162患者来源的异种移植瘤（HER2+/ER+/PR+，PI3Kα野生型，PTEN阳性）中，GDC-0941（100 mg/kg）联合多西他赛（15 mg/kg）导致肿瘤在给药结束后仍保持稳定[1]。
在MCF7-neo/HER2肿瘤中的药效学分析：GDC-0941单独使用可在1小时内降低pAkt、pPRAS40和pS6水平；与多西他赛联合用药可增加裂解的PARP和裂解的caspase-3，与单独使用任一药物相比[1]。
给药方案：在MCF7-neo/HER2异种移植瘤中，当GDC-0941在多西他赛给药前1小时或给药后1小时，或在多西他赛给药后4小时给药时，观察到最大的联合疗效；当GDC-0941在多西他赛给药前4小时或给药后24小时给药时，疗效消失[1]。

重组人PI3Kα、PI3Kβ和PI3Kδ与p85α调节亚基在Sf9杆状病毒系统中共表达，并使用谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析纯化为GST融合蛋白。单体GST融合蛋白用于重组人PI3Kγ的表达和纯化。将GDC-0941溶解于DMSO中，并加入到含有200 μg硅酸钇(Ysi)聚赖氨酸SPA珠、4 mM MgCl₂、1 mM二硫苏糖醇(DTT)、1 μM ATP、0.125 μCi [γ-³³P]-ATP和4% (v/v) DMSO的20 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）中，总体积为50 μL。在反应混合物中加入重组GST融合蛋白PI3Kα (5 ng)、PI3Kβ (5 ng)、PI3Kδ (5 ng)或PI3Kγ (5 ng)，启动激酶反应。室温孵育1小时后，加入150 μL PBS终止激酶反应。随后，将反应混合物以2000 rpm离心2分钟，并使用Wallac Microbeta计数器进行读数。使用MDL Assay Explorer软件进行S型剂量反应曲线拟合，以确定所报告的IC50值。

将不同浓度的 GDC-0941 应用于细胞 48 小时和 72 小时。采用 CellTiter-Glo 发光细胞活力检测试剂盒检测细胞活力和增殖情况。通过蛋白质印迹法检测 pAkt (Ser473)、cleaved caspase-3 和 cleaved PARP 的表达。分别使用 Cell Death Detection ELISAplus 试剂盒和 Caspase-Glo 3/7 试剂盒检测细胞凋亡和 caspase 3/7 活性。

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细胞活力检测 [1]
所有药物处理均进行四重复实验，孵育 4 天，并使用 CellTiter-Glo 试剂盒评估活细胞的相对数量。使用 Wallac 多功能酶标仪测量总发光值。将细胞同时用多西他赛（剂量范围 = 0.0003–0.020 μmol/L）或 GDC-0941（剂量范围 = 0.083–5 μmol/L）处理，浓度范围为 8 × 10，涵盖临床相关剂量。使用 Prism 软件确定达到 50% 最大有效浓度 (EC50) 的药物浓度。通过 Bliss 独立性分析确定 GDC-0941 和多西他赛的联合协同作用。联合反应的 Bliss 期望值 (C) 由以下公式计算：C = (A + B) − (A × B)，其中 A 和 B 分别为药物 A 和 B 在给定剂量下的生长抑制率。Bliss 期望值与相同剂量下药物 A 和 B 联合用药观察到的生长抑制率之差为“Delta.Bliss”。将剂量矩阵中的 Delta.Bliss 值相加，得到 Bliss 总和。 Bliss 总和 = 0 表示联合治疗具有相加效应（符合独立通路效应的预期）；Bliss 总和 > 0 表示活性大于相加效应（协同作用）；Bliss 总和 < 0 表示联合治疗的活性小于相加效应（拮抗作用）。采用 Student t 检验对各细胞系的 Bliss 总和进行统计分析。

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蛋白质印迹[1]
将细胞用 EC50 浓度的 GDC-0941、多西他赛或二者联合处理 4 或 24 小时，然后在添加了蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂混合物 1 和 2 的 1× 细胞提取缓冲液中裂解。使用 Pierce BCA 蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度。对于免疫印迹，将等量的蛋白通过 NuPAGE Bis-Tris 10% 梯度凝胶电泳分离，使用 Criterion 系统转移至聚偏二氟乙烯膜上，并用单克隆抗体进行检测。使用 LI-COR 成像系统，通过 IRDye 680 或 IRDye 800 红外二抗检测特异性抗原-抗体相互作用。

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FACS 分析 [1]
细胞周期分析中，细胞用 EC50 浓度的 GDC-0941 和/或多西他赛处理 24 小时，用 100% 冰乙醇固定，并在碘化丙啶 (PI) 溶液中孵育 30 分钟，然后用 FACScan 流式细胞仪进行分析。细胞死亡分析中，细胞用 GDC-0941、多西他赛或两种药物共同孵育 48 小时，根据制造商的说明用 Annexin V-FITC 和 PI 溶液染色，然后用 FACScan 流式细胞仪进行分析。

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延时显微镜成像 [1]
将细胞接种到玻璃底 24 孔板中，24 小时后，用含药培养基孵育。细胞用EC50浓度的GDC-0941和/或多西他赛处理，每个处理条件下选取多个视野，在配备环境箱、MS2000 XY载物台和CoolSNAP CCD相机的AxioObserver倒置显微镜上，使用10×物镜每15分钟记录一次荧光和相差图像，持续72小时。有丝分裂事件和细胞死亡的计数方法如前所述。细胞还与终浓度为2 μmol/L的caspase抑制剂Z-VAD-FMK共同处理。统计分析采用Student t检验。人乳腺肿瘤细胞系（来自ATCC）在含有10% FBS、青霉素（100单位/mL）、L-谷氨酰胺（2 mmol/L）和链霉素（100 mg/mL）的RPMI或DMEM培养基中，于37°C、5% CO2条件下培养。 MCF10A 细胞在含 EGF (20 ng/mL) 和胰岛素 (10 μg/mL) 的 DMEM:F12 (50:50) 培养基中培养[1]。
细胞活力检测：将细胞在 8×10 剂量矩阵中用 GDC-0941 (0.083-5 μmol/L) 和多西他赛 (0.0003-0.020 μmol/L) 处理 4 天；用 CellTiter-Glo 发光法估算活细胞数；使用 Prism 软件确定 EC50；通过 Bliss 独立性评估协同作用：Delta.Bliss = 观察到的抑制 - 预期的抑制 [C = (A+B)-(A×B)]，Bliss 总和 = 各剂量矩阵中 Delta.Bliss 的总和； Bliss sum>0 表示协同作用[1]。
蛋白质印迹：用 EC50 浓度的GDC-0941、多西他赛或两者处理细胞 4 或 24 小时；在含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的细胞提取缓冲液中裂解；通过 BCA 测定法定量蛋白质；等量样品经 NuPAGE Bis-Tris 10% 梯度凝胶分离后，转移至 PVDF 膜，用一抗（pAkt、Akt、pPRAS40、PRAS40、pS6、S6、pGSK3β、pP70S6K、pFOXO1、PTEN、cyclin D1、pH3、cleaved caspase-3、cleaved PARP、anti-HER2、β-actin）进行孵育，用 IRDye 红外二抗和 LI-COR 成像进行检测[1]。
FACS 细胞周期分析：细胞在 EC50 浓度下处理 24 小时，用冰乙醇固定，用碘化丙啶 (PI) 染色 30 分钟，在 FACScan 流式细胞仪上进行分析[1]。
细胞凋亡检测：细胞处理 48 小时，用 Annexin V-FITC 和 PI 溶液染色，在 FACScan 上进行分析[1]。
延时摄影显微镜观察：将细胞接种于玻璃底24孔板中，用EC50浓度的GDC-0941和/或多西他赛处理；使用10倍物镜每15分钟记录一次相差图像，持续72小时；计数有丝分裂事件和细胞死亡；部分细胞同时用半胱天冬酶抑制剂Z-VAD-FMK（2 μmol/L）处理[1]。
细胞同步化：双胸苷阻滞，释放到含药培养基中；用冷PBS洗涤贴壁细胞，在含有蛋白酶抑制剂、PMSF（1 mmol/L）和磷酸酶抑制剂的细胞提取缓冲液中裂解细胞；通过BCA法测定蛋白质浓度[1]。

将MCF7-neo/HER2或MX-1乳腺癌细胞皮下接种到雌性裸鼠（nu/nu小鼠）中。当肿瘤平均体积达到200至250 mm³时，将小鼠分成每组10只的组。组间大小根据肿瘤大小进行匹配。每周静脉注射一次RP-56976（3%乙醇和97%生理盐水的混合液）。同时，每日口服Pictilisib（GDC-0941，一种MCT，含0.5%甲基纤维素和0.2%吐温-80）。通过将患者来源的肿瘤直接植入NMRI裸鼠皮下，构建了MAXF1162 HER2+/ER+/PR+患者来源乳腺癌肿瘤异种移植模型。计算肿瘤体积。在整个研究过程中，每周测量两次肿瘤大小。

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体内异种移植模型[1]
将MCF7-neo/HER2或MX-1乳腺癌细胞皮下接种到雌性裸鼠（nu/nu）体内。当肿瘤平均体积达到200至250 mm³时，将动物按大小进行分组，每组10只。多西他赛（溶于3%乙醇和97%生理盐水）每周静脉注射一次。GDC-0941（溶于MCT，0.5%甲基纤维素，0.2%吐温-80）每日口服给药。MAXF1162是由Oncotest公司建立的HER2+/ER+/PR+患者来源乳腺癌肿瘤异种移植模型，该模型通过将患者肿瘤直接皮下移植到NMRI裸鼠体内而构建。肿瘤体积计算如下：肿瘤大小（mm³）=（较长测量值×较短测量值²）× 0.5。研究期间每周记录两次肿瘤大小。数据分析后，使用Dunnett t检验确定P值。
对于药效学研究，肿瘤样本（n = 4）立即冷冻或固定于10%中性缓冲福尔马林中。将肿瘤组织在细胞提取缓冲液中解离，并如上所述通过Western blotting分析裂解物。免疫组织化学染色在Ventana Benchmark XT仪器（VMSI）上进行，使用福尔马林固定的5 μm石蜡切片，通过脱蜡、抗原修复缓冲液（VMSI）处理以及在37°C下与抗裂解型caspase-3一抗（Cell Signaling Technology）孵育。使用DABMap技术（VMSI）检测结合抗体，切片用苏木精复染。

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10只荷瘤的Pten^+/−Lkb1^+/hypo小鼠，年龄7至9.5个月，体重25至30克，分为两组：试验组（n=6）给予PI3K抑制剂GDC-0941（GDC-0941双甲磺酸盐，75 mg/kg），对照组（n=4）仅给予生理盐水。实验方案如图1A所示，其中ΔV为肿瘤体积变化，R为肿瘤生长速率。该方案包括预处理阶段（测量肿瘤生长速率）、两个治疗阶段（治疗1和治疗2，评估抗癌药物的疗效）以及两个停药期（停药1和停药2，量化肿瘤复发情况）。第 1 天被指定为首次对小鼠进行成像的日期，在 21 天的预处理期内对小鼠进行 3 次成像，之后每隔 8 至 15 天进行一次成像。在两个为期 28 天的治疗阶段中，小鼠每天通过灌胃给药。第一个治疗阶段（治疗 1）从第 23 天持续到第 50 天，之后是 21 天的停药期（停药期 1）。第二个为期 28 天的治疗阶段（治疗 2）从第 72 天持续到第 99 天，之后是 21 天的停药期（停药期 2），结束于第 119 天。研究结束时，处死小鼠，取出肿瘤并用 10% 福尔马林固定。[2]

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将 MCF7-neo/HER2 或 MX-1 乳腺癌细胞皮下接种到雌性裸鼠（nu/nu）中；当肿瘤平均体积达到 200-250 mm³ 时，将动物按大小进行匹配，并分组（每组 n=10）[1]。
对于 MCF7-neo/HER2 和 MX-1 模型：GDC-0941 配制于 MCT（0.5% 甲基纤维素，0.2% Tween-80）中，每日口服 150 mg/kg；多西他赛配制于 3% 乙醇、97% 生理盐水中，每周静脉注射一次，剂量为 7.5 mg/kg；治疗持续时间为 21 天（MCF7-neo/HER2）或 18 天（MX-1）[1]。
对于 MAXF1162 患者来源的异种移植瘤（HER2+/ER+/PR+）：GDC-0941 每日口服 100 mg/kg；多西他赛15 mg/kg，每周静脉注射一次，连续21天，给药结束后再进行21天的监测[1]。
肿瘤体积计算公式为（较长测量值×较短测量值）×0.5，每周记录两次；采用Dunnett t检验进行统计分析[1]。
药效学研究：肿瘤样本（n=4）立即冷冻或固定于10%中性缓冲福尔马林中；肿瘤在细胞提取缓冲液中解离，裂解物通过Western blotting进行分析；在5 μm石蜡切片上进行免疫组织化学染色，使用抗裂解型caspase-3一抗在37°C下孵育，用DABMap显色，并用苏木精复染[1]。

药代动力学[10]
所有剂量组的pictilisib药代动力学参数均已估算，并汇总于表3和补充表1中。空腹状态下，pictilisib口服后迅速吸收（中位Tmax为2小时[范围0.5-8小时]）；这与剂量无关，且多次给药后保持不变。第1天的末端血浆消除半衰期（T1/2）为13.1至24.1小时。在所有研究的剂量水平下，药物暴露量（Cmax和AUC0-24）均与剂量成正比增加（图1）。第15天观察到类似的药代动力学特征。累积指数（AUCDay15/AUCDay1）为1.2至2.2，表明多次给药后药物蓄积极少。本研究对选择性小分子 1A 类磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) 抑制剂 pictilisib 在大鼠、犬和人体内的吸收、代谢和排泄情况进行了表征。分别以 30 mg/kg、5 mg/kg 和 60 mg 的目标剂量进行单次口服给药。结果表明，pictilisib 在所有动物体内均被迅速吸收，达峰时间 (Tmax) 小于 2 小时。在全身循环中，pictilisib 是所有动物体内总放射性的主要成分，占比超过 86.6%。在大鼠、犬和人体中，分别有 98%、80% 和 95% 的 pictilisib 及其相关放射性物质从尿液和粪便中排出，其中不足 2% 的药物经尿液排出，其余部分经粪便排出。在大鼠和犬中，超过40%的药物相关放射性物质经胆汁排泄，表明胆汁排泄是主要的排泄途径。未代谢的pictilisib在大鼠和犬的胆汁中浓度较低。在大鼠中，胆汁中的主要代谢物是部分氧化的吲唑的O-葡萄糖醛酸苷（M20，占剂量的21%），而在犬中则是氧化哌嗪的开环代谢物M7（占剂量的10.8%）。在大鼠胆汁中检测到的新代谢物是氧化的谷胱甘肽（GSH）结合物（M18、M19），提示pictilisib可能生成活性中间体。核磁共振（NMR）进一步证实M18的结构是吲唑环的N-羟基化和GSH结合的代谢物。 2021 年 7 月；51(7):796-810。https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33938357/

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GDC-0941 在免疫缺陷小鼠中的半衰期约为 2.5 小时[1]。
与多西他赛联合用药后 1 小时内即可达到最大疗效，因为多西他赛在 1 小时内达到血浆峰浓度，而 GDC-0941 的最大浓度也在同一时间窗口内达到[1]。

安全性和耐受性[10] Pictilisib 在 330 mg 剂量（21/28 给药方案）下耐受性良好；大多数不良事件为轻度至中度，且无治疗相关死亡（表 2）。在所评估的剂量水平下，21/28 和 28/28 给药方案的毒性特征似乎无显著差异。发生率 ≥10% 的治疗相关不良事件包括恶心、腹泻、呕吐、疲乏、味觉障碍、食欲下降和皮疹。除 450 mg 剂量组中出现两例 3 级皮疹的剂量限制性毒性 (DLT) 外，该剂量组的第三例患者也出现了 2 级皮疹；尽管如此，该患者仍接受了 8 个月的 Pictilisib 治疗，同时服用口服抗组胺药和润肤剂。在接受每日一次 330 mg 治疗的 10 例患者（28/28 方案）中，2 例出现 1 级或 2 级皮疹，2 例出现 3 级皮疹（在剂量限制性毒性定义窗口期之后）；所有皮疹在停药并使用润肤剂和皮质类固醇等支持性药物后均消退。其他具有临床意义的 ≥3 级药物相关不良事件包括 4 级高血糖（n=1，130 mg）和 3 级肺炎（n=1，340 mg）。该 4 级高血糖为短暂性，无临床意义的症状、体征或酸中毒，发生于一名胆管癌患者，该患者曾接受胰十二指肠切除术，并在事件发生前 2 天开始服用小剂量泼尼松龙。一名曾接受胸部放疗的乳腺癌患者在第一个治疗周期结束时出现3级肺炎，表现为1级呼吸困难、一氧化碳弥散量（DLCO）下降以及高分辨率CT（HRCT）显示磨玻璃样阴影；停药2周并同时服用泼尼松龙后，这些症状缓解。当重新开始服用240 mg的pictilisib时，呼吸困难和HRCT磨玻璃样阴影复发；由于疾病进展，永久停用pictilisib后，这些症状再次缓解。

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剂量限制性毒性（DLT）和最大耐受剂量（MTD）[10]
每日一次450 mg（21/28方案）的MTD已超过，两名患者出现3级皮疹，属于DLT。这是一种斑丘疹，覆盖体表面积的70-80%，在每日服用pictilisib约2周后出现，并在停药2周后自行消退。在每日一次330 mg（21/28给药方案）的治疗方案中，七分之一的患者出现3级斑丘疹，其发病和消退时间模式相似；这也被确定为剂量限制性毒性（DLT）。在28/28给药方案中未观察到DLT。在异种移植模型中，单药和联合治疗均以最大耐受剂量给药，该剂量基于动物体重的最小变化确定（两种药物联合使用时体重无额外变化）[1]。

[1]. GDC-0941, a novel class I selective PI3K inhibitor, enhances the efficacy of RP-56976 in human breast cancer models by increasing cell death in vitro and in vivo.Clin Cancer Res. 2012 Jul 15;18(14):3901-11. .

[2]. Quantitative MRI establishes the efficacy of PI3K inhibitor (GDC-0941) multi-treatments in PTEN-deficient mice lymphoma.Anticancer Res. 2012 Feb;32(2):415-20.

[3].The novel dual PI3K/mTOR inhibitor GDC-0941 synergizes with the MEK inhibitor U0126 in non-small cell lung cancer cells.Mol Med Report. 2012 Feb;5(2):503-8.

[4]. GDC-0941 inhibits metastatic characteristics of thyroid carcinomas by targeting both the phosphoinositide-3 kinase (PI3K) and hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α) pathways.J Clin Endocrinol Metab. 2011 Dec;96(12):E1934-43.

[5]. The identification of 2-(1H-indazol-4-yl)-6-(4-methanesulfonyl-piperazin-1-ylmethyl)-4-morpholin-4-yl-thieno[3,2-d]pyrimidine (GDC-0941) as a potent, selective, orally bioavailable inhibitor of class I PI3 kinase for the treatment of cancer. J Med Chem. 2008 Sep 25;51(18):5522-32.

[6]. The synergistic interaction of MEK and PI3K inhibitors is modulated by mTOR inhibitio. Br J Cancer. 2012 Apr 10;106(8):1386-94.

[7]. Effect of PI3K- and mTOR-specific inhibitors on spontaneous B-cell follicular lymphomas in PTEN/LKB1-deficient mice. Br J Cancer. 2011 Mar 29;104(7):1116-25.

[8]. Biological properties of potent inhibitors of class I phosphatidylinositide 3-kinases: from PI-103 through PI-540, PI-620 to the oral agent GDC-0941. Mol Cancer Ther. 2009 Jul;8(7):1725-38.

[9]. Ligand-independent HER2/HER3/PI3K complex is disrupted by trastuzumab and is effectively inhibited by the PI3K inhibitor GDC-0941. Cancer Cell. 2009 May 5;15(5):429-40.

[10]. First-in-human phase I study of pictilisib (GDC-0941), a potent pan-class I phosphatidylinositol-3-kinase (PI3K) inhibitor, in patients with advanced solid tumors. Clin Cancer Res . 2015 Jan 1;21(1):77-86.

Pictrelisib 是一种磺酰胺类化合物，由哌嗪环与吲唑、吗啉或甲磺酰基取代基连接而成，并与噻吩并嘧啶环相连。它是一种磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) 抑制剂，EC 编号为 2.7.1.137。它属于哌嗪类、吗啉类、吲唑类和噻吩并嘧啶类化合物。Pictrelisib 已在多种癌症的临床试验中用于治疗，包括实体瘤、乳腺癌、晚期实体瘤、转移性乳腺癌和非霍奇金淋巴瘤。Pictrelisib 是一种 I 类 PI3K 小分子抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，pictrelisib 以 ATP 竞争性方式选择性地与 PI3K 结合，抑制第二信使磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸 (PIP3) 的生成以及 PI3K/Akt 信号通路的激活。这可能导致易感肿瘤细胞群的生长、迁移和存活受到抑制。PI3K/Akt 信号通路的激活通常与肿瘤发生相关；PI3K/Akt 信号通路的失调可能导致肿瘤对多种抗肿瘤药物产生耐药性。目的：多西他赛是乳腺癌的一线标准化疗药物。磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K) 是一种脂质激酶，可调节乳腺肿瘤细胞的生长、迁移和存活。本研究旨在探讨口服高生物利用度的I类选择性PI3K抑制剂GDC-0941是否能增强多西他赛在体外和体内人乳腺癌模型中的抗肿瘤活性。实验设计：选取25株代表HER2阳性、管腔型和基底型乳腺癌亚型的乳腺肿瘤细胞系，分别用GDC-0941、多西他赛或二者联合治疗。评估细胞活力、PI3K通路标志物的调控以及细胞凋亡的诱导情况。同时，在非转化型MCF10A人乳腺上皮细胞中评估联合用药对细胞活力的影响。本研究还利用人乳腺癌细胞系异种移植模型和患者来源肿瘤模型评估了GDC-0941和多西他赛的体内疗效。结果：GDC-0941与多西他赛联合用药可降低培养的乳腺肿瘤细胞系的细胞活力，但协同作用的程度存在差异。与未转化的MCF10A细胞相比，两种药物联合用药在某些肿瘤细胞系中产生了更强的协同作用，且该作用与乳腺癌亚型无关。在异种移植模型中，GDC-0941增强了多西他赛的抗肿瘤活性，联合给药后1小时内即可观察到最大疗效。GDC-0941与多西他赛联合治疗可提高有丝分裂阻滞细胞的凋亡率。结论：GDC-0941通过增强药物诱导的细胞凋亡来提高多西他赛在乳腺癌模型中的疗效。 [1] 目的：利用纵向磁共振成像（MRI）技术，评估在基因工程改造的Pten缺陷型癌症小鼠模型中，重复使用磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）抑制剂治疗自发性肿瘤的疗效。材料与方法：在Pten(+/-)Lkb1(+/hypo)小鼠中，分别于重复使用PI3K抑制剂GDC-0941（75 mg/kg）治疗前、治疗期间及治疗后，定量分析B细胞滤泡性淋巴瘤的生长情况。结果：治疗前肿瘤的平均线性生长速率为16.5 ± 12.8 mm³/周。在连续28天重复使用GDC-0941（中间间隔21天停药期）后，平均肿瘤消退率为41 ± 7%。第二次治疗（并非永久性细胞毒性治疗）后，肿瘤以平均40.1 ± 15.5 mm³/周的线性生长速率重新生长。未发现化疗耐药性。结论：该方案可适应复杂的给药方案，并可与不同的癌症疗法联合使用。与最终评估方法相比，该方案降低了生物学变异性，并将小鼠数量减少了10倍。该方案非常适合用于临床前疗效研究以及在研究基因功能时对分子特征明确的小鼠模型进行表型分析。[2] 肺癌是一种预后不良的恶性肿瘤，因此人们一直在寻求新的治疗方法。PI3K/Akt/mTOR和Ras/raf/Erk通路是肿瘤生长和存活的关键调控因子。本研究采用MTT法、流式细胞术和Western blotting法评估了这些通路在肺癌细胞中的作用。我们发现，GDC-0941治疗在两种吉非替尼耐药的非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系A549和H460中均显示出较高的抗肿瘤活性。此外，携带PIK3CA激活突变的H460细胞比携带野生型PIK3CA的A549细胞对GDC-0941更敏感。而且，GDC-0941与U0126联合用药显著抑制细胞生长，诱导G0/G1期阻滞，并促进细胞凋亡。该联合疗法的抗肿瘤活性可能归因于PI3K/Akt/mTOR和Ras/raf/Erk信号通路的同步阻断，从而诱导G0/G1期调控因子、凋亡相关蛋白以及真核翻译起始因子4B（eIF4B）的改变。总之，本研究表明，多靶点干预是治疗肿瘤最有效的方法。此外，使用 GDC-0941 和 MEK 抑制剂阻断 PI3K、mTOR 和 Erk 通路显示出治疗吉非替尼耐药性非小细胞肺癌的潜力。 [3]

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GDC-0941 是一种 I 类选择性 PI3K 抑制剂，它主要通过增加细胞凋亡来增强多西他赛的抗肿瘤活性，这是由于细胞无法有效逃脱有丝分裂阻滞所致，从而加速有丝分裂灾难的发生，并降低细胞死亡阈值[1]。
GDC-0941 与多西他赛联合使用可同时导致 Bcl-xL 失活（多西他赛磷酸化）和促凋亡蛋白 Bad 激活（Akt 抑制导致去磷酸化），从而促进有丝分裂期间的细胞死亡[1]。
MCF7-neo/HER2 和 MAXF1162 异种移植瘤对曲妥珠单抗耐药，这表明 GDC-0941 联合多西他赛可能对 HER2 抗药治疗无效的肿瘤有效[1]。
GDC-0941目前正处于实体瘤适应症（包括乳腺癌）的临床开发阶段[1]。

C23H27N7O3S2

513.6356

513.161

C, 53.78; H, 5.30; N, 19.09; O, 9.34; S, 12.49

957054-30-7

Pictilisib dimethanesulfonate;957054-33-0

17755052

White to off-white solid powder

1.5±0.1 g/cm3

687.7±65.0 °C at 760 mmHg

369.7±34.3 °C

0.0±2.1 mmHg at 25°C

1.753

2.04

144.17

1

10

5

35

832

0

O=S(C)(N1CCN(CC2=CC3N=C(C4C5=C(NN=C5)C=CC=4)N=C(C=3S2)N2CCOCC2)CC1)=O

LHNIIDJUOCFXAP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H27N7O3S2/c1-35(31,32)30-7-5-28(6-8-30)15-16-13-20-21(34-16)23(29-9-11-33-12-10-29)26-22(25-20)17-3-2-4-19-18(17)14-24-27-19/h2-4,13-14H,5-12,15H2,1H3,(H,24,27)

4-(2-(1H-indazol-4-yl)-6-((4-(methylsulfonyl)piperazin-1-yl)methyl)thieno[3,2-d]pyrimidin-4-yl)morpholine

Pictrelisib; Pictilisib; RG7321; 957054-30-7; GDC-0941; PICTILISIB; Pictrelisib; 4-(2-(1H-Indazol-4-yl)-6-((4-(methylsulfonyl)piperazin-1-yl)methyl)thieno[3,2-d]pyrimidin-4-yl)morpholine; GDC 0941; 2-(1H-Indazol-4-yl)-6-(4-methanesulfonylpiperazin-1-ylmethyl)-4-morpholin-4-yl-thieno[3,2-d]pyrimidine; RG-7321; RG 7321; GDC-0941; GDC 0941; GDC0941; GNE0941; GNE-0941; GNE 0941

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~44 mg/mL (85.66 mM)
Water: <1 mg/mL (slightly soluble or insoluble)
Ethanol: <1 mg/mL (slightly soluble or insoluble)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.87 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.87 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 2.5 mg/mL (4.87 mM) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 2%DMSO+30%PEG 300+5%Tween 80+ddH2O: 5mg/mL

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配方 5 中的溶解度: 5 mg/mL (9.73 mM) in 0.5% MC 0.5% Tween-80 (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液； 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。