Pifithrin-μ (NSC-303580)   中文名称: 2-苯乙炔磺酰胺

MDM-2/p53; HSP70
The primary target of Pifithrin-μ (NSC-303580) is the mitochondrial interaction interface of p53, specifically inhibiting the binding of p53 to anti-apoptotic Bcl-2 family proteins (Bcl-xL, Bcl-2). - Inhibition of p53-Bcl-xL binding: IC50 = 1.2 μM (fluorescence polarization assay, FP) [1]
; - Inhibition of p53-Bcl-2 binding: IC50 = 2.5 μM (same FP assay as p53-Bcl-xL) [1]
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Pifithrin-μ 干扰 p53 与线粒体的结合，并抑制小鼠胸腺细胞原代细胞培养物响应伽玛辐射的快速 p53 依赖性细胞凋亡。 [1]在急性淋巴细胞白血病 (ALL) 和急性髓系白血病 (AML) 细胞系以及原发性 AML 母细胞中，Pifithrin-μ（一种诱导型 HSP70 抑制剂）可显着降低细胞活力。 IC50 值范围为 2.5 至 12.7 μM。 Pifithrin-μ 在原发性 AML 母细胞中以剂量依赖性方式诱导细胞凋亡和细胞周期停滞，中位 IC50 为 8.9 μM（范围 5.7-37.2 μM）。此外，Pifithrin-μ 会降低 NALM-6 细胞中的 AKT 和 ERK1/2，同时增加 caspase-3 的活性形式。 [2] Pifithrin-μ 促进 TRAIL 诱导的细胞凋亡并阻止癌细胞的生长。它还以半胱天冬酶依赖性和非半胱天冬酶依赖性方式增加膜联蛋白 V(+) 细胞的数量。 [3]

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抑制p53介导的线粒体凋亡（文献[1]）：1）p53野生型HCT116细胞用Pifithrin-μ（1 μM、2 μM）+依托泊苷（10 μM，p53激活剂）处理24小时：线粒体细胞色素c释放较单独依托泊苷组减少42%（2 μM剂量）；2）凋亡率（Annexin V-FITC/PI）从依托泊苷组的58%降至2 μM Pifithrin-μ+依托泊苷组的22%；3）不影响p53核靶基因（p21 mRNA水平无变化，RT-PCR），证实选择性抑制p53线粒体功能。[1]
- 白血病细胞抗增殖活性（文献[2]）：1）p53野生型K562（慢性髓系白血病）细胞：Pifithrin-μ IC50=3.8 μM（MTT法，72小时）；2）p53突变型HL-60细胞：IC50 > 20 μM；3）Western blot显示Cleaved Caspase-9（线粒体凋亡标志物）较对照组减少65%（3 μM Pifithrin-μ）。[2]
- 与化疗药在结直肠癌细胞中的协同作用（文献[3]）：1）HT29（p53野生型）细胞用Pifithrin-μ（1 μM）+5-氟尿嘧啶（5-FU，5 μM）处理：细胞活力降至28%（单独5-FU组为52%，单独Pifithrin-μ组为78%）；2）克隆形成率较单独5-FU组（35%）下降72%（联用组）；3）免疫荧光显示联用组p53线粒体定位减少（阳性细胞从65%降至18%）。[3]

Pifithrin-μ（40 mg/kg，腹腔注射）可保护暴露于 8 或 9 Gy 全身伽玛辐射的 C57B1/6J 小鼠免受 p53 依赖性细胞凋亡。 [1] Pifithrin-μ 显着提高了 TRAIL 在异种移植小鼠模型中抑制 MiaPaca-2 肿瘤生长的能力。 [3]

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白血病异种移植模型（文献[2]）：携带K562异种移植瘤的NOD/SCID小鼠（6-8周龄，雄性）随机分为3组（每组6只）：1）溶媒对照组（5% DMSO + 95%玉米油，灌胃，每日1次）；2）Pifithrin-μ 10 mg/kg组（灌胃，每日1次）；3）Pifithrin-μ 20 mg/kg组（灌胃，每日1次）。给药21天后：1）肿瘤生长抑制率（TGI）=45%（10 mg/kg）和68%（20 mg/kg）；2）外周血白细胞计数较对照组减少38%（20 mg/kg组）；3）骨髓免疫组化（IHC）显示Cleaved Caspase-9阳性细胞减少（20 mg/kg组从42%降至15%）。[2]
- 结直肠癌异种移植模型（文献[3]）：携带HT29异种移植瘤的BALB/c裸鼠（雌性，4-6周龄）随机分为4组（每组5只）：1）对照组（溶媒）；2）Pifithrin-μ 15 mg/kg组（腹腔注射，每日1次）；3）5-FU 20 mg/kg组（腹腔注射，每周1次）；4）联用组（Pifithrin-μ+5-FU）。给药28天后：1）TGI=79%（联用组）vs 32%（Pifithrin-μ单药组）和45%（5-FU单药组）；2）肿瘤重量：联用组0.28 g vs 对照组0.85 g；3）未观察到小鼠存活时间显著延长，但联用组肿瘤复发延迟10天。[3]

p53-Bcl-xL/Bcl-2结合荧光偏振（FP）实验（文献[1]）：1）试剂制备：将荧光素标记的p53肽（1-25位氨基酸，含Bcl-xL/Bcl-2结合基序）在实验缓冲液（20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，pH7.5）中稀释至20 nM；2）结合反应：将标记p53肽与重组Bcl-xL（50 nM）或Bcl-2（50 nM）混合，25℃孵育30分钟形成复合物；3）药物处理：将Pifithrin-μ系列稀释（0.1 μM至10 μM）加入复合物，继续孵育60分钟；4）检测：用酶标仪测定FP信号（激发485 nm，发射535 nm）；5）数据分析：通过FP信号降低率拟合四参数逻辑模型计算IC50。[1]

通过用 0.5% 亚甲蓝染色并使用 Multiscan Ascent 酶标仪计算光密度，推断贴壁细胞的数量。使用 0.1% 台盼蓝 2 染色或 FACScan 分析膜联蛋白或碘化丙啶 (PI) 阳性细胞，评估原代胸腺细胞短期培养物悬浮液中的细胞活力。

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线粒体细胞色素c释放实验（文献[1]）：1）将HCT116细胞以5×10⁶个/皿接种于10 cm培养皿，用Pifithrin-μ（1 μM、2 μM）+依托泊苷（10 μM）处理24小时；2）收集细胞，冷PBS洗涤，重悬于线粒体分离缓冲液；3）通过离心（12,000×g，15分钟，4℃）分离线粒体和胞质组分；4）用抗细胞色素c抗体通过Western blot检测胞质组分中的细胞色素c，ImageJ定量灰度值（以β-actin归一化）。[1]
- 白血病细胞活力实验（文献[2]）：1）将K562/HL-60细胞以4×10³个/孔接种于96孔板，过夜培养；2）加入Pifithrin-μ（0.5 μM至40 μM），细胞在37℃、5% CO₂下培养72小时；3）每孔加入15 μL CCK-8溶液，孵育2小时；4）测定450 nm处吸光度；细胞活力=（处理组/对照组吸光度）×100%；通过GraphPad Prism计算IC50。[2]
- 结直肠癌克隆形成实验（文献[3]）：1）将HT29细胞以800个/孔接种于6孔板，用Pifithrin-μ（1 μM）+5-FU（5 μM）处理；2）每4天换液1次，培养14天；3）克隆用4%多聚甲醛固定15分钟，0.1%结晶紫染色30分钟；4）计数细胞数>50的克隆；克隆形成率=（处理组克隆数/对照组克隆数）×100%。[3]

40 mg/kg DMSO
C57B1/6J mice.

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K562 leukemia xenograft protocol (literature [2]): 1) Animal preparation: Male NOD/SCID mice (6-8 weeks old) were acclimated for 1 week (22±2°C, 12h light/dark); 2) Tumor inoculation: 2×10⁷ K562 cells suspended in 200 μL PBS were intravenously injected into each mouse (tail vein); 3) Grouping and dosing: When peripheral blood leukocyte count reached 1×10⁹/L (day 7 post-inoculation), mice were randomized into 3 groups (n=6): Control (5% DMSO + 95% corn oil, oral gavage, 0.2 mL/mouse, once daily); Pifithrin-μ 10 mg/kg (dissolved in control vehicle, oral gavage, once daily); Pifithrin-μ 20 mg/kg (same vehicle/route); 4) Monitoring: Peripheral blood was collected every 3 days to count leukocytes; after 21 days, mice were euthanized, bone marrow was collected for IHC, and spleen/liver were weighed (to assess tumor infiltration). [2]
- HT29 colon cancer xenograft protocol (literature [3]): 1) Animal preparation: Female BALB/c nude mice (4-6 weeks old) were acclimated for 1 week; 2) Tumor inoculation: 5×10⁶ HT29 cells suspended in 100 μL Matrigel:PBS (1:1) were subcutaneously injected into the right flank; 3) Grouping and dosing: When tumors reached 100-150 mm³ (day 10 post-inoculation), mice were randomized into 4 groups (n=5): Control (5% DMSO + 10% Cremophor EL + 85% saline, i.p., 0.1 mL/mouse, once daily); Pifithrin-μ 15 mg/kg (dissolved in control vehicle, i.p., once daily); 5-FU 20 mg/kg (dissolved in saline, i.p., once weekly); Combination (Pifithrin-μ daily + 5-FU weekly); 4) Monitoring: Tumor volume (length × width² / 2) and body weight were measured every 3 days; after 28 days, mice were euthanized, tumors were harvested/weighed, and fixed in 4% paraformaldehyde for IHC. [3]

In vivo safety in xenograft models (literatures [2][3]): 1) NOD/SCID mice (literature [2]): Pifithrin-μ 20 mg/kg (oral, 21 days) caused 6% body weight loss (recovered by day 18) and no abnormal serum ALT/AST/BUN/Cr (vs. control); 2) BALB/c nude mice (literature [3]): Pifithrin-μ 15 mg/kg (i.p., 28 days) + 5-FU 20 mg/kg (i.p., weekly) caused 9% body weight loss (vs. 12% for 5-FU alone) and no histopathological damage in liver/kidney/spleen. [2][3]
- In vitro cytotoxicity on normal cells (literature [1]): Pifithrin-μ showed low toxicity to normal human colonic epithelial cells (NCM460): IC50 = 22.5 μM (vs. 3.8 μM in K562 cells), indicating cancer cell selectivity. [1]

[1]. Nat Chem Biol . 2006 Sep;2(9):474-9.

[2]. Blood Cancer J . 2011 Jul;1(7):e28.

[3]. Mol Cancer Ther . 2013 Apr;12(4):341-51.

2-phenylethynesulfonamide is a member of benzenes.

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Unique mechanism of action (literature [1]): Unlike other p53 inhibitors (e.g., Pifithrin-α, which inhibits p53 transcriptional activity), Pifithrin-μ selectively blocks p53's mitochondrial pro-apoptotic function by disrupting p53-Bcl-2/Bcl-xL interactions. This avoids interference with p53's nuclear tumor suppressor activity (e.g., DNA repair), reducing potential carcinogenic risks. [1]
- Therapeutic potential (literatures [2][3]): Pifithrin-μ is a promising candidate for treating p53-wildtype hematological malignancies (e.g., chronic myeloid leukemia) and solid tumors (e.g., colon cancer), especially in combination with chemotherapy (e.g., 5-FU) to reduce chemotherapy-induced apoptosis of normal cells. [2][3]

C8H7NO2S

181.21

181.019

C, 53.03; H, 3.89; N, 7.73; O, 17.66; S, 17.69

64984-31-2

327653

White to light brown solid powder

1.4±0.1 g/cm3

351.7±25.0 °C at 760 mmHg

135.0 to 139.0 °C

166.5±23.2 °C

0.0±0.8 mmHg at 25°C

1.634

2

68.54

1

3

1

12

295

0

S(C#CC1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])(N([H])[H])(=O)=O

ZZUZYEMRHCMVTB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C8H7NO2S/c9-12(10,11)7-6-8-4-2-1-3-5-8/h1-5H,(H2,9,10,11)

2-phenylethynesulfonamide

2934.99.03.00

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~36 mg/mL (~198.7 mM)
Water: <1 mg/mL (slightly soluble or insoluble)
Ethanol: N/A

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (11.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 1% DMSO +30% polyethylene glycol+1% Tween 80 : 10 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。