H3 receptor ( Ki = 0.16 nM ); H3 receptor ( EC50 = 1.5 nM )

在刺激鸟苷 5'-O-(3-[35S]硫代)三磷酸与该受体结合时，Pitolisant (BF2.649) 表现为 Ki 值为 0.16 nM 的竞争性拮抗剂和 EC50 的反向激动剂值为 1.5 nM，内在活性比环丙昔芬高约 50%。 Pitolisant 取代小鼠脑皮质膜上的 [125I]iodoproxyfan 结合，IC50 值为 26.4±4.5 nM。考虑到放射性配体的 Kd 值 (161±9 pM)，Pitolisant 的推导 Ki 值为 14±1 nM。 Pitolisant 取代稳定表达人 H3 受体的大鼠神经胶质瘤 C6 细胞膜上的 [125I]iodoproxyfan 结合，IC50 值为 4.2±0.2 nM。考虑到放射性配体的 Kd 值 (50±4 pM)，Pitolisant 的推导 Ki 值为 2.7±0.5 nM。 Pitolisant 逐渐逆转这种反应，Hill 系数接近 1，IC50 值为 330±68 nM，导致 Ki 值为 17±4 nM。 Pitolisant 引起与膜的基础特异性 [35S]GTPγS 结合的剂量依赖性减少，最大效果相当于基础特异性结合的 75±1%，EC50 值为 1.5±0.1 nM[1]。

在单剂量奥氮平 (2 mg/kg bw) 前 30 分钟给予 Pitolisantat 单剂量 10 mg/kg 也显着影响 FST 中的不动时间。与对照组在 FST 中确定的时间相比，随后对小鼠施用上述药物序列统计上显着增加了不动的持续时间。它也减少了运动活动。相反，在亚慢性治疗中两种药物（Pitolisant 10 mg/kg bw，30 分钟后奥氮平 2 mg/kg bw，4 小时后奥氮平 2 mg/kg bw）给药 15 次后获得的结果表明，给药先服用 Pitolisant，然后服用奥氮平，可平衡小鼠的运动活动；与仅施用 Pitolisant 的对照组的运动水平相比。更重要的是，这种药物组合显着地将不动时间缩短至小鼠强迫游泳试验中对照组获得的水平[单向方差分析； F(3,20)=4.226,P=0.0181][2]。在调节阶段给予 Pitolisant (10 mg/kg) 的大鼠在配对纹理上停留 502±94 秒，该值与对照组没有统计学差异，表明 Pitolisant 不支持位置偏好[3]。

有 [³⁵S]GTPγS 结合的检测方法。使用在冰冷缓冲液（50 mM Tris/HCl，pH 7.4）中匀浆后稳定表达人 H₃ 受体（约 400 fmol/mg 蛋白质）的 CHO-K1 细胞。将匀浆离心两次（20,000g，4°C，10 分钟）后，将最终沉淀重悬于 50 倍体积的缓冲液中。含有 550 μg 蛋白质的膜用 1 U/mL 腺苷脱氨酶预处理，然后在 25°C 下与 0.1 nM [³⁵S] GTPηS 和待检查的药物一起在 25°C 下孵育 60 分钟。体积为 1 mL 的检测缓冲液，其中含有 10 μM GDP、50 mM Tris/HCl、50 mM NaCl、5 mM MgCl2 和 0.02% 牛血清白蛋白（pH 7.4）。使用 10 μM 非放射性 GTPγS 确定非特异性结合。通过 GF/B 玻璃纤维过滤器快速过滤并在真空下结束孵育。冰冷的水清洗后，使用液体闪烁光谱法来量化过滤器上捕获的放射性。竞争性对抗的衡量标准也相同。本质上，稳定表达人 H₃ 受体（约 600 fmol/mg 蛋白质）的 HEK-293 细胞膜（10 μg 蛋白质）与缓冲液（50 mM Tris/HCl）中的 Pitolisant 一起预孵育、pH 7.4、10 mM MgCl2、100 mM NaCl 和 10 μM GDP）在 96 孔微孔板中。室温 (19–20°C) 下轻轻搅拌 30 分钟，然后添加 0.1 nM [³⁵S]GTPηS（最终体积 200 μL）。使用浓度为 10 μM 的非放射性 GTPγS 来测量非特异性结合。在 Multiscreen MAFCOB50 微孔板上，一式三份进行孵育，30 分钟后通过真空快速过滤终止。液体闪烁光谱法对过滤器上捕获的放射性进行计数[1]。

Mice: The study makes use of adult female Albino Swiss mice weighing 20–22 g. A 1% Tween 80 suspension contains either olanzapine or pitolisant. An acute experiment begins 30 minutes before the compounds or vehicle are injected intraperitoneally (i.p.). Pitolisant and Olanzapine are given to the group that receives them 15 minutes apart. Subchronic treatment is done at about 9:00 am (0.2 mL Tween to control group, Pitolisant-10 mg/kg b.w. to Pitolisant group, Olanzapine-2 mg/kg b.w. to Olanzapine group, Pitolisant-10 mg/kg b.w. and Olanzapine after 15 min-2 mg/kg b.w. to Pitolisant+Olanzapine group) and at about 1:00 pm (Olanzapine group and Pitolisant+Olanzapine group). Rats: Male Wistar rats (220-300 g) receive vehicle (methylcellulose 1%, p.o.), Pitolisant (10 mg/kg, p.o.) or D-amphetamine (2.5 mg/kg, i.p. in saline). The nucleus accumbens is removed, weighed, frozen in liquid nitrogen, and kept at -80°C after they are beheaded ninety minutes later. A 0.4 N perchloric acid/2.7 mM EDTA solution in 1 mL is used to homogenize the tissues. HPLC coupled with electrochemical detection is used to analyze the supernatants following centrifugation (8000 rpm, 20 min, 4°C). Dihydroxyphenyl acetic acid (DOPAC), homovanillic acid (HVA), and dopamine (DA) tissue concentrations are measured, and the corresponding ratios (DOPAC/DA, HVA/DA) are computed.

[1]. BF2.649 [1-{3-[3-(4-Chlorophenyl)propoxy]propyl}piperidine, hydrochloride], a nonimidazole inverse agonist/antagonist at the human histamine H3 receptor: Preclinical pharmacology. J Pharmacol Exp Ther. 2007 Jan;320(1):365-75.

[2]. H3 histamine receptor antagonist pitolisant reverses some subchronic disturbances induced by olanzapine in mice. Metab Brain Dis. 2016 Oct;31(5):1023-9.

[3]. Preclinical evaluation of the abuse potential of Pitolisant, a histamine H? receptor inverse agonist/antagonist compared with Modafinil. Br J Pharmacol. 2013 Jun;169(3):632-44.

C17H26CLNO

295.8474

295.17

C, 69.02; H, 8.86; Cl, 11.98; N, 4.73; O, 5.41

362665-56-3

Pitolisant hydrochloride; 903576-44-3; Pitolisant oxalate; 362665-57-4

Solid powder

C1CCN(CC1)CCCOCCCC2=CC=C(C=C2)Cl

NNACHAUCXXVJSP-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H26ClNO/c18-17-9-7-16(8-10-17)6-4-14-20-15-5-13-19-11-2-1-3-12-19/h7-10H,1-6,11-15H2

1-[3-[3-(4-chlorophenyl)propoxy]propyl]piperidine

FUB-649; BF2649; FUB649; BF-2649; FUB 649; BF2.649; B F2649; Pitolisant; Tiprolisant; Pitolisant HCl; Pitolisant hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~66 mg/mL (~198.6 mM)
Water: ~66 mg/mL
Ethanol: ~66 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.45 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。