| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Wnt/β-catenin (IC50 = 129.8 μM, NCI-H295 cell)
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| 体外研究 (In Vitro) |
PNU-74654 结合 β-连环蛋白的 KD 为 450 nM。 β-连环蛋白的 Tcf3/Tcf4 结合表面上存在一个明显的热点，特别是在残基 K435 和 R469 处。该热点两侧的两个小口袋是 PNU-74654 [2] 装订设计的一部分。在 NCI 中，PNU-74654 显着抑制细胞增殖，增强早期和晚期细胞计数，减少核 β-catenin 积累，抑制治疗后 96 小时的 CTNNB1/β-catenin 表达，并增强治疗后 48 小时的早期和晚期细胞计数。 H295细胞。 β-连环蛋白靶基因的小时数增加。对 HeLa 细胞没有观察到影响。 PNU-74654 治疗后 24 小时和 48 小时可降低 NCI-H295 细胞中的苦杏仁酮和大豆醇。 48 小时治疗后 NCI-H295 细胞中 STAR、醛固酮合酶蛋白以及 SF1 和 CYP21A2 mRNA 表达。水平下降。 PNU-74654 治疗后 24 小时可降低 Y1 细胞中的皮质酮，但不会降低细胞存活率 [1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
通过将CT-26细胞注射到小鼠侧腹建立CRC体内模型，然后用PNU-74654 /5-FU/ PNU-74654−5-FU的混合物处理这些模型（图5a）。为了进一步研究，肿瘤样本的组织学染色显示除了炎症区域（图5b， d）外，血管紊乱以及大量红细胞外渗（图5b， a），细胞坏死（图5b，b）和肿瘤间质（图5b， c）。我们观察到，与对照组以及PNU-74654 + 5-FU组相比，接受PNU-74654或5-FU组相比，肿瘤生长明显受到抑制（图5C）。同时，肿瘤组织的组织学染色表明，联合用药可显著提高组织坏死。[3]
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| 酶活实验 |
核磁共振检查[2]
WaterLOGSY是一种鉴定与大分子相互作用的化合物的方法。28,29在本实验中，大量的水磁化部分通过蛋白质-配体复合物以选择性的方式转移到自由配体上。结合化合物（例如PNU-74654）很容易在光谱中通过观察它们的共振符号来识别。不结合的化合物显示负峰或根本没有峰，而结合物显示正峰。这些化合物是在由四到五个分子组成的混合物中筛选出来的。给出阳性信号的混合物被反卷积以识别单个粘合剂。核磁共振实验中使用的β-catenin犰狳重复浓度为2 μM， 5 mM Tris, 10 mM NaCl pH 7.3。Tcf4浓度为25 μM。将化合物溶解在浓度为40 mM的氘化二甲基亚砜（DMSO）中。首先在浓度为50 μM的混合物中在20°C下筛选。竞争实验的样品在PBS中缓冲。核磁共振实验采用瓦里安Inova 600 MHz光谱仪，配备5毫米三共振探头和样品管理系统（SMS）自动进样器。记录每个样品的参考光谱和WaterLOGSY光谱。 ITC测量[2] ITC测量在20°C下使用VP-ITC滴定量热计（MicroCal）进行。样品（如PNU-74654）广泛透析PBS， 1mm DTT。每次滴定实验初始注射2 μL，随后20次注射5 μL。通过将Tcf4 （1-53 W-His6）注射到用于每个特定实验的缓冲液中，在空白滴定中测量稀释热。这些是从结合热中减去的。在3 μM的β-catenin和60 μM的β-catenin下进行直接结合实验。竞争分析的浓度为100 μM的Tcf4 （1-53 W-His6）和5 μM的β-catenin。每次滴定实验均在四种化合物的混合物中进行，每种化合物的浓度为100 μM。结合热采用Origin软件包 对实验测量值进行非线性最小二乘拟合，并假设单一结合位点模型。选择至少三倍降低Tcf4结合亲和力的化合物混合物进行进一步表征。 |
| 细胞实验 |
PNU-74654对细胞系的作用[1]
将NCI-H295细胞以每孔200,000个细胞的速度在24孔板中进行基因表达、蛋白分析和肾上腺激素测量。48 h后，细胞分别用载药（0.1%-0.4% DMSO）或10、50、100和200 μM PNU-74654处理。24和48 h后，收集培养基上清液用于测量肾上腺激素。将贴壁细胞固定用于免疫荧光或收获用于RNA和蛋白质分离。至少进行了三个独立的实验。 将Y1细胞以每孔200,000个细胞的速度在24孔板中进行基因表达和皮质酮测定。24 h后，分别用10、50、100、200 μM PNU-74654处理细胞。24和48 h后，收集培养基上清液用于皮质酮测量，收集贴壁细胞用于RNA分离。至少进行了两个独立的实验。 将HeLa细胞以每孔50000个细胞的速度在24孔板中进行基因表达和蛋白分析。24 h后，用50、100和200个PNU-74654培养液处理细胞。24和48 h后，收获贴壁细胞，分离RNA和蛋白。至少进行了两个独立的实验。 |
| 动物实验 |
雌性近交系BALB/c小鼠购自巴斯德研究所，并随机分为4组，每组3只，分别给予PNU-74654、5-FU、5-FU/PNU-74654混合物以及未处理组（即对照组）。小鼠饲养于标准实验室条件下。将CT-26细胞皮下注射至小鼠侧腹。当肿瘤体积达到100mm³时开始进行治疗。每隔2天测量一次肿瘤大小。[3]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
PNU-74654 是一种 β-catenin-TCF 相互作用抑制剂。
背景：目前，尚无针对晚期/转移性肾上腺皮质癌 (ACC) 患者的有效疗法。Wnt/β-catenin 信号通路在 ACC 中频繁激活，该通路是一个有前景的治疗靶点。目的：探讨抑制 Wnt/β-catenin 信号通路对 ACC 细胞的影响。方法：将肾上腺细胞系（NCI-H295 和 Y1）和非肾上腺细胞系（HeLa）用 PNU-74654（5-200 μM）处理 24-96 小时，以评估细胞活力（MTS 法）、细胞凋亡（Annexin V 染色）、β-catenin 的表达/定位（qPCR、免疫荧光、免疫细胞化学和蛋白质印迹法）、β-catenin 靶基因的表达（qPCR 和蛋白质印迹法）以及肾上腺类固醇生成（放射免疫分析、qPCR 和蛋白质印迹法）。结果：在 NCI-H295 细胞中，PNU-74654 处理 96 小时后显著降低了细胞增殖，增加了早期和晚期细胞凋亡，减少了核内 β-catenin 的积累，抑制了 CTNNB1/β-catenin 的表达，并增加了 β-catenin 靶基因的表达（处理 48 小时）。在 HeLa 细胞中未观察到任何影响。在NCI-H295细胞中，PNU-74654处理后24小时和48小时均降低了皮质醇、睾酮和雄烯二酮的分泌。此外，在NCI-H295细胞中，PNU-74654处理后48小时降低了SF1和CYP21A2 mRNA的表达以及STAR和醛固酮合成酶的蛋白水平。在Y1细胞中，PNU-74654处理后24小时抑制了皮质酮的分泌，但并未降低细胞活力。结论：阻断Tcf/β-catenin复合物可抑制肾上腺皮质肿瘤细胞中的Wnt/β-catenin信号通路，从而诱导细胞凋亡增加、细胞活力降低和肾上腺类固醇生成受损。这些令人鼓舞的发现为在肾上腺皮质癌（ACC）临床前模型中进一步开展抑制Wnt/β-catenin通路的研究奠定了基础。抑制该通路可能成为ACC患者的一种有前景的辅助治疗方法。[1] β-catenin与Tcf家族成员之间的相互作用对于Wnt信号转导通路至关重要，而Wnt信号转导通路在癌症中经常发生突变。这种相互作用覆盖了非常大的表面积（4800 Ų），因此使用小分子抑制剂抑制这种相互作用是一项挑战。然而，蛋白质表面通常包含“热点”，即结合亲和力的主要介质——小区域。小分子可以通过与热点紧密相互作用来与蛋白质竞争结合位点。β-catenin上的Tcf3/Tcf4结合表面在K435和R469残基周围存在一个明确的热点。使用QXP程序将Pharmacia公司化合物库中17700种化合物的子集对接至该热点；将得分最高的 22 个化合物放入生物物理（NMR 和 ITC）筛选漏斗中，测定其与 β-catenin 的特异性结合、与 Tcf4 的竞争性结合以及结合常数。该过程发现了三种具有成药性的低分子量 Tcf4 竞争性化合物，其中结合最强的化合物的 K(D) 值为 450 nM。我们的方法可用于多种情况（例如，从外部化合物库中筛选化合物、无法进行生化功能测定或不打算进行高通量筛选时），并且可能普遍适用于蛋白质-蛋白质相互作用抑制剂的鉴定。[2] |
| 分子式 |
C19H16N2O3
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|---|---|
| 分子量 |
320.348
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| 精确质量 |
320.116
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| 元素分析 |
C, 71.24; H, 5.03; N, 8.74; O, 14.98
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| CAS号 |
113906-27-7
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| 相关CAS号 |
113906-27-7;
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| PubChem CID |
9836739
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.593
|
| LogP |
3.9
|
| tPSA |
63.83
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
24
|
| 分子复杂度/Complexity |
434
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1=CC=C(O1)/C=N/NC(=O)C2=CC=CC=C2OC3=CC=CC=C3
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| InChi Key |
JJEDWBQZCRESJL-DEDYPNTBSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H16N2O3/c1-14-11-12-16(23-14)13-20-21-19(22)17-9-5-6-10-18(17)24-15-7-3-2-4-8-15/h2-13H,1H3,(H,21,22)/b20-13+
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| 化学名 |
N-[(E)-(5-methylfuran-2-yl)methylideneamino]-2-phenoxybenzamide
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| 别名 |
PNU-74654; 113906-27-7; Benzoic acid, 2-phenoxy-, 2-[(5-methyl-2-furanyl)methylene]hydrazide; PNU 74654; CHEMBL254381; N-[(E)-(5-Methylfuran-2-yl)methylideneamino]-2-phenoxybenzamide; PNU74654; (E)-N'-((5-methylfuran-2-yl)methylene)-2-phenoxybenzohydrazide;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 30 mg/mL (~93.65 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1216 mL | 15.6079 mL | 31.2159 mL | |
| 5 mM | 0.6243 mL | 3.1216 mL | 6.2432 mL | |
| 10 mM | 0.3122 mL | 1.5608 mL | 3.1216 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
hsBCL9CT-24
Cardiogenol C HCl
HLY78
IWP-4
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