| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 25mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Wnt/β-catenin (IC50 = 129.8 μM, NCI-H295 cell)
PNU-74654 targets the interaction between β-catenin and T cell factor 4 (Tcf4). β-catenin is a key transcriptional coactivator in the Wnt signaling pathway. In the absence of Wnt signaling, β-catenin is degraded. Upon Wnt stimulation, β-catenin accumulates and translocates to the nucleus, where it binds to Tcf/Lef transcription factors to activate target genes. PNU-74654 binds to β-catenin with a KD of 450 nM and inhibits its interaction with Tcf4, thereby disrupting Wnt signaling. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
PNU-74654 与 β-catenin 的解离常数 (KD) 为 450 nM。β-catenin 的 Tcf3/Tcf4 结合表面存在一个明显的结合热点，具体位于 K435 和 R469 位点。该热点两侧的两个小口袋是 PNU-74654 结合位点设计的一部分 [2]。在 NCI-H295 细胞中，PNU-74654 显著抑制细胞增殖，增加早期和晚期细胞计数，减少核内 β-catenin 的积累，抑制 CTNNB1/β-catenin 的表达（处理后 96 小时），并增加早期和晚期细胞计数（处理后 48 小时）。β-catenin 的靶基因表达也随之升高。在 HeLa 细胞中未观察到任何影响。PNU-74654 在处理后 24 小时和 48 小时降低 NCI-H295 细胞中苦杏仁酮和豆醇的水平。在NCI-H295细胞中，经48小时处理后，STAR、醛固酮合成酶蛋白以及SF1和CYP21A2 mRNA的表达水平均有所下降。PNU-74654在处理后24小时可降低Y1细胞中的皮质酮水平，但不会降低细胞存活率[1]。PNU-74654在NCI-H295细胞中对Wnt/β-catenin通路具有抑制作用，IC50值为129.8 μM。它与β-catenin的结合亲和力（KD）为450 nM。生化和细胞实验均证实了该化合物抑制β-catenin-Tcf4相互作用的能力。作为化学混合物的一部分，它可促进人多能干细胞（hPSCs）的神经分化。其抗肿瘤活性归因于对Wnt通路的抑制。
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| 体内研究 (In Vivo) |
通过将CT-26细胞注射到小鼠侧腹部构建CRC体内模型，然后用PNU-74654/5-FU/PNU-74654-5-FU混合物治疗这些模型（图5A）。为了进一步研究，对肿瘤样本进行组织学染色，结果显示血管紊乱和大量红细胞渗出（图5B，a）、细胞坏死（图5B，b）以及肿瘤间质（图5B，c），此外还有炎症区域（图5B，d）。我们观察到，与对照组以及单独使用PNU-74654或5-FU治疗的组相比，接受PNU-74654联合5-FU治疗的小鼠肿瘤生长显著受到抑制（图5C）。此外，肿瘤组织的组织学染色结果显示，该联合用药显著提高了组织坏死率。[3]
PNU-74654 具有体内抗肿瘤活性。它通过抑制 Wnt/β-catenin 通路，降低参与细胞增殖和存活的 Wnt 靶基因的表达。已在 Wnt 信号通路失调的癌症模型中对其进行了研究。其促进人多能干细胞 (hPSC) 神经分化的能力表明其在再生医学领域具有潜在的应用价值。目前公开资料中关于其体内疗效的详细数据有限。 |
| 酶活实验 |
核磁共振筛选[2]
WaterLOGSY 是一种用于鉴定与大分子相互作用的化合物的方法。在该实验中，大量的本体水磁化强度通过蛋白质-配体复合物选择性地部分转移到游离配体上。结合化合物（例如PNU-74654）可通过观察其共振峰的符号在光谱中轻松识别。不结合的化合物显示负峰或完全没有峰，而结合化合物显示正峰。化合物在由四到五种分子组成的混合物中进行筛选。对产生正信号的混合物进行解卷积以鉴定单个结合物。核磁共振实验中使用的β-catenin armadillo重复序列浓度为2 μM，溶于5 mM Tris、10 mM NaCl、pH 7.3的缓冲液中。Tcf4浓度为25 μM。化合物溶解于氘代二甲基亚砜（DMSO）中，浓度为40 mM。首先在 20°C 下，以 50 μM 的浓度对混合物进行筛选。竞争实验的样品用 PBS 缓冲液缓冲。核磁共振实验使用配备 5 mm 三共振探头和样品管理系统 (SMS) 自动进样器的 Varian Inova 600 MHz 核磁共振波谱仪进行。每个样品均记录参考谱图和 WaterLOGSY 谱图。 等温滴定量热法 (ITC) 测量[2] ITC 测量在 20°C 下使用 VP-ITC 滴定热量计 (MicroCal) 进行。样品用含 1 mM DTT 的 PBS 缓冲液充分透析。每次滴定实验包括初始注入 2 μL，随后进行 20 次 5 μL 的注入。通过将 Tcf4 (1-53 W-His6) 注入到每个特定实验所用的缓冲液中，在空白滴定中测量稀释热。这些稀释热从结合热中减去。直接结合实验中，β-catenin 的浓度为 3 μM，化合物（例如 PNU-74654）的浓度为 60 μM。竞争性实验中，Tcf4 (1-53 W-His6) 的浓度为 100 μM，β-catenin 的浓度为 5 μM。每次滴定实验均使用四种化合物的混合物，每种化合物的浓度均为 100 μM。结合热通过 Origin 软件（MicroCal）对实验测量数据进行非线性最小二乘拟合来确定，并假设为单一位点结合模型。选择 Tcf4 结合亲和力至少降低三倍的化合物混合物进行进一步表征。β-catenin-Tcf4 相互作用实验使用重组 β-catenin 和 Tcf4 蛋白或基于细胞的报告基因实验进行。在生化分析中，将β-catenin和对应于Tcf4结合域的肽段与不同浓度的PNU-74654孵育。通过荧光偏振、时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）或表面等离子共振（SPR）检测相互作用。在细胞实验中，使用Wnt信号通路响应型荧光素酶报告基因（例如TOPFlash）。将报告基因转染至细胞中，并用PNU-74654处理。通过检测荧光素酶活性来评估Wnt信号通路的抑制情况。IC50值通过非线性回归确定。 |
| 细胞实验 |
PNU-74654 处理细胞系[1]
将 NCI-H295 细胞以每孔 20 万个细胞的密度接种于 24 孔板中，用于基因表达、蛋白质分析和肾上腺类固醇测定。48 小时后，用溶剂（0.1%-0.4% DMSO）或 10、50、100 和 200 μM 的 PNU-74654 处理细胞。24 小时和 48 小时后，收集培养基上清液用于肾上腺类固醇测定。贴壁细胞用于免疫荧光固定或收集用于 RNA 和蛋白质提取。至少进行了三次独立实验。 将 Y1 细胞以每孔 20 万个细胞的密度接种于 24 孔板中，用于基因表达和皮质酮测定。 24 小时后，用载体或 10、50、100 和 200 μM 的 PNU-74654 处理细胞。24 小时和 48 小时后，收集培养基上清液用于皮质酮测定，并收集贴壁细胞用于 RNA 提取。至少进行了两次独立实验。 将 HeLa 细胞以每孔 50,000 个细胞的密度接种于 24 孔板中，用于基因表达和蛋白质分析。24 小时后，用载体或 50、100 和 200 μM 的 PNU-74654 处理细胞。24 小时和 48 小时后，收集贴壁细胞用于 RNA 和蛋白质提取。至少进行了两次独立实验。 在 Wnt 信号通路激活的癌细胞系（例如 NCI-H295、SW480）中评估细胞 Wnt/β-catenin 抑制情况。细胞在含有5% CO₂的37°C适宜培养基中培养，并用不同浓度（1-500 μM）的PNU-74654处理。采用qRT-PCR检测Wnt靶基因（例如AXIN2、MYC、CCND1）的表达。通过Western blotting和免疫荧光法评估β-catenin蛋白水平及其核定位。采用MTT或CellTiter-Glo法评估细胞活力和增殖。在神经分化研究中，将hPSCs与PNU-74654混合，作为分化诱导剂的一部分进行处理。 |
| 动物实验 |
雌性近交系BALB/c小鼠购自巴斯德研究所，并随机分为4组，每组3只，分别给予PNU-74654、5-FU、5-FU/PNU-74654混合物以及未处理组（即对照组）。小鼠饲养于标准实验室条件下。将CT-26细胞皮下注射至小鼠侧腹。当肿瘤体积达到100mm³时开始给药。每2天测量一次肿瘤大小。[3]
在小鼠异种移植模型中，使用Wnt信号通路激活的癌细胞系评估体内疗效。PNU-74654的给药途径为口服或腹腔注射，剂量根据临床前研究确定。使用游标卡尺测量肿瘤生长情况。研究结束时，采集肿瘤组织进行组织病理学分析和生化检测（Wnt靶基因表达、β-catenin水平）。对于神经分化研究，则在动物模型中评估其对神经发育的影响。每组样本量通常为6-10只动物。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
PNU-74654 的分子量为 320.34 g/mol，分子式为 C19H16N2O3。纯度：≥98%。储存方式：粉末，2-8°C，可保存 2 年。溶解性：DMSO。生物利用度、半衰期和组织分布数据尚未公开。该化合物是研究 Wnt/β-catenin 信号通路的科研工具。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
关于 PNU-74654 的毒理学数据有限。作为一种 Wnt 通路抑制剂，其潜在毒性可能包括对发育和组织稳态的影响。标准的毒理学研究应包括啮齿动物的急性和亚慢性毒性试验、遗传毒性筛选以及发育影响评估。目前尚未有关于该化合物的临床试验报道。该化合物仅供研究使用。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
PNU-74654 是一种 β-catenin-TCF 相互作用抑制剂。背景：目前，尚无针对晚期/转移性肾上腺皮质癌 (ACC) 的有效治疗方法。Wnt/β-catenin 信号通路在 ACC 中经常被激活，使其成为一个有前景的治疗靶点。目的：探讨抑制 Wnt/β-catenin 信号通路对 ACC 细胞的影响。方法：将肾上腺细胞系（NCI-H295 和 Y1）和非肾上腺细胞系（HeLa）用 PNU-74654（5-200 μM）处理 24-96 小时，以评估细胞活力（MTS 法）、细胞凋亡（Annexin V 染色）、β-catenin 的表达/定位（qPCR、免疫荧光、免疫细胞化学和 Western blotting）、β-catenin 靶基因的表达（qPCR 和 Western blotting）以及肾上腺皮质激素的生成（放射免疫分析、qPCR 和 Western blotting）。结果：在 NCI-H295 细胞中，PNU-74654 处理 96 小时后，细胞增殖显著降低，早期和晚期细胞凋亡增加，核内 β-catenin 积累减少，CTNNB1/β-catenin 表达受到抑制，β-catenin 靶基因表达增加（处理 48 小时后）。在 HeLa 细胞中未观察到上述效应。在NCI-H295细胞中，PNU-74654处理在24小时和48小时均降低了皮质醇、睾酮和雄烯二酮的分泌。此外，在NCI-H295细胞中，PNU-74654处理48小时降低了SF1和CYP21A2 mRNA的表达以及STAR和醛固酮合成酶的蛋白水平。在Y1细胞中，PNU-74654处理24小时抑制了皮质酮的分泌，但并未降低细胞活力。结论：阻断Tcf/β-catenin复合物可抑制肾上腺皮质肿瘤细胞中的Wnt/β-catenin信号通路，从而诱导细胞凋亡增加、细胞活力降低和肾上腺类固醇生成受损。这些令人鼓舞的发现为进一步研究在肾上腺皮质癌（ACC）临床前模型中抑制Wnt/β-catenin通路奠定了基础。抑制该通路可能是一种有前景的ACC患者辅助治疗方法。[1] β-catenin与Tcf家族成员之间的相互作用对Wnt信号通路至关重要，而Wnt信号通路在癌症中经常发生突变。这种相互作用覆盖了非常大的表面积（4800 Ų），因此使用小分子抑制剂抑制这种相互作用具有挑战性。然而，蛋白质表面通常包含“热点”，这些小区域是结合亲和力的主要介质。小分子可以通过与热点紧密相互作用来与蛋白质竞争结合位点。β-catenin上的Tcf3/Tcf4结合表面在K435和R469残基周围有一个明确的热点。使用QXP程序将Pharmacia化合物库中的17700个化合物子集对接至该热点；将排名前 22 的化合物置于生物物理（核磁共振和等温滴定量热法）筛选漏斗中，以确定它们与 β-catenin 的特异性结合、与 Tcf4 的竞争性结合以及结合常数。该过程鉴定出三种具有成药潜力的低分子量 Tcf4 竞争性化合物，其中结合力最强的化合物的 K(D) 值为 450 nM。我们的方法可用于多种情况（例如，从外部化合物库中筛选化合物、无法进行生化功能测定或不打算进行高通量筛选时），并且可能普遍适用于鉴定蛋白质-蛋白质相互作用抑制剂。[2]
PNU-74654 也称为 PNU74654。其化学名称为 N'-[(5-甲基呋喃-2-基)亚甲基]-2-苯氧基苯甲酰肼。它是一种 Wnt/β-catenin 通路抑制剂，可阻断 β-catenin-Tcf4 相互作用。它与β-catenin的结合亲和力（KD）为450 nM。它具有抗肿瘤活性并能促进神经分化。目前尚未有临床试验或监管部门批准的报道。该化合物仅供研究使用。 |
| 分子式 |
C19H16N2O3
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|---|---|
| 分子量 |
320.348
|
| 精确质量 |
320.116
|
| 元素分析 |
C, 71.24; H, 5.03; N, 8.74; O, 14.98
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| CAS号 |
113906-27-7
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| 相关CAS号 |
113906-27-7;
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| PubChem CID |
9836739
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 折射率 |
1.593
|
| LogP |
3.9
|
| tPSA |
63.83
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
24
|
| 分子复杂度/Complexity |
434
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CC1=CC=C(O1)/C=N/NC(=O)C2=CC=CC=C2OC3=CC=CC=C3
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| InChi Key |
JJEDWBQZCRESJL-DEDYPNTBSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H16N2O3/c1-14-11-12-16(23-14)13-20-21-19(22)17-9-5-6-10-18(17)24-15-7-3-2-4-8-15/h2-13H,1H3,(H,21,22)/b20-13+
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| 化学名 |
N-[(E)-(5-methylfuran-2-yl)methylideneamino]-2-phenoxybenzamide
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| 别名 |
PNU-74654; 113906-27-7; Benzoic acid, 2-phenoxy-, 2-[(5-methyl-2-furanyl)methylene]hydrazide; PNU 74654; CHEMBL254381; N-[(E)-(5-Methylfuran-2-yl)methylideneamino]-2-phenoxybenzamide; PNU74654; (E)-N'-((5-methylfuran-2-yl)methylene)-2-phenoxybenzohydrazide;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 30 mg/mL (~93.65 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.80 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.1216 mL | 15.6079 mL | 31.2159 mL | |
| 5 mM | 0.6243 mL | 3.1216 mL | 6.2432 mL | |
| 10 mM | 0.3122 mL | 1.5608 mL | 3.1216 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
hsBCL9CT-24
Cardiogenol C HCl
HLY78
IWP-4
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