HLY78

HLY78 acts as an agonist of the Wnt/β-catenin signaling pathway by targeting the DIX domain of Axin, thereby promoting the association between Axin and low-density lipoprotein receptor-related protein 5/6 (LRP5/6), which leads to phosphorylation of LRP6 and activation of downstream signaling. [2]

通过触发 Wnt/β-catenin 通路，HLY78 可以防止碳离子辐射引起的肿瘤和胚胎细胞死亡 [2]。在HGC-27和AGS细胞中，与对照组相比，HLY78（20 μM，0-48小时）形成集落的能力分别显着增强2.78和2.88倍[3]。 HLY78（20 μM，0-48 小时）可以增强 HGC-27 和 AGS 细胞的迁移能力 [3]。双氢青蒿素可以增强 TNKS 的表达，HLY78 可以显着增加 TNKS 的表达 [3]。

---

在人工胃癌细胞系（HGC-27 和 AGS）中，CCK-8 实验结果表明，HLY78 处理以浓度依赖的方式降低了细胞活力。两种细胞系的活力均随 HLY78 浓度（0.5 至 100 µM）增加而下降，20 µM 被选为后续实验的最佳浓度。 [3]
克隆形成实验显示，与对照组相比，HLY78 (20 µM) 显著增加了 HGC-27 和 AGS 细胞的克隆形成能力。 [3]
HLY78 (20 µM) 促进了 HGC-27 和 AGS 细胞的迁移，表现为伤口愈合实验中伤口距离的缩短以及 Transwell 实验中迁移细胞数量的增加。 [3]
Western blot 分析表明，用 HLY78 (20 µM) 处理胃癌细胞会导致 TNKS、AXIN2、β-catenin、N-cadherin、Vimentin、TWIST 和 MMP2 的蛋白表达水平升高，同时降低 E-cadherin 的表达。这些效应表明 HLY78 激活了 Wnt/β-catenin 通路并促进了上皮-间质转化（EMT）过程。 [3]
免疫荧光分析证实，HLY78 处理增加了 HGC-27 和 AGS 细胞细胞核和细胞质中 TNKS、AXIN2 和 β-catenin 的表达水平。 [3]

HLY78（0-1.8 mg/kg，鼻内注射，一次）通过 LRP6/GSK3β/β-catenin 信号通路改善大鼠蛛网膜下腔出血后的神经功能缺损。

---

在大鼠蛛网膜下腔出血模型中，鼻腔给予 HLY78 (0.6 mg/kg 和 1.8 mg/kg) 在 SAH 后 24 小时能显著改善短期神经功能（改良 Garcia 评分和平衡木评分），优于溶剂处理的 SAH 组。 [2]
HLY78 (0.6 mg/kg) 治疗在 SAH 后 24 小时减轻了同侧大脑皮层的神经元凋亡，表现为 TUNEL 阳性细胞减少，Western blot 分析显示 Bcl-2 水平升高，Bax 和 cleaved caspase-3 水平降低。 [2]
长期给予 HLY78 (0.6 mg/kg) 可改善 SAH 后长达 21 天的神经行为学结局，表现为旋转棒测试和 Morris 水迷宫测试表现改善（逃逸潜伏期和游泳距离减少，在目标象限停留时间增加）。 [2]
HLY78 的神经保护和抗凋亡作用是通过 LRP6/GSK3β/β-catenin 通路介导的，证据是同侧大脑半球中 p-LRP6、p-GSK3β (Ser9) 和 β-catenin 水平升高，而 p-β-catenin、Bax 和 cleaved caspase-3 水平降低。这些效应可被 LRP6 siRNA 敲低所逆转。 [2]

对于细胞计数试剂盒-8（CCK-8）实验，将 HGC-27 和 AGS 细胞以每孔 5x10³ 个细胞的密度接种到 96 孔板中。细胞贴壁后，更换为含有不同浓度 HLY78（0.5, 10, 20, 30, 40, 50, 100 µM）的新鲜培养基。孵育 48 小时后，向每孔加入 CCK-8 试剂并孵育 1 小时。然后使用酶标仪在 450 nm 波长处测量吸光度以确定细胞活力。 [3]
对于克隆形成实验，将 HGC-27 和 AGS 细胞以每孔 5x10³ 个细胞的密度接种到 6 孔板中，并用 HLY78 (20 µM) 处理 24 小时。每 3-4 天更换一次培养基。一周后，用甲醇固定细胞并用 0.1% 结晶紫染色。在光学显微镜下观察并计数克隆。 [3]
对于伤口愈合实验，将 HGC-27 和 AGS 细胞接种到 6 孔板中并生长至 95% 汇合度。使用无菌枪头划一道伤痕。洗涤后，用含有 HLY78 (20 µM) 的无血清培养基处理细胞。在 0 小时和 48 小时拍摄伤痕图像，并测量迁移距离。 [3]
对于 Transwell 迁移实验，将悬浮于无血清培养基中的 HGC-27 和 AGS 细胞接种到 Transwell 小室的上室（每孔 5x10³ 个细胞）。下室加入含有 10% 胎牛血清的培养基作为趋化剂。孵育 12 小时后，将迁移到下表面的细胞固定、染色并在显微镜下计数。 [3]
对于 Western blot 分析，用 HLY78 (20 µM) 处理的 HGC-27 和 AGS 细胞被裂解。蛋白质通过 SDS-PAGE 分离，转移到 PVDF 膜上，并在 4°C 下用特异性一抗孵育过夜，然后与 HRP 标记的二抗孵育。使用 ECL 试剂显色蛋白条带。 [3]
对于免疫荧光分析，将生长在盖玻片上的 HGC-27 和 AGS 细胞用 HLY78 (20 µM) 处理，然后固定、透化并封闭。接着，在 4°C 下用针对 TNKS、AXIN2 或 β-catenin 的一抗孵育过夜，随后与荧光标记的二抗孵育。细胞核用 DAPI 染色，并使用荧光显微镜采集图像。 [3]

Animal/Disease Models: Adult male SD (SD (Sprague-Dawley)) rats (280-310 g, n=9/group, SAH model) [2]
Doses: 0, 0.2, 0.6 and 1.8 mg/kg
Route of Administration: intranasal injection, 1 time , results after 1 hour SAH (subarachnoid hemorrhage): 0.6 mg/kg Dramatically diminished short-term and long-term neurobehavioral deficits and neuronal apoptosis after SAH. Successful delivery to the brain via intranasal administration at 0.6 mg/kg was sufficient to Dramatically increase LRP6 phosphorylation. Reversal of changes in Bcl-2, Bax and cleaved caspase 3 levels.

---

The SAH model was induced in adult male Sprague-Dawley rats (280–310 g) by endovascular perforation of the left internal carotid artery to puncture the bifurcation of the anterior and middle cerebral arteries. Sham-operated rats underwent the same procedure without perforation. [2]
HLY78 was administered intranasally at doses of 0.2, 0.6, and 1.8 mg/kg for dose-response evaluation in short-term neurobehavioral tests. Based on the results, 0.6 mg/kg was selected for subsequent long-term and mechanistic studies. [2]
For short-term assessment, neurological function was evaluated at 24 hours post-SAH using the modified Garcia score and beam-balance test. For long-term assessment, the rotarod test was performed at 7, 14, and 21 days post-SAH, and the Morris water maze test was conducted from 21 to 25 days post-SAH. [2]
For mechanistic studies, some animals received intracerebroventricular injection of LRP6 siRNA or scrambled siRNA 24 hours before SAH induction to knockdown LRP6 expression. [2]
Animals were euthanized at various time points (3, 6, 12, 24, 72 hours or up to 25 days post-SAH) for brain tissue collection for Western blot, immunofluorescence, and TUNEL staining. [2]

[1]. Small-molecule modulation of Wnt signaling via modulating the Axin-LRP5/6 interaction. Nat Chem Biol. 2013 Sep;9(9):579-85.

[2]. HLY78 Attenuates Neuronal Apoptosis via the LRP6/GSK3β/β-Catenin Signaling Pathway After Subarachnoid Hemorrhage in Rats. Neurosci Bull. 2020 Oct;36(10):1171-1181.

[3]. Dihydroartemisinin suppresses proliferation, migration, the Wnt/β-catenin pathway and EMT via TNKS in gastric cancer. Oncol Lett. 2021 Oct;22(4):688.

HLY78 (4-ethyl-5-methyl-5,6-dihydro-1,3-dioxolo[4,5-j]phenanthridine) is a small-molecule lycorine derivative with a molecular weight of 267.32. [2]
It functions by synergizing with Wnt ligands to promote Axin-LRP5/6 interaction, leading to LRP6 phosphorylation and activation of the canonical Wnt/β-catenin signaling pathway. [2]
The study proposes HLY78 as a potential therapeutic agent for attenuating early brain injury after subarachnoid hemorrhage by reducing neuronal apoptosis via the LRP6/GSK3β/β-catenin pathway. [2]
Limitations of the study include the lack of pharmacokinetic data, unknown systemic effects and safety profile of HLY78 in other organs, and the need for further research on other potential roles of LRP6 (e.g., in angiogenesis and neurite growth) after SAH. [2]

C17H17NO2

267.322

267.126

C, 76.38; H, 6.41; N, 5.24; O, 11.97

854847-61-3

44422459

Off-white to light yellow solid powder

3.659

21.7

0

3

1

20

361

0

O1COC2C1=CC1=C(C=2)CN(C)C2C1=CC=CC=2CC

FAZZYPIBZBGQSH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H17NO2/c1-3-11-5-4-6-13-14-8-16-15(19-10-20-16)7-12(14)9-18(2)17(11)13/h4-8H,3,9-10H2,1-2H3

4-ethyl-5-methyl-6H-[1,3]dioxolo[4,5-j]phenanthridine

HLY78; HL Y78; HLY-78

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~26 mg/mL (~97.26 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。