VEGFR2 (IC50 = 1.5 nM); FGFR1 (IC50 = 2.2 nM); PDGFRα (IC50 = 1.1 nM); Abl (IC50 = 0.37 nM); LYN (IC50 = 0.24 nM); Src (IC50 = 5.4 nM)
Ponatinib HCl (AP24534) acts as a pan-BCR-ABL inhibitor, targeting BCR-ABL (including the T315I mutant) [1]
Ponatinib HCl (AP24534) inhibits native BCR-ABL and BCR-ABL^T315I mutant kinase activity with low nanomolar IC50 values [2]
Ponatinib HCl (AP24534) targets FLT3 (especially FLT3-ITD mutant), KIT, FGFR1, and PDGFRα, with IC50 values ranging from 0.3 to 20 nmol/L for inhibiting receptor phosphorylation and cellular proliferation; it has an IC50 of <10 nmol/L for FLT3 signaling inhibition and apoptosis induction in MV4-11 (FLT3-ITD^+/+) AML cells, and an IC50 of 4 nmol/L for inhibiting viability of primary FLT3-ITD-positive AML blasts [3]
Ponatinib HCl (AP24534) is a pan-FGFR inhibitor targeting FGFR1-4, with IC50 values <40 nmol/L for inhibiting FGFR-mediated signaling and viability in engineered Ba/F3 cells; it exhibits GI50 values of 7 to 181 nmol/L for inhibiting cell growth in FGFR-dysregulated tumor cell lines [4]

体外活性：AP24534 有效抑制天然 Abl、AblT315I 和其他临床上重要的 Abl 激酶结构域突变体，IC50 为 0.30 nM–2 nM。 AP24534 不抑制极光激酶家族成员，也不抑制胰岛素受体或 CDK2/细胞周期蛋白 E。 AP24534 抑制表达 Bcr-Abl 的 Ba/F3 细胞的增殖，IC50 为 0.5 nM，以及表达一系列 Bcr 的 Ba/F3 细胞的增殖-Abl 突变体，IC50 为 0.5 nM–36 nM。 AP24534 对增殖的抑制与细胞凋亡的诱导相关。在含有激活形式的 FLT3、KIT、FGFR1 和 PDGFRα 受体的白血病细胞系中，AP24534 有效抑制受体磷酸化和细胞增殖，IC50 为 0.3 nM 至 20 nM。在 MV4-11 (FLT3-ITD(+/+)) 但不是 RS4;11 (FLT3-ITD(–/–)) AML 细胞中，AP24534 在低于 10 nM 的浓度下抑制 FLT3 信号传导并诱导细胞凋亡。 AP24534 抑制 FLT3-ITD 阳性 AML 患者原发性白血病母细胞的活力，IC50 为 4 nM，但不抑制表达天然 FLT3 的 AML 患者的原发性白血病母细胞的活力。在表达活化 FGFR1-4 的 Ba/F3 细胞中，AP24534 有效抑制 FGFR 介导的信号传导和活力，IC50 低于 40 nM。在代表多种肿瘤类型（子宫内膜、膀胱、胃、乳腺癌、肺和结肠）且含有因多种机制失调的 FGFR 的细胞系中，AP24534 抑制 FGFR 介导的信号传导（IC50 小于 40 nM），并抑制细胞生长（IC50） 7 nM–181 nM。激酶测定：使用合成肽底物（Abltide：EAIYAPFAKKK）评估 AP24534 (0-320 nM) 对 GST-Abl 激酶活性的影响。测定在 25 μL 反应混合物中于 30 °C 进行 15 分钟：8 mM MOPS (pH 7)、0.2 mM EDTA、50 μM Abltide、30 mM MgCl2、10 mM β-磷酸甘油、1 mM EGTA、0.002% Brij-35、0.4 mM DTT、0.2 mg/mL BSA、0.4 mM 原钒酸钠、10 nM WT 或突变型 GST-Abl 激酶和 100 µM ATP/γ-32[P]ATP (5000 cpm/pmol)。通过将一部分反应混合物转移到p81磷酸纤维素过滤器上并浸入0.75%磷酸中来终止反应。过滤器用0.75%磷酸洗涤3次，用丙酮漂洗，风干；磷酸盐的掺入通过闪烁计数来测定。所有结果均针对与过滤器的背景结合进行校正，这是通过从激酶反应中省略肽底物来确定的。在激酶测定之前进行时间进程实验以确定酶活性的线性范围。细胞测定：Ba/F3 细胞系分布于 96 孔板（4 × 103 个细胞/孔）中，并与 AP24534 一起孵育 72 小时。使用基于甲硫基磺酸盐 (MTS) 的活力测定（CellTiter96 Aqueous One Solution）测量增殖。所有值均针对不含药物的对照孔进行归一化。 IC 50 值报告为一式四份进行的三个独立实验的平均值。

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普纳替尼盐酸盐（AP24534）在细胞和生化实验中可抑制所有测试的BCR-ABL突变体。体外[γ-³²P]-ATP自磷酸化实验显示，其可抑制全长ABL和ABL^T315I激酶的自磷酸化，而伊马替尼、尼罗替尼和达沙替尼对ABL^T315I无此抑制效果。在表达野生型BCR-ABL或BCR-ABL^T315I的Ba/F3细胞中，药物处理4小时可抑制CrkL磷酸化（BCR-ABL活性标志物）。对原代CML细胞，其可抑制携带野生型BCR-ABL或BCR-ABL^T315I的CML患者单核细胞增殖，抑制BCR-ABL^T315I阳性原代CML细胞的CrkL磷酸化和整体酪氨酸磷酸化；在ENU处理的Ba/F3细胞诱变筛选中，单药可完全抑制耐药克隆的生长 [1]
普纳替尼盐酸盐（AP24534）以低纳摩尔IC50抑制野生型BCR-ABL和BCR-ABL^T315I突变体的激酶活性，并有效抑制相应Ba/F3衍生细胞系的增殖 [2]
普纳替尼盐酸盐（AP24534）处理AML细胞系（MV4-11、Kasumi-1、KG1、EOL1）1小时，可抑制FLT3、KIT、FGFR1和PDGFRα的磷酸化；72小时MTS实验显示，其抑制细胞活力的IC50为0.3~20 nmol/L。在MV4-11（FLT3-ITD^+/+）细胞中，浓度<10 nmol/L时可诱导凋亡，表现为caspase-3/7活性升高、p-STAT5水平降低及PARP切割；对RS4;11（FLT3-ITD^-/-）细胞无上述作用。其对原代FLT3-ITD阳性AML母细胞的活力抑制IC50为4 nmol/L，对表达野生型FLT3的原代AML细胞无抑制效果 [3]
普纳替尼盐酸盐（AP24534）在工程化表达激活型FGFR1-4的Ba/F3细胞中，抑制FGFR介导的信号和细胞活力的IC50<40 nmol/L，且对亲本Ba/F3细胞具有显著选择性。在14种FGFR失调的肿瘤细胞系（子宫内膜癌、膀胱癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌）中，其抑制FGFR信号的IC50<40 nmol/L，抑制细胞生长的GI50为7~181 nmol/L [4]

在表达天然 Bcr-Abl 的 Ba/F3 细胞的小鼠异种移植模型中，AP24534（2.5 mg/kg 和 5 mg/kg）可延长小鼠的中位生存期。在 Ba/F3 Bcr-AblT315I 的异种移植模型中，AP24534 (10 mg/kg–50 mg/kg) 显着抑制肿瘤生长。 AP24534 (30 mg/kg) 降低肿瘤中磷酸化 Bcr-Abl 和磷酸化 CrkL 水平。

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给尾静脉注射野生型BCR-ABL或BCR-ABL^T315I Ba/F3细胞的SCID小鼠口服普纳替尼盐酸盐（AP24534）（第3~21天每日灌胃），可显著延长小鼠生存期。在BCR-ABL^T315I Ba/F3细胞皮下移植模型中，每日口服AP24534持续19天，可剂量依赖性降低肿瘤体积（与载体组相比有统计学意义）；单次口服30 mg/kg AP24534可抑制肿瘤组织中BCR-ABL和CrkL的磷酸化 [1]
给尾静脉注射BCR-ABL^T315I Ba/F3细胞的SCID小鼠每日口服普纳替尼盐酸盐（AP24534），可显著延长小鼠生存期 [2]
在MV4-11（FLT3-ITD^+/+）异种移植模型中，小鼠每日口服普纳替尼盐酸盐（AP24534）1、2.5、5、10、25 mg/kg，持续4周，可剂量依赖性抑制FLT3信号并使肿瘤消退。单次口服给药后6小时，可抑制肿瘤组织中FLT3和STAT5的磷酸化，且血浆药物浓度与抑制效果相关 [3]
给携带FGFR扩增/突变肿瘤异种移植物的小鼠每日口服普纳替尼盐酸盐（AP24534）10~30 mg/kg，可抑制肿瘤生长并阻断FGFR介导的信号 [4]

AP24534 (0-320 nM) 对 GST-Abl 激酶活性的影响是用合成肽底物 (Abltide: EAIYAPFAKKK) 测量的。在 25 μL 反应混合物中，在 30 °C 下进行检测 15 分钟。使用以下物质：8 mM MOPS (pH 7)、0.2 mM EDTA、50 μM Abltide、30 mM MgCl₂、10 mM β-磷酸甘油、1 mM EGTA、0.002% Brij-35、 0.4 mM DTT、0.2 mg/mL BSA、0.4 mM 原钒酸钠、10 nM WT 或突变型 GST-Abl 激酶和 100 µM ATP/γ-³²[P]ATP (5000 cpm/pmol) 。将部分反应混合物转移到 p81 磷酸纤维素过滤器上并将其浸入 0.75% 磷酸中，从而终止反应。将过滤器风干并在 0.75% 磷酸中清洗 3 次后，使用闪烁计数评估磷酸盐的掺入量。从激酶反应中去除肽底物后，所有数据均针对与过滤器的背景结合进行调整。首先进行激酶实验，然后进行时间过程研究以确定酶活性的线性范围。

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ABL及ABL^T315I激酶自磷酸化实验：将去酪氨酸磷酸化的全长ABL或ABL^T315I酶与普纳替尼盐酸盐（AP24534）、伊马替尼、尼罗替尼或达沙替尼共同孵育，同时加入[γ-³²P]-ATP；反应产物经SDS-PAGE分离后，通过放射自显影检测激酶磷酸化的信号强度，以此评估化合物的抑制效果 [1]

Ba/F3 细胞系排列在 96 孔板中（4 × 10³ 细胞/孔），并与 AP24534 一起孵育 72 小时。基于甲硫代磺酸盐 (MTS) 的活力测定（CellTiter96 Aqueous One Solution）用于测量增殖。每个值都与不含药物的对照孔进行比较。三个独立的四次实验的平均值用于报告 IC50 值。

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1. CrkL磷酸化检测实验：将表达野生型BCR-ABL或BCR-ABL^T315I的Ba/F3细胞用普纳替尼盐酸盐（AP24534）或其他抑制剂处理4小时，收集并裂解细胞，通过免疫印迹检测CrkL磷酸化水平；利用电泳迁移率分离磷酸化和非磷酸化CrkL，通过密度定量磷酸化CrkL的比例 [1]
2. 原代CML细胞增殖实验：分离CML患者（野生型BCR-ABL或BCR-ABL^T315I）和健康人的单核细胞，体外用普纳替尼盐酸盐（AP24534）处理后检测细胞活力，以相对于未处理细胞的50%细胞活力为参考阈值 [1]
3. 整体酪氨酸磷酸化流式检测实验：将携带BCR-ABL^T315I的原代CML单核细胞用抑制剂过夜处理，固定并通透后，加入FITC标记的磷酸酪氨酸抗体；通过流式细胞术检测平均荧光强度，以相对于未染色对照组的倍数表示 [1]
4. 诱变筛选实验：将ENU处理的表达野生型BCR-ABL或BCR-ABL^T315I的Ba/F3细胞在不同浓度的普纳替尼盐酸盐（AP24534）中培养，回收耐药克隆并分析亚克隆中BCR-ABL激酶域突变的比例 [1]
5. AML细胞系激酶磷酸化及活力实验：将AML细胞系（MV4-11、Kasumi-1等）用不同浓度的普纳替尼盐酸盐（AP24534）处理1小时，裂解后免疫印迹检测磷酸化和总激酶水平；处理72小时后，采用MTS法检测细胞活力 [3]
6. MV4-11细胞凋亡实验：将MV4-11细胞用不同浓度的普纳替尼盐酸盐（AP24534）处理，在指定时间点检测caspase-3/7活性（以相对于载体处理组的倍数表示）；处理24小时后裂解细胞，免疫印迹检测p-STAT5、总PARP和切割型PARP [3]
7. 原代AML母细胞活力实验：分离AML患者（FLT3-ITD阳性/阴性）的原代白血病母细胞，用普纳替尼盐酸盐（AP24534）处理72小时，通过MTS法检测细胞活力并归一化至未处理组 [3]
8. FGFR工程化Ba/F3细胞实验：将工程化表达激活型FGFR1-4的Ba/F3细胞用普纳替尼盐酸盐（AP24534）处理，检测FGFR信号（磷酸化）和细胞活力 [4]

表达 Bcr-Abl 或 Bcr-Abl^T315I 的 Ba/F3 细胞小鼠异种移植模型
Ba/F3 Bcr-Abl 的剂量为 2.5 mg/kg 和 5 mg/kg；Ba/F3 Bcr-Abl^T315I 的剂量为 2.5 mg/kg–50 mg/kg
每日一次灌胃给药

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1. SCID 小鼠尾静脉注射模型：将表达天然 BCR-ABL 或 BCR-ABL^T315I 的 Ba/F3 细胞注射到 SCID 小鼠的尾静脉中。注射后第3至21天，小鼠每天灌胃一次，分别给予赋形剂、盐酸帕纳替尼（AP24534）或达沙替尼，并监测其生存情况[1]
2. Ba/F3 BCR-ABL^T315I皮下异种移植模型：荷瘤SCID小鼠每天灌胃一次，分别给予赋形剂或不同剂量的盐酸帕纳替尼（AP24534），连续19天。测量并绘制平均肿瘤体积（附标准误）。为了进行信号分析，小鼠被给予单次口服剂量 30 mg/kg AP24534，并收集肿瘤组织进行 BCR-ABL 和 CrkL 磷酸化的免疫印迹分析 [1]
3. MV4-11 异种移植模型：当小鼠侧腹 MV4-11 异种移植肿瘤达到约 200 mm³ 时，小鼠每天一次口服灌胃给予载体或 Ponatinib HCl (AP24534)，剂量分别为 1、2.5、5、10 和 25 mg/kg/d，持续 4 周（每组 10 只小鼠），并记录平均肿瘤体积。单剂量分析中，荷瘤小鼠接受单次口服帕纳替尼（每组4只小鼠），6小时后取出肿瘤，并检测磷酸化FLT3/STAT5和血浆药物浓度[3]
4. FGFR驱动的癌症异种移植模型：荷FGFR扩增或突变肿瘤异种移植的小鼠每日一次灌胃给予帕纳替尼盐酸盐（AP24534），剂量为10-30 mg/kg。监测肿瘤生长，并通过免疫印迹分析肿瘤组织中FGFR介导的信号通路[4]

盐酸帕纳替尼 (AP24534) 具有良好的 ADME 特性 [2]
在荷瘤小鼠单次口服 盐酸帕纳替尼 (AP24534) 后，测定了血浆中帕纳替尼的浓度，并将其与肿瘤组织中 FLT3 磷酸化的抑制作用相关联 [3]
在患者体内，血浆中 盐酸帕纳替尼 (AP24534) 的浓度可以维持在高于 FGFR1-4 抑制 IC50 值的水平 [4]

[1]. Cancer Cell . 2009 Nov 6;16(5):401-12.

[2]. J Med Chem . 2010 Jun 24;53(12):4701-19.

[3]. Mol Cancer Ther . 2011 Jun;10(6):1028-35.

[4]. Mol Cancer Ther . 2012 Mar;11(3):690-9.

[5]. Blood . 2004 Oct 15;104(8):2532-9.

盐酸帕纳替尼是帕纳替尼的盐酸盐。它是一种强效的泛酪氨酸激酶抑制剂，对所有单链耐药的ABL激酶突变均有效，包括T315I突变。它已获批用于治疗慢性粒细胞白血病。它具有抗肿瘤和酪氨酸激酶抑制的双重作用。它含有帕纳替尼(1+)结构域。
盐酸帕纳替尼是一种口服生物利用度高的多靶点受体酪氨酸激酶(RTK)抑制剂的盐酸盐形式，具有潜在的抗血管生成和抗肿瘤活性。帕纳替尼可抑制未突变和所有突变形式的Bcr-Abl，包括T315I，即Bcr-Abl高度耐药的错义突变。该药物还能抑制其他酪氨酸激酶，包括与血管内皮生长因子受体 (VEGFR) 和成纤维细胞生长因子受体 (FGFR) 相关的酪氨酸激酶；此外，它还能抑制酪氨酸激酶受体 TIE2 和 FMS 相关酪氨酸激酶受体 3 (Flt3)。帕纳替尼对 RTK 的抑制作用可能导致细胞增殖和血管生成受到抑制，并可能诱导细胞死亡。Bcr-Abl 是由费城染色体编码的融合酪氨酸激酶。
另见：帕纳替尼（具有活性部分）。

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盐酸帕纳替尼 (AP24534) 是一种强效的口服多靶点激酶抑制剂，旨在克服基于 T315I 突变的 BCR-ABL 抑制剂耐药性。关键的结构特征是碳碳三键连接基，它绕过了T315I突变体中Ile315侧链体积增大的部分。其临床前疗效支持作为泛BCR-ABL抑制剂用于治疗慢性粒细胞白血病（CML）的临床评估[1]
盐酸帕纳替尼 (AP24534) 是通过结构导向设计和广泛的构效关系研究发现的，其中碳碳三键连接基对其对抗BCR-ABL^T315I突变体的活性至关重要。它具有强大的口服活性，是治疗慢性粒细胞白血病 (CML) 的一种有前景的候选药物，包括对目前已批准疗法无效的患者 [2]
除了抑制 BCR-ABL 外，Ponatinib HCl (AP24534) 还能有效靶向 FLT3（尤其是 FLT3-ITD）、KIT、FGFR1 和 PDGFRα，使其成为 FLT3-ITD 驱动的急性髓系白血病 (AML) 和其他由这些激酶驱动的血液系统恶性肿瘤的潜在治疗药物 [3]
Ponatinib HCl (AP24534) 是一种强效的泛 FGFR 抑制剂，在多种 FGFR 扩增或突变的癌症模型（子宫内膜癌、膀胱癌、胃癌、乳腺癌、肺癌、结肠癌）中均显示出活性。其在FGFR驱动模型中的效力与在BCR-ABL驱动模型中的效力相当，支持对其进行在FGFR驱动型癌症患者中的评估[4]

C29H28CLF3N6O

569.03

568.196

C, 61.21; H, 4.96; Cl, 6.23; F, 10.02; N, 14.77; O, 2.81

1114544-31-8

Ponatinib;943319-70-8

46908927

Off-white to light yellow solid powder

5.206

65.77

2

8

6

40

910

0

Cl.CN1CCN(CC2=CC=C(NC(C3=CC=C(C)C(C#CC4=CN=C5C=CC=NN45)=C3)=O)C=C2C(F)(F)F)CC1

BWTNNZPNKQIADY-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C29H27F3N6O.ClH/c1-20-5-6-22(16-21(20)8-10-25-18-33-27-4-3-11-34-38(25)27)28(39)35-24-9-7-23(26(17-24)29(30,31)32)19-37-14-12-36(2)13-15-37;/h3-7,9,11,16-18H,12-15,19H2,1-2H3,(H,35,39);1H

3-(2-imidazo[1,2-b]pyridazin-3-ylethynyl)-4-methyl-N-[4-[(4-methylpiperazin-1-yl)methyl]-3-(trifluoromethyl)phenyl]benzamide;hydrochloride

AP-24534 HCl; AP24534; AP 24534 HCl; Trade name: Iclusig

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL (for HCl salt)

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。