VEGFR2 (IC50 = 1.5 nM); FGFR1 (IC50 = 2.2 nM); PDGFRα (IC50 = 1.1 nM); Abl (IC50 = 0.37 nM); LYN (IC50 = 0.24 nM); Src (IC50 = 5.4 nM)

体外活性：AP24534 有效抑制天然 Abl、AblT315I 和其他临床上重要的 Abl 激酶结构域突变体，IC50 为 0.30 nM–2 nM。 AP24534 不抑制极光激酶家族成员，也不抑制胰岛素受体或 CDK2/细胞周期蛋白 E。 AP24534 抑制表达 Bcr-Abl 的 Ba/F3 细胞的增殖，IC50 为 0.5 nM，以及表达一系列 Bcr 的 Ba/F3 细胞的增殖-Abl 突变体，IC50 为 0.5 nM–36 nM。 AP24534 对增殖的抑制与细胞凋亡的诱导相关。在含有激活形式的 FLT3、KIT、FGFR1 和 PDGFRα 受体的白血病细胞系中，AP24534 有效抑制受体磷酸化和细胞增殖，IC50 为 0.3 nM 至 20 nM。在 MV4-11 (FLT3-ITD(+/+)) 但不是 RS4;11 (FLT3-ITD(–/–)) AML 细胞中，AP24534 在低于 10 nM 的浓度下抑制 FLT3 信号传导并诱导细胞凋亡。 AP24534 抑制 FLT3-ITD 阳性 AML 患者原发性白血病母细胞的活力，IC50 为 4 nM，但不抑制表达天然 FLT3 的 AML 患者的原发性白血病母细胞的活力。在表达活化 FGFR1-4 的 Ba/F3 细胞中，AP24534 有效抑制 FGFR 介导的信号传导和活力，IC50 低于 40 nM。在代表多种肿瘤类型（子宫内膜、膀胱、胃、乳腺癌、肺和结肠）且含有因多种机制失调的 FGFR 的细胞系中，AP24534 抑制 FGFR 介导的信号传导（IC50 小于 40 nM），并抑制细胞生长（IC50） 7 nM–181 nM。激酶测定：使用合成肽底物（Abltide：EAIYAPFAKKK）评估 AP24534 (0-320 nM) 对 GST-Abl 激酶活性的影响。测定在 25 μL 反应混合物中于 30 °C 进行 15 分钟：8 mM MOPS (pH 7)、0.2 mM EDTA、50 μM Abltide、30 mM MgCl2、10 mM β-磷酸甘油、1 mM EGTA、0.002% Brij-35、0.4 mM DTT、0.2 mg/mL BSA、0.4 mM 原钒酸钠、10 nM WT 或突变型 GST-Abl 激酶和 100 µM ATP/γ-32[P]ATP (5000 cpm/pmol)。通过将一部分反应混合物转移到p81磷酸纤维素过滤器上并浸入0.75%磷酸中来终止反应。过滤器用0.75%磷酸洗涤3次，用丙酮漂洗，风干；磷酸盐的掺入通过闪烁计数来测定。所有结果均针对与过滤器的背景结合进行校正，这是通过从激酶反应中省略肽底物来确定的。在激酶测定之前进行时间进程实验以确定酶活性的线性范围。细胞测定：Ba/F3 细胞系分布于 96 孔板（4 × 103 个细胞/孔）中，并与 AP24534 一起孵育 72 小时。使用基于甲硫基磺酸盐 (MTS) 的活力测定（CellTiter96 Aqueous One Solution）测量增殖。所有值均针对不含药物的对照孔进行归一化。 IC 50 值报告为一式四份进行的三个独立实验的平均值。

在表达天然 Bcr-Abl 的 Ba/F3 细胞的小鼠异种移植模型中，AP24534（2.5 mg/kg 和 5 mg/kg）可延长小鼠的中位生存期。在 Ba/F3 Bcr-AblT315I 的异种移植模型中，AP24534 (10 mg/kg–50 mg/kg) 显着抑制肿瘤生长。 AP24534 (30 mg/kg) 降低肿瘤中磷酸化 Bcr-Abl 和磷酸化 CrkL 水平。

AP24534 (0-320 nM) 对 GST-Abl 激酶活性的影响是用合成肽底物 (Abltide: EAIYAPFAKKK) 测量的。在 25 μL 反应混合物中，在 30 °C 下进行检测 15 分钟。使用以下物质：8 mM MOPS (pH 7)、0.2 mM EDTA、50 μM Abltide、30 mM MgCl₂、10 mM β-磷酸甘油、1 mM EGTA、0.002% Brij-35、 0.4 mM DTT、0.2 mg/mL BSA、0.4 mM 原钒酸钠、10 nM WT 或突变型 GST-Abl 激酶和 100 µM ATP/γ-³²[P]ATP (5000 cpm/pmol) 。将部分反应混合物转移到 p81 磷酸纤维素过滤器上并将其浸入 0.75% 磷酸中，从而终止反应。将过滤器风干并在 0.75% 磷酸中清洗 3 次后，使用闪烁计数评估磷酸盐的掺入量。从激酶反应中去除肽底物后，所有数据均针对与过滤器的背景结合进行调整。首先进行激酶实验，然后进行时间过程研究以确定酶活性的线性范围。

Ba/F3 细胞系排列在 96 孔板中（4 × 10³ 细胞/孔），并与 AP24534 一起孵育 72 小时。基于甲硫代磺酸盐 (MTS) 的活力测定（CellTiter96 Aqueous One Solution）用于测量增殖。每个值都与不含药物的对照孔进行比较。三个独立的四次实验的平均值用于报告 IC50 值。

Mouse xenograft models of Ba/F3 cells expressing Bcr-Abl or Bcr-Abl^T315I
2.5 mg/kg and 5 mg/kg for Ba/F3 Bcr-Abl; 2.5 mg/kg–50 mg/kg for Ba/F3 Bcr-Abl^T315I
Oral gavage once daily

[1]. Cancer Cell . 2009 Nov 6;16(5):401-12.

[2]. J Med Chem . 2010 Jun 24;53(12):4701-19.

[3]. Mol Cancer Ther . 2011 Jun;10(6):1028-35.

[4]. Mol Cancer Ther . 2012 Mar;11(3):690-9.

[5]. Blood . 2004 Oct 15;104(8):2532-9.

C29H28CLF3N6O

569.03

568.1965217

C, 61.21; H, 4.96; Cl, 6.23; F, 10.02; N, 14.77; O, 2.81

1114544-31-8

Ponatinib;943319-70-8

Solid powder

CC1=C(C=C(C=C1)C(=O)NC2=CC(=C(C=C2)CN3CCN(CC3)C)C(F)(F)F)C#CC4=CN=C5N4N=CC=C5.Cl

BWTNNZPNKQIADY-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C29H27F3N6O.ClH/c1-20-5-6-22(16-21(20)8-10-25-18-33-27-4-3-11-34-38(25)27)28(39)35-24-9-7-23(26(17-24)29(30,31)32)19-37-14-12-36(2)13-15-37;/h3-7,9,11,16-18H,12-15,19H2,1-2H3,(H,35,39);1H

3-(2-imidazo[1,2-b]pyridazin-3-ylethynyl)-4-methyl-N-[4-[(4-methylpiperazin-1-yl)methyl]-3-(trifluoromethyl)phenyl]benzamide;hydrochloride

AP-24534 HCl; AP24534; AP 24534 HCl; Trade name: Iclusig

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Solubility in Formulation 1: ≥ 2.5 mg/mL (4.39 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL PEG300 and mix evenly; then add 50 μL Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL normal saline to adjust the volume to 1 mL.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 2: ≥ 2.5 mg/mL (4.39 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of 20% SBE-β-CD physiological saline solution and mix evenly.
Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 3: ≥ 2.5 mg/mL (4.39 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of corn oil and mix evenly.

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Solubility in Formulation 4: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30mg/mL (for HCl salt)

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。