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PRN694

别名: PRN 694 PRN-694 PRN694 PRN694
目录号: V13140 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
PRN694 (PRN-694) 是一种新型、高选择性、不可逆/共价双重抑制剂，白介素 2 诱导型 T 细胞激酶 (ITK) 和静息淋巴细胞激酶 (RLK) 的 IC50 分别为 0.3 nM 和 1.4 nM。
PRN694 CAS号: 1575818-46-0
产品类别: New1
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
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InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
PRN694 (PRN-694 ) 是一种新型、高选择性、不可逆/共价双重抑制剂，白介素 2 诱导型 T 细胞激酶 (ITK) 和静息淋巴细胞激酶 (RLK) 的 IC50 分别为 0.3 nM 和 1.4 nM 。 PRN694 在 ITK 和 RLK 上表现出延长的目标停留时间，从而实现效应细胞在体外和体内的持久衰减
生物活性&实验参考方法
体外研究 (In Vitro)
PRN694 对 TEC、BTK、BMX、BLK 和 JAK3 抑制的 IC50 值分别为 3.3、17、17、125 和 30 nM[1]。根据 TCR 激活途径的免疫印迹研究，PRN694 可阻止 NFAT1、JunB、pIκBα 和 pERK 激活或移动至细胞核。研究结果表明，PRN694 在所有高于 1 nM 的剂量下都会抑制 Ca2+ 信号传导。当 PRN694 的添加量高于 0.37 μM 时，可显着减少 FcR 引起的 NK 细胞死亡[1]。第 6 天流式细胞术分析表明，PRN694 显着 (p<0.01) 抑制抗 CD3/CD28 产生的 CD4 和 CD8 T 细胞的增殖[1]。
体内研究 (In Vivo)
在 1、6 和 14 小时，ITK 的 PRN694 占用率分别为 98%、95% 和 54%。 14小时时PRN694的血浆水平比全血IC50低十倍以上。此外，经 RN694 处理的重量远低于车辆重量 (p<0.05)[1]。 ?结肠炎研究表明，PRN694 治疗小鼠的结肠上皮中 CD4+ T 细胞数量少于对照小鼠[2]。
酶活实验
将终浓度为 0.5 μM 的重组 ITK 溶解于 50 mM Hepes、pH 7.5、10 mM MgCl2、0.01% Triton X-100 和 1 mM EGTA 中，与 1.5 μM PRN694 混合 90 分钟以促进结合。然后将混合物稀释 50 倍以启动配体与酶的解离，并将 10 μL 转移至 Greiner 384 孔黑色板中。将铕偶联的抗-His6 抗体添加到每个孔中并孵育 5 分钟，然后添加 ITK 结合荧光示踪剂。示踪剂与 ITK 的结合是配体解离的函数，并且通过铕偶联抗体与读板器上的示踪剂之间的时间分辨 FRET 来检测结合。获取的时间点为 0.25、1、3、6 和 24 小时[1]。
细胞实验
使用 RPMI 1640 和 10% 胎牛血清在 37°C 和 5% CO2 下体外培养细胞。用 PRN694 或其他抑制剂预处理细胞 30 分钟，然后洗涤两次。然后用 1 μg/mL 可溶性抗 CD3 刺激 T 细胞 6 小时，以激活 CD69（通过流式细胞术检测），或用板结合抗 CD3（10 μg/mL 电镀浓度）和可溶性抗 CD 刺激 45 分钟。 -CD28 (1 μg/mL)，用于通过免疫印迹进行下游信号分析。用板结合的抗 CD52 刺激 NK 细胞 6 小时，以激活 CD107a/b，通过流式细胞术检测，或刺激 45 分钟，通过免疫印迹进行下游信号分析[1]。
参考文献

[1]. Targeting interleukin-2-inducible T-cell kinase (ITK) and resting lymphocyte kinase (RLK) using a novel covalent inhibitor PRN694. J Biol Chem. 2015 Mar 6;290(10):5960-78.

[2]. A Small Molecule Inhibitor of ITK and RLK Impairs Th1 Differentiation and Prevents Colitis Disease Progression. J Immunol. 2015 Nov 15;195(10):4822-31.
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C28H35F2N5O2S
分子量
543.67
精确质量
543.247
CAS号
1575818-46-0
PubChem CID
90044055
外观&性状
Off-white to light brown solid powder
密度
1.3±0.1 g/cm3
沸点
679.8±65.0 °C at 760 mmHg
闪点
364.9±34.3 °C
蒸汽压
0.0±2.1 mmHg at 25°C
折射率
1.619
LogP
3.92
tPSA
108
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
7
可旋转键数目(RBC)
10
重原子数目
38
分子复杂度/Complexity
856
定义原子立体中心数目
2
SMILES
C[C@@H](C(C)(C)C)NCC1=CC2=C(C=C1)N(C(=N2)NC(=O)C3=CC=C(S3)C(F)F)C[C@H]4CCCN4C(=O)C=C
InChi Key
NXTKFBGDLDPFLB-PKOBYXMFSA-N
InChi Code
InChI=1S/C28H35F2N5O2S/c1-6-24(36)34-13-7-8-19(34)16-35-21-10-9-18(15-31-17(2)28(3,4)5)14-20(21)32-27(35)33-26(37)23-12-11-22(38-23)25(29)30/h6,9-12,14,17,19,25,31H,1,7-8,13,15-16H2,2-5H3,(H,32,33,37)/t17-,19+/m0/s1
化学名
5-(difluoromethyl)-N-[5-[[[(2S)-3,3-dimethylbutan-2-yl]amino]methyl]-1-[[(2R)-1-prop-2-enoylpyrrolidin-2-yl]methyl]benzimidazol-2-yl]thiophene-2-carboxamide
别名
PRN 694 PRN-694 PRN694
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~125 mg/mL (~229.92 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。
配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。
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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.83 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.8394 mL 9.1968 mL 18.3935 mL
5 mM 0.3679 mL 1.8394 mL 3.6787 mL
10 mM 0.1839 mL 0.9197 mL 1.8394 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

生物数据图片

  • Structure-based design and selectivity of the novel ITK/RLK inhibitor PRN694. A, chemical structure of PRN694. B, model of PRN694 covalently bound to ITK. Molecular modeling predicts that the aminobenzimidazole scaffold makes two hydrogen bonds to the backbone amides of the hinge residues of the ATP binding pocket. The CF2-thiophene was found to provide high potency for either a phenylalanine or threonine gatekeeper residue. A methylpyrolidine linker presents the acrylamide in a position easily accessible for covalent bond formation with Cys-442. C, the dissociation of reversible versus irreversible inhibitors. Ligand binding to ITK as a function of time (hours) in a biochemical off-rate assay utilizing time-resolved FRET was determined as described under “Experimental Procedures.” The completely reversible inhibitor BMS-509744 demonstrated extremely rapid dissociation from ITK (residence time (τ) = 32 ± 17 min), whereas PRN694 remained bound to ITK for the entire assay period, consistent with its irreversible covalent binding. D, the in vitro selectivity and potency of PRN694 against a panel of 250 kinases. Screening of PRN694 was performed at 0.1 and 1.0 μm. The results are displayed on a human kinase dendrogram (reproduced courtesy of Cell Signaling Technology, Inc.). [1].Targeting interleukin-2-inducible T-cell kinase (ITK) and resting lymphocyte kinase (RLK) using a novel covalent inhibitor PRN694. J Biol Chem. 2015 Mar 6;290(10):5960-78.

  • PRN694 blocks cellular and molecular activation of T-lymphocytes and the Jurkat T-ALL cell line. A, gating strategy for flow cytometric analysis of CD69 surface expression in Jurkat cells. Singlet live lymphocytes were gated for CD69 surface expression in Jurkat cells. Jurkat cells (n = 4) (B), human primary CD4 T-cells (n = 6) (C), or human primary CD8 T-cells (n = 4) (D) were pretreated for 30 min with PRN694, BMS-509744, or PRN403 at the indicated doses or vehicle (DMSO), subjected to stimulation with anti-CD3/anti-CD28 for 6 h, and analyzed via flow cytometry for CD69 surface expression. Baseline (unstimulated) CD69 percentage was subtracted, and data were normalized to stimulated and vehicle-treated sample. Jurkat cells (E) or CD3 T-cells (F) isolated from healthy donors were pretreated with vehicle (DMSO), PRN694, BMS-509744, or PRN403 at the indicated doses and stimulated with anti-CD3/anti-CD28 for 6 h. Cell viability was evaluated by flow cytometry using LIVE/DEAD® stain (Invitrogen). Nuclear (G) or cytoplasmic (H) extracts from Jurkat cells pretreated for 30 min with 0.5 μm PRN694, 0.5 μm BMS-509744, 0.5 μm PRN403, 4 μm ibrutinib, or vehicle (DMSO) and stimulated with anti-CD3/anti-CD28 for 45 min were analyzed by immunoblot. Antibodies to actin, lamin B, and GAPDH were included as controls for nuclear versus cytoplasmic extractions. Data are representative of three experiments. For immunoblots G and H, densitometric ratios between phosphoprotein and total or loading control are provided. Error bars, S.E.[1].Targeting interleukin-2-inducible T-cell kinase (ITK) and resting lymphocyte kinase (RLK) using a novel covalent inhibitor PRN694. J Biol Chem. 2015 Mar 6;290(10):5960-78.

  • TCR-proximal signaling is irreversibly blocked by PRN694, abrogating downstream pathway activation. A and B, freshly isolated primary CD4 T-cells were preincubated with vehicle (DMSO) or PRN694 (0.5 μm) and then stimulated for 45 min with anti-CD3/anti-CD28 antibodies. Nuclear extracts (A) or cytoplasmic extracts (B) were analyzed by immunoblot with the indicated antibodies. C and D, freshly isolated primary CD8 T-cells were treated as described for CD4 cells, and nuclear (C) and cytoplasmic (D) extracts were analyzed by immunoblot. E, Jurkat cells were pretreated with 25 nm PRN694 or vehicle, labeled with Fluo4AM, and then stimulated by the addition of anti-CD3 indicated by an arrow. Calcium flux was measured using the intensity of Fluo-AM measured over 5 min following the addition of anti-CD3. The graph shows cumulative data from 12 replicates conducted over two separate experiments. F, Jurkat cells were pretreated with PRN694 (1 nm to 1 μm), vehicle (DMSO), or BAPTA-AM (13 μm); labeled with Fluo4AM; and then stimulated by the addition of anti-CD3. Calcium flux was measured using the intensity of Fluo-AM measured over 5 min following the addition of anti-CD3. The graph shows the area under the fluorescent intensity/time curve. G and H, Jurkat cells were pretreated with 0.5 μm PRN694 or vehicle (DMSO) and then stimulated either with anti-CD3/anti-CD28 or 50 ng/ml phorbol 12-myristate 13-acetate plus 1 μg/ml ionomycin for 45 min. Nuclear (G) and cytoplasmic (H) extracts were analyzed by immunoblot. For immunoblots A, B, C, D, G, and H, densitometric ratios between phosphoprotein and total or loading control are provided. Error bars, S.E.[1].Targeting interleukin-2-inducible T-cell kinase (ITK) and resting lymphocyte kinase (RLK) using a novel covalent inhibitor PRN694. J Biol Chem. 2015 Mar 6;290(10):5960-78.
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