Cytochrome P450 (IC50 = 19 μM)

N、 N-二甲基色胺（DMT）是一种迷幻化合物，在治疗抑郁症方面显示出潜力。除了单胺氧化酶A（MAO-A）在DMT代谢中的主要作用外，人们对代谢途径知之甚少。提高这种认识是确保安全有效地使用DMT的一个重要方面。本研究旨在通过将DMT与重组人CYP酶和人肝微粒体（HLM）孵育，然后使用高分辨率质谱进行代谢物鉴定分析，来研究细胞色素450（CYP）介导的DMT代谢。DMT被CYP2D6快速代谢，而与所有其他研究的CYP酶稳定。在HLM中加入去氢骆驼蓬碱和Proadifen后，DMT的代谢减少，而奎尼丁不影响代谢率，这可能是由于HLM中存在MAO-A残基。CYP2D6孵育物的分析表明，单氧、二氧和三氧代谢物的形成可能是吲哚核心羟基化的结果。需要更多的研究来调查这种代谢途径在体内的作用以及拟议代谢物的任何药理活性。我们的研究结果可能会影响CYP2D6代谢缓慢者服用死藤水或同时使用CYP2D6抑制剂后的安全问题。[2]

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实验性抗肿瘤药物N-[（2'-二甲氨基）乙基]吖啶-4-甲酰胺（AC；NSC 601316；吖啶甲酰胺）氧化为9（10H）吖啶酮，然后进行环羟基化和葡萄糖醛酸化，似乎是AC在大鼠和小鼠体内解毒的主要途径。吖啶酮的形成已在体外使用富含酶的组分进行了进一步表征，其中每毫克蛋白质的活性比细胞质组分增加了约10倍。安吖啶[4'-（9-吖啶基氨基）甲磺酰间茴香醚；NSC 249992]和甲萘醌（分别在6.4和1.8微m下抑制50%）但别嘌呤醇（至30微m）的抑制表明，该活性是由醛氧化酶引起的，不涉及黄嘌呤氧化酶。有趣的是，在细胞质和富含酶的组分中，吖啶酮的形成对经典的细胞色素P450抑制剂Proadifen高度敏感[Proadifen/SKF-525A[盐酸丙啶；2'-（二乙氨基）乙基2,2-二苯基戊烯酸乙酯]（分别在9.2和1.9微M下抑制50%）。进一步的分析表明，Proadifen/SKF-525A（K（is），0.3微M；K（ii）、4.9微米）。西咪替丁、美曲普龙或甲巯咪唑几乎没有抑制作用。微粒体部分没有观察到NADPH依赖性吖啶酮的形成。这些数据表明，之前在分离的大鼠肝细胞和体内观察到的吖啶酮形成最有可能是由于醛氧化酶而不是细胞色素P450[3]。

本研究旨在探讨细胞色素P450抑制剂盐酸普罗迪芬（SKF525）对血清素神经元兴奋性的影响。在电生理评估前48、24和1小时给成年雄性Wistar大鼠服用SKF525。对照组动物注射生理盐水。用水合氯醛麻醉大鼠，将玻璃电极立体定向插入中缝背核（DRN）。识别血清素神经元并记录其放电活动。发现SKF525抑制5-HT神经元的兴奋性。我们认为皮质酮可能在SKF525诱导的5-HT神经元抑制中起关键作用。[1]

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本研究旨在探讨Proadifen对中枢儿茶酚胺神经元兴奋性的影响。在电生理评估前48、24和1小时给成年雄性Wistar大鼠服用SKF525。对照组动物注射生理盐水。用水合氯醛麻醉大鼠，将玻璃电极插入蓝斑（LC）或腹侧被盖区（VTA）。对LC的去甲肾上腺素神经元和VTA神经元的多巴胺进行了鉴定，并记录了它们的放电活动。研究发现，SKF525增强了去甲肾上腺素的兴奋性，降低了多巴胺神经元的兴奋性。我们认为，皮质酮诱导的5-HT神经元抑制至少部分地强调了SKF525刺激去甲肾上腺素神经元的能力。SKF525对多巴胺神经元的抑制作用可能是该化合物对去甲肾上腺素神经元的刺激作用的次要作用[4]。

HLM中CYP酶的抑制作用[2]
为评估特定CYP酶对DMT代谢的贡献，将DMT（1 µM）与HLM（0.5 mg/mL）及NADPH再生系统（1.3 mM NADP + 3.3 mM葡萄糖-6-磷酸酶 + 3.3 mM氯化镁，0.4 U/mL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶）在磷酸盐缓冲液（100 mM，pH 7.4）中孵育，总体系为1 mL，实验组分别添加奎尼丁（CYP2D6抑制剂）、哈明（MAO-A和CYP2D6抑制剂）或普罗德芬/SKF-525A（广谱CYP抑制剂）。样品于37°C预孵育5分钟后，通过加入HLM启动反应。37°C持续孵育60分钟，分别在0分钟（反应启动前）、5、10、20、30和60分钟时取100 µL aliquots。通过加入含内标DMT-D6（100 nM）和2-Me-IAA（300 nM）的冰乙腈（300 µL）终止反应。样品以10,000×g离心2分钟，上清液转移至新进样瓶，直接分析或于-80°C保存待测。实验重复两次。DMT半衰期计算方法与重组CYP酶孵育实验相同。

成年雄性Wistar大鼠（200–250 g）饲养于温度控制在22–24°C的房间内，光照周期为12:12小时，并可自由摄取食物和水。大鼠到达动物房后适应一周。Proadifen/SKF525溶于生理盐水。为达到CYP酶的稳态抑制，大鼠在进行电生理评估前48小时、24小时和1小时分别腹腔注射三次SKF525（25 mg/kg）。对照组动物采用相同方案注射生理盐水。[1]

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\n\n最后一次注射生理盐水或Proadifen/SKF525后1小时，用氯醛水合物（0.4 g/kg，腹腔注射）麻醉大鼠，并将其固定于立体定位仪上。使用加热垫将大鼠体温维持在37°C。打开头皮，在颅骨上钻一个3 mm的孔，用于插入电极。使用DMZ通用拉丝仪将玻璃微电极拉制成直径约1 μm的细尖，并填充2 M NaCl溶液。电极阻抗范围为7至8 MΩ。使用液压微定位器将微电极插入背侧缝核（DRN），位于前囟后方7.8–8.3 mm，脑表面下方4.5–7.0 mm处（Paxinos和Watson，2014）。根据先前研究中描述的特征，血清素神经元通过其规律的低频（小于 5 Hz）放电率和总持续时间为 2.0–5.0 ms 的正双相或三相动作电位以及去极化和复极化阶段的累积持续时间为 0.8–1.2 ms 的累积持续时间来识别，并使用 Power Lab 数据采集系统和 Lab Chart 软件记录至少两分钟。[1]

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\n\n我们发现，与对照组（2.14 ± 0.14 Hz，来自 8 只大鼠的 97 个神经元）相比，Proadifen/SKF525 给药的大鼠的 5-HT 神经元放电活动显著降低了 18%（p = 0.03，双尾 Student's t 检验；图 1）。每条电极轨迹上自发活跃的5-HT神经元的平均数量在各组间无统计学差异（SKF525组：5.67 ± 0.95；对照组：3.69 ± 0.57；p = 0.08，双尾Student t检验）。作为一种强效的CYP抑制剂，SKF525此前已被报道可提高大鼠血浆皮质酮水平（Magus等，1968）。另一方面，皮质酮可抑制背侧缝核（DRN）5-HT神经元的兴奋性谷氨酸能输入（Wang等，2012）。因此，皮质酮可能至少部分介导了SKF525对脑内5-HT神经元的抑制作用。先前有报道称，通过背侧缝核（DRN）内注射γ-氨基丁酸（GABA）抑制5-羟色胺（5-HT）神经元可诱导小鼠出现抑郁样行为（Xiao et al. 2017）。SKF525对5-HT神经元的部分抑制也可能具有致抑郁作用。事实上，已有报道表明，SKF525可逆转丙咪嗪和地昔帕明在大鼠中的抗抑郁样行为作用（Maj et al. 1981）[1]

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\n\nSKF525/普罗替芬给药[4]
\nSKF525的给药方案与我们之前的研究（Grinchii et al. 2018）中所述相同。SKF525/普罗替芬溶于生理盐水中。为了达到CYP的稳态抑制，大鼠在电生理评估前48小时、24小时和1小时分别接受三次腹腔注射SKF525（25 mg/kg）。对照组动物采用相同方案注射生理盐水。\n

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\n\n电生理评估[4]
\n儿茶酚胺分泌神经元兴奋性的评估方法如我们之前的研究所述（Dremencov等，2017；Koprdova等，2019；Csatlosova等，2021）。在最后一次注射生理盐水或Proadifen/SKF525后1小时，用氯醛水合物（0.4 g/kg，腹腔注射）麻醉大鼠，并将其固定于立体定位仪上。使用加热垫将大鼠体温维持在37°C。切开头皮，在颅骨上钻一个直径为3 mm的孔，用于插入电极。使用DMZ通用拉丝仪将玻璃微电极拉制成直径约1 μm的细尖，并填充2 M NaCl溶液。电极阻抗范围为4至6 MΩ。使用液压微定位器将微电极插入蓝斑核（LC）（位于前囟后方8.0–8.3 mm，中线外侧1.2–1.4 mm，脑表面下方5.5–7.5 mm）或腹侧被盖区（VTA）（位于前囟后方4.5–5.5 mm，中线外侧0.6–0.8 mm，脑表面下方7.0–8.5 mm）（Paxinos和Watson，2014）。电极信号经DP-311差分放大器放大1000倍，使用VDL215EQ2图形均衡器和嗡嗡声消除器滤除低频（~50/60 Hz）谐波，并通过Power Lab 4/35数据采集系统输入至联想B50-35 PC，采样率为100 kHz。采样间隔设置为1 ms。单胺能神经元产生的动作电位使用AD Instruments细胞外记录系统记录。去甲肾上腺素能神经元的特征是：上升期持续时间长，放电频率规律（0.5–5.0 Hz），并且在对侧后爪受到伤害性捏掐刺激时出现特征性的爆发放电（Vandermaelen和Aghajanian，1983）。多巴胺神经元的特征是：持续时间为3至5毫秒的三相动作电位，上升相持续时间超过1.1毫秒，上升相中出现拐点或“凹陷”，显著的负向偏转，不规则的放电频率为0.5至10赫兹，混合的单峰和簇状放电模式，簇状放电中动作电位幅度的特征性下降（Grace和Bunney，1983）。在生理盐水组和Proadifen/SKF525处理组的大鼠中，每个脑区（蓝斑核4次，腹侧被盖区5次）的电极下放次数相同。所有组别动物的所有神经元均记录2分钟。

65341 大鼠口服 LD50 2140 mg/kg，《药理学与实验治疗学杂志》，111(131)，1954 [PMID:13175094]
65341 大鼠腹腔注射 LD50 163 mg/kg，《精神药物及相关化合物》，第 2 版，E. Usdin 和 DH Efron，华盛顿特区，1972，-(366)，1972
65341 小鼠口服 LD50 538 mg/kg，《药理学与实验治疗学杂志》，111(131)，1954 [PMID:13175094]
65341 小鼠腹腔注射 LD50 110 mg/kg，《药物化学杂志》，3(508)， 1969
65341 小鼠 LD50 静脉注射 60 mg/kg 精神药物及相关化合物，第 2 版，E. Usdin 和 DH Efron，华盛顿特区，1972 年，-(366)，1972

[1]. Inhibition of cytochrome P450 by proadifen diminishes the excitability of brain serotonin neurons in rats. Gen Physiol Biophys. 2018 Sep;37(6):711-713.

[2]. N, N-dimethyltryptamine forms oxygenated metabolites via CYP2D6 - an in vitro investigation. Xenobiotica. 2023 Dec;53(8-9):515-522.

[3]. Inhibition by SKF-525A of the aldehyde oxidase-mediated metabolism of the experimental antitumour agent acridine carboxamide. Biochem Pharmacol. 1993 May 25;45(10):2159-62.

[4]. Inhibition of cytochrome P450 with proadifen alters the excitability of brain catecholamine-secreting neurons. Gen Physiol Biophys. 2022 May;41(3):255-262.

药物代谢和细胞色素P-450酶系统活性的抑制剂。

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DMT在人肝微粒体中的代谢稳定性：DMT与人肝微粒体（HLM）孵育后，DMT迅速代谢，生成大量IAA。未检测到DMT-NO。与哈尔明（MAO-A和CYP2D6的双重抑制剂）共同孵育时，DMT代谢被完全抑制。与CYP2D6特异性抑制剂奎尼丁共同孵育似乎对DMT的消失没有显著影响。与奎尼丁相比，通用CYP抑制剂普罗替芬/SKF-525A对DMT代谢的影响更大（半衰期延长2.1倍）。结果总结于表1。[2]

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综上所述，Proadifen/SKF525对肝脏和/或脑CYP的抑制作用可增强中枢去甲肾上腺素能神经元的兴奋性，同时抑制中枢多巴胺能神经元的兴奋性。CYP抑制对去甲肾上腺素能神经元放电活动的刺激作用可能至少部分是由皮质酮诱导的5-HT传递抑制所触发的。CYP抑制对多巴胺能神经元放电活动的影响可能是继发于中枢去甲肾上腺素传递的激活（图3）。我们之前的研究（Maj等人，1981；Grinchii等人，2018）观察到SKF525对多巴胺神经元的抑制作用，以及该CYP抑制剂对5-HT神经元的抑制作用，可能至少部分解释了SKF525降低丙咪嗪疗效的能力。丙咪嗪是一种非选择性三环类抗抑郁药，可抑制5-HT、去甲肾上腺素和多巴胺的再摄取（Maj等人，1981）。值得注意的是，Maj及其同事报道，SKF525对地昔帕明（一种主要作用于去甲肾上腺素系统的抗抑郁药）的疗效没有降低作用。由于糖皮质激素和中枢儿茶酚胺在应激反应中起着至关重要的作用，循环糖皮质激素与分泌儿茶酚胺的神经元兴奋性之间的相互作用可能在应激相关疾病的病理生理学中具有特殊意义。然而，还需要进一步的研究来验证这一假设。本研究的主要局限性在于使用了非选择性CYP抑制剂，并且没有区分脑和肝脏CYP的抑制情况。此外，也不能排除Proadifen/SKF525对一氧化氮合酶（NOS）的抑制作用（Sykes等人，2016）。未来的研究应测试选择性抑制剂对特定 CYP 亚型（如 CYP3A1、CYP3A2、CYP3A4 和 CYP3A5）的影响，这些亚型在糖皮质激素代谢中起着至关重要的作用（Peng 等，2011）。[2]

C23H32CLNO2

389.9587

389.212

C, 70.84; H, 8.27; Cl, 9.09; N, 3.59; O, 8.21

62-68-0

302-33-0 (Parent)

65341

White to light yellow solid powder

460.8ºC at 760 mmHg

122-123ºC

132.3ºC

5.459

29.54

1

3

11

27

375

0

CCCC(C1=CC=CC=C1)(C2=CC=CC=C2)C(=O)OCCN(CC)CC.Cl

FHIKZROVIDCMJA-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C23H31NO2.ClH/c1-4-17-23(20-13-9-7-10-14-20,21-15-11-8-12-16-21)22(25)26-19-18-24(5-2)6-3;/h7-16H,4-6,17-19H2,1-3H3;1H

2-(diethylamino)ethyl 2,2-diphenylpentanoate;hydrochloride

Proadifen hydrochloride; 62-68-0; Proadifen HCl; Propyladiphenin; SK&F 525-A; SKF 525A; RP 5171; Proadifen hydrochloride [USAN];

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL (~128.22 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.33 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。