Microbial Metabolite; Production of norsolorinic acid (NA，a precursor of aflatoxin)
Cyclo(D-Leu-D-Pro) targets the production of norsolorinic acid (NA), a precursor of aflatoxin, in aflatoxigenic fungi such as Aspergillus parasiticus. The compound inhibits the accumulation of NA and also suppresses spore formation. The mechanism involves inhibition of the transcription of aflatoxin-related genes including aflR, hexB, pksL1, and dmtA. The compound is a microbial metabolite with antifungal properties.

通过理化方法鉴定，纯化的抑制物质为环(L-亮氨酰-L-脯氨酰)。采用顶端培养法测定，环(L-亮氨酰-L-脯氨酰)对寄生曲霉SYS-4 (= NRRL2999)产生黄曲霉毒素的半数抑制浓度为0.20 mg ml⁻¹。高浓度（超过6.0 mg ml⁻¹）的环(L-亮氨酰-L-脯氨酰)可进一步抑制真菌生长。环(D-亮氨酰-D-脯氨酰)和环(L-缬氨酰-L-脯氨酰)也表现出类似的抑制活性，而环(D-脯氨酰-L-亮氨酰)和环(L-脯氨酰-D-亮氨酰)的抑制活性较弱。逆转录-PCR分析表明，环(L-亮氨酰-L-脯氨酰)抑制了黄曲霉毒素相关基因aflR、hexB、pksL1和dmtA的转录。这是首次报道影响黄曲霉毒素产生的环二肽。[1]

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抑制活性表征。[1]
我们使用微量滴定琼脂平板法（表1）研究了市售环(L-亮氨酰-L-脯氨酰)对寄生曲霉NFRI-95突变株NA积累的抑制活性。结果表明，浓度高于3.5 mg ml−1时，该物质可完全抑制寄生曲霉NFRI-95对NA的积累。浓度为1.0 mg ml−1时，该物质也能部分抑制NA的积累，提示该浓度可能接近50%抑制浓度。环二肽Cyclo(D-Leu-D-Pro)是环二肽L-Leu-L-Pro的立体异构体，其活性与环二肽L-Leu-L-Pro相似（图1D）。L-亮氨酸、D-亮氨酸、L-脯氨酸或D-脯氨酸，以及这些氨基酸的组合均未显示任何抑制活性，表明该抑制作用是环二肽特有的。我们还检测了另外四种含有环二肽L-Leu-L-Pro中一种氨基酸的环二肽（表1）。环二肽Cyclo(L-Leu-L-Gly)在浓度达到3.5 mg ml−1之前未显示任何活性，在浓度为6.0 mg ml−1时对真菌的NA产生有微弱的抑制作用。另外两种环二肽，环二肽Cyclo(L-Gly-L-Pro)和环二肽Cyclo(D-Ala-L-Pro)，均未显示任何抑制作用。相比之下，环(L-Pro-L-Val)即使在浓度低至0.3 mg ml⁻¹时也能抑制NA的积累，该浓度低于环(Leu-Pro)的抑制浓度。这些结果表明，由一个疏水性氨基酸和一个脯氨酸组成的环二肽结构可能有助于其抑制活性。我们更详细地比较了四种异构体环(L-Leu-L-Pro)、环(D-Leu-D-Pro)、环(L-Leu-D-Pro)和环(D-Leu-L-Pro)的作用（图1D和表1）。环(L-Leu-L-Pro)在3.5 mg ml⁻¹的浓度下完全抑制了寄生曲霉NFRI-95的NA积累，并且也抑制了孢子的形成。 Cyclo(D-Leu-D-Pro)在相同浓度下也表现出对NA积累的完全抑制作用，但其对孢子形成的影响似乎较弱，因为即使在6 mg ml−1的浓度下，真菌仍能产生孢子。相比之下，另外两种异构体cyclo(l-Leu-d-Pro)和cyclo(d-Leu-l-Pro)的活性则低得多。Cyclo(l-Leu-d-Pro)在12.0 mg ml−1的浓度下可以完全抑制NA的积累，而cyclo(d-Leu-l-Pro)即使在最高浓度下也无法完全抑制NA的积累（表1和图1D）。有趣的是，这些异构体影响了孢子的颜色，较高浓度会使孢子颜色由浅绿色变为深绿色。[1]

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环(L-亮氨酸-L-脯氨酸)对黄曲霉毒素产生的影响。[1]
在顶端培养中，将寄生曲霉SYS-4 (= NRRL2999)与不同浓度的环(L-亮氨酸-L-脯氨酸)或环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)一起培养。根据该方法测定，浓度为3.5 mg ml−1的两种抑制剂均能完全抑制黄曲霉毒素的产生（图4A，泳道2和3），而真菌生长在此浓度下仅受到轻微影响。相反，当两种物质的浓度均为6 mg ml−1时，菌丝重量显著降低，表明高浓度的这些物质也能抑制真菌生长。添加这些物质并未改变培养基的pH值。薄层色谱分析也显示，菌丝体中没有与黄曲霉毒素产生途径相关的任何中间体的积累（图4A，第5和6泳道）。

在菌丝顶端培养中，当浓度为0至1.0 mg ml⁻¹时，两种物质均能降低黄曲霉毒素的产生（图4B）。环(L-亮氨酸-L-脯氨酸)和环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)的半数抑制浓度几乎相同，分别为0.20和0.13 mg ml⁻¹。相反，在这些浓度下，真菌生长不受影响，表明这些环二肽特异性地抑制了黄曲霉毒素的产生。然而，当这些物质的浓度高于6 mg ml⁻¹时，真菌生长受到抑制（图4B）。黄曲霉毒素相关基因转录的抑制。[1]

采用RT-PCR分析了环(L-亮氨酸-L-脯氨酸)对转录的影响。采用顶端培养法，在添加或不添加浓度为3.5 mg ml⁻¹的环(L-亮氨酸-L-脯氨酸)的YES培养基中培养寄生曲霉SYS-4菌株。在没有抑制剂的情况下，检测到了黄曲霉毒素相关基因aflR、hexB、dmtA和pks的表达（图5A）。然而，在3.5 mg ml⁻¹的浓度下，这些基因的表达被环(L-亮氨酸-L-脯氨酸)完全抑制，而真菌的生长在该浓度下仅受到轻微影响。通过薄层色谱法（TLC）分析培养滤液，也证实了浓度为3.5 mg ml⁻¹的抑制剂对黄曲霉毒素产生的完全抑制（图5B）。 cmd基因（一种组成型表达的钙调蛋白基因，与黄曲霉毒素的产生无关）的表达在环(L-亮氨酸-L-脯氨酸)存在下未受到抑制（图5A）。体外实验表明，环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)可抑制寄生曲霉NFRI-95中去甲索洛林酸(NA)的产生。该化合物的活性与环(L-亮氨酸-L-脯氨酸)相似。浓度高于3.5 mg/mL时，可完全抑制NA的积累；浓度为1.0 mg/mL时，则部分抑制NA的积累。该化合物还能抑制孢子形成。游离氨基酸（亮氨酸或脯氨酸）不显示抑制活性，表明环状结构是必需的。

内生链霉菌菌株是新型生物活性分子的潜在来源。本研究从娑罗双树（Shorea ovalis）树皮中分离得到内生放线菌链霉菌SUK10，并从中分离得到二酮哌嗪类化合物环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)或甘西丁W(GW)，并对其进行了体内抗伯氏疟原虫PZZ1/100的活性测试。在雄性ICR小鼠中，采用4天抑制试验方法，在6.25和3.125 μg/kg体重剂量下，环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)或甘西丁W(GW)在第4天表现出近80%的抑制率。将两种浓度的Cyclo(D-Leu-D-Pro)或gancidin W/GW分别与盐酸奎宁和生理盐水作为阳性和阴性对照进行比较，结果显示，接受3.125 μg kg-1体重剂量治疗的小鼠中，50%在感染后存活超过11个月，几乎达到正常小鼠的寿命。对接受Cyclo(D-Leu-D-Pro)或gancidin W/GW治疗的小鼠血液样本中特定酶和蛋白质的生化检测结果也均在正常范围内；此外，未发现内脏器官有任何异常或损伤。这些研究结果表明，从链霉菌SUK10中分离得到的这种生物活性化合物毒性极低，是动物模型中潜在的抗疟药物候选物。[2]

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GW/环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)或gancidin W在五个不同浓度的窄范围内进行了抗疟活性筛选，以确定哪个剂量具有最佳的抗疟活性。寄生虫血症密度值直接反映了抑制率，抑制率越高，治疗效果越好。结果发现，3.125 μg kg−1 bw剂量组的抑制率最高，接近80%，与其他四个浓度组之间存在显著差异（P<0.05，n=6）。在 6.25 μg kg−1 bw 剂量下，抑制率也达到了高于 65% 的水平，这被认为是体内抗疟活性的基准值，且该值远优于其他三个剂量浓度（表 3）。[2]

接受 3.125 μg kg−1 bw 剂量的 Cyclo(D-Leu-D-Pro) 或 gancidin W/GW 治疗的小鼠的存活时间几乎是接受 12.5 μg kg−1 bw 剂量治疗的小鼠的两倍，并且与接受 6.25 μg kg−1 bw 剂量治疗的小鼠相比，存活时间也相应延长（图 3）。正如先前所证明的，体内和体外分析均预测，寄生虫抑制率越高，接受治疗的小鼠的存活时间就越长。使用剂量浓度为 3.125 μg kg−1 bw 的 Cyclo(D-Leu-D-Pro) 或 gancidin W/GW 治疗小鼠，其存活时间最长（235.53±2.20 天），显著高于其他剂量浓度组（P<0.05，n=6）。令人惊讶的是，使用相同剂量浓度的 Cyclo(D-Leu-D-Pro) 或 gancidin W/GW 治疗组中，剩余的 50%（n=3）小鼠个体存活至感染后 291.13±0.5 天。根据以往文献，这一存活时间几乎达到了正常雄性小鼠的寿命（约 12-18 个月）。在感染后411天内，所有PC组小鼠均存活，这一观察结果与之前的体内抗疟研究结果一致；而NC组小鼠在感染后存活7-9天，与本研究结果一致。[2]

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环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)的体内活性尚未得到充分表征，因为它主要是一种用于研究黄曲霉毒素生物合成抑制的研究化合物。该化合物对真菌生长和黄曲霉毒素产生的影响可能在农业和食品安全领域具有应用前景。然而，目前在动物模型中进行的体内研究较为有限。该化合物被用作研究黄曲霉毒素生物合成调控的工具。

RT-PCR。[1]
将 A. parasiticus SYS-4 (= NRRL2999) 培养于 YES 培养基或添加了 3.5 mg ml⁻¹ 环(L-亮氨酸-L-脯氨酸)的 YES 培养基中。菌丝培养 63 小时后，使用 FastPrep FP100A（Q-BIO gene；Bio 101）和 TRI REAGENT 试剂盒进行菌丝破碎。按照制造商说明书提取总 RNA，然后用无 RNase 的 DNase 处理。使用所得总 RNA 和 RT-PCR 试剂盒进行逆转录 (RT)-PCR。所用引物为：aflR-BamHI-F (CGCGGATCCATGGTTGACCATATCTCCCC) 和 aflR-HindIII-R (CCCCAAGCTTCATTCTCGATGCAGGTAATC)，用于 aflR 基因（登录号 AF441437）；HexB-F1 (CTGCGGGTGGAGCTGCA) 和 HexB-R1 (CAAGCTCCAAGGCGGC)，用于己酸合酶基因（登录号 AF391094）；pKSL1-F1 (CCAGGACAGCCCTATTCTAG) 和 pKSL1-R1 (GGAGTCCAGTGGTATTCAGC)，用于聚酮合酶基因；pksL1（登录号 L42766）、MT-1wholeF1 (ACAAATACCCCTGGCTCAGG) 和 MT-1wholeR1 (ACCTGTTCCATCAAATCGTC)，用于…… O-甲基转移酶I基因，dmtA（登录号AB022906），以及钙调蛋白基因的CMDF1（GGTGATGGCCAGATCACCAC）和CMDR1（CCGATGGAGGTCATGACGTG）（登录号AY017584）。

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喂养实验。[1]
采用尖端培养法，将A. parasiticus NIAH-26在添加了40 μM赭曲霉毒素的YES培养基中，在有或无2 mg环(L-亮氨酸-L-脯氨酸) ml−1的情况下，于28°C培养4天。如上所述，采用氯仿萃取培养基，然后进行高效液相色谱（HPLC）分析来测定黄曲霉毒素的生成量。

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由于环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)是一种抑制黄曲霉毒素生物合成的微生物代谢产物，而非经典的酶抑制剂，因此通常不进行其体外酶/受体结合试验。该化合物的活性通过测定其对真菌培养物中萘酸（NA）积累和黄曲霉毒素相关基因表达的影响来评估。萘酸产生的抑制作用通过HPLC或分光光度法进行定量。该化合物对孢子形成的影响通过显微镜观察和菌落计数进行评估。

抑制物质（例如环(L-亮氨酸-L-脯氨酸)）的测定。[1]
(i) 琼脂平板目测法。[1]
为了筛选抑制黄曲霉毒素产生的细菌，我们对NA积累突变株NFRI-95进行了琼脂平板目测法(14)的筛选，并稍作修改（图1A）。将真菌孢子接种于含有GY琼脂的平板中央，然后将一定量的细菌液体培养物接种于距中心线1.5 cm处。在28°C下培养3至7天后，从平板底部观察细菌对菌丝体中NA积累或真菌生长的影响。真菌菌丝体中红色素 (NA) 的减少表明细菌对黄曲霉毒素的产生受到抑制。

(ii) 微量琼脂平板试验。[1]
基于目测琼脂平板试验，我们设计了一种小规模试验系统，其中使用96孔平底组织培养板作为培养容器（图1B和C）。将100 μl经高压灭菌的GY琼脂倒入每个孔中，使其凝固。将各纯化步骤的各组分或含有抑制物质的甲醇溶液取10至20 μl加入琼脂培养基中，然后敞开培养30分钟以上，使溶液扩散到培养基中，甲醇挥发。将1 μl寄生曲霉NFRI-95的孢子悬液接种到培养基中心。由于孢子数量不影响结果，因此本方法未对其进行调整。在培养皿的每个角上放置一小团黏土或封口膜，使盖子和培养皿之间形成一条细缝，然后用医用胶带（21N，12号；12毫米×9米）密封缝隙，以防止盖子打开。在28℃下培养2或3天后，从培养皿底部观察菌丝的颜色。

(iii) 吸头培养法。[1]
使用移液器吸头作为培养容器，将5 μl A. parasiticus SYS-4的孢子悬液接种到250 μl添加了不同浓度抑制剂的YES培养基中。在28℃下培养4天后，通过离心分离菌丝和培养基。为了检测黄曲霉毒素，将5 μl培养基点样于薄层色谱（TLC）硅胶板（Silica Gel 60）上，然后用氯仿、乙酸乙酯和90%甲酸（体积比6:3:1）的混合溶液展开。在长波紫外光（365 nm）下观察黄曲霉毒素，并使用Fluor-S MultiImager在紫外光（365 nm）下拍照。为了测定黄曲霉毒素的含量，将培养滤液用氯仿萃取，取一定量的氯仿萃取液注入配备硅胶柱（0.46 cm × 15 cm；Shim-pack CLC-SI）和荧光检测器（激发波长365 nm，发射波长425 nm；岛津RF-535型）的岛津高效液相色谱仪（HPLC，型号LC-10A）中，流速为1 mL min⁻¹，室温下进行分析。流动相由甲苯、乙酸乙酯、甲酸和甲醇组成（体积比178:15:4:3）。将黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的保留时间与标准代谢物样品（黄曲霉毒素B-黄曲霉毒素G混合物；Sigma Chemical Co.）的保留时间进行比较。为了检测黄曲霉毒素的前体，用丙酮提取菌丝垫中的前体。提取物浓缩至干后，将残渣溶解于苯-乙腈（98:2，体积比）混合溶剂中，然后进行薄层色谱分析。

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在寄生曲霉或其他产黄曲霉毒素菌株的真菌培养物中，进行环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)的体外细胞测定。将该化合物以不同浓度添加到培养基中，并测定其对NA积累和黄曲霉毒素产生的影响。采用RT-PCR进行基因表达分析，以评估该化合物对黄曲霉毒素生物合成基因的影响。通过显微镜观察孢子形成情况。这些测定证实了该化合物的作用机制。

由于环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)主要是一种用于研究黄曲霉毒素生物合成的研究化合物，因此针对该化合物的体内动物研究十分有限。如果开展此类研究，很可能需要给动物服用该化合物，以评估其对体内黄曲霉毒素产生的影响，或评估其作为饲料添加剂降低黄曲霉毒素污染的潜力。然而，文献中并未详细记载具体的实验方案。

由于环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)是一种研究化合物而非治疗药物，因此其药代动力学性质尚未明确。该化合物是一种环状二肽，分子量为210.27 g/mol。其吸收、分布、代谢和排泄取决于其理化性质。目前公开文献中尚无具体的药代动力学数据。

环(D-亮氨酸-D-脯氨酸)是一种研究用化合物，其毒理学数据有限。作为一种天然存在的环状二肽，它可能具有良好的安全性，但尚未有全面的毒理学研究报道。该化合物在实验室操作时应采取适当的安全预防措施。其用途仅限于研究，不适用于人类治疗。

[1]. Cyclo(L-leucyl-L-prolyl) produced by Achromobacter xylosoxidans inhibits aflatoxin production by Aspergillus parasiticus. Appl Environ Microbiol. 2004 Dec;70(12):7466-73.

[2]. Gancidin W, a potential low-toxicity antimalarial agent isolated from an endophytic Streptomyces SUK10. Drug Des Devel Ther. 2017 Feb 8;11:351-363

Cyclic (L-亮氨酸-L-脯氨酸) 是由亮氨酸和脯氨酸残基组成的同环肽。它既是海洋代谢物，也是细菌代谢物。它是一种二肽、同环肽和吡咯并吡嗪。ChEBI (3S,8aS)-3-异丁基六氢吡咯[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮已在Epichloe typhina、Peroneutypa scoparia及其他相关生物中被报道。黄曲霉毒素是一种强致癌物和有毒物质，主要由黄曲霉（Aspergillus flavus）和寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）产生。我们发现了一种细菌，显著抑制了寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）产生黄曲霉毒素前体诺克洛林（noxololin）的过程。根据其16S核糖体DNA序列，该细菌被鉴定为无色杆菌（Achromobacter xylosoxidans），并命名为A. xylosoxidans NFRI-A1。无色杆菌（Achromobacter xylosoxidans）菌株通常表现出类似的抑制效果。抑制物质被分泌到培养基中，并在加热、酸或碱处理后保持稳定。尽管该细菌似乎产生了多种抑制物质，但我们成功地通过Diaion HP20柱层析、薄层层析和高效液相色谱从培养基中纯化出一种主要的抑制物质。通过物理化学方法鉴定，纯化的抑制物质为环状（L-亮氨酸-L-脯氨酸）。使用尖端培养法，确定Achromobacterium SYS-4（= NRRL2999）对黄曲霉毒素生产的50%抑制浓度（IC50）为0.20 mg/ml。高浓度（超过6.0 mg/ml⁻¹）的环状（L-亮氨酸-L-脯氨酸）进一步抑制了真菌生长。环状（D-亮氨酸-D-脯氨酸）和环状（L-缬氨酸-L-脯氨酸）也表现出类似的抑制活性，而环状（D-脯氨酸-L-亮氨酸）和环状（L-脯氨酸-D-亮氨酸）的活性较弱。反转录PCR分析显示，环状（L-亮氨酸-L-脯氨酸）抑制了与黄曲霉毒素相关的基因aflR、hexB、pksL1和dmtA的转录。这是首次报道环状二肽影响黄曲霉毒素生产。[1] 在纯化抑制剂的过程中，我们发现A1菌株的培养基中除了环状（L-亮氨酸-L-脯氨酸）外，还含有至少三种其他抑制物质。这些物质的量不足以进行进一步表征。尽管这些未知物质与环状（L-亮氨酸-L-脯氨酸）的结合可能产生协同抑制活性，但这些物质之间的详细关系仍需研究。木糖氧化假单胞菌xylose NFRI-A1的环状二肽的生物合成和分泌机制仍然未知。有报道称，环状二肽可能是自发蛋白质环化的降解产物。然而，研究发现许多环状二肽具有多种生物功能。这些物质现在被认为是重要的代谢产物，而不是蛋白质产品。为了从细菌培养物中纯化抑制剂，建立一个简单、灵敏的小规模检测系统是至关重要的。尽管可视化琼脂平板测定可以提供灵敏且清晰的结果，但即使使用小平板（直径6厘米），实验规模似乎也过大。因此，我们设计了一个使用微孔板的小规模测定系统。微孔板非常实用。Magnusson等人独立报道了使用类似的微孔板测定来监测乳酸菌coryniformis亚种coryniformis代谢物的抗真菌活性。我们之前使用微孔板测定从土壤细菌中分离其他抑制物质。我们希望我们的一些发现能够尽快用于防止黄曲霉毒素污染。[1]

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抗疟药物的使用完全依赖于治疗方案的组合、感染阶段、感染宿主的副作用以及疟原虫的种类。奎宁已被证明可以杀死所有疟原虫细胞，无论其种类如何。然而，它仅在疟疾感染的早期阶段有效，此时宿主通常没有症状。本研究中所有未治疗的对照小鼠在感染后7到9天内死亡，这与之前的体内抗疟研究一致，并且与所使用的动物模型类型无关。尽管环状（L-亮氨酸-L-脯氨酸）或gameticine W/GW在其他链霉菌物种中已有报道，但其抗疟特性尚未揭示。事实上，我们的结果表明，环状（L-亮氨酸-L-脯氨酸）或gameticine W/GW是SUK10粗乙酸乙酯提取物的体内抗疟活性代谢物之一。这些结果表明，内生于椭圆树的链霉菌SUK10是潜在低毒性抗疟药物的良好来源。除了对宿主疟原虫感染中红细胞周期进展的理解有限外，某些抗疟参数在疟原虫生命周期的特定周期或阶段往往具有更显著的值，而这些在本研究中未予考虑。[2]

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环状（D-亮氨酸-D-脯氨酸）是一种环状二肽，能够抑制黄曲霉毒素前体诺索洛林酸（NA）在产黄曲霉的真菌中的生成。其分子式为C11H18N2O2，分子量为210.27 g/mol。该化合物还抑制孢子形成。它是环状（L-亮氨酸-L-脯氨酸）的立体异构体，并表现出相似的活性。它是一种研究化合物，尚未获得人用批准。

C11H18N2O2

210.272822856903

210.136

C, 62.83; H, 8.63; N, 13.32; O, 15.22

32510-93-3

Cyclo(Pro-Leu);5654-86-4; 32510-93-3; 32510-93-3

7074739

White to off-white solid powder

1.1±0.1 g/cm3

427.6±34.0 °C at 760 mmHg

163-165ºC

212.4±25.7 °C

0.0±1.0 mmHg at 25°C

1.530

1.1

49.41

1

2

2

15

288

2

O=C1[C@H](CC(C)C)NC([C@@H]2CCCN21)=O

SZJNCZMRZAUNQT-IUCAKERBSA-N

InChI=1S/C11H18N2O2/c1-7(2)6-8-11(15)13-5-3-4-9(13)10(14)12-8/h7-9H,3-6H2,1-2H3,(H,12,14)/t8-,9-/m0/s1

(8aS)-3-(2-methylpropyl)-2,3,6,7,8,8a-hexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione

32510-93-3; Gancidin W; Maculosin 6; Cyclo(-Leu-Pro); cyclo(L-leu-L-pro); (3S,8aS)-3-Isobutylhexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione; Gancidin W; cyclo(Leu-Pro); Cyclo(L-prolyl-L-leucyl); Cyclo-L-leu-L-pro;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : 250 mg/mL (1188.95 mM)