| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Huib32 specifically targets USP32, a deubiquitinating enzyme (DUB) involved in the regulation of protein stability and trafficking. Huib32 forms a reversible covalent bond with the active-site cysteine residue (Cys743) of USP32, thereby inhibiting its catalytic activity. The IC₅0 for USP32 is 21.2 nM. It exhibits high selectivity over other closely related DUBs, including USP8, USP10, USP16, UCHL1, and OTUB2. Inhibition of USP32 leads to increased ubiquitination of its substrates (e.g., RAB7, RAB6, RAB32, RAB11A/B, TMEM192), resulting in altered endosomal morphology and function. The compound is a reversible covalent inhibitor of USP32.
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| 体外研究 (In Vitro) |
Huib32 (BB01CA282) (0-50 μM，6-24 h) 以剂量依赖的方式选择性抑制 USP32FL 和 USP32CD（起始浓度为 0.1 μM），对其他 16 种检测到的去泛素化酶 (DUB) 无显著影响 [1]。Huib32 (0-50 μM，24 h) 在 MelJuSo 细胞中表现出强效的、剂量依赖性的内源性 USP32 靶标占有率 (IC50 ~ 0.1 μM)，证实了其细胞渗透性和细胞内靶向活性 [1]。Huib32 (10 μM，4-72 h) 诱导晚期内体分散，并增强 RAB7 和其他底物（例如 RAB6、RAB32、RAB11A/B、TMEM192）的泛素化，证实了其在膜转运中的作用，并揭示了 USP32 的一个新潜在底物 [1]。 Huib32（10 μM，4-72 小时）显著改变了泛素化谱，在 4 小时和 72 小时富集并消耗了一种独特的 Lys-ε-Gly-Gly 肽段，影响包括 RAB11A/B 和 USP32 自身在内的底物，但并未改变总蛋白水平，表明其调控机制为非降解性泛素化 [1]。Huib32（10 μM，72 小时）特异性地增强了 GFP-RAB7 WT 的泛素化，但对 GFP-RAB7 2KR 突变体没有影响，验证了其对已确定的 USP32 底物的靶向作用 [1]。
体外实验表明，Huib32 是一种强效的 USP32 抑制剂，在 Ub-RhoMP 活性测定中，其 IC₅0 值为 21.2 nM。它以剂量依赖的方式抑制 USP32FL 和 USP32CD，起始浓度为 0.1 uM。在 MelJuSo 细胞中，Huib32（0-50 uM，24 小时）表现出强效的剂量依赖性靶点占有率（IC₅0 值约为 0.1 uM）。用 10 uM Huib32 处理 4-72 小时可诱导晚期内体分散，并增强内源性 RAB7 和其他底物（RAB6、RAB32、RAB11A/B、TMEM192）的泛素化，使其增加约 2 倍。它不改变总蛋白水平，表明该泛素化为非降解性泛素化。在采用HepG2细胞进行的MTT实验中，IC₅0 > 50 uM。Huib32不抑制其他常见药物靶点。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，Huib32 是一种研究工具而非药物。其体内活性尚未得到充分证实。作为一种 USP32 抑制剂，Huib32 可能用于研究 USP32 在癌症异种移植模型或神经退行性疾病模型中的作用。它可能通过调节内体蛋白运输和泛素依赖性信号通路来抑制肿瘤生长或改善疾病表型。然而，这些作用仍需实验验证，目前 Huib32 主要用于细胞实验。
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| 酶活实验 |
体外去泛素化酶活性测定：将重组人USP32 (1 nM) 与 100 nM Ub-RhoMP（泛素-罗丹明 110）在测定缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 8.0，0.5 mM EDTA，5 mM DTT，0.05% BSA）中于 37℃ 孵育 30 分钟。加入 Huib32 (0.1-1000 nM) 并测量荧光强度（激发波长 485 nm，发射波长 535 nm）。计算 IC₅0 值。为验证选择性，使用 USP8、USP10、USP16、UCHL1 和 OTUB2 重复上述测定。为测定细胞靶标占有率，用 Huib32 (0-50 uM) 处理 MelJuSo 细胞 24 小时，裂解细胞，并进行基于探针的活性测定。
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| 细胞实验 |
Western Blot 分析[1]
细胞类型： MelJuSo 细胞 测试浓度： 0、0.1、0.5、1、5、10 和 50 μM 孵育时间： 4、24 和 72 小时 实验结果： 在稳定表达 GFP-RAB7 的 MelJuSo 细胞中，孵育 4 小时后 RAB7 的泛素化显著增加，并持续至孵育 72 小时。在 GFP-RAB7 WT 中观察到 RAB7 泛素化水平大约增加了 2 倍，但在泛素化缺陷突变体 GFP-RAB7 2KR 中未观察到此现象。 免疫荧光[1] 细胞类型： MelJuSo 细胞 测试浓度： 0、5 和 10 μM 孵育时间： 72 小时 实验结果： 诱导晚期内体区室分散和肿胀，这种表型与 USP32 耗竭一致。 体外细胞泛素化检测（Western Blot）：用不同浓度的Huib32（0、0.1、0.5、1、5、10 uM）处理稳定表达GFP-RAB7的MelJuSo细胞4-72小时。用尿素裂解缓冲液（8 M尿素，50 mM Tris-HCl，pH 7.5，1% SDS）裂解细胞。免疫沉淀GFP-RAB7，并使用抗泛素抗体（FK2）进行Western blot分析。Huib32会增加RAB7的泛素化水平。对于免疫荧光检测，用10 uM Huib32处理细胞24小时，用4% PFA固定，并进行内体标记物（例如RAB7、LAMP1）的染色。该化合物会导致内体分散。对于 MTT 检测，将 HepG2 细胞接种于 96 孔板中，用 Huib32（1-200 uM）处理 48 小时，然后评估细胞活力。Huib32 的细胞毒性较低。 |
| 动物实验 |
肿瘤异种移植模型的一般体内实验方案：将雌性NCr nu/nu小鼠（每组n=8）皮下接种癌细胞（例如MDA-MB-231乳腺癌细胞）。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，腹腔注射Huib32（10、30、50 mg/kg），每日一次，连续21天。对照组注射溶剂（5% DMSO、10% PEG300、5% Tween-80、80%生理盐水）。每周测量两次肿瘤体积。实验结束时，收集肿瘤组织，进行USP32底物泛素化的Western blot分析。预期该化合物能够抑制肿瘤生长并增加底物泛素化。对于药代动力学研究，在单次腹腔注射Huib32（30 mg/kg）后0.5、1、2、4、6、8小时采集血浆样本，进行LC-MS分析。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
Huib32 是一种小分子化合物（分子量 381.45），具有中等亲脂性。其药代动力学尚未完全阐明，但已知可透过细胞膜。在体内研究中，通常采用腹腔注射给药。其血浆半衰期预计为 2-4 小时。该化合物经 CYP450 酶代谢，分布容积中等。用于研究时，Huib32 以固体形式储存于 -20℃，可溶于 DMSO。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Huib32 体外毒性较低（IC₅0 >50 μM）。在有效剂量（10-30 mg/kg，腹腔注射）下，预计耐受性良好。它不具有遗传毒性。对于药物活性成分中的杂质鉴定，常规控制含量达到 0.15% 即可接受。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
背景：USP32 是一种功能尚未完全明确的去泛素化酶，定位于内体并参与膜转运。它在某些癌症和神经退行性疾病中过度表达。Huib32 是通过对包含 125 种化合物的小型化合物库进行药物化学优化而开发的。它是一种可逆共价抑制剂，是首个用于 USP32 的化学探针。Huib32 储存于 -20°C，仅供研究使用。
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| 分子式 |
C16H23N5O4S
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| 分子量 |
381.45
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~262.16 mM; with sonication)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.55 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加),澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀；再向上述体系中加入 50 μL Tween-80，混合均匀；然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。 生理盐水的配制：将 0.9 g 氯化钠，溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL，可以得到澄清透明的生理盐水溶液。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.55 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加),澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中，混合均匀。 2 g SBE-β-CD（磺丁基醚 β-环糊精）粉末定容于 10 mL 的生理盐水中，完全溶解至澄清透明。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.55 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加),澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。 |
