Huib32

目录号: V116641
Huib32 是一种高效的小分子 USP32 抑制剂(IC50 = 21.2 nM),与其他密切相关的去泛素化酶 (DUB)(如 USP8/10/16、UCHL1 和 OTUB2)相比,具有很高的选择性。
Huib32 产品类别: DUB
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1mg
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产品描述
Huib32 是一种高效的小分子 USP32 抑制剂(IC50 = 21.2 nM),与其他密切相关的去泛素化酶 (DUB)(如 USP8/10/16、UCHL1 和 OTUB2)相比,具有很高的选择性。Huib32 通过可逆地共价结合 USP32 的活性位点 Cys743 来抑制 USP32,从而提高底物泛素化水平,改变内体形态,并模拟 USP32 敲除表型。Huib32 可用于乳腺癌、卵巢癌、肺癌、阿尔茨海默病和帕金森病等相关疾病的研究。
生物活性&实验参考方法
体外研究 (In Vitro)
Huib32 (BB01CA282) (0-50 μM,6-24 h) 以剂量依赖的方式选择性抑制 USP32FL 和 USP32CD(起始浓度为 0.1 μM),对其他 16 种检测到的去泛素化酶 (DUB) 无显著影响 [1]。Huib32 (0-50 μM,24 h) 在 MelJuSo 细胞中表现出强效的、剂量依赖性的内源性 USP32 靶标占有率 (IC50 ~ 0.1 μM),证实了其细胞渗透性和细胞内靶向活性 [1]。Huib32 (10 μM,4-72 h) 诱导晚期内体分散,并增强 RAB7 和其他底物(例如 RAB6、RAB32、RAB11A/B、TMEM192)的泛素化,证实了其在膜转运中的作用,并揭示了 USP32 的一个新潜在底物 [1]。 Huib32(10 μM,4-72 小时)显著改变了泛素化谱,在 4 小时和 72 小时富集并消耗了一种独特的 Lys-ε-Gly-Gly 肽段,影响包括 RAB11A/B 和 USP32 自身在内的底物,但并未改变总蛋白水平,表明其调控机制为非降解性泛素化 [1]。Huib32(10 μM,72 小时)特异性地增强了 GFP-RAB7 WT 的泛素化,但对 GFP-RAB7 2KR 突变体没有影响,验证了其对已确定的 USP32 底物的靶向作用 [1]。
细胞实验
Western Blot 分析[1]
细胞类型: MelJuSo 细胞
测试浓度: 0、0.1、0.5、1、5、10 和 50 μM
孵育时间: 4、24 和 72 小时
实验结果: 在稳定表达 GFP-RAB7 的 MelJuSo 细胞中,孵育 4 小时后 RAB7 的泛素化显著增加,并持续至孵育 72 小时。在 GFP-RAB7 WT 中观察到 RAB7 泛素化水平大约增加了 2 倍,但在泛素化缺陷突变体 GFP-RAB7 2KR 中未观察到此现象。
免疫荧光[1]
细胞类型: MelJuSo 细胞
测试浓度: 0、5 和 10 μM
孵育时间: 72 小时
实验结果: 诱导晚期内体区室分散和肿胀,这种表型与 USP32 耗竭一致。
参考文献

[1]. https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2025.04.19.649632v1

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C16H23N5O4S
分子量
381.45
外观&性状
White to off-white solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~100 mg/mL (~262.16 mM; with sonication)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.55 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加),澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀;再向上述体系中加入 50 μL Tween-80,混合均匀;然后再继续加入 450 μL 生理盐水 定容至 1 mL。 生理盐水的配制:将 0.9 g 氯化钠,溶解于 ddH₂O 并定容至 100 mL,可以得到澄清透明的生理盐水溶液。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.55 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加),澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL 20% 的 SBE-β-CD 生理盐水水溶液 中,混合均匀。 2 g SBE-β-CD(磺丁基醚 β-环糊精)粉末定容于 10 mL 的生理盐水中,完全溶解至澄清透明。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.55 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加),澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中,混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.6216 mL 13.1079 mL 26.2158 mL
5 mM 0.5243 mL 2.6216 mL 5.2432 mL
10 mM 0.2622 mL 1.3108 mL 2.6216 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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