| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
AGPAT4-IN-1 targets the enzyme 1-acyl-sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase 4 (AGPAT4), also known as lysophosphatidic acid acyltransferase delta (LPAATdelta). AGPAT4 catalyzes the conversion of LPA to PA, a key step in the synthesis of phosphatidylcholine and phosphatidylethanolamine, and a critical node in lipid metabolism and cell signaling. AGPAT4-IN-1 covalently binds to the active site cysteine residue Cys228 of AGPAT4, irreversibly inhibiting its enzymatic activity. This leads to reduced PA production, which in turn inhibits the downstream mTOR/S6K signaling pathway, a key regulator of cell growth, proliferation, and survival. The compound operates within the lipid metabolism and PI3K/AKT/mTOR pathways. It is selective for AGPAT4 over other AGPAT isoforms.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，AGPAT4-IN-1 可抑制 AGPAT4 的酶活性，在无细胞实验中，使用纯化酶和放射性标记的 LPA 底物，其 IC50 值为 795 nM。在肝癌细胞系（例如 HepG2、Huh7、PLC/PRF/5）中，用 1-10 uM 的 AGPAT4-IN-1 处理 24-72 小时可降低 PA 水平，减少 S6K 和 S6 的磷酸化（Western blot），并抑制细胞增殖（MTT 实验），IC50 值约为 2-5 uM。该化合物在浓度 ≥5 uM 时，处理 48 小时后可诱导细胞凋亡（Annexin V/PI 双染，PARP 裂解增加）。此外，它还能降低肝癌细胞的干细胞特性，表现为球状体形成减少和干性标志物（CD133、EpCAM、Nanog）表达降低。 AGPAT4-IN-1 可增强肝癌细胞对索拉非尼的敏感性，使索拉非尼的 IC50 值降低 3-5 倍。在浓度高达 10 uM 时，未观察到对正常肝细胞 (THLE-2) 的明显细胞毒性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，AGPAT4-IN-1 在肝细胞癌 (HCC) 异种移植小鼠模型中表现出抗肿瘤活性。将 HepG2 或 Huh7 细胞（5×10⁶ 个细胞/Matrigel 基质胶）皮下植入雌性 BALB/c 裸鼠（6-8 周龄，每组 n=8）。当肿瘤体积达到约 150 mm3 时，每隔一天腹腔注射 AGPAT4-IN-1，剂量分别为 10、20 或 40 mg/kg，持续 3-4 周。制剂成分：10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80、45% 生理盐水。该化合物在 20-40 mg/kg 剂量下显著抑制肿瘤生长（肿瘤生长抑制率约为 40-60%）。免疫组化结果显示，该化合物还能降低肿瘤中 PA 水平和 p-S6K 的表达。 AGPAT4-IN-1 与索拉非尼（10 mg/kg，每日口服）联合使用可增强肿瘤生长抑制（TGI 约为 70-80%），并在某些动物中诱导肿瘤消退。该联合用药还可降低肿瘤中 CD133+ 癌干细胞的比例。在此剂量下未观察到明显的体重减轻。仅供研究使用。
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| 酶活实验 |
对于非细胞 AGPAT4 酶活性测定，首先在昆虫细胞中表达并纯化重组人 AGPAT4。配制测定缓冲液：50 mM HEPES（pH 7.4）、150 mM NaCl、5 mM MgCl2、0.05% Triton X-100 和 1 mM DTT。将 AGPAT4（5-10 nM）与 AGPAT4-IN-1（0.1-10000 nM，溶于 DMSO，最终 DMSO 浓度为 1%）于 25℃ 孵育 15 分钟。加入底物：25 uM LPA（1-油酰溶血磷脂酸，超声处理）和 10 uM [14C]油酰辅酶 A（55 mCi/mmol），最终反应体积为 50 uL。于 37℃ 孵育 30 分钟。加入 200 uL 氯仿：甲醇 (1:1) 终止反应。涡旋振荡并离心提取脂质，收集有机相，氮气吹干，并重悬于 20 uL 氯仿中。点样于硅胶薄层色谱板，用石油醚：乙醚：甲酸 (80:20:1.5) 展开，并通过放射自显影显色。刮取 PA 斑点，用液体闪烁计数法定量。根据剂量-反应曲线计算 IC50 值。阳性对照：AGPAT4 抑制剂（例如，文献中的化合物）。阴性对照：仅含 DMSO。
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| 细胞实验 |
体外细胞实验中，将肝癌细胞（HepG2、Huh7）培养于含10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素/链霉素（P/S）的DMEM培养基中，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。为检测细胞活力，将细胞接种于96孔板（5×103个细胞/孔），用AGPAT4-IN-1（0.1-100 uM）处理72小时。加入MTT（0.5 mg/mL，4小时），用DMSO溶解，读取OD570值。为检测细胞凋亡，用5或10 uM化合物处理48小时，用Annexin V-FITC和PI染色，并通过流式细胞术进行分析。对于蛋白质印迹实验，用 1-10 uM 的化合物处理细胞 24 小时，用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的 RIPA 缓冲液裂解细胞，然后检测 p-S6K (Thr389)、总 S6K、p-S6 (Ser235/236)、总 S6 和 β-肌动蛋白。对于联合用药研究，用 AGPAT4-IN-1 (2-5 uM) 和索拉非尼 (0.5-5 uM) 处理细胞 48 小时，然后测定细胞活力 (MTT 法) 并计算联合指数 (CompuSyn 法)。对于癌症干细胞检测，用 5 uM 的化合物处理细胞 48 小时，然后在超低吸附培养板中用无血清干细胞培养基培养 7 天；计数球状体 (>50 um)。DMSO 溶剂对照 (≤0.1%)。所有实验均重复三次。
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| 动物实验 |
对于体内异种移植研究，使用雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄，18-22 g，每组n=8-10只）。将HepG2细胞（5×10⁶个，溶于100 μL PBS + 100 μL Matrigel）皮下注射到小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到约150 mm³（第10-14天）时，将小鼠随机分为以下几组：载体对照组、AGPAT4-IN-1 20 mg/kg组、AGPAT4-IN-1 40 mg/kg组、索拉非尼10 mg/kg组以及联合用药组（AGPAT4-IN-1 20 mg/kg + 索拉非尼10 mg/kg）。 AGPAT4-IN-1 配制于 10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80 和 45% 生理盐水中，浓度为 2-4 mg/mL，剂量为 20-40 mg/kg（给药体积 10 mL/kg）。每隔一天腹腔注射一次，连续 21 天。索拉非尼配制于 10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80 和 45% 生理盐水中，或配制于 0.5% 甲基纤维素中，每日口服一次。每周测量两次肿瘤体积（使用游标卡尺，V=长×宽²/2）。记录体重。在实验终点（第 21 天），切除肿瘤，称重，并进行免疫组织化学（p-S6、CD133）和蛋白质印迹（p-S6K、脂质组学测定 PA 水平）分析。干细胞分析中，将肿瘤细胞解离后在无血清干细胞培养基中培养以形成球状体。采用双因素方差分析进行统计分析。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
AGPAT4-IN-1 的具体药代动力学参数尚未公开。该化合物的分子量为 306.77，配制为腹腔注射，剂量为 20-40 mg/kg，隔日一次，提示其口服生物利用度低或腹腔注射是首选给药途径。半衰期 (t½) 未见报道，但隔日给药方案表明其作用持续时间足够长（>24 小时）。分布容积 (Vd) 未知。清除率 (CL) 可能主要经肝脏代谢。蛋白结合率未见报道。溶解度：DMSO 溶解度 ≥100 mg/mL。体内制剂中，该化合物可溶于 10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80 和 45% 生理盐水，浓度最高可达 5 mg/mL。储存：粉末在 -20℃ 下可保存长达 3 年；DMSO 溶液在 -80℃ 下可保存 1 年。仅供研究使用。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚无AGPAT4-IN-1的正式毒性数据。在异种移植研究中，每隔一天腹腔注射高达40 mg/kg的剂量，持续3周，耐受性良好，未观察到明显的体重减轻或明显的毒性症状。尚未有关于主要器官组织病理学分析的报道。作为AGPAT4的共价抑制剂，潜在的靶向不良反应可能包括正常组织（例如肝脏、脂肪组织）脂质代谢紊乱。然而，尚未进行此类研究。标准实验室安全预防措施：避免吸入、摄入、皮肤/眼睛接触；使用个人防护装备（手套、实验服、护目镜）；在通风橱内操作。仅供研究使用，不得用于人体。根据当地危险废物管理条例处置废弃物。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
CAS号：2411250-59-2。分子式：C14H11ClN2O2S，分子量：306.77。又名化合物CL26。HPLC纯度通常>98%。外观：浅黄色至黄色固体粉末。溶解性：DMSO（≥100 mg/mL）。储存：粉末-20℃可保存3年，4℃可保存2年；溶剂中-80℃可保存6个月。靶点：AGPAT4（Cys228共价抑制剂）。IC50：795 nM。研究领域：肝细胞癌（HCC）、脂质代谢、癌症干细胞。通路：脂质代谢、mTOR/S6K信号通路。不可用于人体。仅供研究使用。
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| 分子式 |
C14H11CLN2O2S
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|---|---|
| 分子量 |
306.77
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| CAS号 |
2411250-59-2
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~325.98 mM; with sonication)
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (16.30 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加),澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.2598 mL | 16.2989 mL | 32.5977 mL | |
| 5 mM | 0.6520 mL | 3.2598 mL | 6.5195 mL | |
| 10 mM | 0.3260 mL | 1.6299 mL | 3.2598 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Obeversen sodium
CL-283796
PF-06427878
SDZ-CPI 975
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