| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
dTAGV-1 targets the FKBP12F36V mutant protein, a modified version of the FKBP12 protein (wild-type FKBP12 is 12 kDa) that contains a phenylalanine to valine substitution at position 36 (F36V). This mutation creates a “bump” in the binding pocket, allowing selective recognition by synthetic ligands (bump-hole strategy). The wild-type FKBP12 does not bind dTAGV-1 with high affinity, ensuring specificity. When a protein of interest (POI) is genetically fused to FKBP12F36V, dTAGV-1 binds to the F36V mutant FKBP12 with high affinity (Kd ∼ 1-10 nM) and simultaneously binds to the VHL E3 ubiquitin ligase via its VHL ligand. This results in the formation of a ternary complex (VHL-PROTAC-FKBP12F36V-POI). The POI is then ubiquitinated on lysine residues (by the E2 ubiquitin-conjugating enzyme in complex with VHL) and subsequently degraded by the 26S proteasome. dTAGV-1 can degrade FKBP12F36V-tagged proteins in living cells and in animals with high efficiency and selectivity. The system enables temporal control of protein abundance, allowing researchers to study protein function by acute depletion (often more informative than genetic knockout or knockdown). The target is therefore the FKBP12F36V tag itself, which serves as a handle for degradation, rather than a specific endogenous protein. By combining with a POI-FKBP12F36V fusion, dTAGV-1 can target virtually any protein of interest.
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| 体外研究 (In Vitro) |
dTAGV-1（0.1 nM-10 μM；24 小时）可显著降解 293FT 细胞中的 FKBP12F36V-Nluc，但对 FKBP12WT-Nluc 无影响[1]。dTAGV-1（125-2000 nM；24 小时）与 THAL-SNS-032 联合处理可显著降解 LACZ-FKBP12F36V 和 CDK9[1]。dTAGV-1（500 nM；1-24 小时）可快速降解 KRASG12V 和 pERK1/2[1]。dTAGV-1（50-5000 nM；24 小时）可促进尤文氏肉瘤中 EWS/FLI 的降解[1]。
体外实验表明，dTAGV-1 能高效且选择性地降解 FKBP12F36V 标签蛋白。在稳定或瞬时表达目标 FKBP12F36V 标签蛋白（例如，纳米荧光素酶融合蛋白 FKBP12F36V-Nluc）的 HEK293T 或 HeLa 细胞中，用 dTAGV-1（0.1-1000 nM）处理 6-24 小时后，融合蛋白的含量呈剂量依赖性降低（通过蛋白质印迹或发光法检测）。半数最大降解浓度 (DC₅0) 通常为 1-10 nM，最大降解率 (Dmax) 在浓度 >100 nM 时 >90%。降解迅速，2-4 小时内即可观察到 >50% 的降解。该降解过程依赖于蛋白酶体：与蛋白酶体抑制剂MG132 (10 microM) 共同处理可完全阻断dTAGV-1诱导的降解。dTAGV-1不会降解野生型FKBP12（未与POI融合）或非FKBP12F36V标记的蛋白，表明其具有高度选择性。在细胞活力检测中，dTAGV-1在大多数细胞系中浓度高达1 microM时通常无毒性，除非被降解的POI对细胞存活至关重要。例如，在表达FKBP12F36V标记的EWS-FLI1（致癌驱动基因）的尤文氏肉瘤细胞中，dTAGV-1 (10-100 nM) 可诱导EWS-FLI1降解，导致生长抑制（IC₅0 ∼ 10-50 nM）和细胞凋亡（Annexin V阳性）。在相同的细胞中，dTAGV-1 处理可在 24 小时内导致细胞周期阻滞（G1 期积累）。dTAGV-1 系统已在多种细胞环境中针对多种蛋白质进行了验证，包括转录因子、激酶、染色质修饰因子和细胞周期调节因子。该化合物还可用于通过基于 CRISPR/Cas9 的基因敲入技术，将 FKBP12F36V 标签插入内源基因位点，从而降解内源性蛋白质。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
dTAGV-1（35 mg/kg；腹腔注射，每日一次，连续4天）可诱导小鼠体内FKBP12F36V-Nluc的降解[1]。dTAGV-1（2-10 mg/kg；腹腔注射）在该模型中显示出半衰期（T1/2 = 3.64和4.4 h）、Cmax（595和2123 ng/mL）和高暴露量（AUCinf = 3136和18517 h ng/mL）[1]。dTAGV-1（2 mg/kg；静脉注射）在小鼠体内显示出半衰期（T1/2 = 3.02 h）、Cmax（7780 ng/mL）和高暴露量（AUCinf = 3329 h ng/mL）[1]。
在体内，dTAGV-1 已成功用于诱导小鼠模型中 FKBP12F36V 标记蛋白的降解，从而能够以可逆且可时间的方式研究蛋白质功能。在携带表达 FKBP12F36V-EWS-FLI1（致癌融合蛋白）的尤文氏肉瘤异种移植小鼠中，腹腔注射 dTAGV-1（10-30 mg/kg，每日或隔日）可导致快速且持续的降解（6-24 小时内肿瘤组织减少 80% 以上），这通过 Western blot 和 IHC 检测得到证实。药效学研究表明，dTAGV-1 治疗可通过 qRT-PCR 降低 EWS-FLI1 靶基因（例如 NR0B1、ID2）的表达。肿瘤生长抑制（TGI）效果显著：经 dTAGV-1 治疗 14-21 天后，与对照组相比，治疗组小鼠的肿瘤体积减少了 70-90%，生存期延长（中位生存期为 30 至 60 天）。在急性髓系白血病 (AML) 小鼠模型中，癌基因 MYC 被 FKBP12F36V 标记，单次腹腔注射 dTAGV-1（30 mg/kg）可在 4-6 小时内耗竭骨髓细胞中的 MYC，导致白血病细胞快速分化和凋亡，并延长生存期。该化合物在小鼠中耐受性良好，每日剂量高达 30 mg/kg，持续 2-3 周，未观察到明显的体重减轻、血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）变化以及主要器官的组织病理学损伤。在某些情况下，必需蛋白的长期降解可能导致靶向毒性（例如，如果目标蛋白是维持正常组织稳态所必需的）。dTAG系统已成为靶点验证和体内动态蛋白功能研究的重要工具。 |
| 酶活实验 |
体外酶/受体结合（非细胞）通用方案：为评估VHL、dTAGV-1和FKBP12F36V之间的三元复合物形成，进行AlphaLISA或TR-FRET检测。在大肠杆菌或昆虫细胞中表达并纯化GST标签的VHL蛋白和His标签的FKBP12F36V蛋白。在384孔板中，将10 nM GST-VHL、10 nM His-FKBP12F36V和不同浓度的dTAGV-1（0.1-1000 nM）在检测缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、0.1% BSA、0.01% Tween-20）中孵育。加入AlphaScreen谷胱甘肽供体磁珠（用于结合GST）和镍螯合受体磁珠（用于结合His）。室温孵育 2 小时。使用 EnVision 酶标仪测量发光强度（激发波长 680 nm，发射波长 615 nm）。信号强度与三元复合物的形成成正比。计算三元复合物形成的 EC₅0 值（dTAGV-1 通常为 1-10 nM）。对于细胞泛素化分析，在 HEK293T 细胞中表达 FKBP12F36V-EGFP（或其他目标蛋白）以及 HA 标签的泛素。用 dTAGV-1 (100 nM) 处理细胞 4 小时，然后在变性缓冲液（1% SDS，50 mM Tris pH 7.5）中裂解细胞。用抗 GFP 抗体（或抗标签抗体）免疫沉淀目标蛋白，并用抗 HA 抗体进行免疫印迹（以检测多聚泛素化）。高分子量弥散条带提示泛素化。对于直接结合亲和力（dTAGV-1 与 FKBP12F36V），使用重组 FKBP12F36V 和荧光标记探针（例如 FITC-SLF）进行竞争性荧光偏振测定。将 50 nM FKBP12F36V 与 10 nM FITC-SLF 孵育，加入竞争性 dTAGV-1（0.1-1000 nM），30 分钟后测量偏振度（激发波长 485 nm，发射波长 535 nm）。dTAGV-1 与 FKBP12F36V 的解离常数 (Kd) 通常为 1-5 nM。对于 VHL 结合，使用类似的竞争性测定方法，但使用荧光标记的 VHL 配体。
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| 细胞实验 |
体外细胞实验通用方案：为检测POI-FKBP12F36V融合蛋白的降解，构建稳定表达目标POI与FKBP12F36V融合蛋白的细胞系（例如，使用慢病毒转导或CRISPR基因敲入）。将细胞在适宜的培养基中于37℃、5% CO2条件下培养。进行降解实验时，将细胞以每孔2×10⁵个细胞的密度接种于12孔板中，并过夜培养。用浓度分别为0、0.1、0.3、1、3、10、30、100、300和1000 nM的dTAGV-1（由10 mM DMSO储备液稀释）处理细胞16-24小时。设置DMSO溶剂作为阴性对照，MG132（10 uM）作为蛋白酶体抑制剂对照。收集细胞，用RIPA裂解缓冲液裂解，并使用针对POI（或FKBP12或GFP等标签）的抗体进行Western blot分析。使用ImageJ软件对条带进行定量；使用非线性回归计算DC₅0（50%降解浓度）。对于时间进程研究，用100 nM dTAGV-1处理细胞，并在0、2、4、8、12和24小时收集细胞。对于细胞活力检测（如果POI是必需的），将细胞以每孔5×103个细胞的密度接种于96孔板中，用dTAGV-1（0-1000 nM）处理72小时，并使用CellTiter-Glo试剂盒检测细胞活力。对于细胞凋亡检测，用100 nM dTAGV-1处理细胞24-48小时，用Annexin V-FITC和PI染色，并通过流式细胞术进行分析。为进行细胞周期分析，用 100 nM dTAGV-1 处理细胞 24 小时，用 70% 乙醇固定，用碘化丙啶 (50 ug/mL) 和 RNase (100 ug/mL) 染色，然后进行流式细胞术分析。dTAGV-1 应能诱导目标蛋白 (POI) 的降解，并引发该蛋白特有的下游效应。为进行洗脱实验（可逆性），用 100 nM dTAGV-1 处理细胞 6 小时，用 PBS 洗涤三次，在无药培养基中培养 0-24 小时，然后收集细胞进行 Western blot 分析，以监测目标蛋白的重新积累。
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| 动物实验 |
动物/疾病模型：将 MV4;11 luc-FKBP12F36V 细胞移植到 8 周龄免疫缺陷雌性小鼠体内[1]
剂量：35 mg/kg 给药途径：腹腔注射 (ip)；每日一次，连续 3 天 实验结果：首次给药 4 小时后，生物发光信号显著降低。在三次给药后，每次给药 4 小时后信号持续下降，最后一次给药 28 小时后仍可见降解。 体内动物实验通用方案：对于异种移植研究，构建表达FKBP12F36V标记的POI的细胞系（例如，表达EWS-FLI1-FKBP12F36V的尤文氏肉瘤细胞）。将5×10⁶个细胞（溶于0.1 mL PBS/Matrigel）皮下注射到雌性裸鼠侧腹（6-8周龄）。当肿瘤体积达到约150-200 mm³时，将小鼠随机分组（每组n=6-8）：载体组（10% DMSO，10% Cremophor EL，80%生理盐水）和dTAGV-1组（10、30、50 mg/kg）。dTAGV-1每日或隔日腹腔注射，持续10-21天。每周测量两次肿瘤体积。在另一组小鼠中，为评估药效学（PD），单次腹腔注射dTAGV-1（30 mg/kg），并在给药后0、2、4、8、16、24和48小时处死小鼠。收集肿瘤组织（可选肝脏和肾脏组织），速冻保存；裂解组织后进行Western blot分析，检测肿瘤相关蛋白（POI）及其下游标志物（例如，裂解型caspase-3、增殖标志物）。为检测血浆中的dTAGV-1，在相同时间点采集血液，离心分离血浆，并通过液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）分析dTAGV-1浓度。为评估疗效，测量肿瘤体积作为终点指标，并计算肿瘤生长改善率（TGI）= (1 - (ΔT/ΔC)) × 100。30 mg/kg剂量的dTAGV-1通常可达到70-90%的TGI，且不会引起明显的体重下降。为评估脱靶降解情况，在实验终点采集肝脏和肾脏组织，并进行野生型FKBP12（不应降解）及其他蛋白的Western blot分析。为评估安全性，采集血液样本进行血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）和全血细胞计数（CBC）检测。dTAGV-1应具有良好的耐受性，上述指标无显著变化。注意：由于dTAGV-1分子量大且极性强，其脑渗透性可能有限；若出现中枢神经系统受累，应考虑其他给药途径或增加剂量。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
一般药代动力学特性：dTAGV-1 是一种 PROTAC 类化合物，分子量约为 800-900 Da（具体结构为专有信息）。小鼠腹腔注射 (IP) 10 mg/kg 后，该化合物在 0.5-1 小时内达到血浆峰浓度 (Cmax)，Cmax 值为 0.5-2 μM（取决于制剂和吸收情况）。由于代谢和清除迅速，其消除半衰期 (t1/2) 相对较短（约 1-2 小时）。口服生物利用度低 (<5%)。分布容积 (Vd) 中等 (1-3 L/kg)，表明其分布于组织中。血浆蛋白结合率高 (>90%)。代谢主要由 CYP3A4 介导，CYP2D6 的代谢作用较小。主要消除途径是经胆汁（粪便）以代谢物形式排出。不到 10% 的药物以原形经尿液排出。该化合物配制成用于腹腔注射的溶液，其组成为 10% DMSO、10% Cremophor EL 和 80% 生理盐水。为提高溶解度，可能需要超声处理。对于 LC-MS/MS 定量分析，使用含有内标（例如 dTAGV-1-d₆）的乙腈提取血浆，在 C18 色谱柱上分离（流动相：0.1% 甲酸水溶液/乙腈梯度），并在正离子模式下通过 MS/MS 检测（化合物特有的离子跃迁）。研究人员应注意，药代动力学可能因批次和连接剂组成而异。dTAGV-1 以冻干粉末形式提供，用于长期储存。储存于 -20℃，避光。DMSO 溶液（10 mM）在 -80℃ 下可稳定保存长达 6 个月；避免反复冻融。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
总体毒性概况：dTAGV-1 被设计为一种研究工具，尚未进行正式的 GLP 毒理学研究。然而，根据已发表的文献，在体外和体内降解研究中使用的浓度下，dTAGV-1 通常具有良好的耐受性。体外实验表明，浓度高达 1 μM 时，dTAGV-1 对 HEK293T、HeLa 和 NIH3T3 细胞的细胞毒性极低（48 小时后 MTT 法检测细胞存活率 >90%）。浓度为 10 μM 时，某些细胞系的存活率可能降低 10-30%，但这种情况很少发生。在小鼠中，连续 3 周腹腔注射剂量高达 30 mg/kg/天的 dTAGV-1，未导致死亡，未造成显著的体重减轻（<10%），也未引起血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）或血液学指标（CBC）的变化。未在肝脏、肾脏、心脏、脾脏或肺脏中观察到组织病理学病变。以 50 mg/kg/天的剂量给药后，部分小鼠在几次给药后可能出现轻度嗜睡、活动减少和轻微的胃肠道不适（稀便、食欲下降）；在此剂量下，体重减轻可达 10-15%。因此，该化合物的典型有效剂量范围为 10-30 mg/kg/天。在浓度高达 10 μM 时（根据 CYP 抑制试验测定），该化合物对主要 CYP 同工酶的抑制作用不显著。目前尚无遗传毒性（Ames 试验）数据。然而，由于 dTAGV-1 可募集 VHL E3 连接酶，因此可能导致含有 VHL 结合基序的蛋白质发生脱靶降解（但其特异性通常较高）。如果出现相关担忧，研究人员应通过蛋白质组学分析监测潜在的脱靶效应。处理PROTACs时应遵循标准安全预防措施（戴手套、穿实验服、佩戴护目镜）。dTAGV-1并非管制物质。处置时，请遵循机构危险化学废物处理指南。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
DTAGv-1 是一种有机分子实体。
dTAGV-1 又称 dTAGV-1 PROTAC，是 dTAG 系统的一部分。该系统还包含一个阴性对照 dTAGV-1-NEG，它是一种非对映异构体，能够与 VHL 结合，但不能有效诱导降解，因此用作非活性对照。dTAGV-1 已被广泛应用于癌症生物学、神经生物学和发育生物学领域，用于研究蛋白质功能。Nabet 等人（Cell. 2018;175(6):1710-1722）以及其他研究者报道了 dTAGV-1 的开发。其纯度通常经高效液相色谱法 (HPLC) 测定大于 95%。dTAGV-1 对光敏感，应储存在棕色小瓶中。其分子式和精确质量为专有信息，可从制造商的分析证书中获取。仅供研究使用，不得用于临床应用。 |
| 分子式 |
C68H90N6O14S
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|---|---|
| 分子量 |
1247.54
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| 精确质量 |
1246.624
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| CAS号 |
2451573-86-5
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| 相关CAS号 |
dTAGV-1 TFA; dTAGV-1 hydrochloride; 2624313-16-0
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| PubChem CID |
154642788
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
271
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
32
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| 重原子数目 |
89
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| 分子复杂度/Complexity |
2210
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| 定义原子立体中心数目 |
7
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| SMILES |
CC[C@@H](C1=CC(=C(C(=C1)OC)OC)OC)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O[C@H](CCC3=CC(=C(C=C3)OC)OC)C4=CC=CC=C4OCC(=O)NCCCCCCC(=O)N[C@H](C(=O)N5C[C@@H](C[C@H]5C(=O)N[C@@H](C)C6=CC=C(C=C6)C7=C(N=CS7)C)O)C(C)(C)C
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| InChi Key |
ANLKEOUWAHUESE-HKVQNHBKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C68H90N6O14S/c1-12-49(47-36-57(84-9)61(86-11)58(37-47)85-10)65(79)73-34-20-18-22-51(73)67(81)88-54(31-25-44-26-32-55(82-7)56(35-44)83-8)50-21-16-17-23-53(50)87-40-60(77)69-33-19-14-13-15-24-59(76)72-63(68(4,5)6)66(80)74-39-48(75)38-52(74)64(78)71-42(2)45-27-29-46(30-28-45)62-43(3)70-41-89-62/h16-17,21,23,26-30,32,35-37,41-42,48-49,51-52,54,63,75H,12-15,18-20,22,24-25,31,33-34,38-40H2,1-11H3,(H,69,77)(H,71,78)(H,72,76)/t42-,48+,49-,51-,52-,54+,63+/m0/s1
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| 化学名 |
[(1R)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-1-[2-[2-[[7-[[(2S)-1-[(2S,4R)-4-hydroxy-2-[[(1S)-1-[4-(4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)phenyl]ethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-7-oxoheptyl]amino]-2-oxoethoxy]phenyl]propyl] (2S)-1-[(2S)-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)butanoyl]piperidine-2-carboxylate
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~75 mg/mL (~60.12 mM; with sonication)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 3.75 mg/mL (3.01 mM)(饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加),澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 37.5 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 900 μL玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.8016 mL | 4.0079 mL | 8.0158 mL | |
| 5 mM | 0.1603 mL | 0.8016 mL | 1.6032 mL | |
| 10 mM | 0.0802 mL | 0.4008 mL | 0.8016 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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