dTAGV-1 hydrochloride

别名: dTAGV-1 (hydrochloride); dTAGV-1 hydrochloride;
目录号: V84923 纯度: ≥98%
dTAGV-1 盐酸盐是 dTAGV-1 的盐酸盐形式,是 FKBP12 的小分子降解剂。
dTAGV-1 hydrochloride CAS号: 2624313-16-0
产品类别: PROTAC | 蛋白降解靶向嵌合体
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10mg
25mg
50mg
1g
Other Sizes

Other Forms of dTAGV-1 hydrochloride:

  • dTAGV-1 TFA
  • dTAGV-1-NEG
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产品描述
dTAGV-1 盐酸盐是 dTAGV-1 的盐酸盐形式,是 FKBP12 的小分子降解剂。
生物活性&实验参考方法
靶点
VHL; FKBP12F36V fusion protein
体外研究 (In Vitro)
在 293FT 细胞中,dTAGV-1(0.1 nM-10 μM;24 h)TFA 会导致 FKBP12F36V-Nluc 强烈降解,但对 FKBP12WT-Nluc 没有影响[1]。 THAL-SNS-032 与 dTAGV-1(125-2000 nM;24 h)TFA 共同处理会导致 CDK9 和 LACZ-FKBP12F36V 显着降解[1]。 dTAGV-1(500 nM;1–24 小时)TFA 导致 pERK1/2 和 KRASG12V 快速降解[1]。在尤文肉瘤中,dTAGV-1(50-5000 nM;24 小时)TFA 促进 EWS/FLI 降解[1]。
体内研究 (In Vivo)
dTAGV-1(35 mg/kg;腹膜内注射,每天一次,持续 4 天) 在小鼠中,TFA 会导致 FKBP12F36V-Nluc 降解[1]。小鼠中 TFA 半衰期(T1/2=3.64 和 4.4 h)、Cmax(595 和 2123 ng/mL)以及高暴露量(AUCinf = 3136 和 18517 h·ng/mL)均受 dTAGV-1 影响( 2-10 毫克/千克;腹膜内注射) TFA[1]。小鼠的半衰期 (T1/2=3.02 h)、Cmax (7780 ng/mL) 和大暴露量 (AUCinf = 3329 h·ng/mL) 均受到 dTAGV-1 (2 mg/kg; iv) TFA 的影响[1]。
酶活实验
FKBP12WT和FKBP12F36V双荧光素酶测定[1]
采用293FT FKBP12WT-Nluc和FKBP12F36V-Nluc细胞进行双荧光素酶检测6。简而言之,将细胞以每孔2000个细胞的速度,在20µL合适的培养基中,在384孔的白色培养板中,粘附过夜,并使用Janus Workstation引脚工具添加100 nL化合物,在37℃下放置24 h。为了评估Fluc信号,将板置于室温,加入20µL Dual-Glo Reagent 10 min,在Envision 2104平板读取仪上测量发光。随后,加入20µL Dual-Glo Stop & Glo Reagent,静置10 min,再次测量发光,捕捉Nluc信号。使用GraphPad PRISM v8分析和绘制Nluc/Fluc信号的dmso归一化比率。
细胞实验
细胞活力分析[1]
使用CellTiter-Glo 检测2d贴壁或超低贴壁3d球体的细胞活力。在Envision 2104平板阅读器和Fluostar Omega阅读器上测量发光,并使用GraphPad PRISM v8分析数据。使用CellTiter-Glo进行协同评估,并对参考文献34中描述的方案进行以下修改。简而言之,将EWS502细胞以每孔1000个细胞的速度,在50µL合适的培养基中,在384孔的白色培养板中粘附过夜,并使用Janus Workstation引脚工具添加100 nL化合物,放置72小时。加入10µL CellTiter-glo测定细胞活力,室温孵育15分钟。在Envision 2104平板阅读器上测量发光,使用GraphPad PRISM v8对数据进行分析。
动物实验
动物/疾病模型: 将 MV4;11 luc-FKBP12F36V 细胞移植到 8 周龄免疫缺陷雌性小鼠体内[1]
剂量: 35 mg/kg
给药途径: 腹腔注射,每日一次,连续 4 天
实验结果: 首次和第三次给药后 4 小时观察到生物发光信号显著下降。最后一次给药后 28 小时降解明显。
动物研究:化合物制剂 [1]
用于腹腔注射的 dTAG-13 和 dTAGV-1 的制剂方法是:先将其溶解于 DMSO 中,然后用 20% 溶剂:0.9% 无菌生理盐水 (w:v) 稀释,最终制剂中含有 5% DMSO。 dTAG-13 和 dTAGV-1 的最大溶解度分别为 35 mg kg⁻¹ 和 40 mg kg⁻¹。制剂在室温下可稳定保存 7 天。用于静脉注射时,dTAG-13 和 dTAGV-1 的配制方法为:先将其溶解于 DMSO 中,然后用 5% 溶菌酶:0.9% 无菌生理盐水(w/v)稀释,最终制剂中含有 5% DMSO。
动物研究:药代动力学 (PK) 评价 [1]
在 8 周龄 C57BL/6J 雄性小鼠中评估了药代动力学,分别在 0.08、0.25、0.5、1、2、4、6 和 8 小时(2 mg kg−1 dTAG-13 经尾静脉静脉注射 (IV)、10 mg kg−1 dTAG-13 经腹腔注射 (IP) 和 2 mg kg−1 dTAGV-1 经尾静脉静脉注射给药)以及 0.25、0.5、1、2、4、6、8、24 和 48 小时(2 mg kg−1 dTAGV-1 经腹腔注射给药和 10 mg kg−1 dTAGV-1 经腹腔注射给药)采集血液样本。通过离心法制备血浆,并采用 LC-MS/MS 法测定血浆浓度,质谱跃迁为 49600à340 AMU。使用 Phoenix WinNonlin 计算 PK 参数,以确定血浆峰浓度 (Cmax)、口服生物利用度 (%F)、暴露量 (AUC)、半衰期 (t1/2)、清除率 (CL) 和分布容积 (Vd)。
参考文献

[1]. Rapid and direct control of target protein levels with VHL-recruiting dTAG molecules. Nat Commun. 2020 Sep 18;11(1):4687.

[2].SMALL MOLECULE DEGRADERS OF FKBP12 VIA RECRUITMENT OF VON HIPPEL-LINDAU E3 UBIQUITIN LIGASE (VHL) E3 UBIQUITIN LIGASE, AND USES IN dTAG SYSTEMS. France, WO2020146250A1. 2020-07-16.

其他信息
化学生物学策略,例如降解标签(dTAG)系统,可直接扰乱蛋白质稳态,与基因方法相比具有时间优势,并且比小分子抑制剂具有更高的选择性。我们描述了dTAGV-1,一种特异性VHL募集dTAG分子,可快速降解FKBP12F36V标记的蛋白质。dTAGV-1克服了先前报道的CRBN募集dTAG分子降解难降解癌基因的局限性,支持联合降解剂研究,并有助于在细胞和小鼠中研究蛋白质功能。[1]
我们报道了dTAGV-1,一种高效且特异性VHL募集的FKBP12F36V标记蛋白质降解剂。dTAGV-1具有更优的药代动力学/药效学特性,可作为体内应用的优化工具。通过对PDAC模型中突变型KRAS降解的评估,我们发现CRBN或VHL均可被协同利用,以缓解由该癌蛋白协调的异常信号传导。相反,我们观察到这些E3泛素连接酶复合物降解EWS/FLI的能力存在情境差异。这与我们最近的报告一致,该报告显示,在HCT116细胞中,dTAGV-1能够有效降解核心介导亚基(MED14),而CRBN募集的dTAG分子在该细胞中无效。我们观察到,MED14的快速降解会阻断谱系特异性转录回路。总之,我们的研究支持使用dTAGV-1来克服dTAG系统目前的局限性,从而能够评估难以被CRBN募集的dTAG分子降解的融合蛋白的直接效应。 [1]
我们利用dTAGV-1研究EWS/FLI,结果表明VHL介导的EWS/FLI降解能够快速改变下游靶蛋白的表达,并导致尤文氏肉瘤细胞出现明显的生长缺陷,从而为研究EWS/FLI缺失的直接后果提供了一个强有力的模型系统。该数据支持使用直接作用的异双功能降解剂或分子胶来靶向降解EWS/FLI可能是一种可行的策略,并揭示了与BET溴结构域降解剂联合使用的潜在策略。本研究提供的dTAG分子及其配对对照将有助于评估针对更广泛靶点的精确翻译后蛋白去除的功能后果。dTAG系统能够快速调控蛋白丰度,并可作为一种多功能策略,用于确定靶向降解是否是针对特定靶点在体外和体内进行药物开发的有效方法。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C68H91CLN6O14S
分子量
1284.0
精确质量
1282.6002
CAS号
2624313-16-0
相关CAS号
2624313-15-9 (dTAGV-1 TFA); 2624313-16-0 (dTAGV-1 hydrochloride); 2451573-87-6 (dTAGV-1-NEG)
PubChem CID
155970211
外观&性状
White to off-white solid powder
tPSA
271Ų
SMILES
CC[C@@H](C1=CC(=C(C(=C1)OC)OC)OC)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O[C@H](CCC3=CC(=C(C=C3)OC)OC)C4=CC=CC=C4OCC(=O)NCCCCCCC(=O)N[C@H](C(=O)N5C[C@@H](C[C@H]5C(=O)N[C@@H](C)C6=CC=C(C=C6)C7=C(N=CS7)C)O)C(C)(C)C.Cl
InChi Key
WZEDGWVEEAWMSD-LNVAYBNASA-N
InChi Code
InChI=1S/C68H90N6O14S.ClH/c1-12-49(47-36-57(84-9)61(86-11)58(37-47)85-10)65(79)73-34-20-18-22-51(73)67(81)88-54(31-25-44-26-32-55(82-7)56(35-44)83-8)50-21-16-17-23-53(50)87-40-60(77)69-33-19-14-13-15-24-59(76)72-63(68(4,5)6)66(80)74-39-48(75)38-52(74)64(78)71-42(2)45-27-29-46(30-28-45)62-43(3)70-41-89-62;/h16-17,21,23,26-30,32,35-37,41-42,48-49,51-52,54,63,75H,12-15,18-20,22,24-25,31,33-34,38-40H2,1-11H3,(H,69,77)(H,71,78)(H,72,76);1H/t42-,48+,49-,51-,52-,54+,63+;/m0./s1
化学名
[(1R)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-1-[2-[2-[[7-[[(2S)-1-[(2S,4R)-4-hydroxy-2-[[(1S)-1-[4-(4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)phenyl]ethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-7-oxoheptyl]amino]-2-oxoethoxy]phenyl]propyl] (2S)-1-[(2S)-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)butanoyl]piperidine-2-carboxylate;hydrochloride
别名
dTAGV-1 (hydrochloride); dTAGV-1 hydrochloride;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
Typically soluble in DMSO (e.g. 10 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.7788 mL 3.8941 mL 7.7882 mL
5 mM 0.1558 mL 0.7788 mL 1.5576 mL
10 mM 0.0779 mL 0.3894 mL 0.7788 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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