| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
VHL; FKBP12F36V fusion protein
dTAGV-1 hydrochloride targets the FKBP12F36V protein tag. As a PROTAC, it is a bifunctional molecule that binds to the FKBP12F36V tag on a protein of interest and also recruits an E3 ubiquitin ligase. This leads to the ubiquitination and subsequent degradation of the tagged protein. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在293FT细胞中，dTAGV-1（0.1 nM-10 μM；24 h）与TFA共同处理可导致FKBP12F36V-Nluc的强烈降解，而对FKBP12WT-Nluc无影响[1]。THAL-SNS-032与dTAGV-1（125-2000 nM；24 h）与TFA共同处理可导致CDK9和LACZ-FKBP12F36V的显著降解[1]。dTAGV-1（500 nM；1-24 h）与TFA共同处理可导致pERK1/2和KRASG12V快速降解[1]。在尤文氏肉瘤中，dTAGV-1（50-5000 nM；24 小时）三氟乙酸可促进 EWS/FLI 的降解[1]。体外实验表明，dTAGV-1 盐酸盐是 FKBP12F36V 标签蛋白的强效降解剂。其活性特征在于能够诱导标签蛋白的降解，这可以通过蛋白质印迹法进行检测。
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| 体内研究 (In Vivo) |
dTAGV-1（35 mg/kg；腹腔注射，每日一次，连续4天）在小鼠中，TFA 可导致 FKBP12F36V-Nluc 降解[1]。dTAGV-1（2-10 mg/kg；腹腔注射）对小鼠体内 TFA 的半衰期（T1/2=3.64 和 4.4 小时）、Cmax（595 和 2123 ng/mL）以及高暴露量（AUCinf = 3136 和 18517 h·ng/mL）均有影响[1]。小鼠的半衰期（T1/2=3.02 h）、Cmax（7780 ng/mL）和高暴露量（AUCinf = 3329 h·ng/mL）均受dTAGV-1（2 mg/kg；静脉注射）TFA的影响[1]。体内实验表明，dTAGV-1盐酸盐可诱导FKBP12F36V-Nluc的降解。这表明其可作为研究动物模型中蛋白质功能的工具。
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| 酶活实验 |
FKBP12WT 和 FKBP12F36V 双荧光素酶报告基因检测 [1]
使用 293FT FKBP12WT-Nluc 和 FKBP12F36V-Nluc 细胞进行双荧光素酶报告基因检测6。简而言之，将细胞以每孔 2000 个细胞的密度接种于 384 孔白色培养板中，每孔加入 20 µL 适宜培养基，过夜培养使其贴壁。然后使用 Janus 工作站的针式工具加入 100 nL 化合物，于 37 °C 孵育 24 小时。为了评估荧光素酶 (Fluc) 信号，将培养板恢复至室温，加入 20 µL Dual-Glo 试剂，孵育 10 分钟，并在 Envision 2104 酶标仪上测量发光值。随后，加入 20 µL Dual-Glo Stop & Glo 试剂，孵育 10 分钟，再次测量发光值以获取荧光素酶 (Nluc) 信号。使用 GraphPad PRISM v8 分析并绘制了 DMSO 归一化的 Nluc/Fluc 信号比值。体外酶或受体结合试验方案不适用于 dTAGV-1 盐酸盐。其活性通过测量靶蛋白的降解来评估。 |
| 细胞实验 |
细胞活力分析[1]
使用 CellTiter-Glo 试剂盒检测二维贴壁或超低贴壁三维球状体中的细胞活力。在 Envision 2104 酶标仪和 Fluostar Omega 读板仪上测量发光值，并使用 GraphPad PRISM v8 软件进行数据分析。协同作用评估采用 CellTiter-Glo 试剂盒，并对参考文献 34 中的方案进行了如下修改。简而言之，将 EWS502 细胞以每孔 1000 个细胞的密度接种于 384 孔白色培养板中，每孔加入 50 µL 适宜培养基，过夜培养使其贴壁。然后使用 Janus 工作站的针式工具加入 100 nL 化合物，孵育 72 小时。通过加入 10 µL CellTiter-Glo 试剂盒，并在室温下孵育 15 分钟来测量细胞活力。使用 Envision 2104 酶标仪测量发光值，并使用 GraphPad PRISM v8 软件分析数据。 dTAGV-1 盐酸盐的体外细胞检测方案包括用该化合物处理表达 FKBP12F36V 标签目标蛋白的细胞。然后通过蛋白质印迹法检测蛋白水平以测量降解情况。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：将8周龄免疫缺陷雌性小鼠移植MV4;11 luc-FKBP12F36V细胞[1]
剂量：35 mg/kg 给药途径：腹腔注射，每日一次，连续4天 实验结果：首次和第三次给药后4小时观察到生物发光信号显著下降。最后一次给药后28小时降解明显。 动物研究：化合物制剂[1] 对于腹腔注射，dTAG-13和dTAGV-1的制剂方法是先将其溶解于DMSO中，然后用20% solutol：0.9%无菌生理盐水（w:v）稀释，最终制剂中DMSO含量为5%。 dTAG-13 和 dTAGV-1 的最大溶解度分别为 35 mg kg⁻¹ 和 40 mg kg⁻¹。制剂在室温下可稳定保存 7 天。用于静脉注射时，dTAG-13 和 dTAGV-1 的配制方法为：先将其溶解于 DMSO 中，然后用 5% 溶菌酶：0.9% 无菌生理盐水（w/v）稀释，最终制剂中含有 5% DMSO。 动物研究：药代动力学 (PK) 评价 [1] 在 8 周龄 C57BL/6J 雄性小鼠中评估了药代动力学，分别在 0.08、0.25、0.5、1、2、4、6 和 8 小时（2 mg kg−1 dTAG-13 经尾静脉静脉注射 (IV)、10 mg kg−1 dTAG-13 经腹腔注射 (IP) 和 2 mg kg−1 dTAGV-1 经尾静脉静脉注射给药）以及 0.25、0.5、1、2、4、6、8、24 和 48 小时（2 mg kg−1 dTAGV-1 经腹腔注射给药和 10 mg kg−1 dTAGV-1 经腹腔注射给药）采集血液样本。通过离心法制备血浆，并采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆浓度，质谱跃迁为49600→340 AMU。使用Phoenix WinNonlin软件计算药代动力学参数，包括血浆峰浓度（Cmax）、口服生物利用度（%F）、暴露量（AUC）、半衰期（t1/2）、清除率（CL）和分布容积（Vd）。dTAGV-1盐酸盐的体内动物实验方案包括将该化合物给药于表达FKBP12F36V标记报告蛋白的小鼠。可通过成像（例如，Nluc）或分析组织裂解液来测量报告蛋白的降解情况。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
现有文献中尚未详细描述dTAGV-1盐酸盐的药代动力学特性。其分子量为1284.00。作为一种较大的PROTAC分子，其口服生物利用度可能有限。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
dTAGV-1盐酸盐的毒理学数据尚不可用。本品仅供研究使用。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
化学生物学策略，如降解标签（dTAG）系统，可以直接破坏蛋白质稳态，相较于基因方法提供时间优势，并比小分子抑制剂具有更高的选择性。我们描述了dTAGV-1，这是一种特异性针对VHL的dTAG分子，能够快速降解FKBP12F36V标记的蛋白质。dTAGV-1克服了先前报道的CRBN招募的dTAG分子在降解顽固癌基因方面的局限性，支持共降解研究，并促进在细胞和小鼠中研究蛋白质功能。[1]
我们报告了dTAGV-1，这是一种高效且特异性针对VHL的FKBP12F36V标记蛋白降解剂。dTAGV-1具有优越的药代动力学/药效学特性，使其成为体内应用的最佳工具。通过在PDAC模型中评估突变KRAS的降解，我们发现CRBN或VHL可以协同利用，以缓解由该癌蛋白协调的异常信号。相反，我们观察到这些E3泛素连接酶复合物在降解EWS/FLI方面的能力存在上下文差异。这与我们最近的报告一致，即dTAGV-1有效降解HCT116细胞中的核心介导亚基（MED14），而CRBN招募的dTAG分子在该细胞中无效。我们观察到MED14的快速降解阻断了谱系特异性转录回路。总之，我们的研究支持使用dTAGV-1克服dTAG系统的当前局限性，从而使得评估难以通过CRBN招募的dTAG分子降解的融合蛋白的直接影响成为可能。[1] 我们使用dTAGV-1研究EWS/FLI，结果表明VHL介导的EWS/FLI降解迅速改变下游靶蛋白的表达，并导致尤文肉瘤细胞显著的生长缺陷，从而提供了一个强大的模型系统，用于研究EWS/FLI缺失的直接后果。数据支持通过直接作用的异双功能降解剂或分子凝胶靶向降解EWS/FLI的可能性，并揭示了与BET溴域降解剂联合使用的潜在策略。本研究中提供的dTAG分子及其配对对照将有助于评估精确的翻译后蛋白质去除对更广泛靶标的功能后果。dTAG系统可以快速调节蛋白质丰度，并可以作为一种多功能策略，用于确定靶向降解是否是针对特定靶标的药物开发在体内和体外的有效方法。[1] dTAGV-1盐酸盐是一种研究级PROTAC分子，用于选择性降解FKBP12F36V标记的蛋白质。它是研究蛋白质功能的宝贵工具。它尚未进入临床试验，也未获得任何治疗适应症的批准。其作用机制涉及靶向蛋白质降解。该化合物仅供研究用途。 |
| 分子式 |
C68H91CLN6O14S
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|---|---|
| 分子量 |
1284.0
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| 精确质量 |
1282.6002
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| CAS号 |
2624313-16-0
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| 相关CAS号 |
2624313-15-9 (dTAGV-1 TFA); 2624313-16-0 (dTAGV-1 hydrochloride); 2451573-87-6 (dTAGV-1-NEG)
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| PubChem CID |
155970211
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
271Ų
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| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
32
|
| 重原子数目 |
90
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| 分子复杂度/Complexity |
2210
|
| 定义原子立体中心数目 |
7
|
| SMILES |
CC[C@@H](C1=CC(=C(C(=C1)OC)OC)OC)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O[C@H](CCC3=CC(=C(C=C3)OC)OC)C4=CC=CC=C4OCC(=O)NCCCCCCC(=O)N[C@H](C(=O)N5C[C@@H](C[C@H]5C(=O)N[C@@H](C)C6=CC=C(C=C6)C7=C(N=CS7)C)O)C(C)(C)C.Cl
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| InChi Key |
WZEDGWVEEAWMSD-LNVAYBNASA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C68H90N6O14S.ClH/c1-12-49(47-36-57(84-9)61(86-11)58(37-47)85-10)65(79)73-34-20-18-22-51(73)67(81)88-54(31-25-44-26-32-55(82-7)56(35-44)83-8)50-21-16-17-23-53(50)87-40-60(77)69-33-19-14-13-15-24-59(76)72-63(68(4,5)6)66(80)74-39-48(75)38-52(74)64(78)71-42(2)45-27-29-46(30-28-45)62-43(3)70-41-89-62;/h16-17,21,23,26-30,32,35-37,41-42,48-49,51-52,54,63,75H,12-15,18-20,22,24-25,31,33-34,38-40H2,1-11H3,(H,69,77)(H,71,78)(H,72,76);1H/t42-,48+,49-,51-,52-,54+,63+;/m0./s1
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| 化学名 |
[(1R)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-1-[2-[2-[[7-[[(2S)-1-[(2S,4R)-4-hydroxy-2-[[(1S)-1-[4-(4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)phenyl]ethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-7-oxoheptyl]amino]-2-oxoethoxy]phenyl]propyl] (2S)-1-[(2S)-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)butanoyl]piperidine-2-carboxylate;hydrochloride
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| 别名 |
dTAGV-1 (hydrochloride); dTAGV-1 hydrochloride;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
Typically soluble in DMSO (e.g. 10 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.7788 mL | 3.8941 mL | 7.7882 mL | |
| 5 mM | 0.1558 mL | 0.7788 mL | 1.5576 mL | |
| 10 mM | 0.0779 mL | 0.3894 mL | 0.7788 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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