| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
VHL; FKBP12F36V fusion protein
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 293FT 细胞中,dTAGV-1(0.1 nM-10 μM;24 h)TFA 会导致 FKBP12F36V-Nluc 强烈降解,但对 FKBP12WT-Nluc 没有影响[1]。 THAL-SNS-032 与 dTAGV-1(125-2000 nM;24 h)TFA 共同处理会导致 CDK9 和 LACZ-FKBP12F36V 显着降解[1]。 dTAGV-1(500 nM;1–24 小时)TFA 导致 pERK1/2 和 KRASG12V 快速降解[1]。在尤文肉瘤中,dTAGV-1(50-5000 nM;24 小时)TFA 促进 EWS/FLI 降解[1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
dTAGV-1(35 mg/kg;腹膜内注射,每天一次,持续 4 天) 在小鼠中,TFA 会导致 FKBP12F36V-Nluc 降解[1]。小鼠中 TFA 半衰期(T1/2=3.64 和 4.4 h)、Cmax(595 和 2123 ng/mL)以及高暴露量(AUCinf = 3136 和 18517 h·ng/mL)均受 dTAGV-1 影响( 2-10 毫克/千克;腹膜内注射) TFA[1]。小鼠的半衰期 (T1/2=3.02 h)、Cmax (7780 ng/mL) 和大暴露量 (AUCinf = 3329 h·ng/mL) 均受到 dTAGV-1 (2 mg/kg; iv) TFA 的影响[1]。
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| 酶活实验 |
FKBP12WT和FKBP12F36V双荧光素酶测定[1]
采用293FT FKBP12WT-Nluc和FKBP12F36V-Nluc细胞进行双荧光素酶检测6。简而言之,将细胞以每孔2000个细胞的速度,在20µL合适的培养基中,在384孔的白色培养板中,粘附过夜,并使用Janus Workstation引脚工具添加100 nL化合物,在37℃下放置24 h。为了评估Fluc信号,将板置于室温,加入20µL Dual-Glo Reagent 10 min,在Envision 2104平板读取仪上测量发光。随后,加入20µL Dual-Glo Stop & Glo Reagent,静置10 min,再次测量发光,捕捉Nluc信号。使用GraphPad PRISM v8分析和绘制Nluc/Fluc信号的dmso归一化比率。 |
| 细胞实验 |
细胞活力分析[1]
使用CellTiter-Glo 检测2d贴壁或超低贴壁3d球体的细胞活力。在Envision 2104平板阅读器和Fluostar Omega阅读器上测量发光,并使用GraphPad PRISM v8分析数据。使用CellTiter-Glo进行协同评估,并对参考文献34中描述的方案进行以下修改。简而言之,将EWS502细胞以每孔1000个细胞的速度,在50µL合适的培养基中,在384孔的白色培养板中粘附过夜,并使用Janus Workstation引脚工具添加100 nL化合物,放置72小时。加入10µL CellTiter-glo测定细胞活力,室温孵育15分钟。在Envision 2104平板阅读器上测量发光,使用GraphPad PRISM v8对数据进行分析。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型: 将 MV4;11 luc-FKBP12F36V 细胞移植到 8 周龄免疫缺陷雌性小鼠体内[1]
剂量: 35 mg/kg 给药途径: 腹腔注射,每日一次,连续 4 天 实验结果: 首次和第三次给药后 4 小时观察到生物发光信号显著下降。最后一次给药后 28 小时降解明显。 动物研究:化合物制剂 [1] 用于腹腔注射的 dTAG-13 和 dTAGV-1 的制剂方法是:先将其溶解于 DMSO 中,然后用 20% 溶剂:0.9% 无菌生理盐水 (w:v) 稀释,最终制剂中含有 5% DMSO。 dTAG-13 和 dTAGV-1 的最大溶解度分别为 35 mg kg⁻¹ 和 40 mg kg⁻¹。制剂在室温下可稳定保存 7 天。用于静脉注射时,dTAG-13 和 dTAGV-1 的配制方法为:先将其溶解于 DMSO 中,然后用 5% 溶菌酶:0.9% 无菌生理盐水(w/v)稀释,最终制剂中含有 5% DMSO。 动物研究:药代动力学 (PK) 评价 [1] 在 8 周龄 C57BL/6J 雄性小鼠中评估了药代动力学,分别在 0.08、0.25、0.5、1、2、4、6 和 8 小时(2 mg kg−1 dTAG-13 经尾静脉静脉注射 (IV)、10 mg kg−1 dTAG-13 经腹腔注射 (IP) 和 2 mg kg−1 dTAGV-1 经尾静脉静脉注射给药)以及 0.25、0.5、1、2、4、6、8、24 和 48 小时(2 mg kg−1 dTAGV-1 经腹腔注射给药和 10 mg kg−1 dTAGV-1 经腹腔注射给药)采集血液样本。通过离心法制备血浆,并采用 LC-MS/MS 法测定血浆浓度,质谱跃迁为 49600à340 AMU。使用 Phoenix WinNonlin 计算 PK 参数,以确定血浆峰浓度 (Cmax)、口服生物利用度 (%F)、暴露量 (AUC)、半衰期 (t1/2)、清除率 (CL) 和分布容积 (Vd)。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
化学生物学策略,例如降解标签(dTAG)系统,可直接扰乱蛋白质稳态,与基因方法相比具有时间优势,并且比小分子抑制剂具有更高的选择性。我们描述了dTAGV-1,一种特异性VHL募集dTAG分子,可快速降解FKBP12F36V标记的蛋白质。dTAGV-1克服了先前报道的CRBN募集dTAG分子降解难降解癌基因的局限性,支持联合降解剂研究,并有助于在细胞和小鼠中研究蛋白质功能。[1]
我们报道了dTAGV-1,一种高效且特异性VHL募集的FKBP12F36V标记蛋白质降解剂。dTAGV-1具有更优的药代动力学/药效学特性,可作为体内应用的优化工具。通过对PDAC模型中突变型KRAS降解的评估,我们发现CRBN或VHL均可被协同利用,以缓解由该癌蛋白协调的异常信号传导。相反,我们观察到这些E3泛素连接酶复合物降解EWS/FLI的能力存在情境差异。这与我们最近的报告一致,该报告显示,在HCT116细胞中,dTAGV-1能够有效降解核心介导亚基(MED14),而CRBN募集的dTAG分子在该细胞中无效。我们观察到,MED14的快速降解会阻断谱系特异性转录回路。总之,我们的研究支持使用dTAGV-1来克服dTAG系统目前的局限性,从而能够评估难以被CRBN募集的dTAG分子降解的融合蛋白的直接效应。 [1] 我们利用dTAGV-1研究EWS/FLI,结果表明VHL介导的EWS/FLI降解能够快速改变下游靶蛋白的表达,并导致尤文氏肉瘤细胞出现明显的生长缺陷,从而为研究EWS/FLI缺失的直接后果提供了一个强有力的模型系统。该数据支持使用直接作用的异双功能降解剂或分子胶来靶向降解EWS/FLI可能是一种可行的策略,并揭示了与BET溴结构域降解剂联合使用的潜在策略。本研究提供的dTAG分子及其配对对照将有助于评估针对更广泛靶点的精确翻译后蛋白去除的功能后果。dTAG系统能够快速调控蛋白丰度,并可作为一种多功能策略,用于确定靶向降解是否是针对特定靶点在体外和体内进行药物开发的有效方法。[1] |
| 分子式 |
C68H91CLN6O14S
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|---|---|
| 分子量 |
1284.0
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| 精确质量 |
1282.6002
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| CAS号 |
2624313-16-0
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| 相关CAS号 |
2624313-15-9 (dTAGV-1 TFA); 2624313-16-0 (dTAGV-1 hydrochloride); 2451573-87-6 (dTAGV-1-NEG)
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| PubChem CID |
155970211
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
271Ų
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| SMILES |
CC[C@@H](C1=CC(=C(C(=C1)OC)OC)OC)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O[C@H](CCC3=CC(=C(C=C3)OC)OC)C4=CC=CC=C4OCC(=O)NCCCCCCC(=O)N[C@H](C(=O)N5C[C@@H](C[C@H]5C(=O)N[C@@H](C)C6=CC=C(C=C6)C7=C(N=CS7)C)O)C(C)(C)C.Cl
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| InChi Key |
WZEDGWVEEAWMSD-LNVAYBNASA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C68H90N6O14S.ClH/c1-12-49(47-36-57(84-9)61(86-11)58(37-47)85-10)65(79)73-34-20-18-22-51(73)67(81)88-54(31-25-44-26-32-55(82-7)56(35-44)83-8)50-21-16-17-23-53(50)87-40-60(77)69-33-19-14-13-15-24-59(76)72-63(68(4,5)6)66(80)74-39-48(75)38-52(74)64(78)71-42(2)45-27-29-46(30-28-45)62-43(3)70-41-89-62;/h16-17,21,23,26-30,32,35-37,41-42,48-49,51-52,54,63,75H,12-15,18-20,22,24-25,31,33-34,38-40H2,1-11H3,(H,69,77)(H,71,78)(H,72,76);1H/t42-,48+,49-,51-,52-,54+,63+;/m0./s1
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| 化学名 |
[(1R)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)-1-[2-[2-[[7-[[(2S)-1-[(2S,4R)-4-hydroxy-2-[[(1S)-1-[4-(4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)phenyl]ethyl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-7-oxoheptyl]amino]-2-oxoethoxy]phenyl]propyl] (2S)-1-[(2S)-2-(3,4,5-trimethoxyphenyl)butanoyl]piperidine-2-carboxylate;hydrochloride
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| 别名 |
dTAGV-1 (hydrochloride); dTAGV-1 hydrochloride;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
Typically soluble in DMSO (e.g. 10 mM)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.7788 mL | 3.8941 mL | 7.7882 mL | |
| 5 mM | 0.1558 mL | 0.7788 mL | 1.5576 mL | |
| 10 mM | 0.0779 mL | 0.3894 mL | 0.7788 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。