Stafib-2

别名: Stafib-2; 2097938-74-2; Benzamide, 4-[2-[[[3,4-bis(phosphonooxy)phenyl]methyl]amino]-2-oxoethoxy]-N-(4-phenoxyphenyl)-; 4-((2-(4-((4-Phenoxyphenyl)carbamoyl)phenoxy)acetamido)methyl)-1,2-phenylene bis(dihydrogen phosphate); [4-[[[2-[4-[(4-phenoxyphenyl)carbamoyl]phenoxy]acetyl]amino]methyl]-2-phosphonooxyphenyl] dihydrogen phosphate; Stafib-2?; DTXSID601118678

目录号: V69141 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

Stafib-2 是一种有效且特异性的转录因子 STAT5b 抑制剂，抑制 STAT5b 和 STAT5a 的 IC50 值分别为 82 nM 和 1.7 μM。

Stafib-2 CAS号: 2097938-74-2
产品类别: STAT

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

产品描述
生物活性&实验参考方法
化学信息
溶解度数据
计算器
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产品描述

Stafib-2 是一种有效且特异性的转录因子 STAT5b 抑制剂，抑制 STAT5b 和 STAT5a 的 IC50 值分别为 82 nM 和 1.7 μM。 Stafib-2的细胞通透性较差。

生物活性&实验参考方法

靶点	STAT5b（IC50 = 82 nM)
体外研究 (In Vitro)	Stafib-2 对 STAT5b 的亲和力非常高 (Ki=8.8 nM)[1]。在 K562 和 MDA-MB-231 细胞中，stafib-2（3–10 μM；4-48 小时）不表现出任何可辨别的活性[1]。利用等温滴定量热法（ITC）和蛋白质点突变体分析联合验证了Stafib-2的结合位点，这是首次利用ITC对野生型和突变型蛋白的功能比较，用氨基酸分辨率来表征STAT蛋白的小分子配体的结合位点。前药Pomstafib-2选择性抑制人白血病细胞中STAT5b酪氨酸磷酸化，并以stat5依赖的方式诱导细胞凋亡。我们提出Pomstafib-2作为一种化学工具来解决STAT5蛋白在不同细胞过程中所起作用的基本问题，Pomstafib-2是目前可用的最活跃的STAT5b活化选择性抑制剂
酶活实验	荧光偏振（FP）测定[1] 测试化合物取代荧光团标记肽（最终浓度：10 nM）从各自结合蛋白的能力如前所述进行了分析。肽序列为：STAT1: 5-羧基荧光素- gy (PO3H2)DKPHVL；STAT3: 5-carboxyfluorescein-GY (PO3H2) LPQTV-NH2;STAT4: 5-carboxyfluorescein-GY (PO3H2) LPQNID-OH;STAT5a和STAT5b: 5-羧基荧光素- gy (PO3H2)LVLDKW；STAT6: 5-carboxyfluorescein-GY (PO3H2) VPWQDLI-OH;Lck SH2: 5-羧基荧光素gy (PO3H2)EEIP。由于蛋白质不稳定，未对STAT2进行分析。最终蛋白浓度：STAT1: 420 nM；STAT3: 270 nM；STAT4: 130 nM；STAT5a: 130 nM；STAT5b: 100 nM；STAT6: 310 nM；lk SH2: 30 nM。这些浓度对应于各自蛋白-肽相互作用的kd值。移液部分使用Biomek FX机器人进行。在加入荧光标记的肽之前，将蛋白质和化合物孵育1小时。另外一个小时后，荧光偏振测量使用无限F500平板阅读器。最终缓冲液浓度：10 mM Tris (pH 8.0), 50 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT， 0.1% Nonidet P-40替代品，2% DMSO。根据肽-蛋白结合曲线拟合，将FP的变化转化为抑制百分比。根据IC50数据，使用已发表的公式计算ki值。等温滴定热法（ITC） [1] ITC实验在MicroCal VP-ITC量热计上进行。典型的滴定设置为：25°C细胞温度，150 s初始延迟，约20µM STAT蛋白在10 mM Tris中，50 mM NaCl, pH 8.0, 200µM化合物4作为四钠盐，搅拌速度300 rpm，参考功率为20µcal/s。所有的溶液在实验前都脱了气。结果数据通过NITPIC和SEDPHAT34进行分析，并拟合单位点结合模型，同时将4的浓度定义为固定。采用了低噪声热图积分方法。插图使用GUSSI制作。
细胞实验	Western Blots [1] 如前所述，转染培养的K562细胞并进行Western blotting。使用Fugene HD转染试剂(每孔1 × 106个细胞，1 ml培养基，DNA比例为4:1)。24 h后，分别用化合物或DMSO处理细胞4 h （DMSO终浓度0.2%）。收获后，细胞裂解（裂解缓冲液组成：50 mM Tris-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 10 mM Na4P2O7, 10%甘油，1% Triton X-100, 1 mM EDTA， 100 ng/mL抑蛋白蛋白，1 mM Na3VO4, 10 mM NaF, 1 mM PMSF）。通过SDS-PAGE（10%）分离细胞裂解液组分，然后转移到硝化纤维素膜上。一抗(phospho-STAT5；STAT5;α-兔hrp二抗和ECL检测β-Actin)，并用ImageQuant成像仪进行可视化。采用ImageJ软件（NIH）进行信号定量。凋亡试验[1] 细胞凋亡检测如前所述16。简而言之，将K562细胞（每孔2.5 × 105个细胞）或MDA-MB-231细胞（每孔1 × 105个细胞）接种于24孔组织培养板中，用化合物8按指定浓度（终DMSO浓度：0.2%）处理48小时。48h后收获细胞。用温磷酸盐缓冲盐水（PBS）清洗MDA-MB-231细胞两次，然后用Accutase在37°C下孵育10分钟。用每孔的细胞培养上清进行精准酶中和和细胞重悬。收获后，细胞在4°C下3000 rpm离心5分钟，用冷PBS洗涤2次，再次离心。使用PE Annexin V凋亡检测试剂盒对细胞进行染色。将细胞重悬于结合缓冲液中，并与PE Annexin V和7-AAD在4℃下孵育30 min。用LSRⅱ型流式细胞仪检测细胞凋亡。
参考文献	[1]. Rational development of Stafib-2: a selective, nanomolar inhibitor of the transcription factor STAT5b. Sci Rep. 2017 Apr 11;7(1):819.
其他信息	转录因子STAT5b是肿瘤治疗的靶点。我们近期报道了儿茶酚二磷酸及其衍生物（如Stafib-1）是首批STAT5b SH2结构域的选择性抑制剂。本文中，我们利用固态核磁共振证实了儿茶酚二磷酸与STAT5b的结合，并报道了Stafib-1（Ki = 44 nM）到Stafib-2（Ki = 9 nM）的合理优化。我们结合等温滴定量热法（ITC）和蛋白质点突变分析验证了Stafib-2的结合位点，这是首次利用ITC对野生型和突变型蛋白质进行功能比较，从而以氨基酸分辨率表征STAT蛋白小分子配体的结合位点。前药Pomstafib-2选择性抑制人白血病细胞中STAT5b的酪氨酸磷酸化，并以STAT5依赖的方式诱导细胞凋亡。我们提出Pomstafib-2，它是目前活性最高、选择性最强的STAT5b激活抑制剂，可作为一种化学工具，用于解决不同STAT5蛋白在各种细胞过程中所发挥的基本作用这一根本问题。[1] 我们报道了STAT5b SH2结构域抑制剂Stafib-1 (2) 到Stafib-2 (4) 的合理优化，Stafib-2在保持对密切相关的STAT5a SH2结构域的高选择性的同时，活性显著提高。我们首次将固态核磁共振应用于配体与SH2结构域结合的分析。Stafib-2对STAT5b的高亲和力使我们能够通过等温滴定量热法(ITC)首次比较小分子STAT SH2结构域配体与野生型和突变型STAT蛋白的结合情况，从而实验验证了STAT5b上Stafib-2的亲水性和疏水性结合口袋。戊酰氧基甲酯Pomstafib-2 (8) 能以仅1.5 µM的IC50值抑制培养的人类白血病细胞中STAT5b的磷酸化，且对STAT5a的磷酸化无显著影响，并以STAT5依赖的方式增加人类白血病细胞的凋亡率。由于Pomstafib-2 (8) 是目前活性最高、选择性最强的STAT5b激活抑制剂，我们建议将其用作化学工具，以解析活细胞中两种STAT5蛋白重叠且非冗余的功能。[1]

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C28H26N2O12P2
分子量	644.4597697258
精确质量	644.096
元素分析	C, 52.18; H, 4.07; N, 4.35; O, 29.79; P, 9.61
CAS号	2097938-74-2
PubChem CID	129896883
外观&性状	White to off-white solid powder
LogP	1.8
tPSA	210
氢键供体(HBD)数目	6
氢键受体(HBA)数目	12
可旋转键数目(RBC)	13
重原子数目	44
分子复杂度/Complexity	1020
定义原子立体中心数目	0
SMILES	P(=O)(O)(O)OC1=C(C=CC(=C1)CNC(COC1C=CC(C(NC2C=CC(=CC=2)OC2C=CC=CC=2)=O)=CC=1)=O)OP(=O)(O)O
InChi Key	LJGIDZSIOSYQMR-UHFFFAOYSA-N
InChi Code	InChI=1S/C28H26N2O12P2/c31-27(29-17-19-6-15-25(41-43(33,34)35)26(16-19)42-44(36,37)38)18-39-22-11-7-20(8-12-22)28(32)30-21-9-13-24(14-10-21)40-23-4-2-1-3-5-23/h1-16H,17-18H2,(H,29,31)(H,30,32)(H2,33,34,35)(H2,36,37,38)
化学名	[4-[[[2-[4-[(4-phenoxyphenyl)carbamoyl]phenoxy]acetyl]amino]methyl]-2-phosphonooxyphenyl] dihydrogen phosphate
别名	Stafib-2; 2097938-74-2; Benzamide, 4-[2-[[[3,4-bis(phosphonooxy)phenyl]methyl]amino]-2-oxoethoxy]-N-(4-phenoxyphenyl)-; 4-((2-(4-((4-Phenoxyphenyl)carbamoyl)phenoxy)acetamido)methyl)-1,2-phenylene bis(dihydrogen phosphate); [4-[[[2-[4-[(4-phenoxyphenyl)carbamoyl]phenoxy]acetyl]amino]methyl]-2-phosphonooxyphenyl] dihydrogen phosphate; Stafib-2?; DTXSID601118678
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO: 50 mg/mL (77.58 mM)
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。配方 2 中的溶解度:* ≥ 2.5 mg/mL (3.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More* 配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO: 50 mg/mL (77.58 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	1.5517 mL	7.7584 mL	15.5169 mL
	5 mM	0.3103 mL	1.5517 mL	3.1034 mL
	10 mM	0.1552 mL	0.7758 mL	1.5517 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。