| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
STAT5b（IC50 = 82 nM)
Stafib-2 primarily targets the transcription factor STAT5b, with high selectivity over STAT5a. It binds to the SH2 domain of STAT5b, inhibiting its phosphorylation and subsequent activation. The compound shows an IC50 of 82 nM for STAT5b and 1.7 μM for STAT5a, indicating approximately 20-fold selectivity for the STAT5b isoform. This selectivity makes Stafib-2 a valuable chemical probe for dissecting the distinct biological functions of STAT5b versus STAT5a in various cellular contexts. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
stafib-2 对 STAT5b 的亲和力极高 (Ki=8.8 nM)[1]。在 K562 和 MDA-MB-231 细胞中，stafib-2（3–10 μM；4-48 小时）未表现出任何可辨别的活性[1]。
结合等温滴定量热法 (ITC) 和蛋白质点突变分析验证了 Stafib-2 的结合位点，这是首次利用 ITC 对野生型和突变型蛋白质进行功能比较，以氨基酸分辨率表征 STAT 蛋白小分子配体的结合位点。前药 Pomstafib-2 选择性抑制人白血病细胞中 STAT5b 的酪氨酸磷酸化，并以 STAT5 依赖的方式诱导细胞凋亡。我们提出Pomstafib-2，它是目前活性最高、选择性最强的STAT5b激活抑制剂，可作为一种化学工具，用于解决不同STAT5蛋白在各种细胞过程中所发挥的基本作用这一根本问题。[1] 生化实验表明，Stafib-2对STAT5b具有强效抑制活性，IC50值为82 nM。相比之下，其对STAT5a的活性显著较弱，IC50值为1.7 μM。该化合物的细胞渗透性较差，限制了其在基于细胞的实验中的有效性。因此，其体外活性主要在无细胞酶体系中进行表征，在该体系中，它能有效阻断STAT5b的磷酸化及其下游信号传导事件。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
Stafib-2 的体内活性数据有限。作为一种细胞渗透性较差的工具化合物，其在动物模型中的应用受到限制。该化合物主要用于体外生化研究，以探究 STAT5b 的功能和调控。对于 STAT5b 抑制的体内研究，研究人员通常会选择其他具有更好药代动力学特性的化合物，或采用基因敲低等替代策略。需要开展进一步的研究来全面评估其在动物模型中的应用潜力。
|
| 酶活实验 |
荧光偏振 (FP) 检测 [1]
按照先前描述的方法分析了测试化合物将荧光标记肽（终浓度：10 nM）从其各自结合蛋白上置换下来的能力。肽序列如下：STAT1：5-羧基荧光素-GY(PO3H2)DKPHVL；STAT3：5-羧基荧光素-GY(PO3H2)LPQTV-NH2；STAT4：5-羧基荧光素-GY(PO3H2)LPQNID-OH；STAT5a 和 STAT5b：5-羧基荧光素-GY(PO3H2)LVLDKW；STAT6：5-羧基荧光素-GY(PO3H2)VPWQDLI-OH；Lck SH2：5-羧基荧光素-GY(PO3H2)EEIP。由于蛋白质不稳定，未对STAT2进行分析。最终蛋白质浓度：STAT1：420 nM；STAT3：270 nM；STAT4：130 nM；STAT5a：130 nM；STAT5b：100 nM；STAT6：310 nM；Lck SH2：30 nM。这些浓度对应于相应蛋白质-肽相互作用的解离常数（Kd值）。部分移液操作使用Biomek FX机器人完成。蛋白质和化合物在加入荧光标记肽之前孵育1小时。再孵育1小时后，使用Infinite F500酶标仪测量荧光偏振。最终缓冲液浓度：10 mM Tris (pH 8.0)、50 mM NaCl、1 mM EDTA、1 mM DTT、0.1% Nonidet P-40 替代物、2% DMSO。FP 的变化根据肽-蛋白结合曲线拟合转化为抑制百分比。Ki 值根据 IC50 数据，使用已发表的公式计算得出。 等温滴定量热法 (ITC) [1] ITC 实验在 MicroCal VP-ITC 量热仪上进行。典型的滴定设置如下：样品池温度 25 °C，初始延迟 150 s，约 20 µM STAT 蛋白溶于 10 mM Tris、50 mM NaCl (pH 8.0) 缓冲液中，200 µM 化合物 4（四钠盐），搅拌速度 300 rpm，参考功率为 20 µcal/s。所有溶液在实验前均进行脱气处理。使用 NITPIC 和 SEDPHAT34 对所得数据进行分析，并用单一位点结合模型进行拟合，同时将浓度 4 定义为固定值。采用低噪声热图积分方法。插图使用 GUSSI 绘制。 Stafib-2 的体外酶/受体结合（无细胞）测定通常采用基于荧光偏振的竞争性测定，使用与 STAT5b 的 SH2 结构域结合的荧光标记磷酸肽探针。将重组 STAT5b 蛋白与不同浓度的 Stafib-2 和探针孵育。测量荧光偏振信号的降低（表明探针被化合物置换），以计算 IC50 值。或者，可以使用标记的抗 STAT5b 抗体和磷酸肽进行 TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）测定，其中 Stafib-2 对结合的抑制会导致 FRET 信号的消失。 |
| 细胞实验 |
Western印迹分析[1]
按照先前描述的方法对培养的K562细胞进行转染和Western印迹分析。使用Fugene HD转染试剂（每孔1×10⁶个细胞，1 ml培养基，Fugene与DNA的比例为4:1）将编码STAT5a-GFP或STAT5b-GFP的质粒转染至K562细胞中。24小时后，用化合物或DMSO处理细胞4小时（DMSO终浓度：0.2%）。收集细胞后，进行裂解（裂解缓冲液成分：50 mM Tris-HCl pH 7.5、150 mM NaCl、10 mM Na4P2O7、10% 甘油、1% Triton X-100、1 mM EDTA、100 ng/mL 抑蛋白酶、1 mM Na3VO4、10 mM NaF、1 mM PMSF）。将细胞裂解液组分通过 SDS-PAGE (10%) 电泳分离，然后转移至硝酸纤维素膜。使用 α-兔-HRP 二抗和 ECL 法检测一抗（磷酸化 STAT5、STAT5、β-肌动蛋白），并使用 ImageQuant 成像仪进行显色。使用 ImageJ 软件 (NIH) 进行信号定量。 细胞凋亡检测[1] 细胞凋亡检测按先前描述的方法进行16。简而言之，将K562细胞（每孔2.5 × 10⁵个细胞）或MDA-MB-231细胞（每孔1 × 10⁵个细胞）接种于24孔组织培养板中，并用指定浓度的化合物8（最终DMSO浓度：0.2%）处理48小时。48小时后收集细胞。MDA-MB-231细胞用温热的磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤两次，然后在37℃下用Accutase孵育10分钟。用各孔的细胞培养上清液中和Accutase并重悬细胞。收集细胞后，在4℃下以3000 rpm离心5分钟，用冷的PBS洗涤两次，再次离心。使用 PE Annexin V 细胞凋亡检测试剂盒 I 对细胞进行染色。将细胞重悬于结合缓冲液中，并与 PE Annexin V 和 7-AAD 在 4°C 下孵育 30 分钟。使用 LSR II 流式细胞仪检测细胞凋亡。 由于 Stafib-2 的细胞渗透性较差，因此通常不用于标准的基于细胞的活力或增殖检测。当评估细胞活性时，通常需要使用透化细胞系统或过表达 STAT5b 以促进化合物进入细胞。在此类系统中，可以使用荧光素酶报告基因检测来测量化合物抑制 STAT5b 依赖性转录活性的能力。将细胞转染 STAT5 反应性荧光素酶构建体，并用 Stafib-2 处理，然后测量荧光素酶活性以量化 STAT5b 介导的转录抑制情况。 |
| 动物实验 |
由于Stafib-2的药代动力学性质较差且细胞渗透性有限，其体内动物研究数据并不丰富。作为一种研究工具，它主要用于离体或生化分析。对于靶向STAT5b的化合物，典型的体内模型包括免疫缺陷小鼠的异种移植瘤模型，通过口服或腹腔注射给药，评估肿瘤生长抑制情况和STAT5b磷酸化水平。然而，针对Stafib-2的此类研究在文献中鲜有报道。
|
| 药代性质 (ADME/PK) |
现有文献中关于Stafib-2的药代动力学数据报道并不多。已知该化合物细胞渗透性差，这显著限制了其在细胞和体内系统中的生物利用度和应用价值。这一特性提示Stafib-2可能口服吸收率低且清除迅速。作为一种主要用于体外生化研究的工具化合物，Stafib-2的详细ADME（吸收、分布、代谢和排泄）特征，包括半衰期、清除率和分布容积，通常不会被详细表征。
|
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
Stafib-2 的毒性数据未公开。作为一种仅供实验室使用的研究化合物，尚未进行全面的毒理学研究，包括急性毒性、慢性毒性、遗传毒性和致癌性评估。处理该化合物时应采取标准安全预防措施，包括使用适当的个人防护装备并在通风良好的区域工作。研究人员应查阅材料安全数据表 (MSDS) 以获取具体的安全信息。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
转录因子STAT5b是癌症治疗的靶点。我们最近报道了儿茶酚二磷酸及其衍生物（如Stafib-1）是STAT5b SH2结构域的首批选择性抑制剂之一。在本文中，我们使用固态NMR确认了儿茶酚二磷酸与STAT5b的结合，并报告了从Stafib-1（Ki = 44 nM）合理优化Stafib-2（Ki = 9 nM）。我们使用等温滴定量热法（ITC）和蛋白质点突变分析验证了Stafib-2的结合位点。这是首次使用ITC比较野生型和突变蛋白的功能，从而在氨基酸分辨率上表征小STAT蛋白配体的结合位点。前药Pomstafib-2选择性抑制人类白血病细胞中的STAT5b酪氨酸磷酸化，并以STAT5依赖的方式诱导细胞凋亡。我们提出，Pomstafib-2目前是最活跃和选择性的STAT5b激活抑制剂，可以作为化学工具来解决不同STAT5蛋白在各种细胞过程中的基本作用。[1]
我们报告了STAT5b SH2结构域抑制剂Stafib-1（2）到Stafib-2（4）的合理优化，显著提高了活性，同时保持对密切相关的STAT5a SH2结构域的高选择性。我们首次将固态NMR应用于SH2结构域的配体结合分析。Stafib-2对STAT5b的高亲和力使我们能够首次通过等温滴定量热法（ITC）比较小分子STAT SH2结构域配体与野生型和突变STAT蛋白的结合，从而实验性验证了Stafib-2在STAT5b上的亲水和疏水结合口袋。Pomstafib-2（8）以仅1.5 µM的IC50值抑制了培养的人类白血病细胞中的STAT5b磷酸化，并对STAT5a的磷酸化没有显著影响，增加了人类白血病细胞的凋亡率，且以STAT5依赖的方式进行。由于Pomstafib-2（8）目前是最活跃和选择性的STAT5b激活抑制剂，我们建议将其作为化学工具来阐明两种STAT5蛋白在活细胞中的重叠和非冗余功能。[1] Stafib-2是一种选择性STAT5b抑制剂，主要作为研究工具用于研究STAT5b信号通路。其作用机制涉及与STAT5b的SH2结构域结合，阻止其磷酸化和激活。该化合物对STAT5b的选择性高于STAT5a，使其在剖析同种型特异性功能方面具有价值。然而，其较差的细胞渗透性限制了其在细胞外系统中的应用。Stafib-2未进入临床开发，也未获得治疗使用的批准。它仍然是用于STAT5b生物学基础研究和开发更具药物特性的STAT5b抑制剂的实验工具。 |
| 分子式 |
C28H26N2O12P2
|
|---|---|
| 分子量 |
644.4597697258
|
| 精确质量 |
644.096
|
| 元素分析 |
C, 52.18; H, 4.07; N, 4.35; O, 29.79; P, 9.61
|
| CAS号 |
2097938-74-2
|
| PubChem CID |
129896883
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
1.8
|
| tPSA |
210
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
6
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
12
|
| 可旋转键数目(RBC) |
13
|
| 重原子数目 |
44
|
| 分子复杂度/Complexity |
1020
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
P(=O)(O)(O)OC1=C(C=CC(=C1)CNC(COC1C=CC(C(NC2C=CC(=CC=2)OC2C=CC=CC=2)=O)=CC=1)=O)OP(=O)(O)O
|
| InChi Key |
LJGIDZSIOSYQMR-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C28H26N2O12P2/c31-27(29-17-19-6-15-25(41-43(33,34)35)26(16-19)42-44(36,37)38)18-39-22-11-7-20(8-12-22)28(32)30-21-9-13-24(14-10-21)40-23-4-2-1-3-5-23/h1-16H,17-18H2,(H,29,31)(H,30,32)(H2,33,34,35)(H2,36,37,38)
|
| 化学名 |
[4-[[[2-[4-[(4-phenoxyphenyl)carbamoyl]phenoxy]acetyl]amino]methyl]-2-phosphonooxyphenyl] dihydrogen phosphate
|
| 别名 |
Stafib-2; 2097938-74-2; Benzamide, 4-[2-[[[3,4-bis(phosphonooxy)phenyl]methyl]amino]-2-oxoethoxy]-N-(4-phenoxyphenyl)-; 4-((2-(4-((4-Phenoxyphenyl)carbamoyl)phenoxy)acetamido)methyl)-1,2-phenylene bis(dihydrogen phosphate); [4-[[[2-[4-[(4-phenoxyphenyl)carbamoyl]phenoxy]acetyl]amino]methyl]-2-phosphonooxyphenyl] dihydrogen phosphate; Stafib-2?; DTXSID601118678
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 50 mg/mL (77.58 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.88 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.5517 mL | 7.7584 mL | 15.5169 mL | |
| 5 mM | 0.3103 mL | 1.5517 mL | 3.1034 mL | |
| 10 mM | 0.1552 mL | 0.7758 mL | 1.5517 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
