| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
mTORC1[1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
NV-5138调节细胞中Sestrin2-Gator2相互作用并激活mTORC1。 [1]
NV-5138缺乏蛋白生成能力[1] NV-5138不被支链氨基转氨酶（BCAT）代谢。[1] NV-5138对Sestrin1/2具有选择性[1]。 NV-5138产生类似氯胺酮的抗抑郁行为反应。[1] < br > NV-5138具有与氯胺酮相似的长效抗抑郁作用[1] nv -5138诱导的抗抑郁作用需要mTORC1信号通路[1] NV-5138增加mPFC锥体神经元突触数量和功能。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
当对大鼠静脉注射和口服给药时，NV-5138 盐酸盐的口服生物利用度接近 100%，血浆消除半衰期约为 3 小时[1]。在 PFC 突触体制剂中，NV-5138 盐酸盐（160 mg/kg，口服，单剂量）显着提高磷酸化 mTOR 和下游靶标磷酸化 p70S6K1 和磷酸化 4EB-P1 的水平[2]。还观察到了 NV-5138 盐酸盐（80 mg/kg，口服，每日，持续 7 天）的抗抑郁作用[2]。
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| 酶活实验 |
体外药理筛选[1]
NV-5138在300µM浓度下进行了一式两份的测试，以检测其与107个药物不良反应靶点的潜在相互作用，包括21个转运体、受体、离子通道和中枢神经系统表达的酶。排除显著相互作用的阈值设置为绑定/响应bbb50 %。 BCAT酶促测定[1] 测定缓冲条件为：α -酮戊二酸酯（5 mM）、NADH （0.075 mM）、吡哆醛5′-磷酸（5µM）、亮氨酸脱氢酶（0.95 U）、硫酸铵（50 mM）、DTT （5 mM）和载药（水）、l -亮氨酸、精氨酸和NV-5138。将检测缓冲液分配到96孔板中，加热至37°C 10 min，然后在0.1 M磷酸钾缓冲液中加入BCAT1或BCAT2 （72 ng）。然后在RT下使用Envision平板读取器每分钟读取340 nm处的吸光度，持续30分钟。使用的每种试剂的来源可在补充信息中找到。 14c -亮氨酸蛋白掺入试验[1] 用PBS洗涤HeLa细胞一次，然后在含有CHX （10 ug/ml）或DMSO（1%终值）的饥饿培养基（亮氨酸和无血清DMEM）中37℃孵育2.5 h。孵育后，用PBS洗涤一次细胞，然后在含有14c -亮氨酸（2µCi/ml）的标记培养基中与NV-5138或非放射性亮氨酸在37℃下孵育30分钟。孵育后，收集细胞并在Tris/HCl 10 mM pH 7.4 + 1% NP40中裂解。将裂解液与水和20%三氯乙酸（1:1:2）混合，在冰上孵育2小时，沉淀蛋白质。通过离心收集蛋白质，在NaOH中溶解，置于闪烁液中，在Wallac Microbeta Trilux 2450上读取，计数2分钟。闪烁值被归一化为dmso处理井中计数的百分比。 等温滴定热法（ITC）[1] 由于NV-5138是天然配体l -亮氨酸的类似物，并且已知亮氨酸似乎与Sestrin212共同纯化，因此开发了一种将内源性亮氨酸从结合位点置换为较弱的Sestrin2配体L-Methionine24的程序。蛋氨酸后来被亮氨酸和类似物取代，用于直接结合测量。NV-5138合成和ITC蛋白制备的详细信息可参见补充信息。 |
| 细胞实验 |
细胞培养[1]< br >
所有细胞系在添加10% FBS的DMEM中培养，并在37°C和5% CO2中保持。如前所述，产生了稳定表达Flag-WDR24的HEK-293T细胞。对于亮氨酸饥饿，细胞用不含亮氨酸的DMEM和添加10% dFBS孵育50分钟，然后用NV-5138、亮氨酸或载体处理10分钟。用于细胞培养的试剂的详细信息可在补充信息中找到。
<人力资源>
免疫沉淀（IP）免疫印迹（Western blotting）： [1]
如前所述制备细胞裂解物24。裂解物在4°C下13200 rpm离心8 min后被清除。对于抗flag的IPs，将FLAG-M2亲和凝胶加入约2mg的裂解物中，在4°C下旋转孵育3小时。IP后，用含有500 mM NaCl的Triton洗涤缓冲液洗涤一次。在基于裂解物的蛋白相互作用实验中，IPs以指定剂量重悬于含有载体、NV-5138或亮氨酸的细胞质缓冲液中10分钟。化合物孵育后，离心收集IPs。免疫沉淀蛋白变性，SDS-PAGE分离。使用LI-COR成像系统对膜进行成像。所用试剂和抗体在补充信息中列出。 <人力资源> 细胞热移试验（CETSA）[1] CETSA的执行方法如前所述23。简单地说，HEK293T细胞在不含亮氨酸的培养基中孵育1小时，然后加入NV-5138（300µM）、亮氨酸（300µM）或载体（水）再孵育30分钟。收集细胞，300g室温（RT）离心3min， PBS洗涤，再次离心，最后用1ml含EDTA-free蛋白酶抑制剂片（Roche）的RT PBS重悬。每个细胞悬液在指定温度下加热100µl，加热3 min，样品在RT下放置在工作台上3 min，然后在液氮中快速冷冻。为了使细胞溶解，样品经过两个循环的冻融，然后在4°C下20000 g离心20分钟。所得上清80µl变性，SDS-PAGE分离。使用LI-COR成像系统对膜进行成像。使用的抗体在补充信息中列出。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠，体重250-260克[2]。
剂量： 40、80、160毫克/千克。 给药途径： 口服，单次给药（160毫克/千克）或每日一次，共7天（40、80毫克/千克）。 实验结果： 产生抗抑郁作用。 动物/疾病模型： 雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠，体重250-400克[1]。 剂量： 1毫克/千克、5毫克/千克（药代动力学/PK设计）。 给药途径： 静脉注射1毫克/千克，口服5毫克/千克。 实验结果：口服生物利用度几乎为100%，血浆消除半衰期约为3小时。 动物和给药。[2] 除慢性不可预测应激（CUS）实验外，大多数研究均使用体重250-260克的雄性Sprague-Dawley大鼠。CUS实验由于研究持续时间较长，使用了体重120-140克的大鼠。此外，还使用了先前描述的BDNF Val66Met突变敲入小鼠（8-12周龄的Val/Val野生型、杂合Val/Met和纯合Met/Met小鼠）来测试BDNF的作用。动物单独饲养，并置于标准条件下，光照/黑暗周期为12小时/12小时，可自由摄取食物和水。大鼠单次口服给予赋形剂（0.5%甲基纤维素和0.1%吐温80）、NV-5138（40、80或160 mg/kg，口服，Navitor Pharmaceuticals Inc.）、氯胺酮（10 mg/kg，腹腔注射）、DMSO（0.5%；1 ml/kg，腹腔注射）或NBQX（10 mg/kg，腹腔注射，Tocris Bioscience）。在重复给药研究中，NV-5138（40或80 mg/kg，口服）每日一次，共7天；氯胺酮（10 mg/kg，腹腔注射）隔日一次，共6天。 NV-5138 在大鼠体内的药代动力学分析[1] 为测定口服生物利用度，雄性 SD 大鼠分别以 1 mg/kg 的剂量静脉注射（IV）和 5 mg/kg 的剂量口服（PO）给予溶于 0.5% MC/0.1% Tween80 的 NV-5138（每组每个时间点 n = 3）。PO 组大鼠禁食过夜，IV 组大鼠可自由摄取食物和水。给药后，在指定时间点采集尾静脉血至 K2EDTA 抗凝管中，并以 2000 g 离心 5 分钟收集血浆。为测定脑组织和血浆中 NV-5138 的浓度，大鼠以 160 mg/kg 的剂量口服给药（n = 5），给药 1 小时后断头处死，采集躯干血和一侧脑半球。将血浆与含有普瑞巴林作为内标的乙腈混合并离心，脑和心脏样本直接在乙腈中匀浆。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）定量NV-5138的浓度。使用WinNonlin V 6.2统计软件，利用非房室模型生成药代动力学参数。 mTORC1信号通路和突触蛋白的Western Blotting分析[1] SD大鼠经口灌胃给予NV-5138、亮氨酸或赋形剂（50 mg/ml，溶于含0.5% MC和0.1% Tween80的水中），剂量和时间点如所示。给药后，立即用断头台处死动物。快速显微解剖特定脑区，收集组织，并立即液氮速冻。外周组织和所有脑组织均使用MP匀浆器在裂解缓冲液（细胞裂解缓冲液：1% Triton X-100、50 mM HEPES pH 7.4、100 mM NaCl、2 mM EDTA、10 mM β-甘油磷酸钠、10 mM 焦磷酸钠和1种蛋白酶抑制剂）中于4℃下匀浆。各脑区突触蛋白和mTORC1的分析均按照先前描述的方法16在粗突触体制备物上进行。每个样本等量的总蛋白经变性后，通过SDS-PAGE电泳分离。使用LI-COR成像系统对膜进行成像。蛋白水平以微管蛋白或GAPDH水平进行标准化，并进一步以载体处理的对照组大鼠的蛋白水平进行标准化。所用抗体列于补充信息中。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
口服NV-5138后的药代动力学(PK)和药效学(PD)[1]
研究发现，NV-5138的口服生物利用度接近100%，在大鼠静脉和口服给药后，其血浆消除半衰期约为3小时（补充表3和图4a）。鉴于NV-5138良好的药代动力学特性，我们希望确定口服NV-5138是否能够激活自由摄食大鼠脑和其他器官中的mTORC1，并以mTORC1下游底物磷酸化S6 (S240/244pS6)作为该复合物激活状态的替代药效学参数。如图 3a 和补充图 5a 所示，给药 1 小时后，从大脑前额叶皮层 (PFC) 分离的突触体中 S240/244pS6 的含量呈剂量依赖性增加，在 160 mg/kg 剂量下较溶剂对照组显著增加约 2 倍，在 80 mg/kg 剂量下也观察到增加趋势。基于此结果，我们决定使用 160 mg/kg 的口服剂量进行后续实验，结果显示血浆和全脑提取物中的药代动力学特征相似，表明脑暴露量较高（补充图 4b）。单次口服 NV-5138 1 小时后，除前额叶皮层外，包括纹状体、海马、新皮层在内的多个脑区（但不包括小脑）的 mTORC1 均显著激活（图 3b 和补充图 5b）。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
雷帕霉素靶蛋白复合物1 (mTORC1) 与多种重要的慢性疾病相关，其中许多疾病与年龄增长有关。mTORC1 的完全激活需要多种输入信号，包括氨基酸亮氨酸。胞质蛋白 Sestrin1 和 Sestrin2 特异性地结合多蛋白复合物 GATOR2，并将亮氨酸充足状态传递给 mTORC1 通路激活复合物。本文报道了一种新型口服生物利用度高的化合物 NV-5138，它能与 Sestrin2 结合，并在体外和体内激活 mTORC1。与亮氨酸类似，NV-5138 可在多种外周组织中短暂激活 mTORC1，但与亮氨酸不同的是，由于 NV-5138 不参与蛋白质合成，因此它仅在大脑中激活该复合物。因此，NV-5138 将有助于探索尚未满足的医疗需求领域，包括与 mTORC1 激活状态相关的神经精神疾病和认知障碍。[1]临床前研究表明，包括氯胺酮在内的速效抗抑郁药需要刺激 mTORC1 信号通路。该通路受神经元活动、内分泌和代谢信号的调控，尤其是氨基酸亮氨酸，它通过与上游调节因子 sestrin 结合来激活 mTORC1 信号通路。在此，我们研究了 NV-5138 的抗抑郁作用，NV-5138 是一种新型高选择性小分子 sestrin 调节剂，能够穿透血脑屏障。结果表明，单次注射 NV-5138 即可产生快速且持久的抗抑郁作用，并能迅速逆转慢性应激引起的快感缺失。 NV-5138 的抗抑郁作用需要 BDNF 的释放，因为将 BDNF 中和抗体注入内侧前额叶皮层 (mPFC) 或在敲入阻断活性依赖性 BDNF 释放的 BDNF 多态性的小鼠中，均可阻断其行为反应。NV-5138 给药还能迅速增加 mPFC 中的突触数量和功能，并逆转慢性应激引起的突触缺陷。综上所述，这些结果表明 NV-5138 通过激活 mTORC1 通路和 BDNF 信号通路产生快速的突触反应和抗抑郁行为反应，提示对 sestrin 进行药理学调控是开发速效抗抑郁药的一种新方法。[2]
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| 分子式 |
C7H14CLF2NO2
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|---|---|
| 分子量 |
217.64136838913
|
| 精确质量 |
217.068
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| CAS号 |
2639392-70-2
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| 相关CAS号 |
NV-5138;2095886-80-7
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| PubChem CID |
155981983
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| 外观&性状 |
Off-white to brown solid powder
|
| tPSA |
63.3
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
13
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| 分子复杂度/Complexity |
171
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
Cl.FC(C(C)(C)C[C@@H](C(=O)O)N)F
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| InChi Key |
SIUFCONWYBJSOP-WCCKRBBISA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C7H13F2NO2.ClH/c1-7(2,6(8)9)3-4(10)5(11)12;/h4,6H,3,10H2,1-2H3,(H,11,12);1H/t4-;/m0./s1
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| 化学名 |
(2S)-2-amino-5,5-difluoro-4,4-dimethylpentanoic acid;hydrochloride
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| 别名 |
NV-5138 (hydrochloride); 2639392-70-2; (2S)-2-amino-5,5-difluoro-4,4-dimethylpentanoic acid hydrochloride; NV-5138 hydrochloride;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 250 mg/mL (1148.69 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (9.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (9.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (9.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.5947 mL | 22.9737 mL | 45.9474 mL | |
| 5 mM | 0.9189 mL | 4.5947 mL | 9.1895 mL | |
| 10 mM | 0.4595 mL | 2.2974 mL | 4.5947 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
ICSN3250 hydrochloride
Sirolimus isomer C
mTORC1-IN-3
MT-44
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463611831
