mTORC1
Target: NV-5138 selectively targets brain mammalian target of rapamycin complex 1 (mTORC1) and exerts effects by directly activating mTORC1; the EC50 for activating phosphorylation of mTORC1 downstream substrates in vitro is approximately 0.3 μM [1]
- Target: NV-5138 acts as a Sestrin modulator, specifically activating brain mTORC1 by relieving Sestrin-mediated inhibition of mTORC1 [2]

NV-5138调节细胞中Sestrin2-Gator2相互作用并激活mTORC1。 [1]
NV-5138缺乏蛋白生成能力[1]
NV-5138不被支链氨基转氨酶（BCAT）代谢。[1]
NV-5138对Sestrin1/2具有选择性[1]。

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NV-5138产生类似氯胺酮的抗抑郁行为反应。[1] < br > NV-5138具有与氯胺酮相似的长效抗抑郁作用[1]
nv -5138诱导的抗抑郁作用需要mTORC1信号通路[1]
NV-5138增加mPFC锥体神经元突触数量和功能。

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mTORC1激活活性：NV-5138 剂量依赖性激活mTORC1，在原代皮质神经元中，1 μM浓度可使mTORC1下游底物S6核糖体蛋白（Ser235/236位点）磷酸化水平升高2.8倍，4E结合蛋白1（Thr37/46位点）磷酸化水平升高2.1倍 [1]
- Sestrin-mTORC1相互作用调控：在过表达Sestrin2的HEK293T细胞中，NV-5138 （1 μM）可破坏Sestrin2与GATOR2的结合，解除Sestrin2对mTORC1的抑制，使p-S6水平较对照组升高3.2倍 [2]
- 突触可塑性相关分子调控：原代海马神经元经NV-5138 （0.3-3 μM）处理24小时后，突触后致密蛋白95（PSD95）和突触素（Synapsin I）的蛋白表达水平分别升高1.5-2.3倍和1.4-2.1倍，提示促进突触发生 [2]
- 抗抑郁相关体外效应：在皮质酮处理的原代神经元中，NV-5138 （1 μM）可逆转皮质酮诱导的p-S6水平降低（从对照组的42%恢复至91%），同时上调脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA表达水平1.8倍 [2]

研究发现，NV-5138 基本上具有 100% 的口服生物利用度，在大鼠静脉内和口服给药后测定的血浆消除半衰期约为 3 小时[1]。在 PFC 突触体制剂中，NV-5138（160 mg/kg，口服，单剂量）显着提高磷酸化 mTOR 及其下游靶标磷酸化 p70S6K1 和磷酸化 4EB-P1 的水平[2]。此外，NV-5138（80 mg/kg，口服，每天一次，共 7 天）具有抗抑郁特性[2]。

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重复低剂量NV-5138 （80 mg/kg）也有抗抑郁作用。[2]
低剂量NV-5138（40或80 mg/kg， p.o）每天给药共7天（从第0天开始）的抗抑郁效果也进行了测试（图2F）。由于氯胺酮的抗抑郁作用在7天（24天）后开始逆转，因此每隔一天给予氯胺酮（10mg /kg, i.p）作为6天的阳性对照。结果表明，80mg /kg的NV-5138分别显著减少FST和NSFT的静止时间和进食潜伏期，显示出抗抑郁作用，而不改变运动活动或HCF（图2，G-J）。这与单次给药后24小时评估该剂量缺乏疗效形成鲜明对比（图1、B和D）。氯胺酮给药也分别对FST和NSFT的静止时间和进食延迟产生显著影响（图2、G和J）。

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NV-5138可快速逆转慢性应激引起的行为和突触缺陷[2]
快感缺乏是抑郁症的一个核心症状，伴随着慢性不可预测压力（CUS）的暴露，需要一种典型抗抑郁药的慢性治疗来逆转这种影响，这使得CUS成为抑郁症最有效的模型之一（25,26）。CUS模型也为速效抗抑郁药提供了严格的测试，单剂量氯胺酮可快速逆转CUS诱导的快感缺乏，这是蔗糖偏好测试（SPT）确定的(8)。目前的研究结果表明，重复暴露于CUS（21天）可降低蔗糖偏好，单剂量NV-5138可快速逆转这一效应（图3、a和B）。NV-5138给药不影响非应激对照大鼠的蔗糖偏好（图3B）。两组的总饮水量和总液体消耗量无显著差异(补充图1、A、B；本文提供的在线补充材料；https://doi.org/10.1172/JCI126859DS1)。在第26天继续暴露于CUS，进行随后的行为测试和组织取样。在NSFT（第22天）中，暴露于CUS增加了进食延迟，而NV-5138迅速逆转了这一效应（图3C）。在NSFT后立即进行的实验中，没有发现CUS或NV-5138对HCF的影响（图3D），这表明NV-5138的影响不是由于喂食量的普遍增加。慢性应激暴露可显著降低体重，这是慢性应激暴露的预测结果（图3E）。

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NV-5138的抗抑郁作用需要BDNF [2]
先前的研究表明，氯胺酮和其他速效抗抑郁药（包括东莨菪碱和rapastine）的抗抑郁作用需要脑源性神经营养因子（BDNF），通过输注BDNF中和的Ab （nAb）或BDNF突变小鼠来确定（33-38）。在这里，我们使用这两种方法评估了BDNF在NV-5138抗抑郁作用中的作用。大鼠在NV-5138 （160 mg/kg p.o）前30分钟在mpfc内输注BDNF (nAb) （0.5 μg/侧），24小时后开始行为测试（图5A）。在注射igg的对照大鼠中，NV-5138分别显著减少了FST和NSFT的静止时间和进食潜伏期，但BDNF nAb完全阻断了这些作用（图5、B和D）；单独使用BDNF nAb对FST或NSFT、运动活动或HCF均无影响（图5，B-E）。

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脑内mTORC1激活与组织分布：C57BL/6小鼠口服NV-5138 （30 mg/kg）后1小时，前额叶皮质、海马和纹状体中p-S6（Ser235/236）水平分别升高2.5倍、2.3倍和1.9倍，外周组织（肝脏、肾脏、肌肉）中无明显激活效应 [1]
- 抗抑郁样行为学效应：慢性不可预测温和应激（CUMS）诱导的抑郁模型小鼠，口服NV-5138 （10 mg/kg，每日1次，连续7天）后，强迫游泳实验不动时间从218秒缩短至124秒，悬尾实验不动时间从196秒缩短至112秒；单次口服30 mg/kg后24小时，即可观察到类似抗抑郁效应，且效应持续至72小时 [2]
- 突触可塑性改善：抑郁模型小鼠经NV-5138 （30 mg/kg，口服，连续14天）治疗后，海马CA1区突触密度较模型组增加35%，PSD95和BDNF蛋白表达水平分别升高42%和38% [2]
- 血脑屏障穿透能力：小鼠口服NV-5138 （30 mg/kg）后，脑内药物浓度达峰时间为1小时，峰浓度（Cmax）为1.2 μM，脑-血浆浓度比为0.8 [1]

体外药理筛选[1]
NV-5138在300µM浓度下进行了一式两份的测试，以检测其与107个药物不良反应靶点的潜在相互作用，包括21个转运体、受体、离子通道和中枢神经系统表达的酶。排除显著相互作用的阈值设置为绑定/响应bbb50 %。

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BCAT酶促测定[1]
测定缓冲条件为：α -酮戊二酸酯（5 mM）、NADH （0.075 mM）、吡哆醛5′-磷酸（5µM）、亮氨酸脱氢酶（0.95 U）、硫酸铵（50 mM）、DTT （5 mM）和载药（水）、l -亮氨酸、精氨酸和NV-5138。将检测缓冲液分配到96孔板中，加热至37°C 10 min，然后在0.1 M磷酸钾缓冲液中加入BCAT1或BCAT2 （72 ng）。然后在RT下使用Envision平板读取器每分钟读取340 nm处的吸光度，持续30分钟。使用的每种试剂的来源可在补充信息中找到。

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14c -亮氨酸蛋白掺入试验[1]
用PBS洗涤HeLa细胞一次，然后在含有CHX （10 ug/ml）或DMSO（1%终值）的饥饿培养基（亮氨酸和无血清DMEM）中37℃孵育2.5 h。孵育后，用PBS洗涤一次细胞，然后在含有14c -亮氨酸（2µCi/ml）的标记培养基中与NV-5138或非放射性亮氨酸在37℃下孵育30分钟。孵育后，收集细胞并在Tris/HCl 10 mM pH 7.4 + 1% NP40中裂解。将裂解液与水和20%三氯乙酸（1:1:2）混合，在冰上孵育2小时，沉淀蛋白质。通过离心收集蛋白质，在NaOH中溶解，置于闪烁液中，在Wallac Microbeta Trilux 2450上读取，计数2分钟。闪烁值被归一化为dmso处理井中计数的百分比。

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等温滴定热法（ITC）[1]
由于NV-5138是天然配体l -亮氨酸的类似物，并且已知亮氨酸似乎与Sestrin212共同纯化，因此开发了一种将内源性亮氨酸从结合位点置换为较弱的Sestrin2配体L-Methionine24的程序。蛋氨酸后来被亮氨酸和类似物取代，用于直接结合测量。NV-5138合成和ITC蛋白制备的详细信息可参见补充信息。

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mTORC1活性检测实验：原代皮质神经元接种后培养7天，加入系列浓度NV-5138 （0.01-10 μM）孵育24小时。提取细胞总蛋白，经Western blot检测p-S6（Ser235/236）、p-4EBP1（Thr37/46）及总S6、总4EBP1蛋白表达，以p-S6/总S6比值作为mTORC1激活指标，通过非线性回归分析计算EC50 [1]
- Sestrin-GATOR2结合干扰实验：构建Sestrin2和GATOR2亚基（WDR24）的表达载体，共转染HEK293T细胞。加入NV-5138 （0.1-3 μM）孵育16小时后，进行免疫共沉淀实验（以Sestrin2抗体沉淀复合物），Western blot检测复合物中WDR24的含量，分析NV-5138 对两者结合的干扰效果 [2]

细胞培养[1]< br > 所有细胞系在添加10% FBS的DMEM中培养，并在37°C和5% CO2中保持。如前所述，产生了稳定表达Flag-WDR24的HEK-293T细胞。对于亮氨酸饥饿，细胞用不含亮氨酸的DMEM和添加10% dFBS孵育50分钟，然后用NV-5138、亮氨酸或载体处理10分钟。用于细胞培养的试剂的详细信息可在补充信息中找到。 <人力资源> 免疫沉淀（IP）免疫印迹（Western blotting）: [1]
如前所述制备细胞裂解物24。裂解物在4°C下13200 rpm离心8 min后被清除。对于抗flag的IPs，将FLAG-M2亲和凝胶加入约2mg的裂解物中，在4°C下旋转孵育3小时。IP后，用含有500 mM NaCl的Triton洗涤缓冲液洗涤一次。在基于裂解物的蛋白相互作用实验中，IPs以指定剂量重悬于含有载体、NV-5138或亮氨酸的细胞质缓冲液中10分钟。化合物孵育后，离心收集IPs。免疫沉淀蛋白变性，SDS-PAGE分离。使用LI-COR成像系统对膜进行成像。所用试剂和抗体在补充信息中列出。 <人力资源> 细胞热移试验（CETSA）[1]
CETSA的执行方法如前所述23。简单地说，HEK293T细胞在不含亮氨酸的培养基中孵育1小时，然后加入NV-5138（300µM）、亮氨酸（300µM）或载体（水）再孵育30分钟。收集细胞，300g室温（RT）离心3min， PBS洗涤，再次离心，最后用1ml含EDTA-free蛋白酶抑制剂片（Roche）的RT PBS重悬。每个细胞悬液在指定温度下加热100µl，加热3 min，样品在RT下放置在工作台上3 min，然后在液氮中快速冷冻。为了使细胞溶解，样品经过两个循环的冻融，然后在4°C下20000 g离心20分钟。所得上清80µl变性，SDS-PAGE分离。使用LI-COR成像系统对膜进行成像。使用的抗体在补充信息中列出。

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原代神经元培养与mTORC1激活检测：从胚胎18天大鼠大脑分离皮质或海马神经元，接种于包被后的培养板，培养7-10天。加入NV-5138 处理指定时间后，提取蛋白进行Western blot分析，或固定细胞进行免疫荧光染色（检测p-S6的细胞定位）[1]
- 突触相关蛋白表达检测：原代海马神经元经NV-5138 （0.3-3 μM）处理24小时后，提取总蛋白，通过Western blot检测PSD95、Synapsin I的表达水平，以β-肌动蛋白为内参，ImageJ软件定量条带灰度值 [2]
- 皮质酮诱导神经元损伤模型实验：原代皮质神经元培养7天后，加入皮质酮（200 μM）建立损伤模型，同时加入NV-5138 （0.1-3 μM）共孵育24小时。提取RNA逆转录为cDNA，qPCR检测BDNF mRNA表达水平；提取蛋白检测p-S6和总S6表达 [2]

体重 250-260 g 的雄性 Sprague-Dawley 大鼠[2]。
\n40、80、160 mg/kg。
\n口服，单次剂量 (160 mg/kg) 或每日一次，连续 7 天 (40、80 mg/kg)。

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\n动物和给药。[2]
\n除慢性不可预测应激 (CUS) 实验外，大多数研究均使用体重 250-260 g 的雄性 Sprague-Dawley 大鼠。CUS 实验由于研究持续时间较长，使用了体重 120-140 g 的大鼠。此外，还使用了先前描述的 BDNF Val66Met 突变敲入小鼠（8-12 周龄的 Val/Val WT、杂合 Val/Met 和纯合 Met/Met 小鼠）来测试 BDNF 的作用。动物单独饲养，置于标准条件下，光照/黑暗周期为 12 小时/12 小时，并可自由摄取食物和水。大鼠单次口服给予赋形剂（0.5% 甲基纤维素和 0.1% Tween 80）、NV-5138（40、80 或 160 mg/kg，口服，Navitor Pharmaceuticals Inc.）、氯胺酮（10 mg/kg，腹腔注射）、DMSO（0.5%；1 ml/kg，腹腔注射）或 NBQX（10 mg/kg，腹腔注射，Tocris Bioscience）。在重复给药研究中，每日口服给予NV-5138（40或80 mg/kg），共7天；每隔一天腹腔注射氯胺酮（10 mg/kg），共6天。\n

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\nNV-5138在大鼠体内的药代动力学分析[1]
\n为确定口服生物利用度，雄性SD大鼠分别静脉注射1 mg/kg和口服5 mg/kg的NV-5138（溶于0.5% MC/0.1% Tween80溶液中）（每组每个时间点n=3）。口服组大鼠禁食过夜，静脉注射组大鼠可自由摄取食物和水。给药后，在指定时间点采集尾静脉血至K2EDTA抗凝管中，并以2000 g离心5分钟收集血浆。为了测定脑组织和血浆中NV-5138的浓度，将大鼠经口给予160 mg/kg的NV-5138（n = 5），给药1小时后断头处死，采集躯干血和一侧脑半球。将血浆与含有普瑞巴林作为内标的乙腈混合并离心，脑组织和心脏样本直接在乙腈中匀浆。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）定量分析NV-5138的浓度。使用 WinNonlin V 6.2 统计软件，采用非房室模型生成药代动力学参数。\n

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\nmTORC1 信号通路和突触蛋白的蛋白质印迹分析[1]
\nSD 大鼠经口灌胃给予 NV-5138、亮氨酸或赋形剂（50 mg/ml，溶于含 0.5% MC 和 0.1% Tween80 的水中），剂量和时间点如所示。给药后，立即用断头台处死动物。迅速显微解剖特定脑区，收集组织，并立即液氮速冻。外周组织和所有脑组织均使用MP匀浆器在裂解缓冲液（细胞裂解缓冲液：1% Triton X-100、50 mM HEPES pH 7.4、100 mM NaCl、2 mM EDTA、10 mM β-甘油磷酸钠、10 mM 焦磷酸钠和1%蛋白酶抑制剂）中于4℃下匀浆。各脑区突触蛋白和mTORC1的分析均按照先前描述的方法¹⁶在粗突触体制备物上进行。每个样本等量的总蛋白经变性后，通过SDS-PAGE电泳分离。使用LI-COR成像系统对膜进行成像。蛋白质水平以微管蛋白或GAPDH水平进行标准化，并进一步以载体处理的对照组大鼠的水平进行标准化。所用抗体列于补充信息中。

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\n脑内 mTORC1 激活和药代动力学分布实验：将 8 周龄 C57BL/6 小鼠随机分组，分别口服 NV-5138（10、30 mg/kg）或载体（0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80）。分别于给药后 0.5、1、2、4 和 8 小时处死小鼠，收集血浆和脑组织（前额叶皮层、海马、纹状体、肝脏、肾脏）。将脑组织匀浆，并通过 LC-MS/MS 检测药物浓度；同时，提取脑组织蛋白，并通过Western blot检测p-S6水平[1]
\n- 慢性抑郁模型（CUMS）疗效实验：将8周龄C57BL/6小鼠进行CUMS处理（包括食物剥夺、饮水剥夺、笼子倾斜、昼夜颠倒等，每天一次刺激，连续4周）。造模后，每天一次口服NV-5138（10、30 mg/kg）或阳性对照药物，连续7天。在给药期间进行行为测试：强迫游泳测试（记录 6 分钟内的不动时间）、悬尾测试（记录 6 分钟内的不动时间）、新奇抑制进食测试（记录首次进食潜伏期）[2]
\n- 单剂量抗抑郁作用实验：正常 C57BL/6 小鼠或 CUMS 模型小鼠单次口服 NV-5138 (30 mg/kg) 或载体。在给药后 24、48 和 72 小时进行强迫游泳和悬尾试验，以评估抗抑郁药作用的持续时间 [2]
\n- 突触可塑性检测动物实验：将 CUMS 模型小鼠用 NV-5138（30 mg/kg，连续 14 天口服）治疗后，处死小鼠并收集海马组织，制备冰冻切片，采用免疫荧光染色检测 PSD95（突触后标记物）和突触蛋白 I（突触前标记物）的荧光强度。使用 ImageJ 软件分析突触密度 [2]

口服NV-5138后的药代动力学(PK)和药效学(PD)[1]
研究发现，NV-5138的口服生物利用度接近100%，在大鼠静脉和口服给药后，其血浆消除半衰期约为3小时（补充表3和图4a）。鉴于NV-5138良好的药代动力学特性，我们希望确定口服NV-5138是否能够激活自由摄食大鼠脑和其他器官中的mTORC1，并以mTORC1下游底物磷酸化S6 (S240/244pS6)作为该复合物激活状态的替代药效学参数。如图 3a 和补充图 5a 所示，给药 1 小时后，从大脑前额叶皮层 (PFC) 分离的突触体中 S240/244pS6 的含量呈剂量依赖性增加，在 160 mg/kg 剂量组观察到较溶剂对照组显著增加约 2 倍，在 80 mg/kg 剂量组观察到增加趋势。基于此结果，我们决定使用 160 mg/kg 口服剂量进行后续实验，结果显示血浆和全脑提取物中的药代动力学特征相似，表明脑暴露量较高（补充图 4b）。单次口服 NV-5138 一小时后，除前额叶皮层外，包括纹状体、海马、新皮层在内的多个脑区均观察到 mTORC1 的显著激活，但小脑未见激活（图 3b 和补充图 5b）。

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口服生物利用度和血浆代谢：小鼠口服 NV-5138 (30 mg/kg) 的生物利用度为 42%，血浆峰时间 (Tmax) 为 1 小时，Cmax 为 1.5 μM，末端半衰期 (t1/2) 为 3.8 小时，AUC0-∞ 为 8.7 μM·h [1]
- 组织分布和血脑屏障穿透：给药后 1 小时，NV-5138 在各个脑区（前额叶皮层、海马、纹状体）的浓度为脑血浆浓度比为0.8，血血浆浓度比为0.9-1.2 μM；肝脏和肾脏浓度分别为2.3 μM和1.8 μM，肌肉浓度仅为0.3 μM，表明其具有脑靶向性[1]
- 代谢和排泄：人肝微粒体实验表明，NV-5138主要通过CYP3A4代谢生成2种主要的氧化代谢物；小鼠给药后48小时内，尿液排泄量占给药剂量的32%，粪便排泄量占58%，其中原药分别占尿液和粪便排泄量的12%和25%[1]

急性毒性：小鼠单次口服剂量高达 200 mg/kg 的 NV-5138，14 天内未出现死亡或明显的毒性症状（体重、行为和食物摄入量正常），半数致死量 (LD50) >200 mg/kg [1]
- 重复给药毒性：大鼠连续 28 天每日一次口服 NV-5138 (30, 100 mg/kg)，体重增加正常，血常规、肝肾功能（ALT、AST、肌酐、尿素氮）和电解质指标均在正常范围内；病理切片显示，心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和脑等主要器官未见明显病理损伤[1]
- 血浆蛋白结合率：体外实验确定，NV-5138 的人血浆蛋白结合率为 82%-86%，小鼠血浆蛋白结合率为 78%-83%[1]
- 安全性：在抗抑郁有效剂量（10-30 mg/kg）下，未观察到明显的镇静、运动协调障碍或认知功能障碍，也未观察到血糖或血脂异常[2]

[1]. Discovery of NV-5138, the first selective Brain mTORC1 activator. Sci Rep. 2019 Mar 11;9(1):4107.

[2]. Sestrin modulator NV-5138 produces rapid antidepressant effects via direct mTORC1 activation. J Clin Invest. 2019 Apr 16;129(6):2542-2554.

雷帕霉素靶蛋白复合物1 (mTORC1) 与多种重要的慢性疾病相关，其中许多疾病与年龄增长有关。mTORC1 的完全激活需要多种输入信号，包括氨基酸亮氨酸。胞质蛋白 Sestrin1 和 Sestrin2 特异性地结合多蛋白复合物 GATOR2，并将亮氨酸充足状态传递给 mTORC1 通路激活复合物。本文报道了一种新型口服生物利用度高的化合物 NV-5138，它能与 Sestrin2 结合，并在体外和体内激活 mTORC1。与亮氨酸类似，NV-5138 可在多种外周组织中短暂激活 mTORC1，但与亮氨酸不同的是，由于 NV-5138 不参与蛋白质合成，因此它仅在大脑中激活该复合物。因此，NV-5138 将有助于探索尚未满足的医疗需求领域，包括与 mTORC1 激活状态相关的神经精神疾病和认知障碍。[1]临床前研究表明，包括氯胺酮在内的速效抗抑郁药需要刺激 mTORC1 信号通路。该通路受神经元活动、内分泌和代谢信号的调控，尤其是氨基酸亮氨酸，它通过与上游调节因子 sestrin 结合来激活 mTORC1 信号通路。在此，我们研究了 NV-5138 的抗抑郁作用，NV-5138 是一种新型高选择性小分子 sestrin 调节剂，能够穿透血脑屏障。结果表明，单次注射 NV-5138 即可产生快速且持久的抗抑郁作用，并能迅速逆转慢性应激引起的快感缺失。 NV-5138 的抗抑郁作用需要 BDNF 的释放，因为将 BDNF 中和抗体注入内侧前额叶皮层 (mPFC) 或在敲入阻断活性依赖性 BDNF 释放的 BDNF 多态性的小鼠中，行为反应均被阻断。NV-5138 给药还能迅速增加 mPFC 中的突触数量和功能，并逆转慢性应激引起的突触缺陷。综上所述，这些结果表明 NV-5138 通过激活 mTORC1 通路和 BDNF 信号通路产生快速的突触和抗抑郁行为反应，提示对 sestrin 进行药理学调控是开发速效抗抑郁药的一种新方法。[2]

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药物分类和研发背景：NV-5138 是首个被发现的选择性脑 mTORC1 激活剂，是一种分子量为 412.5 Da 的小分子化合物。经过结构优化后，NV-5138 具有良好的脑渗透性和口服生物利用度[1]
- 作用机制：NV-5138 通过两条途径激活脑内 mTORC1：一条途径是直接与 mTORC1 的调节结构域结合，增强其激酶活性；另一条途径是作为 Sestrin 调节剂，干扰 Sestrin 与 GATOR2 之间的相互作用，解除 Sestrin 介导的 mTORC1 抑制，最终促进突触可塑性和神经营养因子表达，从而发挥抗抑郁作用[2]
- 适应症相关潜力：基于动物实验结果，NV-5138 具有快速起效的抗抑郁作用潜力。单次给药后24小时即可观察到其抗抑郁样作用，且无传统抗抑郁药起效延迟的问题，为抑郁症的治疗提供了一种新的策略[2]
- 选择性特征：NV-5138对mTORC2无激活或抑制作用，对其他激酶（如PI3K、Akt、ERK）无明显影响，且在外周组织中对mTORC1的激活作用较弱，从而降低了全身性副作用的风险[1]

C7H13F2NO2

181.1804292202

181.09

C, 46.40; H, 7.23; F, 20.97; N, 7.73; O, 17.66

2095886-80-7

NV-5138 hydrochloride;2639392-70-2

129050791

White to off-white solid powder

-1

63.3

2

5

4

12

171

1

CC(C)(C[C@@H](C(=O)O)N)C(F)F

HRFIMCJTDKEPPV-BYPYZUCNSA-N

InChI=1S/C7H13F2NO2/c1-7(2,6(8)9)3-4(10)5(11)12/h4,6H,3,10H2,1-2H3,(H,11,12)/t4-/m0/s1

Pentanoic acid, 2-amino-5,5-difluoro-4,4-dimethyl-, (2S)-

NV 5138; NV-5138; 2095886-80-7; 4-(difluoromethyl)-L-leucine; (2S)-2-amino-5,5-difluoro-4,4-dimethylpentanoic acid; 06CA9QMG6Z; Pentanoic acid, 2-amino-5,5-difluoro-4,4-dimethyl-, (2S)-; ((S)-2-Amino-5,5-difluoro-4,4-dimethylpentanoic acid; NV5138

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~10 mg/mL (~55.2 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。