| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
MEK1 31 nM (DC50, in HT29 cells) MEK2 17 nM (DC50, in HT29 cells) MEK1 31 nM (DC50, in SK-MEL-28 cells) MEK2 9.3 nM (DC50, in SK-MEL-28 cells)
MEK1, MEK2 |
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| 体外研究 (In Vitro) |
化合物 23，或 MS432，能够显著降低 COLO 205 细胞（DC50 (MEK1) = 18±7 nM，DC50 (MEK2) = 11±2 nM）和 UACC257 细胞（DC50 (MEK1) = 56±25 nM，DC50 (MEK2) = 27±19 nM）中 MEK1/2 蛋白的水平。
MS432 能有效降解 HT29 细胞中的 MEK1 和 MEK2，其 DC₅0 值分别为 31 nM 和 17 nM。Western blot 分析证实 MEK 蛋白水平呈浓度依赖性降低，在 300 nM 浓度下几乎完全降解。与蛋白酶体抑制剂 MG132 (10 uM) 或 NEDD8 激活酶抑制剂 MLN4924 (1 uM) 共孵育可阻断该降解过程，证实该降解过程依赖于泛素-蛋白酶体系统。在 COLO 205 细胞中，MEK1 的 DC₅0 值为 18 +/- 7 nM，MEK2 的 DC₅0 值为 11 +/- 2 nM。在 UACC257 细胞中，MEK1 的 DC₅0 值为 56 +/- 25 nM，MEK2 的 DC₅0 值为 27 +/- 19 nM。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
MS432（化合物 23）在小鼠体内具有生物利用度，可用于体内疗效研究。[1]在评估的癌细胞系中，MS432（化合物 23）表现出良好的血浆暴露量，其 GI50 值约为化合物 23 的 3 至 20 倍[1]。
MS432 能以 VHL E3 连接酶和蛋白酶体依赖的方式高效且选择性地降解 MEK1 和 MEK2，从而持续抑制细胞内 ERK 的磷酸化。体内实验表明，MS432 在小鼠体内具有良好的血浆暴露量，支持其作为动物模型中 MEK 降解药物的实用性。 |
| 酶活实验 |
激酶抑制试验[1]
使用HotSpot激酶试验测定化合物对MEK1和MEK2激酶的抑制效力。该试验通过检测MEK激酶对ERK磷酸化的活性来测定化合物的活性。简而言之，将化合物与MEK和ERK蛋白的激酶反应混合物在室温下孵育20分钟后，加入33P-ATP（比活度10 μCi/μL）以启动反应，并在室温下孵育2小时。然后通过滤膜结合法检测放射性。激酶活性数据以样品中剩余激酶活性的百分比表示，并与DMSO反应进行比较。反应中使用的纯化激酶蛋白包括：100 nM的MEK1、150 nM的MEK2（PV3615，Thermo Fisher Scientific）和5 μM的ERK激酶失活突变体K52R。在两个独立的实验中，使用 10 倍浓度 3 倍系列稀释法测定 IC50 值（PD0325901、化合物 23 (MS432) 和化合物 24 的最高浓度分别为 3、30 和 30 μM），以 DMSO 作为对照点。 MS432 的合成方法是将 PD0325901（MEK 抑制剂活性基团）通过 PEG 连接子与 VHL 募集配体连接。在体外降解实验中，将细胞用 MS432 的系列稀释液（通常为 1 nM 至 1 uM）处理 6 至 24 小时。使用抗 MEK1/2 抗体通过蛋白质印迹法分析 MEK1/2 蛋白水平。与 MG132 或 MLN4924 共同处理可证实蛋白酶体依赖性降解。 |
| 细胞实验 |
细胞活力检测[1]
细胞类型： (HT-29、SK-MEL-28、COLO 205 和 UACC 257 细胞系。 测试浓度： 0-1 μM。 孵育时间： 72 小时。 实验结果： 以浓度依赖的方式有效抑制这些 CRC 和黑色素瘤细胞的增殖，GI50 值范围为 30 至 200 nM。 将 MS432 溶于 DMSO 配制成储备液，然后用细胞培养基稀释（最终 DMSO 浓度 ≤0.1%）。将 HT29、COLO 205 或 UACC257 细胞接种于 6 孔板中，用指定浓度的 MS432 处理 6-24 小时，然后收集细胞进行蛋白质印迹分析。处理 72-96 小时后，使用 MTT 或 CellTiter-Glo 试剂盒检测细胞活力。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：雄性瑞士白化小鼠[1]。
剂量：50 mg/kg（药代动力学/PK 分析）。 给药途径：腹腔注射。 实验结果：血浆暴露量良好，给药后 0.5 小时检测到最大血浆浓度为 1400 nM，给药后 8 小时检测到最大血浆浓度为 710 nM。 小鼠药代动力学研究[1] 使用三只雄性瑞士白化小鼠对化合物 23 (MS432) 进行了标准的体内药代动力学研究。小鼠腹腔注射化合物 23 (MS432) 溶液，剂量为 50 mg/kg。分别于0.5、2和8小时从每只小鼠采集60微升血液样本。通过离心分离血液，收集血浆，并储存于−70 ± 10 °C直至分析。采用Phoenix WinNonlin（7.0版）的NCA模块进行药代动力学分析。血浆样本采用适用的LC-MS/MS方法进行定量（血浆的定量下限为5.02 ng/mL）。化合物23（MS432）的配制方法为：5% NMP、5% Solutol HS-15和90%生理盐水。 将MS432通过静脉注射或口服途径给予小鼠，以评估其体内MEK1/2降解情况。在给药后4-24小时收集组织样本（例如肿瘤异种移植瘤、脾脏），并通过Western blotting分析MEK1/2水平，进行药效学评估。采用LC-MS/MS法测定血浆暴露量。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
MS432给药后在小鼠体内表现出良好的血浆暴露量，其浓度可在数小时内维持在可测量的水平，从而支持靶点结合和MEK降解。详细的药代动力学参数，例如半衰期、Cmax和生物利用度，尚未公开。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
目前尚未有关于MS432的详细毒性数据报道。然而，作为一种劫持泛素-蛋白酶体系统的PROTAC降解剂，高剂量下潜在的脱靶降解或蛋白酶体饱和仍然是一个理论上的担忧，需要在未来的毒理学研究中进行评估。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
MEK1 和 MEK2（也称为 MAP2K1 和 MAP2K2）是 ERK 信号通路输出的“守门人”，在控制 ERK 活性方面发挥着冗余作用。目前已开发出多种靶向 MEK1/2 的抑制剂，其中包括三种获得 FDA 批准的药物。然而，患者中已观察到对 MEK1/2 抑制剂的获得性耐药，因此亟需新的治疗策略来克服这种耐药性。本文报道了一种首创的 MEK1/2 降解剂 MS432 (23)，它以 VHL E3 连接酶和蛋白酶体依赖的方式高效且选择性地降解 MEK1 和 MEK2，并抑制细胞中的 ERK 磷酸化。与阴性对照 MS432N (24) 相比，MS432 能更有效地抑制结直肠癌和黑色素瘤细胞的增殖，并且 MEK1/2 敲低模拟了其抑制作用。化合物 23 在全蛋白质组学分析中表现出对 MEK1/2 的高选择性。该化合物在小鼠体内也具有生物利用度，可用于体内疗效研究。我们为生物医学界提供了两种明确的化学工具。[1] 在本研究中，研究人员发现了化合物23 (MS432)，它是首个MEK1和MEK2（ERK信号通路的关键调节因子）降解剂。化合物23是一种基于PD0325901的VHL募集型小分子MEK1和MEK2降解剂，具有高效性和选择性。我们还开发了化合物24作为化合物23降解的阴性对照。化合物24是化合物23的非对映异构体，因此与化合物23具有高度的结构相似性。我们证明，化合物23和24在体外以相似的效力抑制MEK1和MEK2的催化活性。在细胞实验中，化合物23以浓度和时间依赖的方式强效诱导MEK1和MEK2的降解，且具有持久的作用。相比之下，阴性对照化合物24并未降低细胞内MEK1/2蛋白的水平。我们的拯救实验表明，化合物23诱导的MEK1/2降解是通过募集VHL E3连接酶介导MEK1/2的多聚泛素化和蛋白酶体依赖性蛋白水解实现的。我们的定量蛋白质组学分析表明，化合物23是MEK1和MEK2的高选择性降解剂。此外，我们发现化合物23（而非化合物24）能有效抑制CRC和黑色素瘤细胞的增殖，并且通过在BRAFV600E癌细胞中用shRNA敲低MEK1/2可以模拟化合物23的抗增殖作用。此外，化合物23在小鼠体内具有良好的血浆暴露量，使其适用于体内疗效研究。总之，化合物 23 和 24 是一对明确的化学工具，研究人员可以利用它们来研究靶向 MEK1 和 MEK2 的治疗潜力。进一步优化化合物 23 使其成为候选药物，可能会为结直肠癌、黑色素瘤和其他癌症带来新的有效疗法。[1]
MS432由Wei等人开发，并发表于《药物化学杂志》（2022）。其作用机制涉及将VHL E3连接酶募集至MEK1/2，进而导致泛素化和蛋白酶体降解。MS432目前仍处于研究阶段，尚未有临床试验或监管部门批准的相关报道。 |
| 分子式 |
C50H65F3IN7O6S
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|---|---|
| 分子量 |
1076.06
|
| 精确质量 |
1075.371
|
| CAS号 |
2672512-44-4
|
| 相关CAS号 |
PD0325901-O-C2-dioxolane;2581116-22-3
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| PubChem CID |
145712394
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
10.4
|
| tPSA |
202Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
6
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
13
|
| 可旋转键数目(RBC) |
26
|
| 重原子数目 |
68
|
| 分子复杂度/Complexity |
1570
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
|
| SMILES |
C(N1C[C@@H](C[C@H]1C(=O)N[C@H](C1C=CC(C2=C(N=CS2)C)=CC=1)C)O)(=O)[C@H](C(C)(C)C)NC(=O)CCCCCCCCCCNCCCONC(C1C=CC(=C(C=1NC1C=CC(=CC=1F)I)F)F)=O
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| InChi Key |
KCBAMQOKOLXLOX-BSZYMOERSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C50H65F3IN7O6S/c1-31(33-16-18-34(19-17-33)45-32(2)56-30-68-45)57-48(65)41-28-36(62)29-61(41)49(66)46(50(3,4)5)59-42(63)15-12-10-8-6-7-9-11-13-24-55-25-14-26-67-60-47(64)37-21-22-38(51)43(53)44(37)58-40-23-20-35(54)27-39(40)52/h16-23,27,30-31,36,41,46,55,58,62H,6-15,24-26,28-29H2,1-5H3,(H,57,65)(H,59,63)(H,60,64)/t31-,36+,41-,46+/m0/s1
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| 化学名 |
(2S,4R)-1-[(2S)-2-[11-[3-[[3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodoanilino)benzoyl]amino]oxypropylamino]undecanoylamino]-3,3-dimethylbutanoyl]-4-hydroxy-N-[(1S)-1-[4-(4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)phenyl]ethyl]pyrrolidine-2-carboxamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。 (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 100 mg/mL (92.93 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.32 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 0.9293 mL | 4.6466 mL | 9.2932 mL | |
| 5 mM | 0.1859 mL | 0.9293 mL | 1.8586 mL | |
| 10 mM | 0.0929 mL | 0.4647 mL | 0.9293 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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