S1PR1 1.03 nM (EC50) S1PR5 8.6 nM (EC50)

Ozanimod (RPC-1063) 盐酸盐作为具有 [35S]-GTPgS 结合的跨物种 S1P5 的 S1P 受体调节剂，表现出内在活性和效力。人 S1P1、食蟹猴 S1P1、小鼠 S1P1、大鼠 S1P1 和犬 S1P1 的 EC50 值分别为 1.03 nM、1.29 nM、0.90 nM、1.02 nM 和 0.61 nM；食蟹猴 S1P5、小鼠 S1P5、大鼠 S1P5 和犬 S1P5 的浓度分别为 8.6 nM、15.9 nM、957.5 nM、2032.7 nM 和 1662.0 nM[1]。通过改变小鼠序列中的丙氨酸，奥扎莫德盐酸盐将 EC50 的效力从 mS1P5 的 958 nM 恢复到 mS1P5_A120T 的 6.7 nM，几乎与 hS1P5 的 EC50 8.6 nM 一致[1]。 ozanimod 盐酸盐对 hS1P5、mS1P5 和 mS1P5 _A120T 的结合亲和力分别为 2.0 nM、59.9 nM 和 5.6 nM[1]。除了 [3H]-A971432 与 S1P5D 的饱和结合值为 8.75 nM 外，ozanimod 盐酸盐还具有 [3H]-ozanimod 与 hS1P5 和 mS1P5_A120T 的饱和结合，KD 值分别为 6.56 nM 和 7.35 nM[1]。

奥扎莫德 (RPC-1063) 盐酸盐（口服强饲；0.05、0.2 或 1 mg/kg；每天一次；连续 14 天）暴露足以参与 S1P1 的结果是循环淋巴细胞减少、疾病评分和体重减轻，但不是S1P5。此外，脊髓炎症、脱髓鞘和凋亡细胞的水平降低，神经丝光的循环水平也降低，神经丝光是神经元变性的标志[1]。在毒素攻击期间，盐酸奥扎莫德（口服强饲；5 mg/kg；每日一次）减少髓鞘质损失和轴突降解，但它不会促进中毒后髓鞘再生的增加[1]。口服奥扎莫德盐酸盐（1 或 5 mg/kg，连续 7 天）治疗的小鼠表现出优异的药代动力学[1]。

使用 LiveBLAzer-FRET B/G 测定通过细胞信号传导测定检测 cAMP (S1P1R) 或 β-arrestin (S1P4R) 信号传导。按照制造商的指示，在 384 孔板中进行三次重复测定。首先使用 20%（2-羟丙基）-β-环糊精按 1:10 稀释化合物原液，并在 -50°C 下在 100% DMSO 中保持 10 mM。每 40 倍最终测定浓度（10 mM），就会生成 10 点剂量反应曲线。 Hepes 7.4 pH，含 0.1% Pluronic F-127。将 80 μM 毛喉素添加到 S1P1R 测定的稀释液中。简而言之，每孔 104 个细胞在 37°C 下培养 4 小时，可获得配体的剂量反应。添加丙磺舒和 CC4-AM 底物，并在 37°C 下再孵育两小时后，使用 Spectramax M5 检查样品。 S1P1R cAMP 测定的数据标准化为 2 μM 毛喉素产生的最高荧光。在 GTPγS 结合测定中，将 1–5 μg/孔膜蛋白在 96 孔板中与 10 μM GDP、100–500 μg/孔麦芽凝集素 PVT SPA 珠在 50 mM HEPES、100 mM NaCl 中孵育 15 分钟， 10 mM MgCl2、20 μg/ml 皂苷和 0.1% 不含脂肪酸 BSA。添加化合物和200 pM GTP [35S] 1250Ci/mmol后，将板孵育120分钟，然后在300g下离心5分钟。 TopCount 仪器用于检测放射性。称为斜率的四参数变量用于拟合所有数据。使用 TopCount 仪器检测放射性。 GraphPad Prism 的四参数变量斜率非线性回归用于拟合所有数据，以确定与 S1P 相关的最大功效和半最大有效浓度 (EC50)。

Ozanimod (RPC1063) 是 S1P1 和 S1P5 受体的特殊激动剂。 S1P1 受体抑制 cAMP 生成和 [35S]-GTPγS 结合，EC50 值为 160 ± 60 pM 和 410 ±分别为下午 160 点。与S1P5受体相关，奥扎莫德的83% Emax值为11±4.3nM。孵育一小时后，RPC1063几乎完全且持续地减少S1P1受体-HEK293T细胞表面的S1P1受体再表达。这是在浓度大于 10 nM 时观察到的。

动物/疾病模型： 实验性自身免疫性脑脊髓炎模型[1]
剂量： 0.05、0.2 或 1 mg/kg
给药途径： 灌胃；0.05、0.2 或 1 mg/kg；每日一次；持续 14 天
实验结果： 0.2 和 1 mg/kg 剂量组的体重减轻和终末疾病评分显著降低，所有剂量组的绝对淋巴细胞计数 (ALC) 均显著降低。脊髓炎症和脱髓鞘减少，脊髓凋亡细胞数量减少，最高剂量 1 mg/kg 组的循环神经丝轻链水平显著降低。

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动物/疾病模型：铜唑/雷帕霉素脱髓鞘模型[1]
剂量：5 mg/kg
给药途径：灌胃；5 mg/kg；每日一次
实验结果：保护神经元轴突，防止CPZ/雷帕霉素治疗小鼠胼胝体中轴突断裂和卵圆形形成。显著减轻了MRI显示的胼胝体髓鞘含量降低的程度。未导致髓鞘含量增加。

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\nMOG35–55 实验性自身免疫性脑脊髓炎模型[1]
\n采用皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 35–55 (MOG35–55) 与弗氏完全佐剂 (CFA) 的乳剂，在 10 周龄雌性 C57BL/6 小鼠（Taconic Biosciences，Rensselaer，NY）中诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE)。随后，分别在注射后 2 小时和 24 小时进行腹腔注射百日咳毒素。小鼠接受两次皮下注射，分别在背部上部和下部各注射一次，每次注射 0.1 ml MOG35–55/CFA 乳剂。两次腹腔注射百日咳毒素的剂量均为 100 ng/次，注射体积为 0.1 ml。本研究在Hooke Laboratories（马萨诸塞州劳伦斯市）进行，使用Hooke试剂盒MOG35–55/CFA乳剂PTX（货号EK-2110）。由于女性多发性硬化症（MS）及其他自身免疫性疾病的临床发病率高于男性（Voskuhl，2011），因此选择雌性小鼠进行EAE实验。EAE是一种免疫驱动的MS临床前模型，据报道雌性小鼠的病情更为严重（Papenfuss等，2004；Rahn等，2014）。
\n\n每日对小鼠进行评估，并在首次出现疾病症状时，根据EAE发病时间和治疗开始时疾病评分的组平均值，将小鼠随机分为治疗组（n = 12）。在EAE疾病发作的第一天开始给药，每日一次通过灌胃给予赋形剂（5% v/v DMSO、5% v/v Tween20、90% v/v Milli-Q水；5 ml/kg）或ozanimod，剂量分别为0.05、0.2或1 mg/kg，连续14天。疗效评估方法包括记录每日EAE疾病的视觉评分（如Scott等人(2016)所述）以及每周三次测量体重。末次给药后约24小时，采集EDTA抗凝血样本，用于通过分类计数评估循环淋巴细胞的绝对数量；另取一份血浆样本，处理后储存于-80°C，用于后续使用Simoa NF-light Advantage试剂盒（102258）由Quanterix公司（美国马萨诸塞州莱克星顿）进行神经丝轻链分析。将小鼠麻醉后，用磷酸盐缓冲液灌注，收集脊髓并保存在10%中性福尔马林溶液中，用于影像学分析。每只小鼠脊髓制备三个苏木精-伊红染色切片，分析炎症灶的数量（每个炎症灶约20个细胞）、脱髓鞘面积的评估（评分0-5分，分别代表<5%、5-20%、20-40%、40-60%、60-80%和80-100%的脱髓鞘面积，其定义为正常结构的破坏，例如苍白和空泡化，与水肿和脱髓鞘一致，以及轴突扩张）和凋亡细胞计数。组织学分析由一位对实验设计和结果不知情的病理学家进行。

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\n\n铜唑酮/雷帕霉素脱髓鞘模型：神经保护和髓鞘再生[1]
\n在8周龄雄性C57BL/6J小鼠（Jackson Laboratories，Bar Harbor，ME）中，通过自由摄取含铜唑酮（0.3% w/w）的正常啮齿动物饲料（Harlan Teklad，Madison，WI），持续6周，并每日一次腹腔注射雷帕霉素，诱导铜唑酮/雷帕霉素脱髓鞘。雷帕霉素每日新鲜配制，剂量为10 mg/kg，体积为5 ml/kg，溶于5% v/v纯乙醇/5% v/v吐温80/5% PEG1000水溶液中。年龄匹配的对照组小鼠可自由摄取不含铜嗪的相同饲料，并每日腹腔注射赋形剂。小鼠以4至5只/笼饲养，每周更换三次新鲜饲料。所有小鼠均可自由饮用经反渗透过滤、酸化且适口性良好的饮用水，pH值为2.5至3.0。该研究由Renovo Neural公司（位于俄亥俄州克利夫兰市）完成。选择雄性小鼠作为脱髓鞘模型，是因为多项研究表明雌性小鼠对该毒素的抵抗力更强，因此在雄性小鼠中观察到更严重的脱髓鞘（MacArthur 和 Papanikolaou，2014）。
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\n\n适应两周后，将小鼠随机分配到不同剂量组，并每日一次灌胃给予赋形剂（5% v/v）。按照图 1 所示的给药和样本采集/检测方案，分别给予 DMSO、5% (v/v) Tween20、90% (v/v) Milli-Q 水（5 ml/kg）或 ozanimod 5 mg/kg。为评估 ozanimod 对神经保护和脱髓鞘的作用，于第 1 天与铜唑酮/雷帕霉素同时开始给药，并持续每日一次，共 6 周。为评估 ozanimod 对髓鞘再生的作用，也于第 1 天开始每日给药，但给药时间在 6 周铜唑酮/雷帕霉素治疗结束后继续延长 12 周（研究的第 7-18 周）。在髓鞘再生评估组中，小鼠在6周的挑战期结束后停止喂食铜唑酮饮食和每日腹腔注射雷帕霉素，并恢复正常啮齿动物饮食。
\n采用体内脑磁共振成像（MRI）监测6周铜唑酮/雷帕霉素治疗的效果，并在脱髓鞘挑战后12周（研究第6周和第18周）再次进行监测。使用7T/20 Bruker-Biospec系统对小鼠进行成像，以在同一动物体内纵向获取高质量的三维MRI图像。小鼠使用1%至3%的异氟烷进行镇静，并将呼吸频率调整至约50至80次/分钟。在MRI扫描过程中持续监测麻醉诱导水平。该系统的加热床将动物体温维持在35°C，直至实验结束。扫描结束后，停止异氟烷麻醉，并将小鼠放回笼中恢复。为了量化髓鞘丢失敏感的磁化转移比率的变化，采集了磁化转移加权磁共振成像（MRI）图像。根据图像质量和动物在MRI机器中的稳定性剔除异常值后，每组小鼠数量为6至9只。
\n\n在实验终止当天，小鼠未接受任何治疗。每组12只动物（年龄匹配的对照组为6只）在接受铜唑酮/雷帕霉素治疗6周后被安乐死，其余动物继续接受治疗直至第9、12和18周，此时处死这些动物并采集样本（第9和12周每组n=6，第18周每组n=12）。用磷酸盐缓冲液灌注动物，取出脑组织，并在4%多聚甲醛中于4℃固定过夜。使用定制的脑切片模具解剖脑组织，并进一步修剪以分离胼胝体，然后将其固定于2.5%戊二醛/4%多聚甲醛混合液中至少12小时。根据特定的形态学标志识别出一小块胼胝体，然后将其切割并包埋于Epon树脂中。将脑组织的头侧和尾侧部分（切片的两侧）置于4°C的冷冻保护液中过夜。使用切片机将头侧部分切成30 μm厚的游离切片；每只动物取两张切片，分别用SMI-32（非磷酸化神经丝蛋白H）或髓鞘蛋白脂蛋白（PLP）抗体染色，并用3,3′-二氨基联苯胺显色。对 SMI-32 染色切片进行评估，以评价白质（胼胝体）中的轴突卵圆形结构；对 PLP 染色切片进行评估，以评价海马和皮质的髓鞘再生程度。

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\n\n药代动力学[1]
\n奥扎尼莫德及其主要活性啮齿动物代谢物 RP101075 在雄性和雌性 C57BL/6J 小鼠中的药代动力学特征相似，因此在连续 7 天每日口服奥扎尼莫德后，对 8 周龄雄性 C57BL/6J 小鼠（杰克逊实验室）的血浆和脑组织进行了评估。在MOG35-55 EAE和铜唑酮/雷帕霉素体内疗效研究中，奥扎尼莫德的给药剂量为1或5 mg/kg，溶剂与上述研究相同。在第七次每日给药后3、6和24小时采集终末血浆和脑组织样本。值得注意的是，在临床应用中，奥扎尼莫德的给药需要进行剂量滴定，以避免潜在的机制性心动过缓风险。但在临床前疗效评估研究中，则不采用剂量滴定，而是直接使用待评估剂量进行给药。使用Biospec Bead Beater-16（含1 mm玻璃珠）将脑组织在乙腈中以1:3 (w/v)的比例匀浆，然后用乙腈以1:10的比例进一步沉淀蛋白质，最终浓度为1:30 (w/v)。血浆蛋白也以1:3 (v/v)的比例用乙腈沉淀。样品经离心后，取上清液进行液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）分析。组织分析中，使用未经处理动物的脑组织匀浆制备标准曲线。每次生物分析均包含一条浓度范围为0.046 nM至500 nM的ozanimod或RP101075的10点标准曲线，色谱柱为Kinetex C18 2.6μm 30 × 3 mm（Phenomenex公司，美国加利福尼亚州托兰斯市），流动相A为0.1%甲酸去离子水，流动相B为0.1%甲酸乙腈。数据采集和分析使用Analyst软件1.5.1版本。\n

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妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
虽然奥扎尼莫德及其活性代谢物在母体血浆中高度结合，不太可能大量进入母乳，但仍可能对母乳喂养的婴儿产生毒性。由于目前尚无关于哺乳期使用奥扎尼莫德的已发表经验，专家意见普遍建议在哺乳期避免使用与其密切相关的药物芬戈莫德，尤其是在哺乳新生儿或早产儿时。一些指南建议由于缺乏数据而在哺乳期避免使用奥扎尼莫德；然而，制造商的标签并未建议在哺乳期禁用奥扎尼莫德。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

[1]. Deconstructing the Pharmacological Contribution of Sphingosine-1 Phosphate Receptors to Mouse Models of Multiple Sclerosis Using the Species Selectivity of Ozanimod, a Dual Modulator of Human Sphingosine 1-Phosphate Receptor Subtyp.

盐酸奥扎尼莫德是奥扎尼莫德的盐酸盐形式，奥扎尼莫德是一种口服生物利用度高的鞘氨醇-1-磷酸（S1P）受体1（S1PR1，S1P1）和5（S1PR5，S1P5）调节剂，具有潜在的抗炎和免疫调节活性。口服后，奥扎尼莫德选择性地靶向并结合淋巴细胞上的S1PR1，诱导S1PR1内化和降解。这导致淋巴细胞滞留在淋巴结中。通过阻止淋巴细胞的迁移，奥扎尼莫德可减少循环外周淋巴细胞的数量以及淋巴细胞向靶组织的浸润。这可抑制淋巴细胞介导的免疫反应，并可能减轻炎症。S1PR1是一种G蛋白偶联受体，在淋巴细胞从淋巴组织迁移的过程中起着关键作用。奥扎尼莫德对 S1PR5 的调节可能具有神经保护作用。
另见：奥扎尼莫德（含有活性成分）。

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药物适应症
多发性硬化症：Zeposia 适用于治疗根据临床或影像学特征定义的活动性复发缓解型多发性硬化症 (RRMS) 成人患者。溃疡性结肠炎：Zeposia 适用于治疗对常规疗法或生物制剂反应不足、疗效丧失或不耐受的中度至重度活动性溃疡性结肠炎 (UC) 成人患者。
治疗多发性硬化症
治疗克罗恩病
治疗溃疡性结肠炎

C23H25CLN4O3

440.92

440.161

C, 62.65; H, 5.72; Cl, 8.04; N, 12.71; O, 10.89

1618636-37-5

Ozanimod;1306760-87-1

91618104

White to off-white solid powder

104Ų

3

7

7

31

609

1

Cl[H].O1C(C2C([H])=C([H])C(=C(C#N)C=2[H])OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=NC(C2C([H])=C([H])C([H])=C3C=2C([H])([H])C([H])([H])[C@]3([H])N([H])C([H])([H])C([H])([H])O[H])=N1

KBXLMOYQNDMHQT-QGZVFWFLSA-N

InChI=1S/C23H24N4O3.ClH/c1-14(2)29-21-9-6-15(12-16(21)13-24)23-26-22(27-30-23)19-5-3-4-18-17(19)7-8-20(18)25-10-11-28;/h3-6,9,12,14,20,25,28H,7-8,10-11H2,1-2H3;1H/t20-;/m0./s1

(S)-5-(3-(1-((2-hydroxyethyl)amino)-2,3-dihydro-1H-inden-4-yl)-1,2,4-oxadiazol-5-yl)-2-isopropoxybenzonitrile hydrochloride

RPC-1063 HCl; RPC1063 hydrochloride; RPC-1063 hydrochloride; Zeposia; UNII-3UPR33JAAM; 3UPR33JAAM

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 200 mg/mL (453.60 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (11.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (11.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 5 mg/mL (11.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 50.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。