EC50 (for human): 5.79 (GCGR), 0.0643 (GIPR), 0.775 nM (GLP-1R)[1]. EC50 (for mouse): 2.32 (GCGR), 0.191 (GIPR), 0.794 nM (GLP-1R) [1]. Ki (for human): 5.6 (GCGR), 0.057 (GIPR), 7.2 nM (GLP-1)[1].

Retatrutide (LY3437943) TFA 针对人类 GCGR、GIPR 和 GLP-1R 的 EC50 值分别为 5.79、0.0643 和 0.775 nM[1]。 Retatrutide TFA 针对小鼠 GCGR、GIPR 和 GLP-1R 的 EC50 值分别为 2.32、0.191 和 0.794 nM[1]。 Retatrutide TFA 对人 GCGR、GIPR 和 GLP-1R 的结合亲和力分别为 5.6、0.057 和 7.2 nM [1]。 Retatrutide TFA 对小鼠 GCGR、GIPR 和 GLP-1R 的结合亲和力分别为 73、2.8 和 1.3 nM[1]。

---

瑞曲肽（LY3437943）/LY在体外激活人GCGR、GIPR和GLP-1R[1]
LY被设计为对人类GCGR、GIPR和GLP-1R具有强效激动剂活性。为了评估LY的内在效力，使用表达人GCGR、人GIPR或人GLP-1R的HEK-293克隆细胞系来测量3′，5′-环磷酸腺苷（cAMP）的积累，作为受体激活下游的第二信使。在人类GCGR中，LY的效力是人类胰高血糖素的2.9倍（LY 50%有效浓度[EC50]=5.79 nM，SEM=0.28 nM，而人类胰高葡萄糖素EC50=1.97 nM，SEM=0.04 nM）（图1B；表S1）。LY在人类GIPR中的效力比GIP（1-42）NH2高8.9倍（LY EC50=0.0643 nM，SEM=0.0037 nM，而人类GIP（1-2）NH2 EC50=0.574 nM，SEM=0.026 nM）（图1C；表S1）。在人类GLP-1R中，LY的效力比GLP-1（7-36）NH2低2.5倍（LY EC50=0.775 nM，SEM=0.041 nM，而人类GLP-1（7-36）NH2 EC50=0.312 nM，SEM=0.007 nM）（图1D；表S1）。在功能测定中，LY是GCGR、GIPR和GLP-1R的完全激动剂（表S1）。所有cAMP测定均使用低受体密度的克隆细胞系进行。这提供了最小的信号通路扩增，并允许对分子的内在效力和功效进行最佳测量（Willard等人，2020）。使用放射性受体结合试验独立确认靶点结合（表S1）。相比之下，观察到几种比较单、双和三受体激动剂（包括SAR441255）激活这些受体的一系列效力（表S2）。为了进一步探索LY在具有内源性GIPR或GCGR表达的人细胞模型中的体外活性，我们研究了优先表达GIPR的分化人脂肪细胞和优先表达GCGR的人诱导多能干细胞衍生肝细胞的功能终点。在肝细胞中，LY在刺激葡萄糖输出方面表现出与天然胰高血糖素相似的效力（图1E）。在脂肪细胞中，LY比天然GIP更能刺激脂肪分解（图1F）。综上所述，这些体外研究结果表明，LY是人类GCGR、GIPR和GLP-1R的强效激动剂。

Retatrutide (LY3437943) TFA（皮下注射；0.47 mg/kg；单剂量）通过与 GIP 或 GLP-1 受体结合并参与体内 GCGR 来增强 ipGTT 中的葡萄糖耐量 [1]。瑞他鲁肽TFA（皮下注射；10 mL/kg；每3天一次；持续21天）激活胰高血糖素受体，导致体重显着下降和能量消耗增加[1]。使用瑞替鲁肽 TFA 是可接受且安全的[1]。

---

瑞他曲肽（LY3437943）/LY是体内GCGR、GIPR和GLP-1R的三重激动剂[1]
为了进一步在体内表征LY，采用了多种转基因小鼠模型来评估靶受体的参与以及对营养和能量代谢的功能贡献。首先，我们在体外受体结合亲和力和功能效力测定中证实，LY是小鼠GCGR、GIPR和GLP-1R的强效激动剂（表S1）。我们表征了LY在小鼠体内的药代动力学特性，以评估给药时间（表S3；图S1）。为了评估LY的GIPR和GLP-1R活性，使用腹腔葡萄糖耐量试验（ipGTT）在正常（野生型）、GIPR阴性（GIPR−/−小鼠）和GLP-1R-阴性小鼠（GLP-1R−/-小鼠）中评估体内血糖控制。与semaglutide和长效GIP类似，LY治疗改善了所有3种基因型的葡萄糖波动（图1G-1I）。总之，这些结果表明，LY可以通过GIP或GLP-1受体改善ipGTT中的葡萄糖耐量。为了评估胰高血糖素活性，我们在LY给药前24小时用GIPR抗体拮抗剂治疗GLP-1R-null小鼠，从而阻断GIPR和GLP-1R活性（Killion等人，2018）。由于小鼠缺乏GIPR和GLP-1R活性，LY在给药后1小时增加了血浆葡萄糖（图1J）。然而，这种葡萄糖的增加被GCGR抗体拮抗剂的预处理所阻断（Jun等人，2015），表明LY在体内功能性地与GCGR结合，在没有GIPR和GLP-1R激动作用的情况下进行测试时会增加血浆葡萄糖（图1J）。重要的是，虽然LY中存在GCGR活性，但对GIP和GLP-1受体的活性产生的促胰岛素作用取代了GCGR对葡萄糖耐量的作用，因为LY（0.1 nmol/kg）在ipGTT期间对野生型小鼠葡萄糖降低的ED50与替西帕肽（0.2 nmol/kg。

---

瑞他曲肽（LY3437943）/LY促进肥胖小鼠的体重减轻[1]
为了研究对体重、能量代谢、身体成分和肝脂肪变性的影响，对C57/Bl6饮食诱导的肥胖（DIO）小鼠施用LY。LY剂量依赖性地降低体重（ED50:4.73 nmol/kg）（图2A和2C）和卡路里摄入量（图2B）。体重减轻主要是由于脂肪量减少（图2D），对瘦体重的影响最小（图2E），如脂肪量/瘦体重比所示（图2F）。LY降低了血糖和血浆胰岛素（图2G和2H），表明血糖控制得到改善，并表明胰岛素敏感性可能得到改善，这与双重GIPR/GLP-1R激动症的研究结果一致（Samms等人，2021）。LY改善了肝脏健康，表现为血浆丙氨酸氨基转移酶和肝脏甘油三酯的降低（图2I和2J）。在另一项实验中，我们测试了LY与替西帕肽对肥胖小鼠体重减轻的疗效。当每天以10nmol/kg的剂量治疗时，LY在肥胖小鼠中比替西帕肽促进了更多的体重减轻（图2K），这与卡路里摄入量的减少有关（图2L）。这可能部分解释了LY的额外减肥。为了阐明这一点，我们对LY进行了额外的研究，以评估能量消耗对减肥的贡献。

---

瑞他曲肽（LY3437943）/LY通过参与肥胖小鼠的胰高血糖素受体增加能量消耗[1]
我们之前已经证明，使用替西帕肽治疗会对增加能量消耗产生微小但显著的影响（Coskun等人，2018），但使用替西帕肽减轻小鼠体重的一个关键驱动因素是减少总热量摄入。为了评估LY对热量摄入和能量消耗的影响，我们在热中性（27°C）下进行了一系列实验。我们研究了与热量摄入匹配（CIM）组相比，10 nmol/kg的LY的效果。在治疗期的前10天，LY导致体重减轻约35%，而CIM导致体重减轻20%（图3A）。在这10天的时间里，卡路里摄入量大幅下降（图3B）。CIM组热量摄入的减少伴随着能量消耗的显著减少。随着对热量摄入的初始抑制治疗作用减弱（图3B），CIM组体重逐渐增加，能量消耗下降的恢复缓慢（图3C）。相比之下，由于维持了治疗前的能量消耗水平（图3C），用LY治疗的小鼠继续保持初始体重减轻（图3B）。与CIM组相比，LY增加了能量消耗（图3C），导致显著的负能量平衡（图3D）和脂质氧化，如呼吸交换率下降所示（图3E）。与其他组相比，LY治疗没有改变运动活动（图3F）。CIM和LY治疗组都因体重减轻而减少了脂肪量和瘦肉量（图3G和3H）。虽然两组之间的瘦体重变化相似，但LY对脂肪量的减少明显大于CIM组。GCGR抗体拮抗剂使LY的体重减轻最小化（图3I），与CIM组中观察到的水平基本一致（图3B）。给予GCGR抗体拮抗剂并没有改变LY对减少热量摄入的总体影响（图3J），但阻断了LY对能量消耗的影响（图3K），这提供了证据表明GCGR激动是能量消耗的关键因素。

受体结合测定[1]
如前所述（Willard等人，2020），使用来自表达人或小鼠GIPR、GLP-1R或GCGR的人胚胎肾（HEK-293）克隆细胞系的膜，使用闪烁接近试验格式，用小麦胚凝集素珠进行受体结合试验（Samms等人，2021；Willard等人，2020）。在每种受体结合试验中，使用未标记的GCG/GIP/GLP-1非特异性结合对照品，GCG为1μM终末，GIP为0.25μM终终末，GLP-1为0.25μM终末。每种受体结合试验的放射配体浓度如下：[125I]-GCG（最终0.15 nM），[125I]-GIP（最终0.075-0.15 nM，[125I-GLP-1（最终0.15 nM））。在每个相应的受体结合试验中添加GCGR膜（1.5μg/孔人或6.5μg/孔小鼠）、GIPR膜（3.0μg/孔人类或7.0μg/孔鼠标）或GLP-1R膜（0.5μg/孔人体或0.12μg/孔老鼠）。Ki值通过非线性回归分析使用结合的放射性标记量与添加的肽浓度来确定。GIP放射性示踪剂通过HPLC纯化，描述为[125I]-Tyr1-GIP（1-42）和[125I]-Tyr10-GIP（1-44）的1:1混合物。用非放射性肽类似物[127I]-Tyr1-GIP（1-42）和[127]-Tyr10-GIP（1-44）进行同源和异源竞争实验，以确保GIPR高亲和力结合位点的定量。使用合成的[127I]-Tyr氨基酸构建块生成肽类似物。

---

人受体功能体外测定[1]
LY的功能活性是通过HEK-293克隆细胞系中3′，5′-环磷酸腺苷（cAMP）的形成来测定的，这些细胞系具有低表达密度的人GCGR（1300个受体/细胞）、人GIPR（1700个受体/电池）或人GLP-1R（1400个受体/细胞）（Willard等人，2020）。如前所述，对人GLP-1R和人GIPR低表达克隆细胞系进行了一代低表达人GCGR克隆细胞系的研究（Willard等人，2020）。如前所述（Willard等人，2020），在无脂肪酸、无球蛋白的人血清白蛋白存在和不存在的情况下进行cAMP形成测定，并使用PerkinElmer Envision仪器检测荧光信号，激发波长为320nm，发射波长为665nm和620nm。

---

小鼠受体功能体外测定[1]
如前所述（Samms等人，2021），使用表达小鼠GCGR、小鼠GIPR或小鼠GLP-1R的HEK-293克隆细胞系中cAMP的形成来测定LY的功能活性。如上所述，在没有血清白蛋白的情况下进行cAMP形成测定，并使用PerkinElmer Envision仪器检测荧光信号，激发波长为320nm，发射波长为665和620nm。

---

人GLP-1Rβ-Arrestin募集试验[1]
如所述，使用GLP-1R CHO-K1 PathHunter细胞进行ARRB2招募（Willard等人，2020）。在没有白蛋白的情况下进行测定，加入PathHunter检测试剂后，使用Envision平板读数器读取化学发光信号。

人肝细胞测定[1]
人诱导多能干肝细胞在补充有抑瘤素M、庆大霉素和牛血清白蛋白的RPMI 1640培养基中培养。为了使细胞适应无葡萄糖条件，在用含有MgSO4（0.82 mM）、NaHCO3（9 mM）、HEPES（0.02 mM）、无脂肪酸BSA（0.1%）、CaCl2（2.25 mM）、NaCl（117.6 mM）、KCl（5.4 mM）和KH2PO4（1.5 mM）的无葡萄糖HGO缓冲液处理之前，洗涤细胞并孵育1小时。孵育后，移除HGO缓冲液，用HGO缓冲溶液中浓度响应的测试肽处理细胞2小时。处理后，收集条件培养基并分析葡萄糖含量，以评估细胞向HGO缓冲区的葡萄糖输出。按照制造商的方案，使用Amplex Red葡萄糖氧化酶检测试剂盒进行葡萄糖分析。 将测试肽的浓度响应曲线绘制为条件培养基中的葡萄糖（y轴）与分子的对数浓度（x轴）。EC50使用4参数可变斜率非线性回归拟合分析（GraphPad Prism 7.0）确定。为了评估效力，EC50被报告为3个实验的平均值，每个实验中每个剂量有3个生物重复。

---

人脂肪细胞测定[1]
分离和培养的人前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞，在前脂肪细胞培养基中孵育1天，然后在脂肪细胞分化培养基中培养6天，在脂肪细胞维持培养基中再培养6天。根据培养的人脂肪细胞脂解分析试剂盒对分化的脂肪细胞进行脂解分析。简而言之，将细胞洗涤两次，然后在测定缓冲液中用浓度响应的测试肽处理3小时。孵育后，将条件培养基转移到单独的平板上，并按照试剂盒方案评估甘油含量。 将测试肽的浓度响应曲线绘制为条件培养基中的甘油（y轴）与肽的对数浓度（x轴）。EC50使用4参数变斜率非线性回归拟合（GraphPad Prism 7.0）确定。

动物/疾病模型：雄性CD-1小鼠[1]
剂量：0.47 mg/kg
给药途径：皮下（sc）给药，单次
实验结果：AUClast，ng*h/mL AUC0-∞，ng*h/mL Cmax，ng/mL Tmax，h t1/2，h CLF，mL/h/kg 41135 41905 1680 12 21 11.22.

---

动物/疾病模型：饮食诱导肥胖（DIO）雄性C57/BL6黑鼠（24-25周龄，40-51克）[1]
剂量：10毫升/公斤
给药途径：皮下注射，每3天一次，持续21天
实验结果：体重减轻，血糖控制改善。

---

\n\n肥胖小鼠体内疗效研究[1]
\n以下研究使用了24周至25周龄的饮食诱导肥胖（DIO）雄性C57/Bl6小鼠，这些小鼠自到达后一直喂以高热量饮食。动物单独饲养于温度控制在24°C至27°C的设施中，光照/黑暗周期为12小时（22:00开灯），并可自由获取食物和水。
\n小鼠在设施中适应至少2周后，根据体重进行随机分组，以确保每个实验组的小鼠体重相近。小鼠体重范围为40克至51克。每组包含6只小鼠。将溶于溶剂的载体（20 mM Tris-HCl，pH 8.0）或LY（剂量范围0.3 nmol/kg至30 nmol/kg）皮下注射（10 mL/kg）给自由采食的DIO小鼠，在黑暗周期开始前30分钟至90分钟进行注射，每3天一次，持续21天。分别于第1、4、7、10、13、16和19天进行皮下注射。研究期间每日测量体重和食物摄入量。所有研究中，兽医人员均对动物的总体健康状况和福利进行监测。未报告任何不良反应。
\n体重绝对变化值通过减去同一动物首次注射分子前的体重计算得出。在第0天和第21天，采用定量核磁共振法测量总脂肪量。在第21天，于黑暗期前处死动物，通过心脏穿刺采集血液，并使用临床化学分析仪分析血浆。肝脏甘油三酯含量通过处死时采集的肝脏匀浆测定。胰岛素采用 Meso Scale Discovery 酶联免疫吸附测定试剂盒进行测定。
\n对于间接测热法研究，将动物置于 TSE PhenoMaster/LabMaster 测热仪中适应 3 天，所有实验均在热中性温度 (27°C) 下进行。在第 0 天和第 22 天，使用 Echo Medical System 仪器通过核磁共振 (NMR) 测定总脂肪量。每天在黑暗周期开始前 30 至 90 分钟，向自由采食的 DIO 小鼠皮下注射载体或 Retatrutide (LY3437943) (10 nmol/kg)，持续 22 天。为了确定LY34379343治疗对体重、身体代谢或能量代谢的影响程度是否独立于热量摄入的变化，我们选取了一组小鼠，使其热量摄入量与Retatrutide (LY3437943)组小鼠的热量摄入量相匹配。在另一项实验中，小鼠每周接受一次10 mg/kg剂量的对照或GCGR抗体拮抗剂治疗。在整个研究过程中，每日测量小鼠的体重和食物摄入量。通过减去同一小鼠首次注射药物前的体重，计算体重的绝对变化。采用开放式循环量热系统，通过间接量热法测量热量和呼吸交换比（RER）。RER是二氧化碳产生量（VCO2）与氧气消耗量（VO2）的比值。 \n

---

\n非人灵长类动物的非临床心血管安全性研究[1]
\n单剂量瑞他曲肽 (LY3437943) 的猴子心血管研究[1]
\n18 只雄性食蟹猴（每组 6 只）在第 1 天接受单次皮下注射赋形剂对照品或 0.05 或 0.5 mg/kg 瑞他曲肽 (LY3437943)，采用平行给药设计。心血管功能评估基于定性心电图 (ECG) 评估以及心电图（QT 间期和校正 QT 间期 [QTc]）和血流动力学（心率和源自左心室压力波形的 dP/dtmax；收缩压、舒张压和平均动脉压；以及动脉脉压）参数的定量分析。在给药前至少 90 分钟以及给药后至少 169 小时内，通过遥测技术记录心电图和血流动力学数据。\n

---

\n一项针对猴子的瑞他曲肽 (LY3437943) 6 个月重复给药毒性研究。[1]
\n雄性和雌性食蟹猴被随机分为四组，分别以 0.05、0.15 和 0.5 mg/kg 的剂量进行皮下注射。在给药前阶段，对每种性别的猴子进行一次遥测测量并进行分析；在给药阶段的第 8 天（仅限第 1 至 3 组）、第 36 天（仅限第 1 和 4 组；因为第 4 组在研究的前几周需要暂停给药）、第 99 天和第 169 天；以及在恢复阶段的第 108 天（雄性）或第 106 天（雌性）进行遥测测量。

[1]. LY3437943, a novel triple glucagon, GIP, and GLP-1 receptor agonist for glycemic control and weight loss: From discovery to clinical proof of concept. Cell Metab. 2022 Sep 6;34(9):1234-1247.e9.

随着肥胖症患病率的不断上升，亟需新的疗法来改善体重管理和代谢健康。正在研发的多受体激动剂有望满足这一未被满足的医疗需求。LY3437943 是一种新型的三重激动肽，可同时作用于胰高血糖素受体 (GCGR)、葡萄糖依赖性促胰岛素多肽受体 (GIPR) 和胰高血糖素样肽-1受体 (GLP-1R)。体外实验表明，LY3437943 对 GCGR 和 GLP-1R 的活性较为平衡，但对 GIPR 的活性更强。在肥胖小鼠模型中，给予 LY3437943 可降低体重并改善血糖控制。除了 GIPR 和 GLP-1R 介导的热量摄入减少外，GCGR 介导的能量消耗增加也进一步增强了体重减轻的效果。在一项 I 期单次递增剂量研究中，LY3437943 的安全性和耐受性与其他肠促胰岛素相似。其药代动力学特征支持每周一次给药，单次给药后体重减轻可持续至第 43 天。这些发现提示需要对 LY3437943 进行进一步的临床评估。[1]

---

结论和未来方向 总之，Retatrutide (LY3437943)/LY 在 GIPR 上的活性失衡（GIPR 活性占优势），而在 GCGR 和 GLP-1R 上的活性平衡。LY 可使肥胖小鼠的体重减轻高达 45%，并具有降低血糖和改善胰岛素抵抗的功效。我们的数据表明，三激动剂中的 GCGR 活性可导致小鼠体重减轻的 30%–35%，这是由于能量消耗增加所致。单次递增剂量研究中的健康受试者表明，LY 耐受性良好。单次给药 LY 后体重减轻可持续至给药后第 43 天，并伴有初始食欲下降。本研究中观察到的LY的安全性、耐受性和疗效特征支持对肥胖症（NCT04881760）和2型糖尿病（NCT04867785）患者进行多次递增剂量LY的评估。[1]

C223H343F3N46O70

4845.35

Retatrutide;2381089-83-2;Retatrutide acetate

White to off-white solid powder

LY3437943 TFA; Retatrutide sodium; LQ42M82ZU6; LY-3437943 TFA; LY-3437943 SODIUM; Tyr-{Aib}-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Ile-{alpha-Me-Leu}-LeuAsp-Lys-{diacid-C20-gamma-Glu-(AEEA)-Lys}-Ala-Gln-{Aib}-Ala-PheIle-Glu-Tyr-Leu-Leu-Glu-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-SerNH2 (Sodium salt)

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO :≥ 100 mg/mL (~20.64 mM)
H2O :~20 mg/mL (~4.13 mM)

Note: 如何溶解多肽产品？请参考本产品网页右上角“产品说明书“文件，第4页。

---

配方 1 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (0.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 12.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: 1.25 mg/mL (0.26 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 12.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: ≥ 1.25 mg/mL (0.26 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 12.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。