LCMV gp33-41 TFA

目录号: V76831 纯度: ≥98%
LCMV gp33-41 (TFA) 是一种羧基延伸的 11 个氨基酸长肽,仅限于 MHC I 类 H-2Db 分子的淋巴细胞性脉络膜脑膜炎病毒序列,被呈递给细胞毒性 T 淋巴细胞。
LCMV gp33-41 TFA 产品类别: Arenavirus
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
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产品描述
LCMV gp33-41 (TFA) 是一种羧基延伸的 11 个氨基酸长的肽,淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒序列,仅限于 MHC I 类 H-2Db 分子,可呈递给细胞毒性 T 淋巴细胞。
LCMV gp33-41 TFA 是一种合成肽,对应于淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒 (LCMV) 糖蛋白 (gp) 的氨基酸 33-41,以三氟乙酸盐的形式提供。
生物活性&实验参考方法
靶点
This peptide is an immunodominant epitope restricted by MHC class I H-2Db molecules and is presented to cytotoxic T lymphocytes (CD8+ T cells). Its primary target is the T cell receptor (TCR) on CD8+ T cells.
体外研究 (In Vitro)
LCMV gp33-41 TFA 并非药物,而是一种用于研究抗病毒 T 细胞反应的免疫学工具。它用于 T 细胞活化试验,在体外刺激特定的 CD8+ T 细胞,并测量其功能反应,包括增殖、细胞因子产生和细胞毒性。
体内研究 (In Vivo)
在体内,LCMV gp33-41 可用于研究适应性免疫反应,方法是通过免疫动物产生抗原特异性 CD8+ T 细胞。它广泛应用于疫苗研究和 T 细胞受体特异性研究,有助于推进抗病毒和免疫治疗策略。
酶活实验
肽-MHC相互作用的非细胞结合分析采用表面等离子共振(SPR)或生物层干涉(BLI)技术。对于SPR,重组H-2Db MHC I类分子经生物素化后固定在链霉亲和素包被的传感器芯片上。LCMV gp33-41肽(KAVYNFATC)配制于运行缓冲液(10 mM HEPES,150 mM NaCl,0.005% Tween-20,pH 7.4)中。将肽进行系列稀释(0.1-100 uM),并流过芯片。监测结合(3分钟)和解离(5分钟)阶段。通过将传感器图拟合到1:1 Langmuir结合模型来计算结合亲和力(KD)。或者,可以使用放射性标记的标准肽进行竞争性结合试验来测量肽与纯化的 H-2Db 分子的结合,其中未标记的 gp33-41 肽竞争结合,并确定 IC50 值。
细胞实验
细胞实验采用来自LCMV感染或免疫小鼠的脾细胞或纯化的CD8+ T细胞进行。T细胞活化实验中,将细胞接种于96孔板(2×10⁵个细胞/孔),并用浓度为1 pM至10 uM的LCMV gp33-41肽刺激24-72小时。通过ELISA或ELISpot检测IFN-γ的产生来评估T细胞活化。增殖实验中,在肽刺激前用CFSE(5-10 uM)标记细胞,并在3-5天后通过流式细胞术分析增殖情况(CFSE稀释)。细胞毒性实验采用肽脉冲靶细胞进行。将未免疫的脾细胞用肽(1-10 uM,1小时)脉冲处理,然后用高浓度CFSE(5 uM)标记。对照组未进行脉冲标记的细胞用低浓度CFSE(0.5 uM)标记。将这些细胞与效应CD8+ T细胞以1:1的比例混合,并共培养4-6小时。通过流式细胞术检测CFSE高表达细胞群相对于CFSE低表达细胞群的减少量,从而量化特异性裂解。对于细胞内细胞因子染色,将细胞用肽和布雷菲德菌素A(3 ug/mL)处理5-6小时,然后固定、透化,并进行IFN-γ、TNF-α和IL-2染色,最后进行流式细胞术分析。
动物实验
体内免疫方案采用6-8周龄的雌性C57BL/6小鼠。LCMV gp33-41肽通过半胱氨酸残基与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联,并与佐剂(如弗氏完全佐剂(CFA)或Addavax)乳化。小鼠接受皮下或腹腔注射,每只小鼠注射25-50 μg肽偶联物,并与聚肌苷酸-聚胞苷酸(每只小鼠10 μg)和佐剂混合。14-21天后,使用弗氏不完全佐剂(IFA)进行加强免疫。对于病毒感染模型,小鼠腹腔注射2×10⁵ PFU的LCMV Armstrong株(急性感染)或2×10⁶ PFU的LCMV Clone 13株(慢性感染)。感染后7至14天,处死小鼠,收集脾细胞,用于体外分析LCMV gp33-41特异性CD8+ T细胞的四聚体染色(Db/GP33四聚体)。或者,对于体内细胞毒性试验,将高浓度CFSE标记的肽脉冲脾细胞静脉注射到小鼠体内。12-18小时后,处死受体小鼠,并通过流式细胞术测定脾脏中CFSE高表达细胞与CFSE低表达细胞的比例,以计算GP33特异性T细胞介导的特异性杀伤百分比。
药代性质 (ADME/PK)
LCMV gp33-41 是一种短的合成肽(9 个氨基酸:KAVYNFATC,以 TFA 盐形式表示的分子量约为 1050 Da),不具备药物的药代动力学特性。作为免疫原,由于易被血清蛋白酶快速降解,其体内半衰期较短(数分钟至数小时)。为了增强免疫原性,该肽通常与载体蛋白(如 KLH 或 BSA)偶联,并与佐剂配制,形成药物储存库,从而延长其与免疫系统的接触时间。免疫后,该肽被抗原呈递细胞(APC,包括树突状细胞)摄取,经加工处理后,通过 MHC I 类分子呈递给 CD8+ T 细胞。由于该肽并非治疗候选药物,因此尚未进行生物分布研究。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
该肽本身的直接毒性极低。在免疫学检测中使用的低浓度下,TFA盐通常被认为对研究用途安全。高浓度TFA可能引起轻微刺激。在动物免疫研究中,在常用剂量(每只小鼠25-50微克)下未报告明显的毒性。其主要生物学效应与免疫激活有关,高剂量下可能导致细胞因子风暴或自身免疫反应,但在研究剂量下尚未观察到这种情况。作为一种研究用肽,目前尚无除注射部位急性局部炎症以外的毒理学特征数据。
参考文献

[1]. Optimal lymphocytic choriomeningitis virus sequences restricted by H-2Db major histocompatibility complex class I molecules and presented to cytotoxic T lymphocytes. J Virol. 1995 Apr;69(4):2297-305.

其他信息
LCMV gp33-41 是一种广泛用于免疫学研究的 MHC I 类限制性表位,尤其适用于研究 CD8+ T 细胞应答。P14 TCR 转基因小鼠品系能够识别 H-2Db 背景下的 LCMV gp33-41,是研究 T 细胞发育、激活、记忆形成和耗竭的关键模型系统。该肽段广泛应用于疫苗研究、T 细胞激活试验、适应性免疫应答研究以及 T 细胞受体特异性研究。此外,由于 GP33 特异性 T 细胞能够介导免疫病理,它也被用于探索自身免疫性疾病的机制。LCMV gp33-41 是推进抗病毒策略和免疫疗法开发的宝贵工具,但尚未获得用于人体的监管批准。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C50H74N11F3015S
分子量
1158.24
相关CAS号
LCMV gp33-41;151705-84-9
外观&性状
White to off-white solid powder
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO :~100 mg/mL (~86.34 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.16 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.8634 mL 4.3169 mL 8.6338 mL
5 mM 0.1727 mL 0.8634 mL 1.7268 mL
10 mM 0.0863 mL 0.4317 mL 0.8634 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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