BzATP triethylammonium salt

p2x1 Receptor; P2X3 Receptor; P2X4 Receptor; P2X7 Receptor
P2X7 receptor – EC50 = 5.33 ± 0.05 (pEC50, human P2X7, calcium influx); EC50 = 5.01 ± 0.04 (pEC50, rat P2X7, calcium influx); EC50 = 3.99 ± 0.06 (pEC50, mouse BALB/c P2X7, calcium influx); EC50 = 4.02 ± 0.02 (pEC50, mouse C57BL/6 P2X7, calcium influx); also activates P2X1, P2X3, P2X2/3, P2X4 receptors with higher potency than P2X7 [1][2][3][4]

BzATP（10-1000 μM；24 小时）刺激 U87 和 U251 胶质瘤细胞迁移和增殖 [3]。在人神经胶质瘤细胞中，BzATP（100μM；6-48小时）促进P2X7R蛋白的产生[3]。

---

BzATP（30-100 μM）在大鼠背根神经节非神经元细胞中诱导电流，该电流可被A-438079（1 μM）显著抑制。[1]
BzATP（3 mM）诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1β，该作用可被A-438079（0.3-3 μM）剂量依赖性地抑制。在3 μM浓度下，A-438079抑制IL-1β释放75.6%（P < 0.01）。[4]
BzATP（500 μM）在原代小鼠巨噬细胞中诱导强烈、持续的细胞内Ca²⁺浓度升高，该作用可被P2X7拮抗剂Brilliant Blue G浓度依赖性地抑制（IC50 = 0.74 μM）。BzATP还诱导巨噬细胞中溴化乙锭摄取（孔形成），该作用可被BBG抑制（IC50 = 1.57 μM）。[4]
BzATP（10-100 μM）以浓度依赖性方式诱导U87和U251人胶质瘤细胞的增殖和迁移。增殖在100 μM BzATP时达到峰值。BzATP（100 μM）将迁移率从39.7 ± 2.3%（对照）增加至73.0 ± 2.1%（P < 0.05）。BzATP还增加这些细胞中ERK、p-ERK和PCNA蛋白的表达。P2X7拮抗剂BBG可阻断这些作用。BzATP不显著增加胶质瘤细胞的凋亡。[3]
BzATP（100 μM）通过免疫荧光和Western blot显示上调U87和U251胶质瘤细胞中P2X7受体蛋白表达。[3]
BzATP（0.5-25 μM）以高效力激活P2X1、P2X3和P2X2/3受体（pEC50 6.70-8.74），对P2X7和P2X4受体的活性最低。[1]
在表达重组P2X7受体的1321N1细胞中，BzATP介导Ca²⁺内流，EC50值：人P2X7 pEC50 = 5.33，大鼠P2X7 pEC50 = 5.01，小鼠BALB/c P2X7 pEC50 = 3.99，小鼠C57BL/6 P2X7 pEC50 = 4.02。BzATP在所有测试的P2X7受体上均为完全激动剂。[2]
BzATP刺激表达P2X7的细胞中Yo-Pro摄取（孔形成），pEC50值：人6.18，大鼠5.20，小鼠BALB/c 4.22，小鼠C57BL/6 4.44。[2]
在P2X1受体上，BzATP是测试中最有效的激动剂（pEC50 = 8.74）。在P2X3受体（人）上，BzATP的pEC50 = 7.10（90%效能）。在P2X2/3异聚受体上，BzATP的pEC50 = 7.50（90%效能）。[1]

与对照组和假手术组相比，盲肠结扎穿刺 (CLP) 诱导后，BzATP (5 mg/kg) 显着增加结肠中 P2X7R 的表达 [4]。

---

在环磷酰胺诱导的出血性膀胱炎小鼠模型中，BzATP（3 mM，体外应用于巨噬细胞）诱导IL-1β释放。[4]
在脓毒症小鼠模型（盲肠结扎穿刺）中，BzATP（5 mg/kg，腹腔注射，CLP后24小时）增加肠道P2X7R表达，增加血清IL-6和TNF-α水平（P < 0.001 vs 对照），增加组织学评分、MPO活性、肠道通透性（血清FD-40）、细菌易位和肠上皮细胞凋亡，并降低紧密连接蛋白表达（occludin、claudin-1、ZO-1）。BzATP治疗的脓毒症小鼠48小时死亡率为91%。[4]
在脓毒症小鼠模型中，BzATP（5 mg/kg，腹腔注射）显著促进肠道P2X7R表达，与假手术组（P < 0.001）和对照组（P < 0.001）相比。[4]
在大鼠帕金森病模型（6-OHDA）中，BzATP未在体内给药（用于体外巨噬细胞刺激）。[1]

体外激活大鼠P2X3和P2X2/3受体[https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11156585/]
重组大鼠P2X3和大鼠P2X2/3受体cDNA与先前发表的用于大鼠同源和异源P2X3受体药理学体外表征的序列相同（Bianchi等人，1999）。使用标准脂质介导的转染方法构建稳定表达大鼠P2X3或大鼠P2X2/3受体的1321N1人星形细胞瘤细胞。所有细胞系均保存在含有10%FBS和抗生素的D-MEM中，如下所示：300μg ml-1 G418用于含P2X3的大鼠细胞；75μg ml-1潮霉素和150μg ml-1G418用于含P2X2/3的大鼠细胞。细胞在37°C的含5%二氧化碳的加湿气氛中生长。 P2X受体功能基于激动剂介导的细胞质Ca2+浓度的增加来确定，如前所述（Bianchi等人，1999）。BzATP（10μM）和α，β-meATP（10μM）分别用于激活大鼠P2X3和P2X2/3受体。简言之，使用荧光成像平板读取器（FLIPR），使用荧光Ca2+螯合染料（Fluo-4）作为96细胞形式的细胞内Ca2+的相对水平的指示剂。细胞在96孔黑壁组织培养板中生长至融合，并在23°C下在D-PBS中装载乙酰氧基甲酯（AM）形式的Fluo-4（1μM）1-2小时。在每次实验运行中，以1-5s的间隔收集荧光数据。使用GraphPad Prism中的四参数logistic Hill方程分析浓度响应数据。https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11156585/

---

钙内流FLIPR实验：将稳定表达P2X7受体的1321N1细胞接种于多聚-D-赖氨酸包被的黑色96孔板中，加载Fluo-4染料。BzATP在10⁻¹⁰至10⁻⁴ M的11个半对数浓度下测试。加入激动剂后，记录细胞内Ca²⁺浓度变化3分钟。使用四参数逻辑斯蒂Hill方程分析浓度-效应曲线。[1][2]
Yo-Pro摄取实验：将表达P2X7受体的1321N1细胞接种于多聚-D-赖氨酸包被的黑色壁96孔板中。用不含Mg²⁺或Ca²⁺离子的PBS洗涤细胞两次。在加入激动剂前立即加入Yo-Pro碘化染料（终浓度2 μM），测量染料摄取1小时。[2]
巨噬细胞IL-1β释放实验：通过腹腔灌洗收集静息驻留巨噬细胞，铺板，用LPS（3 μg/ml）引发2小时，然后加入BzATP（3 mM），30分钟后收集上清液进行IL-1β ELISA。[4]
巨噬细胞内Ca²⁺测量：原代小鼠巨噬细胞加载Fluo-4，测量BzATP（500 μM）诱导的[Ca²⁺]c变化。使用BBG作为拮抗剂。[4]
巨噬细胞孔形成实验：巨噬细胞在溴化乙锭（25 μM）存在下用BzATP（500 μM）处理。荧光法测量EB摄取。使用BBG作为拮抗剂。[4]

细胞增殖测定[3]
细胞类型： U87 和 U251 神经胶质瘤细胞
测试浓度： 5、10、50、100、500 和 1000 μM
孵育时间：2、6、12、24、48和72小时
实验结果：U87和U251神经胶质瘤细胞系的增殖情况分别在 10-1000 μM 和 100-1000 μM 存在时显着增加。 U87和U251细胞系的细胞增殖峰值均在100μM处。 U87 和 U251 细胞系的最佳孵育时间均为 24 小时。

---

蛋白质印迹分析[3]
细胞类型： U87 和 U251 神经胶质瘤细胞
测试浓度： 100 μM
孵化持续时间：6-48 小时
实验结果：诱导 P2X7R 上调。

---

稳定表达重组P2X1、P2X2、P2X3、P2X4、P2X7、P2Y1、P2Y2受体的1321N1人星形细胞瘤细胞维持在含10% FBS和适当选择抗生素的DMEM中。细胞接种于96孔板中进行钙内流实验。[1][2]
原代小鼠腹腔巨噬细胞：通过灌洗收集，铺板，用LPS（3 μg/ml，2小时）引发，然后用BzATP（3 mM）处理以释放IL-1β。对于Ca²⁺和孔形成实验，巨噬细胞用BzATP（500 μM）处理。[4]
U87和U251人胶质瘤细胞：在含10% FBS的DMEM中培养。细胞用BzATP（5-1000 μM）处理进行MTT增殖实验（最佳条件：100 μM，24小时）。通过划痕实验评估迁移。使用Western blot和免疫荧光检测P2X7R、ERK、p-ERK、PCNA表达。通过TUNEL染色评估凋亡。[3]
小鼠固有层巨噬细胞：从脓毒症小鼠肠黏膜分离，在含10% FBS的RPMI-1640中培养。用BzATP（500 μM）或BBG（10 μM）处理30分钟。[4]

动物/疾病模型： 2月龄雄性C57BL/6小鼠（每只体重在20至25克之间）[4]
剂量： 5 mg/kg
给药途径： 腹腔注射 (ip)
实验结果： 48小时后，治疗组和对照组小鼠的死亡率分别为91%和86%。

在小鼠脓毒症模型中，BzATP（5 mg/kg，腹腔注射，CLP后24小时）将48小时死亡率增加至91%（对照组为86%，A740003治疗组为73%）。BzATP增加脓毒症小鼠的组织学损伤评分、MPO活性、肠道通透性和上皮细胞凋亡。[4]
在U87和U251胶质瘤细胞中，BzATP（100 μM，24小时）未显著增加TUNEL染色检测的凋亡。[3]

[1]. Pharmacological characterization of recombinant human and rat P2X receptor subtypes. Eur J Pharmacol. 1999 Jul 2;376(1-2):127-38.

[2]. Amino acid residues in the P2X7 receptor that mediate differential sensitivity to ATP and BzATP. Mol Pharmacol. 2007 Jan;71(1):92-100.

[3]. Involvement of P2X 7 Receptor in Proliferation and Migration of Human Glioma Cells. Biomed Res Int. 2018 Jan 9;2018:8591397.

[4]. Systemic blockade of P2X7 receptor protects against sepsis-induced intestinal barrier disruption. Sci Rep. 2017 Jun 29;7(1):4364.

BzATP（2',3'-O-(4-苯甲酰苯甲酰)ATP）是一种合成的ATP类似物，广泛用作P2X7受体激动剂。然而，它对P2X7不具有选择性；对P2X1和P2X3受体的效力更高。BzATP是大鼠P2X7受体的部分激动剂（90%效能）和人P2X7受体的部分激动剂（98%效能）。它是小鼠P2X7受体的完全激动剂。BzATP也是P2X4受体的激动剂（人80%效能，大鼠81%效能）。在胶质瘤细胞中，BzATP通过ERK通路激活促进增殖和迁移。在脓毒症中，BzATP加剧炎症和肠道屏障功能障碍。BzATP被用作研究P2X7受体在各种疾病模型中功能的工具药。[1][2][3][4]

---

ATP作为一种快速神经递质，通过特异性激活一类称为P2X受体的配体门控离子通道发挥作用。本研究在一个缺乏内源性P2受体活性的异源表达系统中，对六种不同的重组P2X受体亚型进行了药理学表征。编码四种人P2X受体亚型（hP2X1、hP2X3、hP2X4和hP2X7）和两种大鼠P2X受体亚型（rP2X2和rP2X3）的cDNA在1321N1人星形胶质细胞中稳定表达。此外，rP2X2和rP2X3受体亚型在这些细胞中共表达，形成异源多聚体受体。基于假定的P2配体刺激Ca2+内流的活性，确定了每种受体亚型的药理学特征。观察到的每种反应的效力和动力学均具有受体亚型特异性，并与其各自的电生理特性相关。每种受体亚型均表现出独特的药理学特征，这基于其对核苷酸类似物、二腺苷多磷酸和推定的P2受体拮抗剂的敏感性。αβ-亚甲基ATP（αβ-meATP）是一种推定的P2X受体选择性激动剂，研究发现其仅在hP2X1、hP2X3和rP2X3受体亚型上表现出强效激动剂活性。苯甲酰苯甲酸ATP（BzATP，2'和3'混合异构体）据报道是一种P2X7受体选择性激动剂，其在大鼠和人P2X7受体上的活性最低，但在hP2X1、rP2X3和hP2X3受体上却是强效（nM级）激动剂。这些数据系统地考察了P2X受体激活的功能药理学。[1] P2X7受体（P2X7R）的激动剂特性与其他P2X受体在两个主要方面存在显著差异：激活该受体需要高浓度的ATP（>100 μM），并且ATP类似物2',3'-O-(4-苯甲酰基-苯甲酰基)ATP（BzATP）的效力高于ATP，且能诱发更高的最大电流。然而，这些特性在不同物种间存在显著差异。我们试图利用大鼠和小鼠P2X7R对ATP和BzATP反应的巨大差异，来确定可能导致这些激动剂在P2X7R上发挥独特作用的区域或特定残基。我们测量了野生型大鼠和小鼠P2X7R、嵌合型P2X7R以及带有点突变的小鼠P2X7R对ATP和BzATP的膜电流反应。野生型大鼠P2X7R对ATP的敏感性是野生型小鼠P2X7R的10倍，对BzATP的敏感性是其100倍。我们发现激动剂的EC50值完全由P2X7R的胞外结构域决定。当两个片段（氨基酸残基115-136和282-288）互换时，小鼠的敏感性转变为大鼠的敏感性。对这些区域进行点突变分析发现，大鼠P2X7R中一个氨基酸残基——天冬酰胺284——完全解释了ATP敏感性10倍的差异，而BzATP敏感性100倍的差异则需要将赖氨酸127和天冬酰胺284从大鼠转移到小鼠。因此，物种间单个氨基酸的差异即可导致激动剂效力发生显著变化，并可区分两种广泛使用的P2X7受体激动剂。[2]

---

既往研究表明，P2X7受体（P2X7R）的激活可促进某些类型肿瘤的增殖和迁移。本研究旨在探讨激活的P2X7R是否以及如何促进人胶质瘤细胞的增殖和迁移。结果显示，P2X7R阳性细胞的数量随肿瘤分级的升高而增加。在U87和U251人胶质瘤细胞系中，P2X7R均有表达，且其表达可被P2X7R激动剂3'-O-(4-苯甲酰苯甲酰)ATP (BzATP)和siRNA增强。我们的结果还表明，10 μM BzATP足以显著诱导胶质瘤细胞增殖，而100 μM BzATP则使细胞增殖达到峰值。此外，BzATP处理显著增强了U87和U251细胞的迁移能力。然而，BzATP处理并未显著改变U87和U251细胞的凋亡数量。另外，BzATP处理的U87和U251胶质瘤细胞中ERK、p-ERK和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达均升高。MEK/ERK通路抑制剂PD98059可阻断BzATP激活的胶质瘤细胞的增殖和迁移。这些结果表明，ERK通路参与了P2X7R激活诱导的胶质瘤细胞增殖和迁移。[3]

C24H24N5O15P3.C18H45N3

1018.97

816.1686255

White to off-white solid powder

306 Ų

6

20

16

54

1300

0

CCN(CC)CC.C1=CC=C(C=C1)C(=O)C2=CC=C(C=C2)C(=O)OC3C(OC(C3O)N4C=NC5=C(N=CN=C54)N)COP(=O)(O)OP(=O)(O)OP(=O)(O)O

HVOVBTNCGADRTH-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H24N5O15P3.C6H15N/c25-21-17-22(27-11-26-21)29(12-28-17)23-19(31)20(16(41-23)10-40-46(36,37)44-47(38,39)43-45(33,34)35)42-24(32)15-8-6-14(7-9-15)18(30)13-4-2-1-3-5-13;1-4-7(5-2)6-3/h1-9,11-12,16,19-20,23,31H,10H2,(H,36,37)(H,38,39)(H2,25,26,27)(H2,33,34,35);4-6H2,1-3H3

[5-(6-aminopurin-9-yl)-4-hydroxy-2-[[hydroxy-[hydroxy(phosphonooxy)phosphoryl]oxyphosphoryl]oxymethyl]oxolan-3-yl] 4-benzoylbenzoate;N,N-diethylethanamine

BzATP triethylammonium salt; bbATP triethylammonium salt

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O :~50 mg/mL (~49.07 mM)

配方 1 中的溶解度: 100 mg/mL (98.14 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。