Phytohemagglutinin P

别名: Phytohemagglutinin P; PHA-P
目录号: V89276 纯度: ≥98%
植物血凝素 P (PHA-P) 是一种有丝分裂原,可选择性刺激血源性或淋巴单核细胞。
Phytohemagglutinin P 产品类别: Disease Research Fields
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
植物血凝素 P (PHA-P) 是一种有丝分裂原,可选择性地刺激造血或淋巴单核细胞来源的细胞。
植物血凝素P (PHA-P) 是从菜豆(Phaseolus vulgaris,又称红芸豆)种子中提取的一种凝集素。它由多种同源凝集素组成,这些同源凝集素能特异性地与糖蛋白上的碳水化合物部分结合。PHA-P 是一种强效的有丝分裂原,可诱导淋巴细胞母细胞转化和增殖,因此是免疫学中用于体外刺激T细胞分裂的经典试剂。它还用于染色体分析、淋巴细胞转化试验以及研究免疫细胞中的信号转导通路。
生物活性&实验参考方法
靶点
Phytohemagglutinin P targets carbohydrate structures, specifically complex N-linked glycans containing galactose, N-acetylgalactosamine, and mannose residues on cell surface glycoproteins and glycolipids. The primary cellular target is the T cell receptor-associated CD3 complex and other signaling molecules, but the mechanism involves cross-linking of multiple glycoproteins leading to global T cell activation. By binding to these targets, PHA-P bypasses antigen specificity and activates a large fraction of T cells via the TCR/CD3 pathway.
体外研究 (In Vitro)
植物血凝素-P(10 μg/ml;24-48 小时)刺激的蜕膜 CD8+ T 淋巴细胞产生高水平的干扰素γ和白细胞介素(IL)8,以及低水平的粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(CSF2)、IL1B、IL2、IL6、IL10、IL12 和肿瘤坏死因子;这些因子不随妊娠年龄而变化[2]。
体外实验表明,植物血凝素P(PHA-P)具有强效的促有丝分裂活性。在1-10 ug/mL的浓度下,它能刺激人外周血单核细胞(PBMC)发生母细胞转化,上调活化标志物(CD25、CD69、HLA-DR)的表达,并促进细胞增殖。通过[3H]-胸苷掺入或BrdU摄取测定,DNA合成高峰出现在48-72小时。PHA-P还能诱导细胞因子产生,尤其是IL-2、IFN-γ和TNF-α。此外,由于其血凝活性,它还能引起红细胞和白细胞的凝集。
体内研究 (In Vivo)
植物血凝素-P(25 和 50 mg/kg;腹腔注射;每日一次,连续 15 天;雄性 Sprague-Dawley 大鼠)可降低纵向骨生长、软骨细胞数量、软骨板厚度、干骺端硬组织质量、钙化软骨核心百分比以及每毫米骨表面成骨细胞数量。此外,PHA-P 还会增加破骨细胞数量、标记的破骨细胞核数量以及每个破骨细胞的平均细胞核数量[1]。
由于植物血凝素P(PHA-P)具有强效的免疫刺激和毒性作用,因此通常不作为体内全身治疗药物使用。然而,它已被用于动物模型作为免疫佐剂的研究。当皮下或腹腔注射PHA-P到小鼠体内时,会诱发局部炎症、脾肿大和血清细胞因子水平升高。高剂量时,它还会引起致命的全身炎症反应。PHA-P的局部应用已被探索用于治疗皮肤病毒感染,但这并非标准疗法。在体内,该化合物会被迅速清除,并可能引起过敏反应。
酶活实验
PHA-P 的一种非细胞(无细胞)实验是其血凝试验。将浓度为 2% 的洗涤红细胞悬液(人或兔)与系列稀释的 PHA-P 溶液混合于 96 孔圆底板中。室温孵育 1-2 小时后,观察细胞沉淀的模式。弥散的沉淀表明未发生凝集,而覆盖底部的网格状沉淀则表明发生了凝集。最小凝集浓度 (MAC) 定义为仍能引起完全凝集的最高稀释度。该试验用于测定凝集素的碳水化合物结合活性。
细胞实验
体外细胞实验采用分离的人外周血单核细胞 (PBMC) 或纯化的 T 细胞。将细胞以 1-2 × 10⁵ 个/孔的密度接种于 96 孔板中,培养基为含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640。加入 PHA-P,使其终浓度为 0.5-20 ug/mL。在 37℃、5% CO2 条件下培养 48-72 小时后,通过在最后 4-8 小时每孔加入 0.5 uCi 的 [3H]-胸苷来检测细胞增殖,随后收集细胞并进行闪烁计数。或者,也可以使用 MTT 比色法或 CellTiter-Glo 法。收集上清液用于细胞因子 ELISA 检测。
动物实验
由于毒性,PHA-P 的体内动物实验受到限制。典型的实验方案是,将 PHA-P(50-500 μg/只)腹腔注射到雌性 BALB/c 小鼠体内。2-6 小时后,采集血液样本,并通过 ELISA 法检测血清细胞因子(IL-2、IL-6、TNF-α)。同时,收集脾脏,用于流式细胞术分析 T 细胞活化标志物以及进行离体淋巴细胞增殖实验。当剂量较高(>1 mg/只)时,动物会出现感染性休克的症状(体温过低、竖毛、嗜睡),并可能在 24 小时内死亡。佐剂研究的剂量通常要低得多(10-50 μg/只)。
药代性质 (ADME/PK)
植物血凝素P是一种蛋白质,口服会被消化,因此不采用口服给药途径。静脉或腹腔注射后,由于网状内皮系统快速清除和蛋白水解,其血浆半衰期很短(数分钟至数小时)。它不能经完整皮肤吸收。其分布主要局限于血管和淋巴器官。代谢涉及肝脏和其他组织中的蛋白水解。主要以小肽片段的形式经尿液排泄。由于植物血凝素P并非候选药物,因此尚未发表正式的药代动力学研究。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
植物血凝素P(PHA-P)高剂量时具有毒性。小鼠静脉注射后的LD50约为5-10 mg/kg。症状包括呼吸困难、腹泻和体温过低。长期接触可导致体重减轻、淋巴组织增生和自身免疫样反应。职业性接触芸豆粉尘可引起呼吸道过敏。PHA-P也是嗜碱性粒细胞释放组胺的强效诱导剂,注射后可引起过敏反应。处理纯粉末时必须格外小心;务必佩戴手套和口罩,并在生物安全柜中操作。
参考文献

[1]. Effector activity of decidual CD8+ T lymphocytes in early human pregnancy. Biol Reprod. 2006;75(4):562-567.

其他信息
植物血凝素P(PHA-P)提取自红芸豆,经亲和层析纯化。它以冻干粉末形式供应,可溶于水和缓冲液。其主要应用之一是核型分析:PHA-P可刺激全血中的T淋巴细胞分裂,从而使细胞周期停滞于中期,并制备用于产前和产后遗传分析的染色体。它还用于癌症免疫学,以生成淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞);以及用于HIV研究,以激活潜伏病毒。PHA-P并非获批药物,而是一种研究级试剂,无临床适应症。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
外观&性状
Solid powder
别名
Phytohemagglutinin P; PHA-P
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
H2O : 10 mg/mL (with sonication and heat)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: 25 mg/mL in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加),澄清溶液 超声助溶

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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