| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 10 mM * 1 mL in DMSO |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
PDPK1
The PDK1 agonist PS48 has the power to enhance the osteogenic capacity of dexamethasone-treated MC3T3-E1 cells. In MC3T3-E1 cells treated with dexamethasone after PS48 treatment, the protein levels of p-AKT and p-mTOR are elevated. [2] PS48 binding to PDK1 characterized by ITC[1] The binding properties of PS48 and its analog compound PS08 (4) to PDK150–359 Y288G Q292A were determined by isothermal titration calorimetry (ITC) at 20 °C (Table 1 and Supplementary Fig. 2). Both compounds bound to PDK150–359 with a 1:1 stoichiometry and a binding affinity in the micromolar range (PS48, Kd = 10.3 μM; PS08, Kd = 6.2 M). The close resemblance of the compounds and their thermodynamic parameters, ΔH, ΔG and TΔS (Table 1), suggested a similar binding mechanism. In both cases, binding was both enthalpy and entropy favorable and driven by the entropy term (ΔH/ΔG = 27.1% and 25.0%, respectively; Table 1)[1]. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
PDK1 激动剂 PS48 能够增强地塞米松处理的 MC3T3-E1 细胞的成骨能力。在 PS48 处理后用地塞米松处理的 MC3T3-E1 细胞中，p-AKT 和 p-mTOR 的蛋白水平升高。 [2]
以ITC为特征的PS48与PDK1的结合[1] 在20°C下，通过等温滴定量热法（ITC）测定了PS48及其类似化合物PS08（4）与PDK150-359 Y288G Q292A的结合性能（表1和补充图2）。这两种化合物都以1:1的化学计量比与PDK150-359结合，结合亲和力在微摩尔范围内（PS48，Kd=10.3μM；PS08，Kd=6.2 M）。化合物及其热力学参数ΔH、ΔG和TΔS（表1）的密切相似性表明了类似的结合机制。在这两种情况下，结合都是焓和熵有利的，并且是由熵项驱动的（ΔH/ΔG分别为27.1%和25.0%；表1）[1]。 在用地塞米松处理的MC3T3-E1前成骨细胞中，加入PS48 (5 µM) 可促进PDK1蛋白以及成骨标志物Runx2、OCN和ALP的表达，此结果通过免疫印迹法确定。[2] ALP染色和茜素红染色实验表明，PS48 (5 µM) 能增强被地塞米松处理抑制的MC3T3-E1细胞的成骨功能。[2] 用PS48 (5 µM) 与地塞米松共同处理MC3T3-E1细胞，导致磷酸化AKT (p-AKT) 和磷酸化mTOR (p-mTOR) 的蛋白水平升高，表明AKT/mTOR信号通路被激活。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，PDK1激动剂PS48可以维持地塞米松治疗小鼠的骨量。 [2]
双转基因APPsw/PSENdE9小鼠是阿尔茨海默病的模型，用于测试口服PDK-1激动剂PS48预防Morris Water Maze（MWM）中学习和记忆预期下降的效果。小鼠在标准（SD）或高脂肪（HFD）饮食中饲养，从10个月大开始给药，并在14个月大时进行测试PS48对学习TG动物隐藏平台的空间位置有积极影响，无论是SD还是HFD，与载体饮食和WT动物相比。在成功获得空间记忆后的几个测量指标上（探针试验），该药物也被证明对任何一种饮食的动物都有显著益处。在几个探针测量中，与SD相比，HFD组TG动物的PS48治疗效果更为明显。HFD产生了体重增加和高血糖的一些预期代谢效应，并加速了TG动物的认知障碍PS48被发现在TG组中适度减轻体重和改善OGTT反应方面具有附加值，尽管结果尚不明确。PS48耐受良好，无明显临床体征或症状，本身不影响寿命。这些结果建议在人体试验之前进行更大规模的临床前研究[3]。 |
| 酶活实验 |
等温滴定量热法。[1]
如前所述，使用VP-ITC仪器进行量热滴定，并按照补充方法中的详细说明进行了小幅修改。 蛋白激酶活性测试。[1] 蛋白激酶活性测试基本上如前所述8,28，使用T308tide作为PDK1的底物。更多信息详见补充方法。 探索PDK1中ATP结合位点的构象。[1] HM多肽和小化合物激活PDK1是由于酶构象的变化。我们通过扫描TNP-ATP/PDK1在P-HM多肽、PIFtide或低分子量化合物存在或不存在的情况下的稳态荧光，探讨了PDK1中ATP结合位点的构象。数据是在Varian Cary Eclipse荧光分光光度计（激发λ=479 nm；发射扫描λ=500-600 nm；激发狭缝=10 nm；发射狭缝=10纳米）中以200 nm min-1的速率获得的，每100 nm扫描150个数据点，平均时间为0.3秒。更多信息详见补充方法。 |
| 细胞实验 |
MC3T3-E1 细胞在含有 4 mM 甘油磷酸盐和 25 g/mL 抗坏血酸的成骨分化培养基中培养直至 70% 汇合。然后向成骨分化培养基中补充不同浓度的地塞米松（最终乙醇浓度，0.01%，vol/vol）14天。每两天更换一次培养基。添加或不添加 PS48 (5 M) 的地塞米松 107 M 培养基用于培养 MC3T3-E1 细胞。
细胞培养与处理: 小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1（亚克隆4）在补充了胎牛血清的α-MEM中培养。对于成骨分化实验，细胞在含有甘油磷酸盐和抗坏血酸的分化培养基中培养。PS48在培养液中的最终使用浓度为5 µM，并根据实验设计与地塞米松 (10^-7 M) 联用。[2] 免疫印迹 (Western Blot): 使用RIPA裂解液从MC3T3-E1细胞中提取总蛋白。蛋白样品通过SDS-PAGE分离，转印至PVDF膜上，并用针对PDK1、Runx2、OCN、ALP、磷酸化AKT、总AKT、磷酸化mTOR、总mTOR以及GAPDH（作为上样对照）的特异性一抗进行孵育。与HRP标记的二抗孵育后，使用化学发光底物试剂盒显示目标蛋白。[2] ALP染色: 成骨诱导后，MC3T3-E1细胞经洗涤、固定，并根据制造商说明书使用BCIP/NBT试剂盒进行碱性磷酸酶 (ALP) 活性染色。对染色后的细胞进行拍照。[2] 茜素红染色: 为评估矿化情况，将固定的MC3T3-E1细胞用茜素红工作液染色5分钟，然后洗涤并拍照。[2] |
| 动物实验 |
药物制剂和给药[3]
在初步毒性和耐受性研究中，正常成年C7/Bl6小鼠连续两周接受给药，一组采用灌胃给药，另一组采用静脉注射给药。PS48溶解于100% DMSO中，然后用玉米油稀释至最终DMSO浓度为5%。每日灌胃给药（1 mg/kg和50 mg/kg）相当于每50克小鼠12.5微升DMSO。在另一项评估中，小鼠经尾静脉注射PS48，剂量逐渐增加至最大20 mg/kg。每日记录体重和一般活动情况，尸检包括检测肝脏和肌肉酶水平。[3] PS48在2xTG小鼠认知功能的临床研究中，从44周龄开始口服给药。为了确保小鼠摄入足量的每日药物剂量，同时保证总热量摄入量相等，药物分别通过标准饲料（SD）和高脂饲料（HFD）两种方式给药。在SD组小鼠中，药物被添加到一种饼干面团零食（或补充剂）中，这种零食比SD更受小鼠欢迎，且小鼠总是能吃完，因此可以轻松追踪小鼠的摄入量。在喂食面团期间，小鼠被单独饲养，以监测其是否完全摄入。因此，小鼠每日食物摄入量的一半（约3克）为面团/药物混合物，另一半为SD饲料颗粒。将药物/载体-玉米油乳液（50微升）与面团（1/20 v/v）混合后，分装到硅胶糖果模具中（每孔1.3毫升），冷冻保存，一周内使用（每块约1.5克）。我们发现，动物更喜欢高脂饮食（HFD），甚至超过了饼干面团。HFD本身质地较软，因此可以简单地研磨，并与化合物（或载体）乳化在玉米油/5% DMSO中混合。然后将其重新制成5克颗粒，干燥后放入料斗中。HFD-V组的平均每日食物摄入量为3.2克，HFD-PS48组为3.3克。[3]小鼠每日每公斤体重给予50毫克PS48。基于平均体重为 46 克的成年转基因 (2xTG) 小鼠，PS48 的日剂量为 2.3 毫克。基于平均体重为 41 克的野生型 (WT) 小鼠，PS48 的日剂量为 2.0 毫克。未根据各组小鼠体重随时间的变化进行进一步剂量调整。从开始治疗到认知测试结束，药物治疗持续时间略超过 4 个月。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
蛋白质磷酸化能够传递大量细胞内信号。磷酸化介导信号转导的一种机制是通过诱导靶蛋白或相互作用蛋白的构象变化。先前的研究描述了一个变构位点，该位点介导AGC激酶的磷酸化依赖性激活。AGC激酶PDK1通过底物上磷酸化基序的结合而被激活。本文报道了PDK1与一种合理设计的低分子量激活剂结合的晶体结构，并利用荧光检测和氘交换实验描述了该小分子化合物在晶体和溶液中诱导的构象变化。我们的结果表明，该化合物的结合在靶位点（PIF结合口袋）引起局部变化，并在ATP结合位点和激活环引起变构变化。总而言之，我们阐述了小分子化合物通过模拟磷酸化依赖性构象变化来触发PDK1激活的变构变化的分子细节。[1]长期高剂量糖皮质激素治疗可导致成骨细胞活力和功能下降，进而引发骨质疏松和骨坏死。本研究探讨了HIF-1α在糖皮质激素诱导的MC3T3-E1细胞成骨抑制中的作用及其机制。结果表明，当MC3T3-E1细胞暴露于浓度范围为10⁻⁹至10⁻⁶ M的地塞米松（Dex）时，HIF-1α蛋白表达降低。地塞米松处理后，MC3T3-E1细胞中PDK1的表达也降低。 MC3T3-E1细胞经糖皮质激素受体拮抗剂RU486和地塞米松联合处理后，HIF-1α表达增强。此外，HIF-1α表达上调能够促进MC3T3-E1细胞的成骨能力和PDK1表达。然而，HIF-1α拮抗剂2-甲氧基雌二醇（2-ME）在经地塞米松处理的MC3T3-E1细胞中具有相反的作用。此外，尽管腺病毒-HIF-1α构建体转导后HIF-1α表达上调，但PDK1拮抗剂二氯乙酸仍能抑制MC3T3-E1细胞的成骨能力。PDK1激动剂PS48能够促进经地塞米松处理的MC3T3-E1细胞的成骨能力。重要的是，在用PS48处理后，经地塞米松处理的MC3T3-E1细胞中p-AKT和p-mTOR的蛋白水平升高。体内实验表明，PDK1激动剂PS48能够维持地塞米松处理小鼠的骨量。这项研究为糖皮质激素诱导骨质疏松症的机制提供了新的认识。[2]
本研究使用PS48作为药理学工具来激活PDK1。它能够通过激活PDK1/AKT/mTOR信号通路来拮抗地塞米松诱导的前成骨细胞成骨功能的抑制。[2] |
| 分子式 |
C17H15CLO2
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|---|---|---|
| 分子量 |
286.75
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| 精确质量 |
286.076
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| 元素分析 |
C, 71.21; H, 5.27; Cl, 12.36; O, 11.16
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| CAS号 |
1180676-32-7
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
44141940
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
444.1±24.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
222.4±22.9 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.609
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| LogP |
5.59
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| tPSA |
37.3
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|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
2
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
20
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| 分子复杂度/Complexity |
337
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C(O)/C=C(C1=CC=CC=C1)/CCC2=CC=C(Cl)C=C2
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| InChi Key |
LLJYFDRQFPQGNY-QINSGFPZSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H15ClO2/c18-16-10-7-13(8-11-16)6-9-15(12-17(19)20)14-4-2-1-3-5-14/h1-5,7-8,10-12H,6,9H2,(H,19,20)/b15-12-
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| 化学名 |
(Z)-5-(4-chlorophenyl)-3-phenylpent-2-enoic acid
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~57 mg/mL (~198.8 mM)
Ethanol: ~57 mg/mL (~198.8 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.72 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.4874 mL | 17.4368 mL | 34.8736 mL | |
| 5 mM | 0.6975 mL | 3.4874 mL | 6.9747 mL | |
| 10 mM | 0.3487 mL | 1.7437 mL | 3.4874 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
| NCT Number | Recruitment | interventions | Conditions | Sponsor/Collaborators | Start Date | Phases |
| NCT05546385 | Recruiting | Device: Sham breathing device Device: Partial Rebreathing Device |
Migraine With Aura | Rehaler | June 16, 2023 |
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COA
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