| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 靶点 |
Dihydroorotate dehydrogenase (DHODH) (Inhibitor. IC50 ≈ 1 nM for inhibition of proliferation in MOLM-13 AML cells; binds to the same site as brequinar based on pull-down and docking studies) [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
PTC299 抑制缺氧诱导的 HeLa 细胞中 VEGFA 蛋白的合成，EC50 为 1.64 ± 0.83 nM[1]。在白血病细胞中，PTC299 的疗效比 Brequinar、Vidofludimus 或 A 77-1726 强十到千倍以上，IC50 约为 1 nM [1]。
PTC299 抑制 HeLa 细胞中缺氧诱导的 VEGFA 蛋白产生，EC50 为 1.64 ± 0.83 nM。其无活性的 R-对映体 PTC-371 无效。 [1] PTC299 剂量依赖性地抑制转染了含有 VEGFA 5'-UTR 载体的 HT1080 细胞中 V5 标记的 VEGFA165 蛋白的产生，证实了该 UTR 对其活性的必要性。 [1] 使用 35S 标记的蛋氨酸/半胱氨酸进行的脉冲追踪实验表明，PTC299 (100 nM) 降低了新合成的 VEGFA 蛋白水平，但不影响总蛋白合成、VEGFA 分泌或降解，表明其抑制 VEGFA mRNA 翻译。 [1] PTC299 处理 HT1080 细胞 8 小时后，选择性降低了细胞内嘧啶核苷酸 (dCTP, dTTP) 水平，但不影响嘌呤核苷酸 (dATP, dGTP) 水平。 [1] 使用 15N-谷氨酰胺进行的代谢标记实验表明，PTC299 (100 nM) 抑制嘧啶核苷酸的从头合成，降低了 15N 标记的 CTP、UTP 和 UMP 的水平。这种抑制是快速且剂量依赖性的。 [1] PTC299 诱导的 VEGFA 蛋白合成抑制和 S 期细胞周期停滞可被外源性尿苷完全挽救，但不能被腺苷、胞苷或鸟苷挽救，这将其效应与嘧啶核苷酸耗竭联系起来。 [1] 使用 PTC299 偶联的 Sepharose 珠子进行的化学下拉实验，特异性地从细胞裂解液中富集了 DHODH 和 prohibitin-1/2。游离的 PTC299 或 brequinar 能竞争性阻断 DHODH（而非 prohibitin）与珠子的结合。游离的 PTC299 或 brequinar 也能将 DHODH 从珠子上洗脱下来。PTC299 珠子结合人源 DHODH，但不结合大鼠 DHODH。 [1] PTC299 抑制从 K562 细胞分离的线粒体中的 DHODH 活性，其效力与 brequinar 相似，且强于 teriflunomide。 [1] 在包含 240 种肿瘤细胞系的筛选中，PTC299 显示出广泛的抗增殖活性。敏感性 (IC50 < 1 µM) 在造血系统细胞系中 (57%) 比在实体瘤细胞系中 (18%) 更常见。基因表达分析表明，敏感细胞通常具有较低的嘧啶补救合成酶 (CDA, UPP1) 表达，更依赖于从头合成。 [1] PTC299 能强效抑制白血病细胞系（例如 MOLM-13 AML，IC50 ≈ 1 nM）的增殖，其效力显著高于 brequinar、vidofludimus 或 teriflunomide。它还能抑制五个患者来源的急性髓系白血病 (AML) 细胞样本的增殖，IC50 值在 2 nM 到 60 nM 之间。 [1] PTC299 能诱导 AML MOLM-13 细胞分化。 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠 HT1080 纤维肉瘤异种移植模型中，口服给予 PTC299 (0.3, 1, 3 mg/kg，每日两次) 能剂量依赖性地抑制肿瘤生长。3 mg/kg BID 的剂量达到最大效果。 [1]
在同一模型中，PTC299 治疗导致瘤内和循环血浆中人源 VEGFA 水平的剂量依赖性降低，这与肿瘤生长控制相关。CD31 染色显示，肿瘤血管直径减小且分布更均匀。 [1] 在全身性白血病模型中，静脉接种了 MOLT-4 人急性淋巴细胞白血病 (ALL) 细胞的 NOD-SCID 小鼠，在接种后第 7 天开始接受 PTC299 (10 mg/kg，每日一次) 治疗。PTC299 显著延长了中位生存时间（136 天 vs 溶媒组 46 天），并减少了循环白血病细胞。多柔比星未能延长生存期。 [1] 在实体瘤异种移植模型中，皮下植入 MOLM-13 AML 细胞的裸鼠接受 PTC299 (10 mg/kg, QD)、阿糖胞苷 (AraC, 60 mg/kg, QD) 或两者联合治疗。与溶媒或单独 AraC 相比，单独使用 PTC299 显著延缓了肿瘤生长。PTC299 与 AraC 联合进一步延缓了肿瘤生长。 [1] 在一项针对 2 型神经纤维瘤病 (NF2) 患者的临床研究中，为期 8 周的 PTC299 治疗显著降低了患者升高的血清 VEGFA 水平。对部分患者存档血清样本的分析显示，PTC299 治疗增加了二氢乳清酸 (DHO，DHODH 的底物) 的水平，表明在人体内实现了靶点结合。 [1] |
| 酶活实验 |
对于体外 DHODH 活性测定，使用了显色底物还原法。通过监测 2,6-二氯吲哚酚 (DCIP) 的还原，分光光度法测量了二氢乳清酸 (DHO) 氧化与泛醌还原的偶联反应。在测试化合物或溶媒对照存在下测定反应速率。 [1]
为了在更生理化的背景下进行 DHODH 抑制研究，使用玻璃匀浆器从对数生长期的 K562 细胞中分离线粒体。将分离的线粒体沉淀并重悬于匀浆缓冲液中。然后使用相同的显色原理，在抑制剂存在下评估这些线粒体制备物中的 DHODH 活性，反应 30 分钟后通过 LC-MS/MS 定量乳清酸的产生。 [1] |
| 细胞实验 |
对于 VEGFA 抑制 ELISA，用一系列剂量的 PTC299 处理细胞（例如 HeLa、HT1080）指定时间（例如，HeLa 细胞在缺氧条件下）。然后收集培养上清液，使用商业酶联免疫吸附测定 (ELISA) 试剂盒按照说明书定量 VEGFA 蛋白水平。绘制剂量反应曲线并计算 EC50 值。 [1]
对于细胞增殖/毒性测定（CC50 或 IC50 测定），将细胞接种于板中，并用一系列浓度的 PTC299 处理 72 小时。然后使用 CellTiter-Glo 发光细胞活力测定法评估细胞活力，该法通过测量细胞 ATP 水平作为活细胞数的指标。绘制剂量反应曲线并计算 IC50 值。 [1] 对于嘧啶核苷酸从头合成的代谢标记，将对数生长期的细胞培养在含有 1 mM 15N-谷氨酰胺的无谷氨酰胺培养基中。用化合物或溶媒处理指定时间（例如 8 小时）后，洗涤、收集细胞，并在冷的甲醇/水混合物中裂解。离心后收集上清液，通过 LC-MS/MS 分析以定量 15N 标记的嘧啶核苷酸代谢物（例如 UMP、CTP、UTP）。 [1] 对于细胞周期分析，在存在或不存在外源性核苷 (100 µM) 的情况下，用 PTC299 (100 nM) 处理 HT1080 细胞 24 小时。然后收集细胞，固定，用碘化丙啶染色，并通过流式细胞术分析 DNA 含量和细胞周期分布。 [1] |
| 动物实验 |
对于皮下异种移植模型（例如，HT1080 纤维肉瘤、MOLM-13 AML），将肿瘤细胞植入免疫缺陷小鼠（例如，裸鼠）的侧腹部。当肿瘤达到预定大小后，将小鼠随机分组进行治疗。PTC299 配制成载体（具体成分未在正文中详细说明），并通过灌胃法给药。在 HT1080 研究中，每日两次（BID）分别给予 0.3、1 和 3 mg/kg 的剂量。在 MOLM-13 AML 研究中，每日一次（QD）给予 10 mg/kg 的剂量。定期测量肿瘤体积。[1]
对于系统性白血病模型，将 1 × 107 个 MOLT-4 人 ALL 细胞静脉注射到 NOD-SCID 小鼠体内。接种后7天，将小鼠随机分组并开始治疗。PTC299以10 mg/kg的剂量每日一次口服给药。对照组接受赋形剂或阿霉素（0.5或1 mg/kg，腹腔注射，每周一次）。监测小鼠的存活情况。在第2周和第4周，通过流式细胞术对人CD45进行染色，定量分析循环白血病细胞。[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
对NF2临床试验中一名患者的存档血清样本进行分析表明，PTC299的血浆浓度随治疗而升高，并与血清二氢乳清酸（DHO）水平升高相关，证实了药物的全身暴露和靶点结合。[1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
临床前安全性研究（详见补充材料）表明，PTC299 在动物模型中安全且耐受性良好。即使浓度比其在肿瘤细胞中的 IC50 高 1000 倍，PTC299 也不会抑制正常原代细胞（包括造血干细胞）的增殖。[1]
在筛选试验中，PTC299 对 205 种激酶和 62 个其他药理靶点均未显示出脱靶抑制作用。[1] 在之前的实体瘤临床试验中，PTC299 未引起髓系抑制，而髓系抑制是某些其他 DHODH 抑制剂的常见副作用。[1] 然而，文献指出，在之前的临床研究中，279 名接受治疗的患者中有 2 名出现严重肝毒性，因此 PTC299 的临床试验被暂停。[1] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
PTC299 是一种新型口服小分子药物，旨在抑制肿瘤中血管内皮生长因子 (VEGF) 的产生。VEGF 的过度表达在多种疾病中起着关键作用，包括癌症和黄斑变性。PTC299 是通过 PTC 公司的 GEMS 技术发现的，其靶向调控 VEGF 生成的转录后过程，目前正在开发用于癌症治疗。
Emvododstat 是一种口服生物利用度高的血管内皮生长因子 (VEGF) 合成小分子抑制剂，具有潜在的抗血管生成和抗肿瘤活性。Emvododstat 通过选择性结合 VEGF 信使 RNA (mRNA) 的 5' 和 3' 非翻译区 (UTR) 来靶向转录后过程，从而阻止 VEGF 的翻译。这抑制了 VEGF 蛋白的产生，并降低了其在肿瘤和血液中的水平。反过来，这可能导致内皮细胞迁移、增殖和存活受到抑制，微血管形成受到抑制，肿瘤细胞增殖受到抑制，并最终诱导肿瘤细胞死亡。VEGF在多种肿瘤细胞类型中表达上调，并在血管生成过程中发挥关键作用。此外，emvododstat可能增强其他化疗药物的抗肿瘤活性。 药物适应症 已在癌症/肿瘤（未具体说明）和实体瘤的治疗中进行研究。 作用机制 PTC299旨在通过靶向调控VEGF生成的转录后控制过程来抑制肿瘤中VEGF的产生。由于PTC299抑制VEGF的产生，因此其作用发生在VEGF通路中的不同位置，与Avastin®或Sutent®等疗法不同。 PTC299 可作为单一药物使用，也可与其他抗血管生成药物或化疗药物联合使用，用于治疗癌症。 药效学 PTC299 在多种肿瘤类型中均表现出广泛的活性，可阻断 VEGF 合成，包括乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、纤维肉瘤、胃癌、肺癌、黑色素瘤、神经母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌和肾细胞癌。PTC299 作为单药疗法，可显著降低肿瘤和血浆中的 VEGF 浓度，降低肿瘤血管密度，并显著抑制肿瘤进展。 PTC299 最初是通过 PTC Therapeutics 的 GEMS 技术，在表型筛选中被鉴定为 VEGFA mRNA 翻译抑制剂。后续的机制研究表明，其主要靶点是二氢乳清酸脱氢酶 (DHODH)，它是嘧啶从头合成途径中的限速酶。VEGFA 生成的抑制是嘧啶核苷酸耗竭的下游结果。[1] 它代表了一类新型的 DHODH 抑制剂。与一些使用纯化酶测定法鉴定的抑制剂不同，PTC299 在 DHODH 嵌入线粒体膜时表现出更强的效力，这表明其活性可能受到膜脂相互作用的促进。[1] 分子对接研究表明，PTC299 与 brequinar 类似物 C44 结合于 DHODH 中相同的疏水性口袋，主要通过非极性亲脂性（“手套式”）相互作用。[1] 其活性具有物种选择性，能有效抑制人 DHODH，但对大鼠 DHODH 没有抑制作用。 [1] 由于PTC299在体外和体内均对血液肿瘤细胞具有强大的活性，并且观察到这类癌症通常嘧啶补救途径活性降低，因此PTC299正在被重新评估用于治疗血液恶性肿瘤（例如白血病、淋巴瘤）。[1] |
| 分子式 |
C25H20CL2N2O3
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|---|---|
| 分子量 |
467.343904495239
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| 精确质量 |
466.09
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| 元素分析 |
C, 64.25; H, 4.31; Cl, 15.17; N, 5.99; O, 10.27
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| CAS号 |
1256565-36-2
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| PubChem CID |
49787172
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| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
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| LogP |
6.3
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| tPSA |
54.6
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
32
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| 分子复杂度/Complexity |
651
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
COC1=CC=C(C=C1)[C@H]2C3=C(CCN2C(=O)OC4=CC=C(C=C4)Cl)C5=C(N3)C=CC(=C5)Cl
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| InChi Key |
SRSHBZRURUNOSM-DEOSSOPVSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H20Cl2N2O3/c1-31-18-7-2-15(3-8-18)24-23-20(21-14-17(27)6-11-22(21)28-23)12-13-29(24)25(30)32-19-9-4-16(26)5-10-19/h2-11,14,24,28H,12-13H2,1H3/t24-/m0/s1
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| 化学名 |
(4-chlorophenyl) (1S)-6-chloro-1-(4-methoxyphenyl)-1,3,4,9-tetrahydropyrido[3,4-b]indole-2-carboxylate
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| 别名 |
PTC299; PTC 299; PTC-299
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~106.99 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 0.83 mg/mL (1.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 8.3 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 0.83 mg/mL (1.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 8.3 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1398 mL | 10.6988 mL | 21.3977 mL | |
| 5 mM | 0.4280 mL | 2.1398 mL | 4.2795 mL | |
| 10 mM | 0.2140 mL | 1.0699 mL | 2.1398 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Bamirastine
戊双氟酚
PROTAC-PEG3-Amino
MT-3014
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
