| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Unesbulin (PTC596; 20-200 nM; for 48 hours) causes apoptosis in AML cells in a p53-independent way. Overexpression of BMI-1 renders AML cells insensitive to PTC596-induced apoptosis [1]. Unesbulin (200 nM; for 10 hours) promotes accumulation of cells in G2/M phase [1]. Unesbulin (0.012-1 μM; for 20 hours) dramatically lowers BMI-1 protein levels [1]. Unesbulin inhibits APC/CCDC20 activity, resulting to persistent activation of CDK1 and CDK2, ultimately causing hyperphosphorylation of BMI1 [2].
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| 体外研究 (In Vitro) |
Unesbulin（PTC596；20-200 nM；持续 48 小时）以不依赖于 p53 的方式导致 AML 细胞凋亡。 BMI-1 的过度表达使得 AML 细胞对 PTC596 诱导的细胞凋亡不敏感 [1]。 Unesbulin（200 nM；持续 10 小时）促进 G2/M 期细胞的积累 [1]。 Unesbulin（0.012-1 μM；持续 20 小时）可显着降低 BMI-1 蛋白质水平 [1]。 Unesbulin 抑制 APC/CCDC20 活性，导致 CDK1 和 CDK2 持续激活，最终导致 BMI1 过度磷酸化 [2]。
用 PTC596 (20-200 nM, 20 小时) 处理可剂量依赖性地降低 MOLM-13 和 U-937 急性髓系白血病细胞中 BMI-1 蛋白的表达。[1] PTC596 对 AML 细胞系表现出纳摩尔级别的效力，48 小时的平均 IC50（抑制 50% 细胞生长的浓度）为 30.7 ± 4.1 nM，平均 ED50（诱导 50% annexin V 阳性的有效浓度）为 60.3 ± 6.7 nM。[1] PTC596 诱导的细胞凋亡不依赖于 p53，因为 p53 突变细胞系（U-937, HL-60）与 p53 野生型细胞系同样敏感，并且在 OCI-AML3、MOLM-13 和 MV4-11 细胞中稳定敲低 p53 并未显著改变它们对 PTC596 的敏感性。[1] PTC596 并未增加 AML 细胞系中的 p53 蛋白水平，且 siRNA 敲低 BMI-1 也未增加 p53 水平，表明 p53 介导的信号传导不参与 PTC596 诱导的凋亡。[1] 在 MOLM-13 和 K562 细胞中过表达 BMI-1 会显著降低它们对 PTC596 诱导凋亡的敏感性，表明其对 BMI-1 的抑制是靶向性的。[1] 用 PTC596 (200 nM, 10 小时) 处理可在 p53 野生型 (MOLM-13) 和 p53 缺陷型 (U-937) AML 细胞中诱导 G2/M 期细胞周期阻滞，并伴有有丝分裂阻滞的形态学特征。[1] 蛋白质印迹分析显示，在 MOLM-13 细胞中，PTC596 处理 (≥110 nM, 20 小时) 降低了 BMI-1 及其下游靶标泛素化组蛋白 H2A 的水平，增加了磷酸化 CDK1 (T161) 和磷酸化 CDK2 (T160) 的水平，并提高了细胞周期蛋白 B1 和 Securin 的水平。[1] PTC596 诱导线粒体凋亡，证据包括在 MOLM-13 和 U-937 细胞中观察到 BAX 构象改变、caspase-3 切割和线粒体膜电位 (Δψm) 丧失。[1] PTC596 处理以剂量和时间依赖的方式降低了 MOLM-13 和 U-937 细胞中抗凋亡蛋白 MCL-1 的蛋白水平，但未影响其 mRNA 水平。BCL-2、BCL-XL 和 BAX 的水平未发生显著变化。[1] 蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺对 PTC596 引起的 MCL-1 减少影响不大，但蛋白酶体抑制剂 MG132 和泛 caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 能阻断此减少，表明 PTC596 抑制新的 MCL-1 蛋白合成并增强其蛋白酶体和 caspase 介导的降解。[1] 在来自 13 名患者的原代 AML 细胞中，PTC596 诱导剂量依赖性的细胞凋亡（annexin V 阳性），在 500 nM 浓度下，13 个样本中有 10 个观察到 >30% 的特异性增加。[1] 未成熟的 CD34+CD38low/– AML 干细胞/祖细胞比成熟的 AML 细胞对 PTC596 诱导的凋亡更敏感。[1] 对一份原代 AML 样本进行的质谱流式分析显示，PTC596 降低了 MCL-1 的表达，在 CD34+CD38low/– 干细胞/祖细胞群体中降低最为显著。它还降低了磷酸化 AKT（Ser473，降低 42.8%）等其他 MCL-1 诱导因子的水平。[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
unesbulin（PTC596；5 mg/kg；口服灌胃；每 3 天一次，持续 13 天）可以显着延长小鼠的存活时间 [1]。与使用 K562 细胞的对照 SCID 小鼠相比，unesbulin（20 mg/kg；口服强饲；每周一次，持续 15 天）产生的肿瘤体积明显更小 [1]。与载体治疗组相比，每周两次口服 unesbulin（10 或 12.5 mg/kg）直至死亡被发现可显着延长携带 HL-60 细胞的 NOD-SCID 小鼠的存活时间 [1]。
在侵袭性 MOLM-13 异种移植模型（使用 NOD-SCID/IL2Ry-KO 小鼠）中，自白血病细胞注射后一天开始，口服给予 PTC596 (5 mg/kg，每 3 天一次)，与对照组相比，在第 13 天显著降低了外周血中循环的人 CD45+ 白血病细胞百分比，并显著延长了中位生存期（16.5 天 vs. 溶媒组 13.0 天）。[1] 在 CB17 SCID 小鼠的 K562 皮下异种移植模型中，肿瘤建立后，每周口服一次 PTC596 (20 mg/kg)，与溶媒对照组相比，显著降低了平均肿瘤体积。[1] 在 NOD-SCID 小鼠的 HL-60 静脉异种移植模型中，自细胞注射后三天开始，口服给予 PTC596 (10 或 12.5 mg/kg，每周两次)，与溶媒对照组相比，以剂量依赖的方式显著延长了小鼠的生存期。[1] 脾集落形成单位实验表明，在供体小鼠中给予 PTC596（两次口服 20 mg/kg，间隔一周）与溶媒处理相比，并未统计学上显著减少经致死剂量照射的受体小鼠中移植骨髓细胞形成的肉眼可见脾集落数量，提示其对正常造血干细胞/祖细胞影响较小。相比之下，5-氟尿嘧啶处理严重减少了集落数量。[1] |
| 细胞实验 |
细胞凋亡分析[1]
细胞类型： AML 细胞系（MOLM-13、OCI-AML3、MOLM-14、MV4-11、U-937、HL-60） 测试浓度：20、50、100、200 nM 孵育时间：48 小时 实验结果： 细胞周期分析 [1] 细胞类型： MOLM-13 和 U-937 细胞 测试浓度： 200 nM 孵育时间：10小时 实验结果：导致G2/M期细胞积累，而G1期细胞百分比相位减小。 蛋白质印迹分析[1] 细胞类型： MOLM-13 细胞 测试浓度： 0.012、0.037、0.11、0.33、 1 μM 孵育时间：20 小时 实验结果：BMI-1 及其下游靶标泛素化组蛋白 H2A 的显着蛋白质水平减少。细胞周期蛋白 B1 和 securin 水平升高。 使用台盼蓝拒染法和流式细胞术检测 annexin V 结合来评估细胞活力和凋亡。将细胞以 1–2 × 10^5 个细胞/毫升的密度接种，用不同浓度的化合物处理指定时间（例如 48 或 72 小时），然后进行分析。对于 annexin V 检测，收集细胞，用 annexin V 偶联物染色，并通过流式细胞术分析以确定凋亡细胞百分比。[1] 对于凋亡机制研究，通过用荧光染料（如 DiOC6）染色细胞并用流式细胞术分析来评估线粒体膜电位损失 (Δψm)。使用针对活性 BAX 的构象特异性抗体通过流式细胞术检测 BAX 构象变化。使用针对切割/活性 caspase-3 的抗体通过流式细胞术分析 caspase-3 切割。[1] 使用 Click-IT EdU 掺入试剂盒进行细胞周期分析。用 EdU 孵育细胞以标记新合成的 DNA，然后固定、透化，并通过点击化学用荧光叠氮化物偶联物染色。用碘化丙啶染色 DNA 含量。基于 EdU 掺入与 DNA 含量，通过流式细胞术确定细胞周期分布（G1、S、G2/M 期）。[1] 通过流式细胞术分析细胞内蛋白水平（如 BMI-1、p53）。固定并透化细胞，用特异性一抗和荧光标记的二抗染色，通过流式细胞术测量平均荧光强度。[1] 使用蛋白质印迹分析评估蛋白表达。裂解细胞，通过 SDS-PAGE 分离蛋白质，转印至膜上，并用特异性一抗（如针对 BMI-1、MCL-1、BCL-2 家族蛋白、细胞周期调节蛋白、磷酸化蛋白）进行检测。与辣根过氧化物酶偶联的二抗孵育后，使用化学发光法检测信号。[1] 使用定量实时 PCR 测量 mRNA 水平。提取总 RNA，反转录为 cDNA，并使用 TaqMan 基因表达检测试剂盒在实时 PCR 系统上定量目标基因（如 BMI1、MCL1）的表达。以 GAPDH 作为内参基因进行标准化。[1] 对于基因敲低，使用核转染装置和特定的核转染试剂盒，将靶向 BMI-1 的小干扰 RNA 或阴性对照转染至细胞中。转染后培养 48-72 小时进行分析。[1] 对于稳定过表达，用携带 BMI-1 cDNA 或空载体对照的慢病毒感染细胞。筛选稳定细胞群并通过 Western blot 或流式细胞术验证 BMI-1 过表达。[1] 使用质谱流式技术对原代 AML 样本进行单细胞分析。用一组针对表面标记（如 CD34、CD38）和细胞内蛋白（如 MCL-1、磷酸化信号蛋白）的金属偶联抗体染色细胞。通过飞行时间质谱流式细胞仪分析细胞，并使用专用软件处理数据。[1] |
| 动物实验 |
动物/疾病模型：NOD-SCID/IL2Rγ-KO (NSG) 小鼠，MOLM-13 细胞 [1]
剂量：5 mg/kg 给药途径：po（灌胃）；每 3 天一次，持续 13 天 实验结果：与载体对照组相比，PTC596 组小鼠的存活时间显著延长，且呈剂量依赖性。 对于 MOLM-13 静脉异种移植模型，将 1 × 10^6 个 MOLM-13 细胞静脉注射到 NSG 小鼠体内。一天后（第 1 天），将小鼠随机分组。PTC596以 5 mg/kg 的剂量通过灌胃给药，PTC596 悬浮于含有 0.5% 羟丙基甲基纤维素和 0.1% Tween 80 的蒸馏水中。每3天给药一次。于第13天采集外周血，通过流式细胞术分析循环白血病细胞（人CD45+）。生存期作为主要终点进行监测。[1] 对于K562皮下异种移植模型，将2 × 10^7个K562细胞与Matrigel以1:1的比例混合，皮下注射到CB17 SCID小鼠的侧腹部。肿瘤形成后（11天后），将小鼠随机分组，分组依据为肿瘤体积。每周一次口服给予PTC596，剂量为20 mg/kg。定期测量肿瘤大小。[1] 对于HL-60静脉异种移植模型，将1 × 10^7个HL-60细胞静脉注射到NOD-SCID小鼠体内。注射三天后，将小鼠随机分组。 PTC596 以 10 或 12.5 mg/kg 的剂量口服给药，每周两次。主要终点为生存率。[1] 为了评估对正常造血的影响，我们进行了脾集落形成单位 (CFU-S) 检测。供体 C57BL/6 小鼠分别接受单次口服载体、间隔一周口服两次 20 mg/kg 的 PTC596，或单次腹腔注射 150 mg/kg 的 5-氟尿嘧啶 (5-FU)。末次给药两周后，从供体小鼠中采集骨髓细胞。每只小鼠共采集 5 × 10^4 个骨髓细胞，并通过静脉注射移植到经致死剂量 (10 Gy) 照射的受体小鼠体内。移植后11天，取出脾脏，用卡诺氏液固定，并计数脾脏表面的肉眼可见菌落。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
Unesbulin是一种口服有效的多梳环指癌基因BMI1（B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，unesbulin靶向肿瘤细胞和癌症干细胞（CSCs）表达的BMI1，诱导BMI1过度磷酸化，导致其降解。这抑制了BMI1介导的信号转导通路，从而减少了表达BMI1的肿瘤细胞的增殖。BMI1是多梳抑制复合物1（PRC1）的关键蛋白，在某些肿瘤细胞类型中过度表达，并在CSCs的存活、增殖和化疗耐药性中发挥关键作用。其表达与肿瘤侵袭性增强和预后不良相关。
PTC596是一种新型小分子，通过高通量筛选BMI-1抑制剂而发现，其药代动力学性质优于之前的抑制剂PTC-209。[1] 其作用机制包括诱导CDK1与BMI-1结合，以及CDK1介导的BMI-1在新的N端位点的磷酸化，从而导致BMI-1降解。[1] PTC596通过转录后机制下调MCL-1蛋白水平，包括抑制新蛋白合成和增强蛋白酶体和半胱天冬酶介导的降解，从而导致线粒体膜电位不稳定和诱导线粒体凋亡。 [1] PTC596 的抗白血病活性不依赖于 p53，因此对于具有不良复杂核型或治疗相关性 AML 的 AML 患者而言，PTC596 可能是一种潜在的治疗选择，这些患者通常伴有 p53 突变和预后不良。[1] PTC596 对 CD34+CD38low/– AML 干/祖细胞表现出强效活性，这些细胞是导致复发和化疗耐药的原因，同时在 CFU-S 检测中似乎不会影响正常的造血干/祖细胞。[1] 截至本文发表时，PTC596 已进入一项针对晚期实体瘤患者的 I 期临床试验 (NCT02404480)。[1] |
| 分子式 |
C₁₉H₁₃F₅N₆
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|---|---|
| 分子量 |
420.3387
|
| 精确质量 |
420.112
|
| CAS号 |
1610964-64-1
|
| 相关CAS号 |
1610964-64-1;Unesbulin HCl;
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| PubChem CID |
74223469
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.6±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
583.9±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
307.0±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.6 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.645
|
| LogP |
3.68
|
| tPSA |
81.6
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
10
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
586
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
TWLWOOPCEXYVBE-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C19H13F5N6/c1-9-26-13-7-4-11(20)8-14(13)30(9)18-28-16(25)15(21)17(29-18)27-12-5-2-10(3-6-12)19(22,23)24/h2-8H,1H3,(H3,25,27,28,29)
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| 化学名 |
5-Fluoro-2-(6-fluoro-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol-1-yl)-N4-(4-(trifluoromethyl)phenyl)pyrimidine-4,6-diamine
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| 别名 |
PTC596 PTC-596 PTC 596
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~16.67 mg/mL (~39.66 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (3.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (3.97 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.3790 mL | 11.8951 mL | 23.7903 mL | |
| 5 mM | 0.4758 mL | 2.3790 mL | 4.7581 mL | |
| 10 mM | 0.2379 mL | 1.1895 mL | 2.3790 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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