Pulegone   中文名称: 胡薄荷酮、长叶薄荷酮

Pulegone's primary targets are not well-defined, but it has been shown to induce cytotoxicity followed by regenerative cell proliferation, which is the proposed mechanism of action for pulegone-induced urothelial tumors in female rats. It also possesses anxiolytic-like actions that are unrelated to the benzodiazepine site of the GABAA receptor.

体外实验表明，薄荷酮具有细胞毒活性。研究人员已在多种细胞系中研究了其对细胞增殖和毒性的影响。

体内研究表明，薄荷酮可通过细胞毒性及随后的再生细胞增殖机制，诱发雌性大鼠发生尿路上皮肿瘤。此外，它还已知在动物模型中引起肝毒性及其他毒性作用。

可通过细胞活力检测来评估薄荷酮的体外活性。将细胞培养于适宜的培养基中，并用不同浓度的薄荷酮处理。采用MTT或台盼蓝排除法等标准方法测定细胞活力，以确定其细胞毒性作用。

在细胞实验中，研究人员使用包括尿路上皮细胞在内的多种细胞系来研究薄荷酮的细胞毒性和增殖效应。他们用不同浓度的化合物处理细胞，并评估细胞活力、增殖情况以及DNA损伤标志物。

在体内研究中，通常采用口服方式给动物模型（例如大鼠）服用薄荷酮。通过组织病理学检查和毒性生物标志物分析来评估该化合物对尿路上皮、肝脏和其他器官的影响。

代谢/代谢物
(R)-(+)-薄荷酮是一种单萜酮，也是薄荷油的主要成分。摄入高剂量薄荷油会导致严重的毒性反应，甚至死亡。研究表明，薄荷酮的代谢物是造成这种毒性的原因。以往的代谢研究使用了接近致死剂量的药物，以及可能导致某些代谢物降解的分离和分析技术。为了阐明这些问题并进一步探索其代谢途径，本研究向F344大鼠施用了¹⁴C标记的薄荷酮，剂量范围为0.8至80 mg/kg。对收集的尿液进行高效液相色谱(HPLC)分析表明，薄荷酮的代谢广泛而复杂。通过HPLC分离出14种代谢物，并利用核磁共振(NMR)、紫外光谱(UV)和质谱(MS)对其进行了表征。结果表明，薄荷酮主要通过三条途径代谢：1）羟基化生成单羟基薄荷酮，随后进行葡萄糖醛酸化或进一步代谢；2）还原碳碳双键生成薄荷酮/异薄荷酮非对映异构体，随后进行羟基化和葡萄糖醛酸化；3）谷胱甘肽与薄荷酮发生迈克尔加成反应，随后进一步代谢生成8-(N-乙酰半胱氨酸-S-基)薄荷酮/异薄荷酮非对映异构体。该1,4-加成反应不仅在体内发生，而且在体外谷胱甘肽S-转移酶或弱碱的催化下也能发生。此外，还观察到两种硫尿酸的几种羟基化产物。与以往研究不同，本研究中鉴定的主要代谢物（除一种外）均为II相代谢物，且大多数游离代谢物的结构与先前鉴定的I相代谢物不同。薄荷酮是一种单萜，能够保护植物免受捕食者的侵害，同时也是薄荷油（一种传统堕胎药）中的一种肝毒性成分。在大鼠中，薄荷酮显著降低了肝组织和血浆中的谷胱甘肽水平，并且在用亚砜-3-丁酸酯处理的动物中，其毒性显著增强。胡椒基丁醚对细胞色素P-450的抑制作用减弱了薄荷酮的谷胱甘肽耗竭作用。此外，作者在体外未发现谷胱甘肽与未代谢的薄荷酮结合的证据。给予薄荷醇呋喃（一种已知的薄荷酮氧化性和肝毒性代谢物）对血浆和肝脏中的谷胱甘肽水平仅有轻微影响，而亚砜-3-丁酸酯并未增强其毒性。这些结果间接表明，薄荷酮的细胞色素P-450催化生物活化至少通过两条独立的途径进行：1）薄荷酮生成并随后活化为薄荷醇呋喃；2）薄荷酮（而非薄荷醇呋喃）生成活性中间体，这些中间体可通过需要还原型谷胱甘肽的机制进行解毒。(R)-(+)-薄荷酮是薄荷油中的一种单萜成分，是一种肝毒性物质，尽管具有潜在的致命性，但仍在民间医学中用作堕胎药。薄荷酮经人肝细胞色素P-450代谢为薄荷呋喃，后者是薄荷酮的直接肝毒性代谢产物。我们测试了表达的人肝细胞色素P450（CYP1A2、2A6、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4）催化薄荷酮和薄荷呋喃氧化的能力。表达的CYP2E1、CYP1A2和CYP2C19能够将薄荷酮氧化为薄荷呋喃，其Km和Vmax值分别为29 μM和8.4 nmol/min/nmol P-450；CYP1A2分别为94 μM和2.4 nmol/min/nmol P-450；CYP2C19分别为31 μM和1.5 nmol/min/nmol P-450。参与薄荷酮代谢的人肝P-450酶与薄荷酮代谢的P-450酶相同，只是多了CYP2A6。这些P-450酶可以将薄荷呋喃氧化成一种新发现的代谢物2-羟基薄荷呋喃，后者是已知代谢物薄荷内酯和异薄荷呋喃形成过程中的中间体。基于对¹⁸O₂和¹⁸H₂O的研究，2-羟基薄荷呋喃主要来源于呋喃环氧化物形成的二氢二醇。CYP2E1、CYP1A2和CYP2C19氧化薄荷醇的Km和Vmax值如下：CYP2E1：33 μM和0.43 nmol/min/nmol P-450； CYP1A2：57 μM 和 0.29 nmol/min/nmol P-450；CYP2C19：62 μM 和 0.26 nmol/min/nmol P-450。
利用摄入相关代谢 (MICA) 实验，新鉴定出人体内 (S)-(-)-薄荷酮的主要代谢产物为 2-(2-羟基-1-甲基乙基)-5-甲基环己酮（8-羟基薄荷酮，M1）和 3-羟基-3-甲基-6-(1-甲基乙基)环己酮（1-羟基薄荷酮，M2）。基于质谱结合合成和核磁共振实验，鉴定出 3-甲基-6-(1-甲基乙基)环己醇（薄荷醇）和 E-2-(2-羟基-1-甲基亚乙基)-5-甲基环己酮（10-羟基薄荷醇，M4）。次要代谢产物包括3-甲基-6-(1-甲基乙基)-2-环己烯酮（胡椒酮，M5）和α,α,4-三甲基-1-环己烯-1-甲醇（3-对-薄荷烯-8-醇，M6）。薄荷醇呋喃并非薄荷醇的主要代谢产物，很可能是已知（M4）和/或未知前体在后处理过程中产生的假象。(S)-(-)-薄荷醇和(R)-(+)-薄荷醇毒性的差异归因于(R)-(+)-薄荷醇中双键的酶促还原能力显著降低。这可能导致10-羟基薄荷酮（M4）进一步氧化代谢，产生更多未检测到的代谢产物，从而解释在人体中观察到的肝毒性和肺毒性。关于薄荷酮代谢产物（共25种）的更完整数据，请访问HSDB记录页面。
薄荷酮的分子量为152.24 g/mol，分子式为C10H16O。它微溶于水（25℃时溶解度为2.3 g/L）。它是一种澄清的浅黄色油状物，应冷藏于2-8℃保存。

相互作用
腹腔注射薄荷油的主要成分R-(+)-薄荷酮（薄荷酮）可导致ddY小鼠出现广泛的肝损伤，其特征是血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性升高和肝细胞中央小叶坏死。用细胞色素P-450酶抑制剂SKF-525A、美替普酮、胡椒基丁醚和二硫化碳（CS2）治疗小鼠可预防或显著降低薄荷酮的肝毒性。这些结果与薄荷酮的某些代谢产物是导致小鼠肝损伤的原因这一观点相符。摄入薄荷油与严重的肝毒性和死亡相关。其主要成分R-(+)-薄荷酮经肝细胞色素P450代谢为有毒的中间体。本研究旨在评估特异性细胞色素P450抑制剂双硫仑和西咪替丁是否能降低暴露于毒性剂量R-(+)-薄荷酮的小鼠的肝毒性。雌性BALB/c小鼠（20 g）预先腹腔注射150 mg/kg西咪替丁、100 mg/kg双硫仑或二者联合用药。1小时后，小鼠腹腔注射300 mg/kg薄荷酮，24小时后处死。数据采用ANOVA进行分析。事后t检验采用Bonferroni校正。与R-(+)-薄荷酮组相比，双硫仑组和西咪替丁组的血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平有降低的趋势。西咪替丁组、双硫仑-西咪替丁联合用药组和R-(+)-薄荷酮组之间的差异具有统计学意义。双硫仑和西咪替丁预处理能最有效地降低R-(+)-薄荷酮诱导的肝毒性。考虑到预处理动物模型的局限性，西咪替丁和双硫仑联合用药显著降低了薄荷酮的毒性作用，且其效果优于任何一种药物的单独使用。这些数据表明，在肝毒性代谢物的形成过程中，R-(+)-薄荷酮的代谢似乎更多地依赖于CYP1A2而非CYP2E1。谷胱甘肽在薄荷酮的解毒过程中发挥作用。在肝毒性剂量下，薄荷酮会消耗肝脏中的谷胱甘肽；在小鼠中，腹腔注射薄荷酮后，用马来酸二乙酯降低谷胱甘肽水平会增强其毒性。在(R)-(+)-薄荷呋喃中未观察到毒性增加。研究表明，与对乙酰氨基酚类似，谷胱甘肽途径的饱和会导致更高比例的药物被代谢为活性代谢物（例如8-薄荷呋喃醛）。然而，其他研究表明，谷胱甘肽可以与薄荷呋喃环氧化物（8-薄荷呋喃醛的前体）反应。从腹腔注射薄荷酮的大鼠胆汁中分离出谷胱甘肽结合物（包括混合谷胱甘肽葡萄糖醛酸苷）表明，谷胱甘肽结合物可能在细胞色素P450产生的活性代谢物（(R)-(+)-薄荷呋喃或γ-酮烯醛）的解毒过程中发挥重要作用。这些证据表明，动物体内发生的薄荷酮代谢活化过程也发生在人体内，最终生成(R)-(+)-薄荷呋喃。高浓度的(R)-(+)-薄荷呋喃是一种直接的肝毒性产物，但如果薄荷酮代谢物的浓度不足以耗尽肝细胞内的谷胱甘肽，则可能不会观察到肝毒性。以下观察结果证实了细胞色素P450在(R)-(+)-薄荷酮代谢活化中的作用：多种P450抑制剂可降低(R)-(+)-薄荷酮和(R)-(+)-薄荷呋喃的毒性，而苯巴比妥预处理则会增加二者的毒性。因此，氧化作用似乎会增强(R)-(+)-薄荷酮和(R)-(+)-薄荷呋喃的毒性，这与(R)-(+)-薄荷酮经由9-羟基薄荷酮转化为(R)-(+)-薄荷呋喃的事实相符，其中活性8-薄荷酮醛是最终的毒性物质。有证据表明，薄荷酮可以通过自由基机制氧化为9-羟基薄荷酮。这一证据来源于以下观察：用自由基清除剂C-藻蓝蛋白治疗可降低薄荷酮对大鼠的肝毒性。

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非人类毒性值
LD50 大鼠（Wistar，雄性）腹腔注射 819 mg/kg（24 小时）/ 薄荷油 USP /
LD50 大鼠口服 470 mg/kg / R-(+)-薄荷酮 /
LD50 大鼠腹腔注射 150 mg/kg
LD50 犬静脉注射 330 mg/kg
LD50 小鼠皮下注射 1,709 mg/kg
已知薄荷酮具有毒性。它是一种肝毒素，可导致肝损伤。研究表明，它还能通过细胞毒性和再生增殖机制诱发雌性大鼠的尿路上皮肿瘤。由于安全隐患，在某些地区，薄荷酮作为调味剂的使用受到管制。

[1]. Calamintha nepeta (L.) Savi and its Main Essential Oil Constituent Pulegone: Biological Activities and Chemistry. Molecules. 2017 Feb 14;22(2).

[2]. Involvement of nociceptive transient receptor potential channels in repellent action of pulegone. Biochem Pharmacol. 2018 May;151:89-95.

根据加州劳动法，薄荷酮可能具有致癌性。(+)-薄荷酮是 p-薄荷-4(8)-烯-3-酮的 (5R)-对映异构体。据报道，薄荷酮存在于软薄荷 (Minthostachys mollis)、紫苏 (Perilla frutescens) 和其他具有相关数据的生物体中。另见：桦树叶（部分）。作用机制：在大鼠中，腹腔注射薄荷酮 (300 mg) 后 6 小时内出现中枢静脉扩张和肝窦扩张，12 小时后观察到小叶中心坏死。24 小时后的电镜观察显示内质网变性、线粒体肿胀和细胞核改变。研究表明，(R)-(+)-薄荷酮的代谢产物通过修饰辅基血红素或载脂蛋白使细胞色素 P450 失活。在体外，(R)-(+)-薄荷呋喃在人肝微粒体中特异性抑制CYP2A6，并且已分离出与该酶的加合物。CYP1A2、CYP2D6、CYP2E1或CYP3A4未表现出类似的失活作用。(R)-(+)-薄荷酮及其代谢物(R)-(+)-薄荷呋喃均具有肝毒性，腹腔注射后在小鼠体内产生类似的肝毒性作用。这些作用与人类薄荷油中毒后的报道相似。
治疗用途
薄荷油及其代谢物(R)-(+)-薄荷呋喃的治疗适应症主要用于治疗普通感冒和胃肠道不适，据推测，绝大多数此类产品用于自我用药。因此，关于副作用的报道可能不足。
薄荷酮是一种天然单萜，可用作香料和调味剂成分。它存在于多种植物的精油中，包括薄荷和欧芹。由于其毒性，其用途在某些方面受到限制，主要用作研究化合物，用于研究毒性和致癌机制。

C10H16O

152.24

152.12

89-82-7

442495

Colorless to light yellow liquid

0.9±0.1 g/cm3

224.0±0.0 °C at 760 mmHg

< 25 °C

82.2±0.0 °C

0.1±0.4 mmHg at 25°C

1.470

2.56

17.07

0

1

0

11

197

1

C(=C1/CC[C@@H](C)CC/1=O)(/C)\C

NZGWDASTMWDZIW-MRVPVSSYSA-N

InChI=1S/C10H16O/c1-7(2)9-5-4-8(3)6-10(9)11/h8H,4-6H2,1-3H3/t8-/m1/s1

(5R)-5-methyl-2-propan-2-ylidenecyclohexan-1-one

NSC-15334; NSC 15334; Pulegone

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ≥ 270 mg/mL (~1773.63 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (14.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 22.5 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (14.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 22.5 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.25 mg/mL (14.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 22.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。