| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
TRPC3/transient receptor potential canonical channel 3 (IC50 = 700 nM, for TRPC3-mediated Ca2+ influx)
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在 TRPC 家族成员中，Pyr3 直接且选择性地抑制 TRPC3 通道。 Pyr3 的 IC50 值为 700 nM，以剂量依赖性方式抑制 TRPC3 介导的 Ca2+ 内流。在 0.3 μM 时，Pyr3 变得明显，而在 3 μM 时，它几乎消失。有趣的是，共表达 TRPC3 和 TRPC6 的细胞能够使用 Pyr3 抑制 Ca2+ 内流，但共表达 TRPC1 和 TRPC5 的细胞则不能。 Pyr3 抑制 Ang II 诱导的 NFAT 易位，但 Pyr2 的抑制作用较轻微且呈浓度依赖性（Pyr3 的 IC50 值为 0.05 μM，而 Pyr2 的 IC50 值为 2 μM）[1]。
|
| 体内研究 (In Vivo) |
在这项研究中，研究人员在体内检查了压力超负荷诱导的心肌肥大中的Pyr3。重要的是，假手术小鼠的收缩压和舒张压、心率、死亡率、体重以及肝、肺和心脏的重量不受Pyr3（0.1 mg·kg-1·day-1）慢性治疗的影响（图S16A和SI附录中的表S1和S2）。此外，在用赋形剂或Pyr3治疗的小鼠中，横主动脉缩窄（TAC）手术显著增加了左心室收缩末期压（ESP）（SI附录中的表S1和S2），表明这些小鼠同样诱导了压力超负荷。值得注意的是，Pyr3显著减轻了1周TAC手术后心脏大小的增加（SI附录中的图6A和B以及图S16B）。Pyr3效应是指向心性肥大，因为与缩短分数（FS）和不受TAC影响的右心室（SI附录中的图S16 D和E）相比，心脏横断面中段超声心动图中舒张末期心室内径（r）与心室壁厚度（h）的比值显著降低（SI附录图6A和图S16C）。TAC诱导的心钠素（ANP）mRNA表达的增加是心肌肥大的可靠标志物，Pyr3也抑制了这种表达（图6C）。六周TAC手术诱导了扩张性肥大的r/h比值增加（SI附录中的图S16F），FS恶化，左心室重量与胫骨长度比（LVW/TL）升高，与收缩压梯度呈良好相关性。Pyr3抑制了这些症状（图6D和E）。因此，Pyr3对向心性和扩张性心肌肥大具有强效作用[1]。
|
| 酶活实验 |
电生理学。[1]
如前所述，使用EPC-9或Axopatch 200B膜片钳放大器在室温（22-25°C）下对HEK293或HEK293T细胞进行膜片钳技术的全细胞模式。电压钳实验在-50 mV或-60 mV的保持电位下进行，记录以2.0 kHz采样，以2.9 kHz滤波。I-V关系是通过从-100 mV到+100 mV或从-120 mV到+80 mV的50、200或400 ms电压斜坡来确定的。6当用下文所述的移液管溶液填充时，移液管电阻范围为2至6兆欧。串联电阻被电子补偿至>50%。含有的外部溶液（单位：mM）：对于TRPC3和C6，140 NaCl、5 KCl、2 CaCl2、1 MgCl2、10葡萄糖、10 HEPES（用NaOH调节pH 7.4）。对于TRPM4b，110 NaCl、5 CaCl2、10葡萄糖、10 HEPES（用NaOH调节pH 7.4）。移液管溶液含有（单位：mM）：对于mAChR激活的TRPC3电流，95 CsOH、95天冬氨酸、40 CsCl、4 MgCl2、5 EGTA、2 ATPNa2、5 HEPES、8磷酸肌酸（用CsOH调节pH 7.2）。对于OAG诱导的TRPC3电流，130 CsOH、130谷氨酸、3.1 MgCl2、2.8 CaCl2、10 EGTA、2 ATPNa2、0.3 GTPNa2、10 HEPES（用CsOH调节pH 7.2）。对于TRPC6电流，145 CsOH、145天冬氨酸、2 MgCl2、0.3 CaCl2、10 EGTA、10 HEPES（用CsOH调节pH 7.2）。对于TRPM4b电流，110 CsOH、110天冬氨酸、4 MgCl2、8.4 CaCl2、10 EGTA、4 ATPNa2、10 HEPES（用CsOH调节pH 7.4）。将外部溶液的渗透压调节至约300mOSM。对照组（22.7±2.4 pF）和表达TRPC3的Pyr3处理的（21.2±2.5 pF）HEK293细胞的膜电容没有显著差异（P=0.74）。 |
| 细胞实验 |
如所述进行NFAT活性和心肌细胞肥大生长的测量。简而言之，从1-2天大的Sprague-Dawley大鼠中分离出新生大鼠心肌细胞，并在明胶涂层培养皿或层粘连蛋白涂层硅橡胶培养皿上培养。用Fugene 6转染cDNA（pNFAT-Luc、pBNP-Luc和pRL-SV40），在无血清培养基中以100 MOI感染编码NFAT4亚型GFP融合氨基末端区的重组腺病毒。转染48小时后，用Ang II（100nM）或机械拉伸20%刺激细胞。在用Ang II刺激或机械拉伸之前，用Pyr2或Pyr3处理细胞20分钟。洗涤、固定细胞，然后用Alexa Fluor 594 phalloidin染色，以观察肌动蛋白丝。通过[3H]亮氨酸掺入测量蛋白质合成。在用Ang II（100 nM）刺激之前，用Pyr2或Pyr3处理细胞20分钟，然后将[3H]亮氨酸（1 10μCi/ml）加入培养基中并进一步孵育6小时。使用液体闪烁计数器测量掺入的[3H]丙氨酸。使用GraphPad Prism测定IC50值。
|
| 动物实验 |
按照既定方法进行TAC手术、血流动力学测量和组织学分析。简而言之，通过TAC手术诱发压力负荷过重。TAC手术在6周龄雄性C57BL6j小鼠上进行。在TAC手术前3天，将装有聚乙二醇或Pyr3（0.1 mg/kg/天）的微型渗透泵腹腔植入小鼠体内，持续1周。若TAC手术持续6周，则在术后3天给予Pyr3治疗。TAC手术6周后，使用配备7.5 MHz成像探头的ALOKA超声图像分析系统（SSD-5500）进行经胸超声心动图检查。通过将微纳米导管从右侧颈总动脉插入主动脉，再插入左心室，进行血流动力学测量。为了计算压力梯度，使用尾套式检测系统测量远端动脉压。测量心脏重量后，提取总RNA。采用实时RT-PCR定量检测ANP mRNA的表达。小鼠ANP mRNA的引物和探针如下：正向引物，5'-CATCACCCTGGGCTTCTTCCT-3'；反向引物，5'-TGGGCTCCAATCCTGTCAATC-3'；TaqMan®探针，5'-ATTTCAAGAACCTGCTAGACCACCTGGA-3'。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
经典的瞬时受体电位（TRPC）通道控制着Ca²⁺和其他阳离子的内流，这些阳离子在质膜受体与磷脂酶C（PLC）偶联后，可诱导多种细胞过程。开发TRPC亚型特异性抑制剂对于区分在天然系统中发挥特定生理作用的不同TRPC通道至关重要。本文鉴定了一种吡唑化合物（Pyr3），它能选择性地抑制TRPC3通道。吡唑化合物的结构-功能关系研究表明，三氯丙烯酰胺基团对于Pyr3的TRPC3选择性至关重要。电生理和光亲和标记实验揭示了Pyr3对TRPC3蛋白的直接作用。在DT40 B淋巴细胞中，Pyr3能有效抑制Ca²⁺内流依赖的PLC向质膜的转位以及B细胞受体诱导的Ca²⁺反应的后期振荡阶段。此外，Pyr3 可减弱活化 T 细胞核因子（一种 Ca²⁺ 依赖性转录因子）的激活，抑制新生大鼠心肌细胞的肥大生长，并抑制小鼠体内压力超负荷诱导的心脏肥大。这些关于天然 TRPC3 通道重要作用的发现与之前的遗传学研究结果高度一致。因此，TRPC3 选择性抑制剂 Pyr3 是研究 TRPC3 体内功能的有力工具，提示 Pyr3 在治疗 TRPC3 相关疾病（例如心脏肥大）方面具有潜在的药用价值。[1]
背景和目的：吡唑衍生物最近被认为是瞬时受体电位阳离子 (TRPC) 通道的选择性阻断剂，但它们区分 TRPC 和 Orai 孔复合物的能力尚不明确。本研究旨在表征一系列吡唑衍生物的 TRPC/Orai 选择性，并阐明选择性抑制这些通路对肥大细胞活化的影响。实验方法：采用微波辅助合成法制备吡唑类化合物，并通过Fura-2成像检测其对Ca²⁺内流的影响，并通过膜片钳记录检测其对膜电流的影响。实验在过表达TRPC3的HEK293细胞和表达经典Orai通道介导的储存操纵性Ca²⁺内流的RBL-2H3肥大细胞中进行。研究了吡唑类化合物对RBL-2H3细胞Ca²⁺信号传导的抑制作用，包括脱颗粒和活化T细胞核因子（NFAT）活化两个层面。主要结果：Pyr3是一种先前报道的TRPC3选择性抑制剂，它以相似的效力抑制Orai1和TRPC3介导的Ca²⁺内流和电流以及肥大细胞活化。相比之下，Pyr6抑制Orai1介导的Ca²⁺内流的效力比抑制TRPC3介导的Ca²⁺内流的效力高37倍，并且能有效抑制肥大细胞活化。新型吡唑化合物 Pyr10 对 TRPC3 介导的反应表现出显著的选择性（18 倍），并且 Pyr10 对 TRPC3 通道的选择性阻断几乎不影响肥大细胞活化。结论和意义：吡唑衍生物 Pyr6 和 Pyr10 能够区分 TRPC 和 Orai 介导的 Ca²⁺ 内流，可作为分析相关 Ca²⁺ 通道细胞功能的有效工具。https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22862290/ |
| 分子式 |
C16H11CL3F3N3O3
|
|---|---|
| 分子量 |
456.62
|
| 精确质量 |
454.982
|
| 元素分析 |
C, 42.09; H, 2.43; Cl, 23.29; F, 12.48; N, 9.20; O, 10.51
|
| CAS号 |
1160514-60-2
|
| PubChem CID |
56964346
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
4.964
|
| tPSA |
73.22
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
28
|
| 分子复杂度/Complexity |
621
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
RZHGONNSASQOAY-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C16H11Cl3F3N3O3/c1-2-28-15(27)10-7-23-25(12(10)16(20,21)22)9-5-3-8(4-6-9)24-14(26)11(17)13(18)19/h3-7H,2H2,1H3,(H,24,26)
|
| 化学名 |
ethyl 1-[4-(2,3,3-trichloroprop-2-enoylamino)phenyl]-5-(trifluoromethyl)pyrazole-4-carboxylate
|
| 别名 |
Pyr 3; Pyr-3; 1160514-60-2; 1H-Pyrazole-4-carboxylic acid, 1-[4-[(2,3,3-trichloro-1-oxo-2-propen-1-yl)amino]phenyl]-5-(trifluoromethyl)-, ethyl ester; CHEMBL4177187; ethyl 1-(4-(2,3,3-trichloroacrylamido)phenyl)-5-(trifluoromethyl)-1h-pyrazole-4-carboxylate; RZHGONNSASQOAY-UHFFFAOYSA-N; GTPL4293; SCHEMBL12274132; Pyr3
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 125 mg/mL (~273.74 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1900 mL | 10.9500 mL | 21.9000 mL | |
| 5 mM | 0.4380 mL | 2.1900 mL | 4.3800 mL | |
| 10 mM | 0.2190 mL | 1.0950 mL | 2.1900 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|
|
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
