| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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TRPC3/transient receptor potential canonical channel 3 (IC50 = 700 nM, for TRPC3-mediated Ca2+ influx)
Pyr3 specifically targets the transient receptor potential canonical channel 3 (TRPC3). It acts as a selective antagonist at this channel, inhibiting TRPC3-mediated calcium influx. The compound has an IC50 of 0.05 μM for suppressing the activation of the nuclear factor of activated T cells (NFAT) and an IC50 of 0.7 μM for inhibiting TRPC3-mediated Ca2+ influx. It is selective for TRPC3 over other TRPC family members. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在TRPC家族成员中，Pyr3可直接且选择性地抑制TRPC3通道。Pyr3的IC50值为700 nM，其应用以剂量依赖的方式抑制TRPC3介导的Ca2+内流。在0.3 μM浓度下，Pyr3开始发挥作用，而在3 μM浓度下，其抑制作用几乎完全消失。值得注意的是，共表达TRPC3和TRPC6的细胞能够被Pyr3抑制Ca2+内流，而共表达TRPC1和TRPC5的细胞则不能。Pyr3抑制Ang II诱导的NFAT易位，而Pyr2的抑制作用较弱且呈浓度依赖性（Pyr3的IC50值为0.05 μM，而Pyr2的IC50值为2 μM）[1]。体外实验表明，Pyr3以剂量依赖的方式抑制TRPC3介导的Ca2+内流。该化合物对该效应的IC50值为700 nM。在浓度约为3 µM时，它几乎完全阻断了通道活性。在共表达TRPC3和TRPC6的细胞中，Pyr3抑制Ca2+内流，但在共表达TRPC1和TRPC5的细胞中则无此作用，这表明其具有选择性。它还能抑制NFAT的激活。
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| 体内研究 (In Vivo) |
本研究探讨了Pyr3在体内压力超负荷诱导的心脏肥大中的作用。重要的是，在假手术小鼠中，长期给予Pyr3（0.1 mg·kg⁻¹·day⁻¹）治疗并未影响收缩压、舒张压、心率、死亡率、体重以及肝脏、肺脏和心脏的重量（见补充信息图S16A和表S1、S2）。此外，横向主动脉缩窄术（TAC）显著增加了接受载体或Pyr3治疗的小鼠的左心室收缩末期压力（ESP）（见补充信息表S1、S2），表明这些小鼠均被诱导了压力超负荷。值得注意的是，Pyr3显著减轻了TAC手术1周后心脏体积的增大（见补充信息图6A和B以及图S16B）。 Pyr3效应指的是向心性肥厚，因为在心脏中部横切面的超声心动图检查中，舒张末期心室内半径（r）与心室壁厚度（h）的比值显著降低（图6A和SI附录图S16C），而射血分数（FS）和右心室不受TAC影响（SI附录图S16D和E）。TAC诱导的心房利钠肽（ANP）mRNA表达增加（ANP是心脏肥厚的可靠标志物）也被Pyr3抑制（图6C）。六周的TAC手术导致r/h比值增加，这是扩张型肥厚的特征（SI附录图S16F），同时左心室射血分数（FS）下降，左心室重量与胫骨长度比值（LVW/TL）升高，且与收缩压梯度呈良好相关性。这些症状可被 Pyr3 抑制（图 6 D 和 E）。因此，Pyr3 对向心性肥大和扩张性心肌肥大均有显著疗效[1]。
在体内，Pyr3 已被用于研究 TRPC3 在各种生理和病理过程中的作用。作为一种 TRPC3 拮抗剂，它可用于研究该通道在心血管和神经系统疾病等动物模型中的功能。然而，现有文献中并未详细描述 Pyr3 的具体体内数据，例如其在特定疾病模型中的疗效。但其作为研究工具的应用表明，它已被应用于此类研究中。 |
| 酶活实验 |
电生理学。[1]
在室温（22–25°C）下，使用EPC-9或Axopatch 200B膜片钳放大器，对HEK293或HEK293T细胞进行全细胞膜片钳记录，具体方法如前所述。电压钳实验的钳制电位为-50 mV或-60 mV，采样频率为2.0 kHz，滤波频率为2.9 kHz。采用50 ms、200 ms或400 ms的电压斜坡（从-100 mV到+100 mV或从-120 mV到+80 mV）测定I-V关系。6 当使用下文所述的移液管溶液填充时，移液管电阻为2至6兆欧姆。串联电阻通过电子补偿补偿至>50%。外液成分（单位：mM）：TRPC3 和 C6 为：140 NaCl、5 KCl、2 CaCl2、1 MgCl2、10 葡萄糖、10 HEPES（用 NaOH 调节 pH 至 7.4）。TRPM4b 为：110 NaCl、5 CaCl2、10 葡萄糖、10 HEPES（用 NaOH 调节 pH 至 7.4）。移液管内液成分（单位：mM）：mAChR 激活的 TRPC3 电流为：95 CsOH、95 天冬氨酸、40 CsCl、4 MgCl2、5 EGTA、2 ATPNa2、5 HEPES、8 磷酸肌酸（用 CsOH 调节 pH 至 7.2）。对于 OAG 诱导的 TRPC3 电流，外液成分为：130 mOsm CsOH、130 mOsm 谷氨酸、3.1 mOsm MgCl₂、2.8 mOsm CaCl₂、10 mOsm EGTA、2 mOsm ATPNa₂、0.3 mOsm GTPNa₂ 和 10 mOsm HEPES（用 CsOH 调节 pH 至 7.2）。对于 TRPC6 电流，外液成分为：145 mOsm CsOH、145 mOsm 天冬氨酸、2 mOsm MgCl₂、0.3 mOsm CaCl₂、10 mOsm EGTA 和 10 mOsm HEPES（用 CsOH 调节 pH 至 7.2）。对于 TRPM4b 电流，外液成分为：110 mOsm CsOH、110 mOsm 天冬氨酸、4 mOsm MgCl₂、8.4 mOsm CaCl₂、10 mOsm EGTA、4 mOsm ATPNa₂ 和 10 mOsm HEPES（用 CsOH 调节 pH 至 7.4）。所有外液的渗透压均调节至约 300 mOsm。在表达TRPC3的HEK293细胞中，对照组（22.7 ± 2.4 pF）和Pyr3处理组（21.2 ± 2.5 pF）的膜电容未观察到显著差异（P = 0.74）。 由于Pyr3是一种离子通道阻滞剂，其功能依赖于通道位于细胞膜上，因此无细胞检测并非表征其活性的主要方法。然而，如果存在合适的放射性标记配体，则可以使用放射性配体结合实验来研究其与TRPC3的结合亲和力。或者，也可以在电生理研究中使用分离的膜片钳技术在无细胞系统中测量其作用。 |
| 细胞实验 |
按照既定方法测定NFAT活性和心肌细胞肥大生长情况。简而言之，从1-2日龄Sprague-Dawley大鼠中分离出新生大鼠心肌细胞，并在明胶包被的培养皿或层粘连蛋白包被的硅橡胶培养皿上进行培养。使用Fugene 6转染试剂将cDNA（pNFAT-Luc、pBNP-Luc和pRL-SV40）转染至细胞中，并在无血清培养基中以100 MOI感染编码GFP融合的NFAT4亚型氨基末端区域的重组腺病毒。转染48小时后，用Ang II（100 nM）刺激细胞或施加20%的机械牵拉。在用Ang II或机械牵拉刺激细胞前20分钟，用Pyr2或Pyr3处理细胞。细胞经洗涤、固定后，用 Alexa Fluor 594-鬼笔环肽染色以显示肌动蛋白丝。蛋白质合成通过 [³H]亮氨酸掺入法测定。在用 Ang II (100 nM) 刺激前 20 分钟，用 Pyr2 或 Pyr3 处理细胞，然后向培养基中加入 [³H]亮氨酸 (110 μCi/ml) 并继续孵育 6 小时。使用液体闪烁计数器测定掺入的 [³H]亮氨酸。IC50 值使用 GraphPad Prism 计算。进行基于细胞的体外 Pyr3 检测，以测量其对 TRPC3 介导的钙离子内流的抑制作用。一种常用的方法是使用表达 TRPC3 和钙敏感荧光染料（例如 Fura-2 或 Fluo-4）的细胞。将染料加载到细胞中，并随时间测量荧光强度。随后用TRPC3激动剂（例如二酰甘油类似物）刺激细胞以诱导钙离子内流，并记录荧光强度的增加。之后用不同浓度的Pyr3处理细胞，并测量钙信号的抑制情况。根据剂量反应曲线计算抑制的IC50值。
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| 动物实验 |
按照既定方法进行TAC手术、血流动力学测量和组织学分析。简而言之，通过TAC手术诱发压力负荷过重。TAC手术在6周龄雄性C57BL6j小鼠上进行。在TAC手术前3天，将装有聚乙二醇或Pyr3（0.1 mg/kg/天）的微型渗透泵腹腔植入小鼠体内，持续1周。若TAC手术持续6周，则在术后3天给予Pyr3治疗。TAC手术6周后，使用配备7.5 MHz成像探头的ALOKA超声图像分析系统（SSD-5500）进行经胸超声心动图检查。通过将微纳米导管从右侧颈总动脉插入主动脉，再插入左心室，进行血流动力学测量。为了计算压力梯度，使用尾套式检测系统测量远端动脉压。测量心脏重量后，提取总RNA。采用实时RT-PCR定量检测ANP mRNA的表达。小鼠ANP mRNA的引物和探针如下：正向引物，5'-CATCACCCTGGGCTTCTTCCT-3'；反向引物，5'-TGGGCTCCAATCCTGTCAATC-3'；TaqMan®探针，5'-ATTTCAAGAACCTGCTAGACCACCTGGA-3'。
Pyr3的体内动物实验旨在研究TRPC3在疾病中的作用。例如，在心脏肥大模型（一种心脏病动物模型）中，可以给予该化合物，并评估其对肥大进展和心脏功能的影响。在神经系统疾病模型中，可以评估其对神经元功能或行为的影响。现有文献中没有关于Pyr3的具体实验方案，因此其应用仅限于研究。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
目前文献中未提供Pyr3的药代动力学(PK)数据。其生物利用度、半衰期和组织分布等特性对于将其用作体内研究工具至关重要。该化合物通常以粉末形式储存。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
公开文献中没有关于Pyr3的毒理学数据。作为一种阻断钙通道的研究化合物，其安全性至关重要。然而，目前尚无关于其LD50、器官毒性或遗传毒性的具体数据报道。Pyr3仅供研究用途，不用于人类治疗。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
经典的瞬时受体电位（TRPC）通道控制着Ca²⁺和其他阳离子的内流，这些阳离子与磷脂酶C（PLC）偶联至质膜受体后，可诱导多种细胞过程。开发TRPC亚型特异性抑制剂对于区分在天然系统中发挥特定生理作用的不同TRPC通道至关重要。本文鉴定了一种选择性抑制TRPC3通道的吡唑化合物（Pyr3）。对该吡唑化合物的结构-功能研究表明，三氯丙烯酰胺基团对于Pyr3的TRPC3选择性至关重要。电生理和光亲和标记实验揭示了Pyr3对TRPC3蛋白的直接作用。在DT40 B淋巴细胞中，Pyr3有效抑制了Ca²⁺内流依赖的PLC向质膜的转位以及B细胞受体诱导的Ca²⁺反应的后期振荡阶段。此外，Pyr3 可以减弱活化 T 细胞核因子（一种 Ca²⁺ 依赖性转录因子）的激活，抑制新生大鼠心肌细胞的肥大生长，并抑制小鼠应激超负荷诱导的心脏肥大。这些关于天然 TRPC3 通道重要作用的发现与之前的遗传学研究高度一致。因此，Pyr3 作为一种 TRPC3 选择性抑制剂，是研究 TRPC3 体内功能的有力工具，提示 Pyr3 在治疗 TRPC3 相关疾病（如心脏肥大）方面具有潜在的药用价值。[1]
背景与目的：吡唑衍生物最近被发现是瞬时受体电位阳离子 (TRPC) 通道的选择性阻滞剂，但它们区分 TRPC 和 Orai 孔复合物的能力尚不清楚。本研究旨在表征一系列吡唑衍生物的 TRPC/Orai 选择性，并阐明选择性抑制这些通路对肥大细胞活化的影响。实验方法：采用微波辅助合成法制备吡唑类化合物，并通过Fura-2成像检测其对Ca²⁺内流的影响，并通过膜片钳记录检测其对膜电流的影响。实验在过表达TRPC3的HEK293细胞和表达经典Orai通道介导的储存操作型Ca²⁺内流的RBL-2H3肥大细胞中进行。研究了吡唑类化合物对RBL-2H3细胞Ca²⁺信号传导的抑制作用，包括脱颗粒和核因子T（NFAT）的激活。主要结果：Pyr3是一种先前报道的TRPC3选择性抑制剂，它以相似的效力抑制Orai1和TRPC3介导的Ca²⁺内流和电流，以及肥大细胞活化。相比之下，Pyr6抑制Orai1介导的Ca²⁺内流的效力是抑制TRPC3介导的Ca²⁺内流的37倍，并且能有效抑制肥大细胞活化。新型吡唑化合物Pyr10对TRPC3介导的反应表现出显著的选择性（18倍），Pyr10对TRPC3通道的选择性阻断几乎不影响肥大细胞活化。结论和意义：吡唑衍生物Pyr6和Pyr10能够区分TRPC和Orai介导的Ca²⁺内流，是分析相关Ca²⁺通道细胞功能的有效工具。Pyr3是一种研究级化合物，可用作研究TRPC3通道功能的选择性工具。该试剂对TRPC3相对于其他TRPC家族成员具有高度选择性，因此对于解析TRPC3在钙信号传导和细胞生理学中的具体作用具有极高的价值。它尤其适用于研究TRPC3在心血管系统和神经系统中的作用。该试剂尚未获准用于临床。所有信息仅供研究参考，不得用于诊断或临床用途。 |
| 分子式 |
C16H11CL3F3N3O3
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|---|---|
| 分子量 |
456.62
|
| 精确质量 |
454.982
|
| 元素分析 |
C, 42.09; H, 2.43; Cl, 23.29; F, 12.48; N, 9.20; O, 10.51
|
| CAS号 |
1160514-60-2
|
| PubChem CID |
56964346
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| LogP |
4.964
|
| tPSA |
73.22
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
28
|
| 分子复杂度/Complexity |
621
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
RZHGONNSASQOAY-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C16H11Cl3F3N3O3/c1-2-28-15(27)10-7-23-25(12(10)16(20,21)22)9-5-3-8(4-6-9)24-14(26)11(17)13(18)19/h3-7H,2H2,1H3,(H,24,26)
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| 化学名 |
ethyl 1-[4-(2,3,3-trichloroprop-2-enoylamino)phenyl]-5-(trifluoromethyl)pyrazole-4-carboxylate
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| 别名 |
Pyr 3; Pyr-3; 1160514-60-2; 1H-Pyrazole-4-carboxylic acid, 1-[4-[(2,3,3-trichloro-1-oxo-2-propen-1-yl)amino]phenyl]-5-(trifluoromethyl)-, ethyl ester; CHEMBL4177187; ethyl 1-(4-(2,3,3-trichloroacrylamido)phenyl)-5-(trifluoromethyl)-1h-pyrazole-4-carboxylate; RZHGONNSASQOAY-UHFFFAOYSA-N; GTPL4293; SCHEMBL12274132; Pyr3
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 125 mg/mL (~273.74 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1900 mL | 10.9500 mL | 21.9000 mL | |
| 5 mM | 0.4380 mL | 2.1900 mL | 4.3800 mL | |
| 10 mM | 0.2190 mL | 1.0950 mL | 2.1900 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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