Quercitrin   中文名称: 槲皮苷

Natural flavonoid

槲皮素（5-50 μM；24-72 小时）通过抑制结直肠癌细胞的生长逐渐提高其毒性[1]。在 DLD-1 细胞中，槲皮素（5-50 μM；24-72 小时）和槲皮素（50 μM；48-72 小时）会引起细胞炎症和线粒体膜电位破坏。外叶从内叶接收磷脂丝氨酸 (PS) 的易位 [1]。

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槲皮素作为含量最丰富的生物类黄酮化合物，主要以糖苷形式（即槲皮苷）存在。尽管多项研究表明槲皮苷具有强效抗氧化作用，但其具体作用机制尚未完全阐明。本研究探讨了槲皮苷对DLD-1结肠癌细胞株是否具有凋亡和抗增殖作用。通过WST-1细胞增殖实验、乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测、核小体富集因子测定、caspase-3活性变化、线粒体膜电位（MMP）丧失以及质膜磷脂酰丝氨酸（PS）外翻等指标，我们系统评估了槲皮苷随时间/剂量变化的抗增殖与促凋亡效应。实验数据显示：槲皮苷能显著增强caspase-3活性、诱发MMP去极化、提高凋亡细胞比例，且这些效应均呈现时间与剂量依赖性。研究结果证实槲皮苷对结肠癌细胞具有抗增殖和促凋亡作用。结合体内分析数据，槲皮苷活性有望成为早期结直肠癌的生物标志物候选[1]。

槲皮素（50 和 100 mg/kg；灌胃一次）通过抑制四氯化碳诱导的氧化中间体和活化，对小鼠脑损伤显示出有效的保护作用 [2]。

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槲皮苷是蔬菜和水果中主要存在的黄酮类化合物之一。本研究旨在评估槲皮苷对四氯化碳（CCl₄）诱导的脑损伤的保护作用，并进一步阐明其潜在机制。实验采用ICR小鼠，通过腹腔注射CCl₄（同时联合或不联合槲皮苷给药）持续4周。数据显示：槲皮苷能显著抑制小鼠脑内活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）水平的升高，降低组织纤溶酶原激活剂（t-PA）活性，增强抗氧化酶活性，并阻断细胞色素P450 2E1（CYP2E1）的诱导。槲皮苷还可通过抑制单胺氧化酶（MAO）、乙酰胆碱酯酶（AChE）及N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基（NR2B）的活性，预防CCl₄引发的脑功能紊乱。此外，蛋白质印迹分析表明，槲皮苷能抑制肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）等促炎细胞因子的释放。综上，本研究表明槲皮苷或可作为一种神经保护剂的潜在候选分子[2]。

生化分析[2]
如前所述，基于2′7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯氧化为2′7〃-二氯荧光素，测量ROS。ROS的形成由DCF标准曲线定量，数据表示为每分钟每毫克蛋白质形成的pmol DCF。使用商业试剂盒测定海马匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、单胺氧化酶（MAO）和乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性。 根据制造商的说明，通过硫代巴比妥酸反应物质（TBARS）测定法测量海马匀浆中的丙二醛（MDA）浓度，并在532nm波长下测量吸光度。

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功能活性t-PA活性测定[2]
根据制造商的说明，使用活性t-PA ELISA试剂盒测定功能活性t-PA。显色量与样品中活性t-PA的浓度成正比。

细胞增殖测定 [1]
细胞类型： DLD-1 结肠癌细胞系
测试浓度： 5、10、25 和 50 μM
孵育持续时间：24、48和72小时
实验结果：结直肠癌细胞增殖以时间和剂量依赖性方式减弱。

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细胞凋亡分析 [1]
细胞类型： DLD-1 结肠癌细胞系
测试浓度： 50 μM
孵育持续时间：48和72小时
实验结果：诱导细胞凋亡，并且 caspase-3 酶活性在时间和剂量上增加依赖方式。

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细胞生长和细胞毒性的测量[1]
为了检测槲皮苷对处理后细胞存活率的影响，进行了WST-1细胞增殖试验。WST-1转化测定基于完整细胞的线粒体功能，使其能够将稳定的四唑盐WST-1（4-[3-（4-碘苯基）-2-（4-硝基苯基）-2H-5-四唑基]-1,3-苯二磺酸盐）代谢为可溶性紫色甲酰胺产物。将1x104个细胞/孔接种到含有100μl生长培养基的96孔板中，在不存在或存在浓度逐渐增加的槲皮苷的情况下，然后在37°C的5%CO2中孵育24、48和72小时。孵育期结束后，用10μl WST-1处理细胞4小时。使用Multiscan ELISA读数器在450 nm处测量染料积累。通过从含有WST-1底物的平均值中减去不含WST-1的平均值来计算存活率，并表示为对照的百分比。数据得到了其他三个独立实验的证实。用“CytoTox 96R非放射性细胞毒性试验”试剂盒比色测定槲皮苷的细胞毒性作用，以剂量和时间依赖的方式。按照WST-1测定所述进行细胞处理以准备细胞毒性试验。然后将培养基（10μl）转移到96孔微量滴定板上。通过加入50μl新鲜底物混合物，在室温下黑暗中孵育30分钟，然后加入50μl终止溶液，并用酶标仪在490 nm处测量光密度（OD）来测定乳酸脱氢酶（LDH）的水平。通过减去相应化学×浓度培养基的OD值来校正490 nm处化学物质的自然颜色，该培养基以与细胞相同的方式处理和测量三次。数据得到了其他三个独立实验的证实。

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凋亡核小体和坏死DNA释放的检测[1]
细胞死亡检测Elisa plus（CDDE）试剂盒是一种光度酶免疫测定法，用于确定处理细胞上清液中与凋亡相关的坏死和细胞质组蛋白相关DNA片段（单核小体和寡核小体）的DNA质量和数量。根据制造商的说明进行应用，可同时检测同一孔中的细胞凋亡和坏死。样品的颜色发展是通过细胞质或细胞上清液中分别指示凋亡或坏死的DNA片段量的富集因子来确定的，并且相对于未处理的细胞表达。为了研究对测定的可能干扰，将颗粒添加到细胞中，其浓度比上述实验中使用的最终浓度（160μg/cm2）高两倍。随后，按照CDDE试剂盒方案对样品进行离心（10分钟，200克）。然后使用试剂盒中包含的裂解缓冲液，将上清液与50μm槲皮苷处理的细胞裂解液1:1混合48和72小时，并根据制造商的说明进行分析。

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线粒体膜电位变化的测定[1]
我们还使用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒检测了DLD1和MRC5细胞在槲皮苷处理48小时后MMP的损失，MMP是凋亡的另一个重要标志。该试剂盒使用JC-1，一种独特的阳离子染料，来发出MMP损失的信号。JC-1在线粒体中积累，在非凋亡细胞中呈红色，而在凋亡细胞中，MMP崩溃，因此JC-1作为单体留在细胞质中，在荧光下呈绿色。诱导细胞（5×105个细胞/2 mL）凋亡，以1000 rpm离心10分钟收集。去除上清液，用200μl培养基均质化颗粒，并在细胞上加入20μl JC-1染料；然后，将细胞在37°C的5%CO2中孵育30分钟。然后，将它们在400 g下离心5分钟，去除上清液，并将200μl的测定缓冲液加入到颗粒中并涡旋。然后，再次重复此步骤。然后，将所有颗粒用320μl测定缓冲液重新悬浮，并将每个颗粒中的100μl加入96孔板中，一式三份。在健康细胞中，红色形式的聚集体具有560/595nm的吸收/发射最大值，而在凋亡细胞中，单体绿色形式的吸收/辐射最大值为485/535nm。使用荧光Elisa阅读器在这些波长下读取平板。计算绿色/红色（485/560）值以确定MMP的变化。

动物/疾病模型：雄性ICR小鼠四氯化碳(CCl4)诱导脑损伤[2]
剂量：50和100 mg/kg
给药途径：灌胃(po)；50和100 mg/kg，单次给药
实验结果：剂量依赖性地显著降低海马匀浆中活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的浓度，并剂量依赖性地降低脑组织中CYP2E1的水平。增加超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性。抑制小鼠脑组织中N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)的水平以及单胺氧化酶(MAO)和乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性。

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雄性ICR小鼠（20–25 g）饲养于动物房内，温度为20–22 °C，相对湿度为40–60%，光照/黑暗周期为12/12小时。适应环境1周后，将40只小鼠随机分为4组。通过腹腔注射（ip）每公斤体重2 ml四氯化碳（CCl4）橄榄油溶液（1:1，v/v），每周两次，持续4周，诱导脑损伤。¹³第1组小鼠每周两次注射花生油（溶剂对照），并通过灌胃给予含0.5%羧甲基纤维素钠的水；第2组小鼠注射四氯化碳，并通过灌胃给予含0.5%羧甲基纤维素钠的水；第 3 组和第 4 组小鼠与第 2 组小鼠一样，注射了 CCl4，并分别通过灌胃法给予槲皮苷（每日 50 和 100 mg/kg 体重，悬浮于 0.5% 羧甲基纤维素钠溶液中）。槲皮苷剂量的选择基于之前的研究结果。[2]

代谢/代谢产物
在曲霉属中产生槲皮素；Westlake DWS，《加拿大微生物学杂志》9: 211 (1963)；在多孔菌属中可能产生槲皮苷醌；Pickard MA & Westlake DWS，《加拿大生物化学杂志》48: 1351 (1970)。/摘自表格/
槲皮苷已知的人体代谢产物包括L-鼠李糖、槲皮素和α-L-鼠李糖。

5280459 小鼠腹腔注射LD50为200 mg/kg，美国国家技术信息服务中心，AD277-689
5280459 兔静脉注射LD50 >150 mg/kg，《美国药学会杂志》（科学版），41(119)，1952

[1]. Apoptotic Effects of Quercitrin on DLD-1 Colon Cancer Cell Line. Pathol Oncol Res. 2015 Apr;21(2):333-8.

[2]. Quercitrin offers protection against brain injury in mice by inhibiting oxidative stress and inflammation. Food Funct. 2016 Jan;7(1):549-56.

槲皮苷是一种槲皮素O-糖苷，由槲皮素在3位通过糖苷键与α-L-鼠李糖基部分连接而成。它具有抗氧化、抗利什曼原虫、抑制羰基还原酶（NADPH）活性（EC 1.1.1.184）、抑制醛还原酶活性（EC 1.1.1.21）、抑制酪氨酸酶活性（EC 1.14.18.1）以及作为植物代谢产物的作用。它是一种单糖衍生物、四羟基黄酮、α-L-鼠李糖苷和槲皮素O-糖苷。它是槲皮苷-7-醇盐的共轭酸。
据报道，槲皮苷存在于蓼属植物（Persicaria muricata）、茶树（Camellia sinensis）以及其他有相关数据的生物体中。

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综上所述，所有数据均表明槲皮苷对结肠癌细胞具有抗增殖和促凋亡作用。基于上述结果，槲皮苷似乎能激活DLD1细胞中特定的细胞内死亡相关通路，导致线粒体膜电位丧失并诱导细胞凋亡。我们的研究结果提示槲皮苷可能用于治疗人类结肠癌[1]。

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总之，这是首次报道槲皮苷对四氯化碳（CCl4）引起的脑损伤具有保护作用。其主要机制可能是减轻脑氧化应激、抑制炎症反应以及改善神经递质功能障碍（图8）。槲皮苷降低了CCl4暴露小鼠脑组织中活性氧（ROS）、细胞色素P450 2E1（CYP2E1）、丙二醛（MDA）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA）、核受体2B（NR2B）、乙酰胆碱酯酶（AChE）和单胺氧化酶（MAO）的活性，并提高了抗氧化酶的活性。槲皮苷还能抑制炎症刺激引发的关键促炎细胞因子的水平。总的来说，尽管槲皮苷对四氯化碳诱导的脑损伤有积极作用，但仍需要更深入的机制研究来支持这些有益作用。[2]

C21H20O11

448.38

448.1

C, 56.25; H, 4.50; O, 39.25

522-12-3

5280459

Light yellow to yellow solid powder

1.8±0.1 g/cm3

814.0±65.0 °C at 760 mmHg

174-183ºC

288.3±27.8 °C

0.0±3.1 mmHg at 25°C

1.776

2.17

190.28

7

11

3

32

741

5

C[C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]([C@@H](O1)OC2=C(OC3=CC(=CC(=C3C2=O)O)O)C4=CC(=C(C=C4)O)O)O)O)O

OXGUCUVFOIWWQJ-HQBVPOQASA-N

InChI=1S/C21H20O11/c1-7-15(26)17(28)18(29)21(30-7)32-20-16(27)14-12(25)5-9(22)6-13(14)31-19(20)8-2-3-10(23)11(24)4-8/h2-7,15,17-18,21-26,28-29H,1H3/t7-,15-,17+,18+,21-/m0/s1

2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxy-3-[(2S,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxychromen-4-one

Thujin; 522-12-3; Quercetin 3-rhamnoside; Quercitroside; Quercetrin; Quercimelin; Thujin; Quercetin 3-L-rhamnoside; Quercitrin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~125 mg/mL (~278.78 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.58 mg/mL (5.75 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。