Flt3 (Kd = 1.6±0.7 nM)
Quizartinib HCl (AC-220; AC-010220) is a potent and selective inhibitor of the Fms-like tyrosine kinase 3 (FLT3) receptor tyrosine kinase (Biochemical binding Kd for FLT3: 1.6 ± 0.7 nM). It also shows affinity for closely related receptor tyrosine kinases including KIT, PDGFRα, PDGFRβ, RET, and CSF1R, with binding constants (Kd) within 10-fold of that for FLT3. Additionally, it binds to FLT1, FLT4, DDR1, and VEGFR2 with Kd within 100-fold of FLT3, as determined by a KinomeScan panel of 402 kinase assays. [1]

体外活性：AC220 是一种独特、有效、选择性的 FLT3 抑制剂，对 FLT3 具有高亲和力，Kd 值为 1.6 nM。 AC220 抑制人白血病细胞系 MV4-11 中 FLT3 的自磷酸化，MV4-11 具有纯合 FLT3-ITD 突变且依赖于 FLT3，而 RS4;11 则表达野生型 FLT3，IC50 值分别为 1.1 nM 和 4.2 nM。 AC220 是最有效的细胞 FLT3-ITD 抑制剂，与 IC50 值范围为 0.87 nM 至 64 nM 的所有其他 FLT3 抑制剂相比，对 MV4-11 细胞增殖具有最显着的抑制作用，IC50 为 0.56 nM。 AC220 对 A375 细胞的增殖没有抑制活性，该细胞在 BRAF 中具有激活突变，并且不依赖于 FLT3，这表明 FLT3 抑制和一般细胞毒性作用之间存在很大的窗口。激酶测定：为了测量 FLT3 自磷酸化的抑制，将 MV4-11 或 RS4;11 细胞在低血清培养基 (0.5% FBS) 中培养过夜，并于第二天以每孔 400 000 个细胞的密度接种到 96 孔板中。将细胞与不同浓度的 AC220 在 37°C 下孵育 2 小时。为了在 RS4;11 细胞中诱导 FLT3 自磷酸化，在 AC220 孵育 2 小时后添加 100 ng/mL FLT3 配体 15 分钟。制备细胞裂解物并在预涂有总 FLT3 捕获抗体的 96 孔板中孵育。将包被板与抗 FLT3 的生物素化抗体一起孵育以检测总 FLT3，或与抗磷酸酪氨酸的抗体一起孵育以检测 FLT3 自磷酸化。在这两种情况下，SULFO 标记的链霉亲和素二抗用于在 Meso Scale Discovery 平台上进行电化学发光检测。 AC220抑制FLT3-ITD或TLT3-WT自磷酸化50%的浓度代表IC50值。细胞测定：细胞（MV4-11 和 RS4;11 细胞）在低血清培养基（0.5% FBS）中培养过夜，以每孔 40 000 个细胞接种到 96 孔板中，并在 37° 下暴露于 AC220 72 小时C。使用 Cell Titer-Blue Cell Viability Assay 测量细胞活力。

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在生化结合实验中，Quizartinib 与FLT3结合的Kd为1.6 ± 0.7 nM。[1]
在采用FLT3-ITD突变的人白血病细胞系MV4-11的细胞实验中，Quizartinib 抑制FLT3自身磷酸化的IC50为1.1 ± 0.1 nM，抑制细胞增殖的IC50为0.56 ± 0.3 nM。[1]
在表达野生型FLT3的细胞系RS4;11中（用FLT3配体刺激），Quizartinib 抑制FLT3自身磷酸化的IC50为4.2 ± 0.3 nM。[1]
Quizartinib 在浓度高达10,000 nM时，对A375细胞（BRAF突变，不依赖FLT3）的增殖没有显著抑制作用，表明其选择性和缺乏一般细胞毒性。[1]
在从FLT3-ITD突变患者分离的原代AML原始细胞中，Quizartinib 抑制FLT3磷酸化的IC50约为2 nM，并在来自五位不同患者的样本中将细胞活力降低，IC50范围在0.3 nM至2 nM之间。[1]

在 FLT3-ITD 依赖性 MV4-11 肿瘤异种移植小鼠模型中，口服 AC220（10 mg/kg）可诱导 FLT3 自磷酸化的时间依赖性抑制； 2小时时抑制率为90%，24小时时抑制率为40%。 AC220 每天口服一次，剂量低至 1 mg/kg，可显着延长 FLT3-ITD AML 小鼠模型的生存期。使用 10 mg/kg AC220 治疗 28 天，所有小鼠的肿瘤均快速完全消退，并且在治疗后 60 天期间没有肿瘤再生长。与舒尼替尼治疗相比，AC220 显示出更显着的疗效，舒尼替尼治疗使除一只小鼠外的所有小鼠的肿瘤缓慢缩小并在停止治疗后立即恢复生长。

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在皮下MV4-11（FLT3-ITD）异种移植小鼠模型中，单次口服给予Quizartinib（10 mg/kg）在给药后2小时抑制肿瘤中FLT3自身磷酸化达90%，24小时后抑制达40%。[1]
在同一皮下MV4-11异种移植模型中，口服给予Quizartinib（10 mg/kg，每日一次，持续28天）导致所有治疗小鼠的肿瘤迅速完全消退，在为期60天的治疗后观察期内未观察到肿瘤再生。[1]
在FLT3-ITD AML（MV4-11细胞）的小鼠骨髓移植模型中，每日一次口服Quizartinib治疗30天能剂量依赖性地延长生存期。在10 mg/kg剂量下，80%的动物存活至研究终

生化激酶结合试验[1]
KinomeScan激酶结合测定如前所述进行。对于FLT3测定，我们使用了仅跨越催化结构域的激酶构建体（NP_004110.2中的氨基酸592至969）。该构建体不包括膜旁结构域，旨在测量开放FLT3活性位点对抑制剂的内在结合亲和力。

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使用KinomeScan实验测定生化激酶结合亲和力（Kd）。使用了包含FLT3催化结构域（氨基酸592-969）的重组蛋白。化合物针对一组402种人激酶实验进行筛选。在初筛中，化合物以10 µM的单一浓度进行测试。对于初筛中确定为阳性（hit）的激酶，测定其解离常数（Kd）。对于Quizartinib，也对初筛中未确定为阳性的所有激酶测量了Kd，以确保没有遗漏靶点。该实验测量测试化合物置换固定化的、活性位点导向配体的能力。[1]

细胞检测[1]
MV4-11和RS4；分别在含有10%胎牛血清（FBS）的Iscove培养基和含有10%FBS的RPMI中培养11个细胞。对于增殖试验，细胞在低血清培养基（0.5%FBS）中培养过夜，然后以每孔40000个细胞的速度接种在96孔板上。向细胞中加入抑制剂，并在37°C下孵育72小时。使用Promega的Cell Titer Blue细胞活力测定法测量细胞活力。为了测量FLT3自磷酸化的抑制作用，将细胞在低血清培养基（0.5%FBS）中培养过夜，并在第二天以每孔400000个细胞的密度接种在96孔板上。将细胞与抑制剂在37°C下孵育2小时。诱导RS4中FLT3自磷酸化；在化合物孵育2小时后加入100ng/mL FLT3配体15分钟。制备细胞裂解物，并在预涂有总FLT3捕获抗体的96孔板中孵育。将涂覆的板与抗FLT3的生物素化抗体一起孵育以检测总FLT3，或与抗磷酸酪氨酸的抗体一起孵育来检测FLT3自磷酸化。在这两种情况下，在Meso Scale Discovery平台上使用SULFO标记的链霉抗生物素二抗进行电化学发光检测。

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原代细胞分析1]
白血病细胞标本由约翰·霍普金斯肿瘤和细胞采购银行的Sidney Kimmel癌症中心提供，并得到区域肿瘤研究中心拨款2 P30 CA 006973-44的支持。使用Ficoll-Hypaque密度梯度离心从全血或骨髓中分离出单核细胞，并将其储存在含有10%二甲亚砜的FBS中的液氮中。使用时，冷冻样品迅速解冻，在培养基中孵育过夜，然后进行另一轮密度离心（添加DNA酶），以消除冻融循环中发生凋亡的细胞。FLT3突变状态如所述确定。46使用3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑（MTT）分析评估细胞毒性。19为了通过蛋白质印迹评估FLT3磷酸化，将患者来源的白血病母细胞在磷酸缓冲盐水中洗涤，然后在摇动的同时将其重新悬浮在裂解缓冲液（20 mM Tris，pH 7.4，100 mM NaCl，1%Igepal，1 mM EDTA，2 mM NaVO4，加完全蛋白酶抑制剂鸡尾酒）中30分钟进行裂解。通过在18000g下离心澄清裂解物，并测定上清液中的蛋白质（Bio-Rad）。将抗FLT3（S18）抗体加入提取物中，孵育过夜；然后再加入蛋白A琼脂糖2小时。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳并转移到Immobilon膜上后，用抗磷酸酪氨酸抗体（4G10）进行免疫印迹以检测磷酸化的FLT3，然后用抗FLT3抗体剥离和重定以测量总FLT3。使用增强化学发光法对蛋白质进行可视化。为了定量磷酸化FLT3水平，如“细胞测定”所述，通过ELISA测定细胞裂解物中的磷酸化FLT 3和总FLT3

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对于细胞FLT3自身磷酸化抑制实验，将MV4-11或RS4;11细胞在低血清培养基（0.5% FBS）中培养过夜。然后将细胞接种到96孔板中（每孔400,000个细胞），并在37°C下与抑制剂孵育2小时。对于RS4;11细胞，在最后15分钟加入FLT3配体（100 ng/mL）以诱导磷酸化。裂解细胞，将裂解液转移到预先包被了抗FLT3捕获抗体的96孔板中。使用抗磷酸酪氨酸抗体检测磷酸化的FLT3，使用生物素化的抗FLT3抗体检测总FLT3，随后使用SULFO标记的链霉亲和素二抗和电化学发光检测。[1]
对于细胞增殖实验，将MV4-11细胞在低血清培养基（0.5% FBS）中培养过夜，然后接种到96孔板中（每孔40,000个细胞）。加入抑制剂，细胞在37°C下孵育72小时。使用刃天青（Cell Titer-Blue）法测量细胞活力。[1]
对于原代AML原始细胞实验，使用密度梯度离心从患者血液或骨髓样本中分离单核细胞。对于活力实验，细胞用Quizartinib处理72小时，并使用MTT法评估细胞活力。对于磷酸化分析，细胞用Quizartinib处理1小时，然后裂解。通过Western blot（使用抗FLT3抗体免疫沉淀后）或通过更灵敏的基于电化学发光的ELISA方法（类似于上述细胞实验）定量磷酸化FLT3和总FLT3水平。[1]

配制于 22% 羟丙基-β-环糊精中；10 mg/kg；灌胃给药。雌性 NU/NU 或严重联合免疫缺陷小鼠，植入 MV4-11 细胞。
\n小鼠：所用小鼠为雌性 nu/NU 或严重联合免疫缺陷小鼠。Quizartinib（盐酸盐）配制于 22% 羟丙基-β-环糊精中，CEP-701 配制于 20% 的 Gelucire 44/14 水溶液（体积比）中，MLN-518 和 SU 11248 配制于 10 mM 柠檬酸钠溶液（pH 3.5）中，PKC-412 配制于 3:1 的 Gelucire 44/14-丙二醇溶液（体积比）中，Bay 43-9006 配制于 80% 的 PEG-400 溶液中。选择化合物浓度，并以 10 mL/kg 的体积给药，以达到预期剂量。采用灌胃法给药，并在给药后 0、25、0.5、1、2、4、6 和 24 小时采集血浆样本。为了获得三个独立的血浆浓度时间进程，对三组动物（每组三只）进行半纵向眼部采血（150 μL），每只动物采集两到三个时间点的样本。使用含有内标的乙腈溶液（体积为 4 倍）提取血浆样本和对照品（25 μL），并采用液相色谱串联质谱法进行分析。

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\n药代动力学研究[1]
\n雌性 NU/NU 或重症联合免疫缺陷小鼠购自 Charles River Laboratories 或 Harlan 公司。 AC220（盐酸盐）配制于22%羟丙基-β-环糊精溶液中，CEP-701配制于20% Gelucire 44/14水溶液（体积比）中，MLN-518和舒尼替尼配制于10 mM柠檬酸钠溶液（pH 3.5）中，PKC-412配制于3:1 Gelucire 44/14-丙二醇溶液（体积比）中，索拉非尼（甲苯磺酸盐）配制于80% PEG-400溶液中。化合物浓度的选择旨在以10 mL/kg的体积递送所需剂量。化合物通过灌胃给药，并在给药后0.25、0.5、1、2、4、6和24小时采集血浆样本。为了采集血浆样本，我们采用半纵向方法，对3组动物（每组3只）进行眼部采血（150 μL），每只动物采集2至3个时间点的样本，以获得3个独立的血浆浓度-时间曲线。血浆样本和对照样本（25 μL）用4倍体积的含内标的乙腈提取，并采用液相色谱串联质谱法进行分析。药代动力学参数的获得，是通过将归一化的液相色谱串联质谱峰面积拟合到非房室模型，并使用WinNonlin软件包中的线性梯形估计法进行拟合而获得的。Ambit的小鼠研究符合《实验动物饲养和使用指南》⁴⁵中关于保定、饲养、外科手术、饲料和液体控制以及兽医护理的建议。

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\n动物疗效研究[1]
\n皮下异种移植模型[1]
\n该模型由Ambit公司用于测定FLT3的体内抑制情况，并由Piedmont Research Center LLC公司用于测定抗肿瘤疗效，所有操作均遵循已发表的程序。化合物的配制和给药方法与药代动力学研究中所述相同。为测定FLT3抑制情况，在给药后2小时或24小时收集肿瘤组织，称重，并通过机械分离法裂解肿瘤细胞。将肿瘤裂解液以835g离心15分钟，去除蛋白质和组织碎片。使用“细胞检测”部分所述的基于电化学发光的酶联免疫测定法 (ELISA) 检测澄清的裂解液中的总 FLT3 和磷酸化 FLT3。

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\n骨髓移植模型。[1]
\n该模型按照已发表的程序进行。20 对于静脉骨髓移植，非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷小鼠在接受 150 mg/kg 环磷酰胺腹腔注射预处理前适应 2 周，环磷酰胺每日一次，连续 2 天。休息 48 小时后，将 5 × 10⁶ 个 MV4-11 细胞经尾静脉注射给动物。 AC220 的配制和给药方法与药代动力学研究中所述相同。

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\n在药代动力学研究中，Quizartinib（盐酸盐）配制成 22% 羟丙基-β-环糊精溶液。小鼠通过灌胃单次口服给药，剂量为 10 mL/kg。在给药后特定时间点采集血样进行血浆浓度分析。[1]
\n在皮下 MV4-11 异种移植瘤疗效研究中，荷瘤小鼠（肿瘤体积约为 200-250 mm³）每日一次口服 Quizartinib（10 mg/kg），持续 28 天。在治疗期间以及治疗结束后 60 天内监测肿瘤大小。 [1]
\n在骨髓移植疗效模型中，NOD/SCID小鼠预先接受环磷酰胺（150 mg/kg，腹腔注射，每日一次，连续2天）处理。休息48小时后，静脉注射5×10⁶个MV4-11细胞。23天后，开始每日一次口服Quizartinib（0.1、1或10 mg/kg）或载体，持续30天。监测小鼠的生存情况。[1]
\n在皮下异种移植模型中，FLT3抑制剂的药效学研究中，荷MV4-11肿瘤的小鼠接受单次口服Quizartinib（10 mg/kg）。分别在给药后2小时和24小时收集肿瘤组织，通过ELISA分析磷酸化FLT3和总FLT3的水平。[1]

吸收、分布和排泄
在健康受试者中，片剂形式的奎扎替尼的平均（标准差）绝对生物利用度为71%（±7%）。空腹口服给药后，健康受试者奎扎替尼和AC886的达峰时间（中位Tmax）分别约为4小时（范围2至8小时）和5至6小时（范围4至120小时）。在初诊急性髓系白血病患者中，每日一次服用35.4 mg奎扎替尼后，诱导治疗期间的Cmax和AUC0-24h分别为140 ng/mL（71%）和2,680 ng·h/mL（85%），巩固治疗期间的Cmax和AUC0-24h分别为204 ng/mL（64%）和3,930 ng·h/mL（78%）。在诱导治疗期间，代谢物 AC886 的 Cmax 和 AUC0-24h 分别估计为 163 ng/mL (52%) 和 3,590 ng·h/mL (51%)；在巩固治疗期间，则分别估计为 172 ng/mL (47%) 和 3,800 ng·h/mL (46%)。将奎扎替尼的每日一次剂量增加至 53 mg 后，奎扎替尼的 Cmax 和 AUC0-24h 在稳态时分别增加至 529 ng/mL (60%) 和 10,200 ng·h/mL (75%)。代谢物 AC886 的 Cmax 和 AUC0-24h 也分别增加至 262 ng/mL (48%) 和 5,790 ng·h/mL (46%)。与高脂高热量餐同服时，未观察到quizartinib药代动力学的临床显著差异。
健康受试者单次服用53 mg放射性标记的quizartinib后，76.3%的总放射性物质从粪便中回收（其中4%为原形），1.64%从尿液中回收。
健康受试者稳态分布容积估计为275 L（17%）。
健康受试者quizartinib的总清除率估计为2.23 L/小时（29%）。

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代谢/代谢物
体外研究表明，quizartinib主要通过CYP3A4/5氧化代谢，而AC886的生成和代谢也由CYP3A4/5完成。

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生物半衰期
平均（标准差）有效半衰期在接受维持治疗的新诊断急性髓系白血病 (AML) 患者中，quizartinib 和 AC886 的半衰期 (t1/2) 分别为 81 小时 (±73) 和 136 小时 (±113)。

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在小鼠中，单次口服 10 mg/kg 的Quizartinib后，血浆峰浓度 (Cmax) 达到 3.8 ± 0.4 µM（约 2100 ng/mL），达峰时间 (Tmax) 为 1.5 ± 0.9 小时。0 至 24 小时血浆浓度-时间曲线下面积 (AUC0-24h) 为 35 ± 4 µM×h。表观血浆半衰期约为 4 小时。[1]
在小鼠中，血浆暴露量（Cmax 和 AUC0-24h）与口服给药剂量呈正比增加，给药剂量范围为 0.1 至约 30 mg/kg。 [1]在大鼠中，Quizartinib的口服生物利用度约为40%（以3 mg/kg剂量比较口服和静脉给药）。[1]
小鼠血浆中Quizartinib的血浆蛋白结合率约为99%。[1]

肝毒性
在quizartinib治疗急性髓系白血病(AML)患者的上市前临床试验中，10%至16%的患者出现丙氨酸氨基转移酶(ALT)升高，其中1%至3%的患者ALT升高超过正常值上限(ULN)的5倍。然而，在未接受quizartinib治疗的化疗患者中也报告了类似的ALT升高发生率，且大多数情况下ALT升高是短暂的、无症状的，并且与血清胆红素升高无关。由于细菌、病毒和机会性感染，未经治疗的AML患者出现间歇性肝酶升高并不罕见。在quizartinib的注册试验中，虽然偶有急性肝损伤和肝功能衰竭的病例，但所有病例均归因于其他合并症和因素（多器官功能衰竭），与quizartinib无关。自在美国获批以来，尚未有与奎扎替尼治疗相关的临床明显肝损伤病例报告。
可能性评分：E（不太可能是临床明显肝损伤的原因）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无奎扎替尼在哺乳期临床应用的信息。由于奎扎替尼与血浆蛋白的结合率超过99%，因此其在乳汁中的含量可能很低。然而，制造商建议在接受 quizartinib 治疗期间以及末次给药后 1 个月内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
quizartinib 和 AC886 的体外血浆蛋白结合率均达到 99% 或更高。体外实验中，quizartinib 和 AC886 的血药浓度/血浆浓度比值分别为 0.79-1.30 和 1.36-3.19。

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在小鼠进行的 28 天皮下异种移植研究和 30 天骨髓移植研究中，使用剂量高达 10 mg/kg/天的 Quizartinib 治疗未引起明显的体重减轻或其他明显的毒性反应。[1]

[1]. AC220 is a uniquely potent and selective inhibitor of FLT3 for the treatment of acute myeloid leukemia (AML). Blood, 2009, 114(14), 2984-2992.

[2]. SYK is a critical regulator of FLT3 in acute myeloid leukemia. Cancer Cell. 2014 Feb 10;25(2):226-42.

[3]. PROTACs: great opportunities for academia and industry. Signal Transduct Target Ther. 2019 Dec 24;4:64.

药效学
在FLT3-ITD依赖性白血病小鼠模型中，奎扎替尼显示出抗肿瘤活性。体外研究表明，奎扎替尼是慢延迟整流钾电流（IKs）的主要抑制剂。在接受奎扎替尼治疗的急性髓系白血病（AML）患者中，女性患者每日剂量为90 mg，男性患者每日剂量为135 mg，疗程为28天。治疗后，磷酸化FLT3（pFLT3）和总FLT3（tFLT3）的中位水平分别从第1天的3312 RLU和5639 RLU下降至第8天的1235 RLU和142 RLU。此外，第1天ITD阳性患者的pFLT3水平显著高于非ITD阳性患者（p < 0.0001，Mann-Whitney检验）。然而，无论患者是否携带ITD突变，pFLT3水平均降低至相似水平。暴露-反应分析预测，在维持治疗期间，奎扎替尼26.5 mg和53 mg剂量水平下，达到稳态Cmax中位数时，QTcF间期中位数将呈浓度依赖性延长18和24 ms [双侧90%置信区间(CI)上限：21和27 ms]。

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奎扎替尼是一种第二代FLT3抑制剂，专门针对FLT3的高效性和选择性进行了优化，用于治疗急性髓系白血病(AML)。[1]
它是一种双芳基脲化合物。 [1]
通过 KinomeScan 定量分析，Quizartinib 的选择性谱显示其对主要属于 III 类受体酪氨酸激酶家族的少数激酶具有高度选择性，其选择性评分与其他已知的选择性激酶抑制剂（如伊马替尼和吉非替尼）相当。[1]
其药代动力学特征包括良好的口服吸收、剂量比例暴露量以及支持每日一次给药的半衰期，再加上其高效性和选择性，在当时的 FLT3 抑制剂中被认为是独一无二的，并符合临床 FLT3 抑制剂的理想特征。[1]

C29H34CL2N6O4S

633.59

632.174

C, 54.98; H, 5.41; Cl, 11.19; N, 13.26; O, 10.10; S, 5.06

1132827-21-4

1132827-21-4 (HCl);950769-58-1;

24889392

Typically exists as White to off-white solid at room temperature

6.893

137.63

2

8

8

40

849

0

CC(C)(C)C1=CC(=NC(=O)NC2=CC=C(C=C2)C3=CN4C5=C(C=C(C=C5)OCCN6CCOCC6)SC4=N3)NO1.Cl.Cl

CVWXJKQAOSCOAB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C29H32N6O4S/c1-29(2,3)25-17-26(33-39-25)32-27(36)30-20-6-4-19(5-7-20)22-18-35-23-9-8-21(16-24(23)40-28(35)31-22)38-15-12-34-10-13-37-14-11-34/h4-9,16-18H,10-15H2,1-3H3,(H2,30,32,33,36)

N-(5-tert-butyl-isoxazol-3-yl)-N'-{4-[7-(2-morpholin-4-yl-ethoxy)imidazo[2,1-b][1,3]benzothiazol-2-yl]phenyl}urea dihydrochloride

AC220 HCl or AC010220 HCl; AC220 diHCl; AC 220; AC-220 dihydrochloride; AC010220; Quizartinib dihydrochloride; 1132827-21-4; AC-220 dihydrochloride; vanflyta; quizartinib hydrochloride; AC 010220 (dihydrochloride); AC010220.2HCL; WK7Q6ZIZ10; AC-010220; AC 010220; AC010220

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

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