| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
In Ctns-/- MEFs, QX77 (48 hours) increases the expression levels of Rab11 [1]. Rab11-positive vector vesicles restored the high-motility transport phenotype of wild-type cells, and QX77 restored downregulated LAMP2A expression in Ctns-/-MEFs [1]. In cystine cells, treatment with the CMA activator QX77 prevented Rab11 downregulation and trafficking abnormalities. Additionally, LAMP2A's location on the lysosomal membrane is enhanced by QX77 treatment [1]. QX77 corrects the location of LAMP2A on the lysosomal membrane of cystine cells and dramatically promotes its relocalization to LAMP1-positive lysosomes in cystine cells [1]. QX77 restores the levels of resistance seen in wild-type cells while shielding cystine cells from oxidative damage caused by tert-butyl hydroperoxide. LAMP2A expression is required for QX77 to have an impact on cystine cell survival [1]. In D3 and E14 ES cells, QX77 (10 μM; 0, 3 or 6 days) downregulates pluripotency factors and AP responsiveness, increases LAMP2A expression, activates CMA, and partially loses typical ES cell shape [2].
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 Ctns-/- MEF 中，QX77（48 小时）可增加 Rab11 的表达水平 [1]。 Rab11 阳性载体囊泡恢复了野生型细胞的高运动性转运表型，QX77 恢复了 Ctns-/-MEF 中下调的 LAMP2A 表达 [1]。在胱氨酸细胞中，用 CMA 激活剂 QX77 治疗可防止 Rab11 下调和运输异常。此外，QX77 处理增强了 LAMP2A 在溶酶体膜上的定位 [1]。 QX77 纠正 LAMP2A 在胱氨酸细胞溶酶体膜上的位置，并显着促进其重新定位到胱氨酸细胞中的 LAMP1 阳性溶酶体 [1]。 QX77 恢复野生型细胞的耐药水平，同时保护胱氨酸细胞免受叔丁基过氧化氢引起的氧化损伤。 QX77 需要 LAMP2A 表达才能影响胱氨酸细胞存活 [1]。在 D3 和 E14 ES 细胞中，QX77（10 μM；0、3 或 6 天）下调多能因子和 AP 反应性，增加 LAMP2A 表达，激活 CMA，并部分失去典型的 ES 细胞形状 [2]。
使用浓度为 10 µM 的 QX77 处理小鼠胚胎干细胞系（D3 和 E14），导致多能性转录因子（Oct4, Sox2, Nanog）的表达下调和碱性磷酸酶（AP）活性降低，后者是未分化干细胞的标志物。 QX77 处理还诱导了胚胎干细胞特征性的致密集落形态的丧失。 这些效应与 QX77 对 CMA 的药理学激活作用一致，促进了胚胎干细胞的分化。[2] 用 CMA 激活剂 QX77 处理 Ctns−/− 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEFs) 48 小时，可诱导 Rab11 表达上调至野生型细胞水平。相比之下，染料木黄酮（一种 TFEB 激活剂）没有此效果。[1] 通过伪全内反射荧光显微镜 (pseudo-TIRFM) 进行的囊泡运输分析显示，与野生型细胞相比，Ctns−/− MEFs 中的 GFP-Rab11 阳性囊泡运动性降低。用 QX77 处理 Ctns−/− 细胞可挽救这一缺陷，恢复在野生型细胞中观察到的高运动性运输表型。这种挽救效应依赖于 LAMP2A 的表达，因为在用 shRNA 下调 LAMP2A 的 Ctns−/− 细胞中未观察到该效应。[1] 定量 PCR 分析显示，用 QX77 处理野生型和 Ctns−/− MEFs 48 小时，不会上调 Rab7 效应蛋白 RILP 的表达。相比之下，染料木黄酮处理会上调 RILP 表达。[1] 共聚焦显微镜分析表明，用 QX77 处理 Ctns−/− 细胞能显著增加 CMA 受体 LAMP2A 在 LAMP1 阳性溶酶体上的重新定位。[1] 细胞存活实验 (MTT) 表明，用 QX77 预处理 Ctns−/− MEFs 48 小时，可保护它们免受叔丁基过氧化氢 (100 μM) 诱导的氧化应激性细胞死亡。这种保护作用使存活率恢复到野生型细胞水平，并且依赖于 LAMP2A 的表达，因为 LAMP2A 敲低会阻止该效应。[1] |
| 细胞实验 |
Western Blot 分析 [2]
细胞类型： ES D3 细胞系； E14TG2a (E14) 细胞系 测试浓度： 10 μM 孵育时间： 3 或 6 天 实验结果： LAMP2A 表达增加，SOX2 和 Oct4 蛋白表达减少。 为了分析 Rab11 和 RILP 表达，用 QX77、染料木黄酮或载体 (DMSO) 处理野生型 (WT) 和 Ctns−/− 小鼠胚胎成纤维细胞 (MEFs) 48 小时。然后裂解细胞，并使用针对 Rab11、RILP 和 loading control 的特异性抗体通过蛋白质印迹法分析蛋白表达水平。[1] 为了进行 RILP mRNA 的 qRT-PCR 分析，从用 QX77 或载体处理 48 小时的 WT 和 Ctns−/− MEFs 中分离 RNA。将 RNA 反转录，并使用小鼠 Rilp 特异性引物和作为内参的 β-肌动蛋白 引物进行定量 PCR。[1] 为了进行囊泡运输研究，用 QX77 处理或未处理的 Ctns−/− MEFs 被转染 GFP-Rab11。使用伪全内反射荧光显微镜 (pseudo-TIRFM) 进行活细胞成像。每 300-500 毫秒采集一次图像，并使用专用软件追踪和分析 GFP-Rab11 阳性囊泡的运动以确定囊泡速度。[1] 为了分析 LAMP2A 的溶酶体定位，用 QX77 或载体处理 Ctns−/− 细胞一段时间（根据其他实验推断可能为 48 小时），然后固定并用针对内源性 LAMP1 和 LAMP2A 的抗体进行免疫染色。使用共聚焦显微镜获取图像，并使用图像分析软件量化 LAMP2A 与 LAMP1 阳性结构的共定位。[1] 对于细胞存活实验，将 Ctns−/− 和 WT MEFs 接种在 96 孔板中并培养 24 小时。然后在含有 10% 透析 FBS 的新鲜培养基中用 QX77 或载体 (DMSO) 预处理细胞 48 小时。随后，加入浓度为 100 μM 的氧化应激剂叔丁基过氧化氢。过夜孵育后，使用 MTT 法测定细胞活力。更换为含有 MTT 试剂的新鲜培养基，并在 37°C 下孵育 4 小时。然后溶解细胞，用酶标仪测量 560 nm 处的吸光度。减去无细胞孔的背景吸光度，并计算相对于未处理对照孔的存活百分比。[1] 为了评估 LAMP2A 依赖性，首先用针对小鼠 LAMP2A 的慢病毒 shRNA 感染 Ctns−/− MEFs 7 天以下调其表达。然后对这些细胞进行相同的 QX77 预处理和氧化应激挑战，随后进行上述 MTT 实验。[1] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
QX77 是一种分子伴侣介导的自噬 (CMA) 小分子激活剂。
在本研究中，QX77 被用作药理学工具，以验证增加 CMA 活性（模拟分化过程中观察到的上调）足以抑制小鼠胚胎干细胞的多能性并促进其分化。 QX77 的作用与强制过表达限速 CMA 受体 LAMP2A 的作用相似。[2] |
| 分子式 |
C16H13CLN2O2
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|---|---|---|
| 分子量 |
300.739622831345
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| 精确质量 |
300.066
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| CAS号 |
1798331-92-6
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
118129505
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| LogP |
2.9
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| tPSA |
50.7
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
21
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| 分子复杂度/Complexity |
419
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
ClC1C=CC2=C(C=1)OCC(C1C=CC(=CC=1)NC(C)=O)=N2
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| InChi Key |
PYCTUCLCTVWILY-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H13ClN2O2/c1-10(20)18-13-5-2-11(3-6-13)15-9-21-16-8-12(17)4-7-14(16)19-15/h2-8H,9H2,1H3,(H,18,20)
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| 化学名 |
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: 10 mg/mL (33.25 mM) in 50% PEG300 +50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3251 mL | 16.6257 mL | 33.2513 mL | |
| 5 mM | 0.6650 mL | 3.3251 mL | 6.6503 mL | |
| 10 mM | 0.3325 mL | 1.6626 mL | 3.3251 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
LAMP2A mislocalization is associated within vivoaccumulation and impaired CMA substrate lysosomal internalization in cystinosis.J BiolChem.2017 Jun 23;292(25):10328-10346. d |
CTNS regulates LAMP2A trafficking.J BiolChem.2017 Jun 23;292(25):10328-10346. d |
TFEB activation improves lysosomal trafficking and corrects the localization of LAMP2A in cystinotic cells.J BiolChem.2017 Jun 23;292(25):10328-10346. d |
Tepotinib hydrochloride monohydrate
BKN-1
NEO214
MJO445
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