| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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描述：R59022（R-59022；DKGI-I）是一种新型高效的DGKα抑制剂和5-羟色胺受体拮抗剂。它能抑制二酰甘油激酶，IC50值为2.8 μM。
| 靶点 |
Diacylglycerol Kinase: R59022 inhibits diacylglycerol kinase in human platelets. At 10 μM, it inhibits thrombin-induced phosphatidic acid formation by approximately 40%. At 100 μM, approximately 80% inhibition is observed. [2]
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| 体外研究 (In Vitro) |
R59-022（1分钟，10 μM）可增强血小板聚集[2]。R59-022（30 μM，0-60分钟）可促使嗜碱性粒细胞释放更多诺美汀[3]。在HeLa和U87细胞中，R59-022（40 μM，30分钟）可激活蛋白激酶C (PKC)[4]。在Vero细胞中，R59-022（0-10 μM，4小时）可破坏埃博拉病毒(EBOV)[5]。
抑制磷脂酸生成：R59022（1-100 μM）呈浓度依赖性地抑制凝血酶（1单位/mL）诱导的人血小板中[³²P]磷脂酸的生成。在10 μM浓度下，抑制率约为40% (p < 0.05)。在100 μM浓度下，抑制率约为80% (p < 0.01)。单独使用 R59022 (100 μM) 对静息状态下的 PA 含量没有显著影响。[2] 增强血小板聚集：在 10 次实验中的 9 次，R59022 (10 μM) 增强了亚最大浓度凝血酶 (0.03-0.1 单位/mL) 诱导的血小板聚集。该化合物不影响形态变化反应。[2] 增强 ATP 分泌：在使用荧光素-荧光素酶试剂的实验中，R59022 (10 μM) 增强了凝血酶刺激的血小板的 ATP 分泌。 [2] 5-羟色胺分泌增强：R59022 (10 μM) 显著使凝血酶剂量-反应曲线中 [³H]5-羟色胺分泌的曲线左移 (p < 0.05)，表明其增强了致密颗粒的分泌。[2] 40kDa 蛋白磷酸化增加：在阈值浓度凝血酶刺激的血小板中，R59022 (10 μM) 使 40kDa 蛋白（蛋白激酶 C 底物）的 [³²P] 磷酸化水平显著增加 338% (p < 0.01)。[2] 对 20kDa 蛋白磷酸化无影响：在凝血酶刺激的血小板中，R59022 (10 μM) 对 20kDa 蛋白（肌球蛋白轻链）的 [³²P] 磷酸化水平无显著影响。 [2] 二酰甘油生成增加：R59022 (10 μM) 显著增加了凝血酶 (0.1 单位/mL) 刺激的血小板中 [³H]二酰甘油的生成，从 1035 ± 53 增加到 1356 ± 116 (p < 0.05)。[2] 对肌醇磷酸酯生成无影响：R59022 (10 μM) 对凝血酶 (1 单位/mL) 诱导的 [³H]肌醇三磷酸酯生成无显著影响 (380 ± 81 vs. 355 ± 67)。 [2] 对细胞内钙动员无影响：R59022 (10 μM) 对凝血酶诱导的细胞内 Ca²⁺ 动员的剂量反应曲线（通过 fura2 荧光测定）无显著影响，无论是否存在细胞外 Ca²⁺。[2] 对 A23187 诱导的激活作用影响甚微：在 4 项实验中的 3 项中，R59022 (10 μM) 对吲哚美辛存在下阈值浓度钙离子载体 A23187 诱导的分泌或聚集无影响。在一项实验中观察到轻微的增强作用，但远低于凝血酶的作用。 [2] 高浓度下的形态变化：当浓度高于 10 μM 时，R59022 会导致光透射率降低，类似于凝血酶刺激引起的形状变化，这引发了人们对其在高浓度下特异性的担忧。[2] |
| 体内研究 (In Vivo) |
R 59-022（2 mg/kg，腹腔注射，12 天）显著延长了移植了 U87 GBM 细胞的 SCID 小鼠的中位生存期 [6]。
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| 酶活实验 |
纯化DGKα激酶活性测定：从过表达该酶的HeLa细胞中亲和纯化FLAG-DGKα。将PC、DAG（二油酰）和PS（摩尔比55:5:40）按以下方法制备脂质体：将脂质在氯仿中干燥，在缓冲液（50 mM MOPS，pH 7.5，100 mM NaCl，5 mM MgCl₂）中水化，经冻融循环，并通过100 nm聚碳酸酯滤膜挤出。在干燥前，将R59022以0.5或2.0 mol%的摩尔比加入到脂质体的氯仿溶液中。激酶反应体系包含缓冲液B、1 mM CaCl₂、1 mM DTT、纯化酶、4.75 mM脂质体，并以10 μL 10 mM [γ-³²P]ATP启动（最终体积100 μL）。反应在 25°C 下进行 15 分钟。活性测定以 32P 掺入 PA 为指标。[4]
细胞匀浆中的 DGK 活性：将 FLAG 标记的 DGK 同工酶瞬时转染至 HEK 293T 细胞。48 小时后，收集细胞并进行匀浆。激酶测定体系包含缓冲液 B、1 mM DTT、2 mM 脂质（PC:DAG:PS 脂质体，其中包含指定的 DAG 种类）以及 5 μg 匀浆蛋白。对于 DGKα 和 DGKβ，需添加 1 mM CaCl2。反应以 [γ-32P]ATP 启动。[4] 5-HTR 结合测定：放射性配体竞争结合测定由 NIMH 精神活性药物筛选项目进行。初筛使用 10 μM 化合物测定放射性配体结合的抑制率。对于抑制作用显著的受体，采用 Cheng-Prusoff 方程在二级测定中确定 Ki 值。进行功能测定（激动剂/拮抗剂）以确定其作用机制。[4] |
| 细胞实验 |
Western Blot 分析 [4]
细胞类型： HeLa 细胞 测试浓度： 40 μM 孵育时间： 30 分钟 实验结果： PKC 下游靶点的磷酸化水平增加了约 2.5 倍。 血小板制备：采集未服用药物的志愿者的血液，并使用无菌柠檬酸盐抗凝剂。通过 200g 离心 20 分钟获得富血小板血浆。在前列环素存在下，通过 800g 离心 10 分钟分离血小板。将血小板重悬于改良的Tyrode缓冲液（135 mM NaCl、12 mM NaHCO₃、2.8 mM KCl、0.35 mM NaH₂PO₄、1 mM MgCl₂、5 mM HEPES、5 mM葡萄糖，pH 7.3）中。在标记实验中，将血小板分别与[³²P]Pi（1 mCi/3 mL）孵育1小时，[³H]肌醇（50 μCi/mL）孵育3小时，[³H]5-羟色胺（10 μCi）孵育45-60分钟，[³H]花生四烯酸（50 μCi）孵育45-60分钟，或fura2 AM（6 μM）孵育45-60分钟，所有步骤均在富血小板血浆中进行，之后进行离心。所有实验均在吲哚美辛（10 μM）存在下进行。 [2] 聚集和分泌研究：实验在 Chronolog Lumi-aggregometer 中进行（终体积 0.5 mL，搅拌，37°C）。在加入凝血酶或 A23187 前 60 秒加入 R59022 或溶剂，血小板再静置 60 秒。ATP 分泌测定中加入荧光素-荧光素酶试剂（0.2 mg）。全程记录光透射率。[2] 磷脂酸和蛋白质磷酸化：对于 [³²P] 标记的血小板，取 50 μL 样品进行蛋白质磷酸化分析（SDS-PAGE，11% 凝胶）以终止反应，剩余部分转移至 1.8 mL 氯仿/甲醇 (1:2 v/v) 混合液中，通过薄层色谱法测定磷脂酸 (PA) 含量。 [2] 肌醇磷酸酯和二酰甘油：对于[³H]肌醇或[³H]花生四烯酸标记的血小板，反应通过转移至1.8 mL氯仿/甲醇/盐酸（体积比50:100:1）终止。肌醇磷酸酯通过Dowex阴离子交换色谱法分离。[³H]DG通过薄层色谱法测定，并与由血小板磷脂酶C孵育的磷脂酰肌醇制备的DG进行共色谱鉴定。[2] 5-羟色胺分泌：[³H]5-羟色胺分泌的测定方法如前所述。[2] 钙测定：Fura2研究在Perkin-Elmer单光束荧光分光光度计（型号LS-3）上进行，温度为37°C，并持续搅拌。激发波长为 350 或 380 nm，发射波长为 510 nm。细胞内 Ca²⁺ 浓度采用比值法或 Grynkiewicz 等人 [2] 描述的单波长读数法进行估算。 |
| 动物实验 |
动物/疾病模型： 植入 U87 GBM 细胞的 SCID（重症联合免疫缺陷）小鼠 [6]
剂量： 10 mg/kg 给药途径： 腹腔注射 (ip) 实验结果： 中位生存期延长，肿瘤体积缩小。 骨髓来源巨噬细胞分离：** 将小鼠安乐死，收集胫骨和股骨，离心获得骨髓细胞。过滤细胞，在 20% L929 条件培养基中分化为巨噬细胞 7 天。所有动物实验程序均经渥太华大学动物护理委员会批准。未进行体内药物剂量研究。 [5] 骨髓来源巨噬细胞的分离：将小鼠安乐死，收集胫骨和股骨，离心获得骨髓细胞。过滤细胞，在20% L929条件培养基中培养7天，诱导分化为巨噬细胞。所有动物实验程序均经渥太华大学动物护理委员会批准。未进行体内药物剂量研究。[5] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
高浓度下的特异性问题：当浓度高于 10 μM 时，R59022 会导致光透射率下降，类似于凝血酶刺激引起的形状变化，这引发了人们对高浓度下非特异性效应或选择性丧失的担忧。因此，功能研究的最大浓度设定为 10 μM。[2]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
6-[2-[4-[(4-氟苯基)-苯基亚甲基]-1-哌啶基]乙基]-7-甲基-5-噻唑并[3,2-a]嘧啶酮是一种二芳基甲烷化合物。
背景：R59022 是一种二酰甘油激酶抑制剂。本研究使用 R59022 来探讨蛋白激酶 C 和二酰甘油在凝血酶激活血小板中的作用。R59022 通过抑制二酰甘油激酶，阻止二酰甘油代谢为磷脂酸，从而导致二酰甘油积累并增强蛋白激酶 C 的激活。[2] 作用机制（原理）：本研究假设，如果二酰甘油是血小板激活中的第二信使，那么抑制其代谢应该能够增强血小板对亚最大剂量凝血酶刺激的反应，类似于甲基黄嘌呤增强 cAMP 介导的反应。研究结果支持这一假设。 [2] 磷脂酸作为第二信使的证据：该研究提供的证据表明，磷脂酸在血小板中不发挥第二信使的作用，因为 R59022 抑制了磷脂酸的生成，但并不影响 Ca²⁺ 动员，同时还能增强功能反应。[2] 10 μM 浓度下的选择性：该研究证实，10 μM 的 R59022 浓度低于诱导形态改变样效应的阈值，因此可作为血小板研究中 DG 激酶的相对选择性抑制剂。[2] |
| 分子式 |
C27H26FN3OS
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|---|---|
| 分子量 |
459.58
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| 精确质量 |
459.178
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| CAS号 |
93076-89-2
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| 相关CAS号 |
R 59-022 hydrochloride;93076-98-3
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| PubChem CID |
3012
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.26g/cm3
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| 沸点 |
619.8ºC at 760mmHg
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| 闪点 |
328.6ºC
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| 折射率 |
1.654
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| LogP |
5.281
|
| tPSA |
65.85
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
5
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| 重原子数目 |
33
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| 分子复杂度/Complexity |
868
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
O=C1N2C(SC=C2)=NC(C)=C1CCN1CC/C(=C(\C2C=CC(F)=CC=2)/C2C=CC=CC=2)/CC1
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| InChi Key |
MFVJXLPANKSLLD-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C27H26FN3OS/c1-19-24(26(32)31-17-18-33-27(31)29-19)13-16-30-14-11-22(12-15-30)25(20-5-3-2-4-6-20)21-7-9-23(28)10-8-21/h2-10,17-18H,11-16H2,1H3
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| 化学名 |
6-[2-[4-[(4-fluorophenyl)-phenylmethylidene]piperidin-1-yl]ethyl]-7-methyl-[1,3]thiazolo[3,2-a]pyrimidin-5-one
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| 别名 |
R59022 R 59022 R-59022
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~62.5 mg/mL (~135.99 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1759 mL | 10.8795 mL | 21.7590 mL | |
| 5 mM | 0.4352 mL | 2.1759 mL | 4.3518 mL | |
| 10 mM | 0.2176 mL | 1.0879 mL | 2.1759 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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ζ-Stat (NSC37044)
PKCη pseudosubstrate inhibitor,myristoylated
PKCβII Peptide Inhibitor I
PKCε (85-92)
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