RAF265 (CHIR-265) 中文名称: RAF 265

别名: RAF 265; RAF265; CHIR-265; CHIR 265; RAF-265; CHIR265 1-甲基-5-[[2-[5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基]-4-吡啶]氧基]-N-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-苯并咪唑-2-胺; 1-甲基-5-[[2-[5-(三氟甲基)-1H-咪唑-2-基]-4-吡啶基]氧基]-N-[4-(三氟甲基)苯基]-1H-苯并咪唑-2-胺; RAF265 (CHIR-265)

目录号: V0511 纯度: ≥98%

COA 产品数据产品说明书 SDS

RAF265（以前也称为 CHIR265；RAF 265；RAF-265）是一种口服生物可利用的多激酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。

RAF265 (CHIR-265) CAS号: 927880-90-8
产品类别: VEGFR

产品仅用于科学研究，不针对患者销售

规格	价格	库存	数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

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纯度: ≥98%

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产品描述

RAF265（以前也称为 CHIR265；RAF 265；RAF-265）是一种口服生物可利用的多激酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。它抑制多种激酶，如 BRAFV600E、BRAF（野生型）、c-RAF、VEGFR2、PDGFR、CSF 1R、RET、c-KIT、SRC 和 STE20，IC50 范围为 3-60 nM。 RAF26 在 BRAFV600E 黑色素瘤和结直肠癌异种移植模型中表现出优异的体外抗增殖活性和高体内抗肿瘤功效。

生物活性&实验参考方法

靶点	VEGFR2 (EC50 = 30 nM); B-Raf (IC50 = 3 nM-60 nM)
体外研究 (In Vitro)	体外活性：RAF265 抑制 C-Raf、野生型 B-Raf 和突变型 (V600E) B-Raf。 RAF265 有效阻断细胞中 Rafs 下游底物 MEK 和 ERK 的磷酸化，还可以杀死含有 B-Raf 突变的黑色素瘤和结直肠癌细胞系，而与 PTEN 突变状态无关。在突变 B-Raf 黑色素瘤细胞系中，RAF265 抑制 Raf 激酶会导致细胞周期停滞并诱导细胞凋亡，模拟这些细胞中 Raf RNAi 的作用。 RAF265 还有效抑制 VEGFR2 的磷酸化和 VEGF 刺激的 hMVEC 的增殖。在 HT29 和 MDAMB231 细胞中，RAF265 显示抑制活性，IC20 为 1 至 3 μM，IC50 为 5 至 10 μM。虽然 RAF265 导致所有测试细胞系的克隆存活率显着下降，这意味着 RAF265 对克隆存活率产生显着影响。在 HCT116 细胞中将 RAF265 添加到 RAD001 可能会导致 AKT、S6 蛋白和 4EBP1 磷酸化适度降低。 Raf265显着降低Bcl-2蛋白水平，对CM-和NCI-H727细胞有很强的抑制作用，而对BON1和GOT1细胞的TRAIL敏感性没有影响。当蛋白激酶 D3 (PRKD3) 被敲低时，可以增强 A2058 黑色素瘤细胞中 RAF265 的细胞杀伤作用，从而防止 MAPK 信号重新激活、诱导 PARP 裂解、增加 caspase 活性、中断细胞周期进程并抑制集落形成。激酶测定：Raf 和 Mek 在测定缓冲液（50 mM Tris，pH 7.5，15 mM MgCl2。0.1 mM EDTA 和 1 mM DTT）中以 2 × 最终浓度混合，并在聚丙烯测定板中每孔分配 15 μL。背景水平在含有 Mek 和 DMSO 且不含 Raf 的孔中测定。向含有 Raf/Mek 的孔中添加 3 μL 用 100% DMSO 稀释的 10 × RAF265。通过每孔添加 12 μL 在测定缓冲液中稀释的 2.5 × 33P-ATP 来启动 raf 激酶活性反应。 45-60 分钟后，添加 70 μL 终止试剂 (30 mM EDTA) 终止反应。将过滤板用 70% 乙醇预润湿 5 分钟，然后用洗涤缓冲液过滤进行漂洗。然后将反应孔中的样品 (90 μL) 转移至过滤板。使用 Millipore 过滤装置，用洗涤缓冲液将过滤板洗涤 6 次。将板干燥并每孔添加 100 μL 闪烁液。然后使用 Wallac Microbeta 1450 读数器确定 CPM。细胞测定：MTT测定和Bliss加性模型用于评估RAF265对细胞活力的影响。在 96 孔板的每个孔中，1 × 104 个细胞在 200 μL 培养基中生长。 24小时后，添加RAF265以达到0.1至10μM的终浓度。处理 48 小时后，向每孔中添加 20 μL 5 mg/mL MTT PBS 溶液。 4小时后，除去上清液并将甲臜晶体丢弃在200μL DMSO中。然后使用吸光度板读数器在 595 nm 处测量吸光度。数据表示为活细胞的百分比。
体内研究 (In Vivo)	RAF265 在 12 mg/kg 的 HCT116 异种移植物中显示出 71% 至 72% TVI%（肿瘤体积抑制百分比）。 RAF265 和 RAD001 的组合显示出增强的抗肿瘤活性，并增加了 T10（相对肿瘤体积达到初始肿瘤体积 10 倍的时间）和肿瘤生长延迟。 RAD001 和 RAF265 的组合还显着增强了 HCT116 和 MDAMB231 中 caspase-3 的激活，但在 A549 异种移植物中则不然。 RAF265 口服 100 mg/kg 剂量可抑制 FDG（2-脱氧-2-[18F]氟-d-葡萄糖）积累并减少 A375M 异种移植物中的肿瘤体积。
酶活实验	在测定缓冲液（50 mM Tris、pH 7.5、15 mM MgCl₂、0.1 mM EDTA 和 1 mM DTT）中，Raf 和 Mek 以 2 × 最终浓度混合。然后将 15 μL 分配到聚丙烯测定板的每孔中。测量含有 Mek 和 DMSO 但不含 Raf 的孔中的背景水平。将 3 μL 用 100% DMSO 稀释的 10 × RAF265 添加到含有 Raf/Mek 的孔中。要启动 raf 激酶活性反应，请在测定缓冲液中每孔添加 12 μL 稀释的 2.5 × ³³P-ATP。 45-60 分钟后，通过添加 70 μL 终止试剂 (30 mM EDTA) 来终止反应。用 70% 乙醇预润湿五分钟后，用洗涤缓冲液冲洗过滤板。随后，将样品 (90 μL) 从反应孔移至过滤板。使用Millipore过滤装置用洗涤缓冲液洗涤过滤板六次。板干燥后，每孔加入 100 μL 闪烁液。之后，使用 Wallac Microbeta 1450 读取器计算 CPM。
细胞实验	Bliss 加法模型和 MTT 测定用于评估 RAF265 如何影响细胞活力。 96 孔板的每孔中总共有 1 × 10⁴ 细胞在 200 μL 培养基中生长。为了达到 0.1 至 10 μM 的终浓度，24 小时后添加 RAF265。 48 小时处理期后，向每个孔中添加 20 μL 5 mg/mL MTT PBS 溶液。 4小时后提取上清液，将甲臜晶体置于200μL DMSO中。接下来，使用吸光度板读数器在 595 nm 处测量吸光度。活细胞的百分比用于表达数据。
动物实验	Mice: In vivo testing is also done to evaluate the combination's effectiveness. The flank region of 6-week-old female athymic mice receives a single subcutaneous injection of 3×10⁶ A549, H460, HCT116, or MDAMB231 cells. Treatment options for the mice are vehicle, RAD001 (12 mg/kg daily), RAF265 (12 mg/kg daily), or both, and they are randomized into four groups (n=7/group) once the tumors reach 50 mm3. The drug combination is administered concurrently, and all medications are administered over a period of 14 days (6 days on, 2 days off, and 6 days on). Both drugs are given to control mice in their appropriate delivery systems. Tumor volumes and animal weights are recorded twice a week, and the results are expressed in relation to the original tumor volume. It is recorded how long it takes for a tumor to reach a relative volume ten times its initial volume. Tumor growth curve, growth delay, and percentage of tumor volume inhibition are used to evaluate the efficacy of drugs. To show how the relative tumor size has changed over time, a tumor growth curve is used. An algorithm is used to compute the tumor volume inhibition percentage (TVI%).
参考文献	[1]. AACR Meeting Abstracts 2008;2008:4876. [2]. Mol Cancer Ther . 2010 Feb;9(2):358-68. [3]. Endocr Relat Cancer . 2011 Mar 21;18(2):277-85. [4]. Cancer Res . 2011 Jun 15;71(12):4280-91. [5]. Neoplasia . 2011 Mar;13(3):266-75.
其他信息	1-methyl-5-[[2-[5-(trifluoromethyl)-1H-imidazol-2-yl]-4-pyridinyl]oxy]-N-[4-(trifluoromethyl)phenyl]-2-benzimidazolamine is an aromatic ether. B-Raf/VEGFR-2 Inhibitor RAF265 is an orally bioavailable small molecule with potential antineoplastic activity. CHIR-265 binds and inhibits Raf kinases, which may result in a reduction of tumor cell growth and proliferation, and tumor cell death. In addition, this agent inhibits vascular endothelial growth factor receptor type 2 (VEGFR-2), thereby disrupting tumor angiogenesis. Raf kinases are critical enzymes in the Ras/Raf/MEK/ERK signaling pathway and are frequently upregulated in neoplasms. Drug Indication Investigated for use/treatment in melanoma. Mechanism of Action CHIR-265 binds and inhibits Raf kinases, which may result in a reduction of tumor cell growth and proliferation, and tumor cell death. In addition, this agent inhibits vascular endothelial growth factor receptor type 2 (VEGFR-2), thereby disrupting tumor angiogenesis. Raf kinases are critical enzymes in the Ras/Raf/MEK/ERK signaling pathway and are frequently upregulated in neoplasms.

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C24H16F6N6O
分子量	518.41
精确质量	518.128
元素分析	C, 55.60; H, 3.11; F, 21.99; N, 16.21; O, 3.09
CAS号	927880-90-8
相关CAS号	927880-90-8;
PubChem CID	11656518
外观&性状	White to khaki solid powder
密度	1.5±0.1 g/cm3
沸点	667.6±65.0 °C at 760 mmHg
闪点	357.5±34.3 °C
蒸汽压	0.0±2.0 mmHg at 25°C
折射率	1.622
LogP	6.03
tPSA	80.65
氢键供体(HBD)数目	2
氢键受体(HBA)数目	11
可旋转键数目(RBC)	5
重原子数目	37
分子复杂度/Complexity	763
定义原子立体中心数目	0
SMILES	FC(C1C=CC(NC2N(C)C3C(=CC(=CC=3)OC3C=C(C4NC(C(F)(F)F)=CN=4)N=CC=3)N=2)=CC=1)(F)F
InChi Key	YABJJWZLRMPFSI-UHFFFAOYSA-N
InChi Code	InChI=1S/C24H16F6N6O/c1-36-19-7-6-15(10-17(19)34-22(36)33-14-4-2-13(3-5-14)23(25,26)27)37-16-8-9-31-18(11-16)21-32-12-20(35-21)24(28,29)30/h2-12H,1H3,(H,32,35)(H,33,34)
化学名	1-methyl-5-[2-[5-(trifluoromethyl)-1H-imidazol-2-yl]pyridin-4-yl]oxy-N-[4-(trifluoromethyl)phenyl]benzimidazol-2-amine
别名	RAF 265; RAF265; CHIR-265; CHIR 265; RAF-265; CHIR265
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)

DMSO: ~100 mg/mL (~192.9 mM)

Water: <1 mg/mL

Ethanol: ~33 mg/mL (~63.6 mM)

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.93 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入到 400 μL PEG300 中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: 1 mg/mL (1.93 mM) in 10% EtOH + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入 900 μL 20% SBE-β-CD 生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 1 mg/mL (1.93 mM) in 10% EtOH + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 EtOH 储备液添加到 900 μL 玉米油中并充分混合。

配方 4 中的溶解度: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 30 mg/kg

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	1.9290 mL	9.6449 mL	19.2898 mL
	5 mM	0.3858 mL	1.9290 mL	3.8580 mL
	10 mM	0.1929 mL	0.9645 mL	1.9290 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息

NCT Number	Recruitment	interventions	Conditions	Sponsor/Collaborators	Start Date	Phases
NCT01352273	Completed	Drug: MEK162 + RAF265	Advanced Solid Tumors	Array Biopharma, now a wholly owned subsidiary of Pfizer	June 2011	Phase 1
NCT00304525	Completed	Drug: RAF265	Metastatic Melanoma	Novartis Pharmaceuticals	April 2006	Phase 1 Phase 2

生物数据图片