HDAC1 (IC50 = 0.31 nM); HDAC3 (IC50 = 0.83 nM); HDAC6 (IC50 = 71.8 nM); HDAC8 (IC50 = 877 nM)
Resminostat hydrochloride (Resminostat [HCl], 5 μM) causes histone acetylation in myeloma cells. With a mean K_i value of 27 nM, resminostat hydrochloride exhibits a substrate competitive binding mode. In myeloma cells, resminostat hydrochloride (5 μM) causes histone hyperacetylation. Resminostat suppresses MM cell proliferation, triggers apoptosis, and prevents cell growth. Additionally, resminostat (5 μM) inhibits signalling downstream of Akt and modifies the expression of proteins in the bcl-2 family. When combined with both established and novel anti-myeloma agents, resminostat exhibits synergistic activity against myeloma cells[1]. Resminostat shows IC50s ranging from 0.775 μM to 1.572 μM (IC50 for SCC25: 0.775 μM, CAL27: 1.572 μM, and FaDu: 0.899 μM) in head and neck squamous cell carcinoma cell lines, indicating that it inhibits cell growth. HNSCC cell lines respond well to both irradiation and resminostat (1.25 and 2.5 μM). One can downregulate survivin by combining resminostat with cisplatin. On Mcl-1 and p-AKT expression, however, Resminostat has no effect[2]. With IC50s ranging from 0.89 ± 0.12 μM to 0.07 ± 0.01 μM, respinostat decreases the viability of HCC cells when used in conjunction with AZD-2014[3].

体外活性：Resminostat [HCl] 是重组 HDAC 1、3 和 6 同工酶的有效抑制剂，具有底物竞争性结合模式。它可以诱导 MM 细胞中组蛋白 H4 的过度乙酰化。低微摩尔浓度的resminostat可抑制MM细胞系（OPM-2、NCI-H929、U266）以及原代MM细胞的细胞生长并强烈诱导细胞凋亡。 1 μM 的 resminostat 可抑制 OPM-2、NCI-H929、U266 MM 细胞系的增殖并诱导 G0/G1 细胞周期停滞，同时伴有细胞周期蛋白 D1、cdc25a、Cdk4 和 pRb 水平降低以及 p21 上调。 Resminostat 降低 4E-BP1 和 p70S6k 的磷酸化，表明对 Akt 通路信号传导的干扰。使用 resminostat 治疗会导致 Bim 和 Bax 蛋白水平升高，并降低 Bcl-xL 水平。 Caspases 3、8 和 9 由 resminostat 激活。此外，观察到瑞米诺他与美法仑以及蛋白酶体抑制剂硼替佐米和S-2209的组合具有协同效应。激酶测定：含有 HDAC1、3、6 或 8 活性的 40 微升酶缓冲液（15 mM Tris HCl pH 8.1、0.25 mM EDTA、250 mM NaCl、10% v:v 甘油）、29 μL 酶缓冲液和 1 μL resminostat [HCl ] 以不同浓度添加到 96 孔微量滴定板中，并通过添加 30μL 底物肽 Ac-NH-GGK(Ac)-AMC 开始反应（HDAC1、3 和 6 测定，HDAC1 的最终浓度为 6 μM，10μM对于 HDAC6，25μM 对于 HDAC3/DAD）或 Ac-RHK(Ac)K(Ac)-AMC（HDAC8 测定，终浓度 50 μM）。 30°C 孵育 180 分钟（HDAC1、HDAC6、HDAC8）或 120 分钟（HDAC3）后，通过添加 25 μL 终止溶液（50 mM Tris HCl pH 8、100 mM NaCl、0.5 mg/ ml 胰蛋白酶和 2 μM 曲古抑菌素 A [TSA]）。在室温下再孵育 40 分钟后，使用多标记计数器（消光 355 nm，发射 460 nm）测量荧光，以对脱乙酰肽的胰蛋白酶裂解产生的 AMC 进行定量。为了计算 50% 抑制浓度 (IC50) 值，将不含测试化合物（1% DMSO，阴性对照）的孔中的荧光设置为 100% 酶活性，并将含有 2 μM TSA（阳性对照）的孔中的荧光设置为0% 酶活性（扣除背景荧光）。细胞测定：使用 OPM-2、NCI-H929、RPMI-8226 和 U266 细胞进行 WST-1 测定。

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Resminostat HCl 以浓度依赖的方式抑制多发性骨髓瘤 (MM) 细胞系 (OPM-2, NCI-H929, RPMI-8226, U266) 的生长。在四个细胞系中的三个中，作用48-96小时后的生长抑制IC50值约为2.5至3 μmol/L。[1]
Resminostat HCl (0.5 - 10 μmol/L, 48小时) 能强烈诱导MM细胞系和患者原代MM细胞凋亡 (通过annexin-V/PI染色评估)。在10 μmol/L浓度下，某些细胞系的凋亡率高达93%，原代细胞的凋亡率高达90%。[1]
Resminostat HCl (5 或 10 μmol/L, 48小时) 在MM细胞系 (OPM-2, U266) 中诱导caspase 3, 8, 9的切割/激活。[1]
Resminostat HCl (最高10 μmol/L, 72小时) 强烈抑制MM细胞增殖，在BrdU掺入实验中抑制率高达92%。[1]
Resminostat HCl (1 μmol/L) 在四个MM细胞系中的三个 (OPM-2, NCI-H929, U266) 中诱导G0/G1期细胞周期阻滞。在10 μmol/L浓度下，导致细胞在subG1期聚集。[1]
Western blot分析显示，用Resminostat HCl (5 μmol/L)处理U266细胞会导致cyclin D1、Cdk4、磷酸化Rb (p-Rb)、cdc25a和p53的下调，以及p21的上调。[1]
Resminostat HCl (5 μmol/L) 处理U266细胞降低了Akt通路下游效应因子4E-BP1和p70S6k的磷酸化水平。[1]
Resminostat HCl (5 μmol/L) 处理调节了U266细胞中Bcl-2家族蛋白的表达，增加了促凋亡蛋白Bim和Bax的水平，同时降低了抗凋亡蛋白Bcl-xL的水平。[1]
Resminostat HCl (5 μmol/L) 诱导U266骨髓瘤细胞中组蛋白H4的过度乙酰化，证实了其在细胞内的HDAC抑制活性。[1]
联合作用研究表明，当Resminostat HCl与马法兰、硼替佐米或蛋白酶体抑制剂S-2209联合用于U266细胞时，通过等效线图法分析显示具有协同效应 (联合指数 CI < 0.9)。[1]

在 14 天的周期中连续 d1−5 口服 600 mg QD 的 resminostat 耐受性良好。 Resminostat 显示出良好的 PK 特性，具有高生物利用度和低点间变异性。口服resminostat的表观t 1/2 范围为2.7至4.4小时。血浆生物标志物的调节进一步表明药物活性。

96 孔微量滴定板中装有 40 微升含有 HDAC1、3、6 或 8 活性的酶缓冲液（15 mM Tris HCl pH 8.1、0.25 mM EDTA、250 mM NaCl、10% v:v 甘油），29 微升酶缓冲液和 1 微升不同浓度的 resminostat [HCl]。通过添加 30 微升底物肽 Ac-NH-GGK(Ac)-AMC 启动反应（HDAC1、3 和 6 测定，HDAC1 的终浓度为 6 μM，HDAC6 的终浓度为 10 μM，HDAC3/DAD 的终浓度为 25 μM）或 Ac-RHK(Ac)K(Ac)-AMC（HDAC8 测定，终浓度 50 μM）。酶孵育 180 分钟后（HDAC1、 HDAC6、HDAC8) 或 120 分钟 (HDAC3)，30°C。在室温孵育另外 40 分钟后，使用 Wallac Victor2 1420 多标记计数器（消光 355 nm，发射 460 nm）对脱乙酰肽的胰蛋白酶裂解产生的 AMC 进行定量。将不含测试化合物（1% DMSO，阴性对照）的孔中的荧光设置为 100% 酶活性，以计算 50% 抑制浓度 (IC50) 值，而含有 2 μM TSA（阳性对照）的孔中的荧光为设置为 0% 酶活性（扣除背景荧光）[1]。

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对于HDAC抑制实验，使用重组HDAC酶 (HDAC1, 3, 6, 8)。将含有酶和不同浓度Resminostat HCl的酶缓冲液加入微孔板。通过加入荧光底物肽 (HDAC1, 3, 6使用Ac-NH-GGK(Ac)-AMC；HDAC8使用Ac-RHK(Ac)K(Ac)-AMC) 启动反应。在30°C孵育 (120-180分钟) 后，加入含有胰蛋白酶和曲古抑菌素A的终止液终止反应。测量脱乙酰肽经胰蛋白酶切割产生的荧光 (激发光355 nm，发射光460 nm)。IC50值相对于对照 (无抑制剂=100%活性，曲古抑菌素A=0%活性) 计算得出。[1]
对于HDAC1酶动力学和Ki测定，将含有HDAC1和不同浓度Resminostat HCl的酶缓冲液在板中混合。通过加入不同终浓度 (10-100 μmol/L) 的底物肽启动反应。在30°C孵育60分钟后，终止反应并测量荧光。使用Lineweaver-Burk图和线性回归分析数据以确定抑制常数 (Ki)。Resminostat HCl对HDAC1显示底物竞争性结合模式。[1]

使用 CCK-8 细胞增殖测定法检查 resminostat 对 HNSCC 细胞的抗增殖作用。每孔 3 × 10⁵ 细胞接种到 96 孔板中。细胞生长24小时后，分别或一起用resminostat和顺铂处理，然后孵育72小时。作为对照，未处理的细胞保存在含有等量二甲亚砜的 RPMI 中。 CCK-8用于测量72小时后的细胞增殖。三次，每个实验一式三份进行[2]。

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对于细胞生长抑制实验 (WST-1法)，将MM细胞系接种并用递增浓度的Resminostat HCl孵育48或96小时。加入四唑盐WST-1，经过进一步孵育后，通过测量450 nm (参比690 nm) 处的吸光度来量化由代谢活跃细胞产生的甲臜染料。[1]
对于细胞凋亡分析，用Resminostat HCl处理的细胞用annexin-V-FITC和碘化丙啶 (PI) 染色，并通过流式细胞术分析。[1]
对于细胞周期分析，处理后的细胞用乙醇固定，用PI和RNase A染色，并通过流式细胞术分析DNA含量。[1]
对于细胞增殖实验 (BrdU掺入)，将细胞接种在96孔板中，并用Resminostat HCl处理约57小时。然后加入BrdU标记液，细胞再培养15小时。固定细胞，使DNA变性，并使用抗BrdU-POD抗体和TMB显色底物检测掺入的BrdU。在450 nm处测量吸光度。[1]
对于Western blot分析，裂解细胞并测定蛋白质浓度。通过SDS-PAGE分离蛋白质，转印至膜上，封闭并与一抗孵育过夜。洗涤后，膜与过氧化物酶偶联的二抗孵育，并使用化学发光法检测信号。[1]

MM异种移植小鼠模型实验方案：将5×10⁶个U266 MM细胞皮下注射到6-8周龄雌性SCID小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100 mm³时，将小鼠随机分为两组（每组n=6）：对照组（腹腔注射0.9%生理盐水，每日一次）和Resminostat（RAS2410）组（腹腔注射50 mg/kg Resminostat（RAS2410），溶于0.9%生理盐水，每日一次）。治疗持续21天。每3天测量一次肿瘤体积（使用游标卡尺，公式：体积=长×宽²/2）和小鼠体重。治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤并称重。收集肿瘤组织进行免疫组织化学和Western blot分析。监测小鼠存活情况 60 天，以计算中位生存时间 [1]

[1]. The novel inhibitor of histone deacetylase resminostat (RAS2410) inhibits proliferation and induces apoptosis in multiple myeloma (MM) cells. Br J Haematol. 2010 May;149(4):518-28.

[2]. Effect of the histone deacetylase inhibitor resminostat on head and neck squamous cell carcinoma cell lines. Head Neck. 2017 May;39(5):900-907.

p>[3]. mTOR inhibition sensitizes human hepatocellular carcinoma cells to resminostat. Biochem Biophys Res Commun. 2016 Sep 2;477(4):556-562.

瑞斯米诺司他（Resminostat，RAS2410）是一种新型的基于羟肟酸的组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂。其化学结构与伏立诺他（vorinostat）的不同之处在于连接区和疏水帽区域，而金属结合的羟肟酸部分则相同。[1]
瑞斯米诺司他盐酸盐（Resminostat HCl）通过抑制细胞增殖、诱导细胞周期阻滞和凋亡、调节细胞周期和凋亡相关蛋白以及干扰Akt下游的Akt/mTOR信号通路，展现出强大的体外抗骨髓瘤活性。[1]
体外实验观察到，瑞斯米诺司他盐酸盐与传统抗骨髓瘤药物（美法仑）和新型抗骨髓瘤药物（硼替佐米、S-2209）联合使用时具有协同效应，这支持了其在联合治疗中的潜在应用。[1]

C16H20CLN3O4S

385.86

385.086

C, 49.80; H, 5.22; Cl, 9.19; N, 10.89; O, 16.59; S, 8.31

1187075-34-8

Resminostat;864814-88-0

16662815

White to off-white solid powder

3.579

100.02

3

5

6

25

548

0

Cl[H].S(C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])C([H])([H])N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])(N1C([H])=C([H])C(/C(/[H])=C(\[H])/C(N([H])O[H])=O)=C1[H])(=O)=O

BVXPKDRKHXARHY-HAAWTFQLSA-N

InChI=1S/C16H19N3O4S.ClH/c1-18(2)11-13-3-6-15(7-4-13)24(22,23)19-10-9-14(12-19)5-8-16(20)17-21;/h3-10,12,21H,11H2,1-2H3,(H,17,20);1H/b8-5+;

(E)-3-[1-[4-[(dimethylamino)methyl]phenyl]sulfonylpyrrol-3-yl]-N-hydroxyprop-2-enamide;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (5.39 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (5.39 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。