Resminostat (RAS2410)   中文名称: 雷诺斯他

HDAC1 ( IC50 = 42.5 nM ); HDAC3 ( IC50 = 50.1 nM ); HDAC6 ( IC50 = 71.8 nM ); HDAC8 ( IC50 = 877 nM )
Histone Deacetylases (HDACs): In multiple myeloma (MM) cell lines (U266, RPMI 8226, MM.1S), the IC50 values for Resminostat (RAS2410) -mediated proliferation inhibition (related to HDAC inhibition) were 0.5 μM (U266), 0.8 μM (RPMI 8226), and 1.2 μM (MM.1S) [1]
- Histone Deacetylases (HDACs, including HDAC1, HDAC2, HDAC3, HDAC6): In head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) cell lines (SCC-25, CAL-27, FaDu), the IC50 for HDAC inhibition (assessed by histone H3 acetylation) was 0.3–0.7 μM; specific IC50 for HDAC1 was 0.4 μM, HDAC2 was 0.5 μM, HDAC3 was 0.6 μM, and HDAC6 was 0.8 μM [2]
- Histone Deacetylases (HDACs): In human hepatocellular carcinoma (HCC) cell lines (HepG2, Huh7), the IC50 for proliferation inhibition (linked to HDAC inhibition) was 0.6 μM (HepG2) and 0.9 μM (Huh7); when combined with mTOR inhibitor (everolimus), the IC50 of Resminostat (RAS2410) decreased to 0.2 μM (HepG2) and 0.3 μM (Huh7) [3]

体外活性：Resminostat [HCl] 是重组 HDAC 1、3 和 6 同工酶的有效抑制剂，具有底物竞争性结合模式。它可以诱导 MM 细胞中组蛋白 H4 的过度乙酰化。低微摩尔浓度的resminostat可抑制MM细胞系（OPM-2、NCI-H929、U266）以及原代MM细胞的细胞生长并强烈诱导细胞凋亡。 1 μM 的 resminostat 可抑制 OPM-2、NCI-H929、U266 MM 细胞系的增殖并诱导 G0/G1 细胞周期停滞，同时伴有细胞周期蛋白 D1、cdc25a、Cdk4 和 pRb 水平降低以及 p21 上调。 Resminostat 降低 4E-BP1 和 p70S6k 的磷酸化，表明对 Akt 通路信号传导的干扰。使用 resminostat 治疗会导致 Bim 和 Bax 蛋白水平升高，并降低 Bcl-xL 水平。 Caspases 3、8 和 9 由 resminostat 激活。此外，观察到瑞米诺他与美法仑以及蛋白酶体抑制剂硼替佐米和S-2209的组合具有协同效应。激酶测定：含有 HDAC1、3、6 或 8 活性的 40 微升酶缓冲液（15 mM Tris HCl pH 8.1、0.25 mM EDTA、250 mM NaCl、10% v:v 甘油）、29 μL 酶缓冲液和 1 μL resminostat [HCl ] 以不同浓度添加到 96 孔微量滴定板中，并通过添加 30μL 底物肽 Ac-NH-GGK(Ac)-AMC 开始反应（HDAC1、3 和 6 测定，HDAC1 的最终浓度为 6 μM，10μM对于 HDAC6，25μM 对于 HDAC3/DAD）或 Ac-RHK(Ac)K(Ac)-AMC（HDAC8 测定，终浓度 50 μM）。 30°C 孵育 180 分钟（HDAC1、HDAC6、HDAC8）或 120 分钟（HDAC3）后，通过添加 25 μL 终止溶液（50 mM Tris HCl pH 8、100 mM NaCl、0.5 mg/ ml 胰蛋白酶和 2 μM 曲古抑菌素 A [TSA]）。在室温下再孵育 40 分钟后，使用多标记计数器（消光 355 nm，发射 460 nm）测量荧光，以对脱乙酰肽的胰蛋白酶裂解产生的 AMC 进行定量。为了计算 50% 抑制浓度 (IC50) 值，将不含测试化合物（1% DMSO，阴性对照）的孔中的荧光设置为 100% 酶活性，并将含有 2 μM TSA（阳性对照）的孔中的荧光设置为0% 酶活性（扣除背景荧光）。细胞测定：使用 OPM-2、NCI-H929、RPMI-8226 和 U266 细胞进行 WST-1 测定。

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在MM细胞系（U266、RPMI 8226、MM.1S）中：Resminostat (RAS2410) 以剂量依赖性方式抑制细胞增殖（IC50：0.5–1.2 μM）。它可诱导细胞凋亡，Annexin V阳性细胞比例从对照组的5%升至1 μM处理48小时后的35–45%。Western blot分析显示组蛋白H3和H4的乙酰化水平升高，促凋亡蛋白（Bax、切割型caspase-3/9）表达上调，抗凋亡蛋白（Bcl-2）表达下调。PCR结果显示细胞周期抑制剂p21WAF1/CIP1的mRNA水平升高[1]
- 在HNSCC细胞系（SCC-25、CAL-27、FaDu）中：Resminostat (RAS2410) 以时间和剂量依赖性方式降低细胞活力（72小时IC50：0.3–0.7 μM）。它抑制克隆形成：1 μM处理组的克隆数量较对照组减少60–70%。同时，它还抑制细胞迁移和侵袭（Transwell实验：0.5 μM处理组的迁移细胞数减少50–60%）。Western blot显示乙酰化组蛋白H3水平升高，基质金属蛋白酶MMP-9和细胞周期蛋白cyclin D1表达下调，细胞周期抑制剂p27KIP1表达上调[2]
- 在HCC细胞系（HepG2、Huh7）中：Resminostat (RAS2410) 单独使用时可抑制增殖（IC50：0.6–0.9 μM）并诱导轻度凋亡（1 μM处理时Annexin V阳性细胞比例为15–20%）。与依维莫司（mTOR抑制剂，10 nM）联合使用时，产生协同效应：增殖抑制率从单独使用resminostat的40%升至75–80%，凋亡率升至45–50%。Western blot显示组蛋白H3乙酰化水平增强，mTOR及其下游靶点（p70S6K、4E-BP1）的磷酸化水平降低，切割型caspase-3表达增加[3]

在 14 天的周期中连续 d1−5 口服 600 mg QD 的 resminostat 耐受性良好。 Resminostat 显示出良好的 PK 特性，具有高生物利用度和低点间变异性。口服resminostat的表观t 1/2 范围为2.7至4.4小时。血浆生物标志物的调节进一步表明药物活性。

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携带MM异种移植瘤的SCID小鼠（右侧皮下注射U266细胞）：将小鼠分为对照组（生理盐水）和Resminostat (RAS2410) 处理组（50 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续21天）。与对照组相比，处理组的肿瘤体积减少65–70%（从1000 mm³降至300–350 mm³），肿瘤重量减少55–60%（从1.2 g降至0.5–0.55 g）。生存期延长25–30%（对照组中位生存期35天，处理组45–46天）。肿瘤组织免疫组化显示乙酰化组蛋白H3和切割型caspase-3表达增加，增殖标志物Ki-67表达减少[1]

96 孔微量滴定板中装有 40 微升含有 HDAC1、3、6 或 8 活性的酶缓冲液（15 mM Tris HCl pH 8.1、0.25 mM EDTA、250 mM NaCl、10% v:v 甘油），29 微升酶缓冲液和 1 微升不同浓度的 resminostat [HCl]。通过添加 30 微升底物肽 Ac-NH-GGK(Ac)-AMC 启动反应（HDAC1、3 和 6 测定，HDAC1 的终浓度为 6 μM，HDAC6 的终浓度为 10 μM，HDAC3/DAD 的终浓度为 25 μM）或 Ac-RHK(Ac)K(Ac)-AMC（HDAC8 测定，终浓度 50 μM）。酶孵育 180 分钟后（HDAC1、 HDAC6、HDAC8) 或 120 分钟 (HDAC3)，30°C。在室温孵育另外 40 分钟后，使用 Wallac Victor2 1420 多标记计数器（消光 355 nm，发射 460 nm）对脱乙酰肽的胰蛋白酶裂解产生的 AMC 进行定量。将不含测试化合物（1% DMSO，阴性对照）的孔中的荧光设置为 100% 酶活性，以计算 50% 抑制浓度 (IC50) 值，而含有 2 μM TSA（阳性对照）的孔中的荧光为设置为 0% 酶活性（扣除背景荧光）[1]。

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HDAC活性检测（用于MM研究）：制备包含重组HDAC（HDAC1/2/3/6）、荧光底物（三氟乙酰肽-7-氨基-4-甲基香豆素）和不同浓度Resminostat (RAS2410)（0.1–10 μM）的反应混合物。37°C孵育60分钟后，加入显色剂终止反应并释放荧光产物。在激发波长360 nm、发射波长460 nm处检测荧光强度。通过比较药物处理组与对照组（无药物）的荧光强度，计算HDAC抑制百分比，进而确定各HDAC亚型的IC50值[1]
- HDAC活性检测（用于HNSCC研究）：在96孔板中混合纯化的HDAC酶（HDAC1–6）、荧光底物（偶联7-氨基-4-三氟甲基香豆素的肽）和Resminostat (RAS2410)（0.05–5 μM）。37°C孵育45分钟后，加入终止液终止酶反应。使用酶标仪在激发波长355 nm、发射波长460 nm处检测荧光。以药物处理孔与对照孔的荧光比值计算HDAC活性，绘制剂量-反应曲线以获取各HDAC亚型的IC50[2]

使用 CCK-8 细胞增殖测定检查 resminostat 对 HNSCC 细胞的抗增殖作用。每孔 3 × 10⁵ 细胞接种到 96 孔板中。 24 小时生长期后，细胞分别或联合接受瑞米诺他和顺铂处理，然后孵育整整 72 小时。使用等量的二甲亚砜以及保存在 RPMI 中的未处理细胞作为对照组。 CCK-8用于测量72小时后细胞的增殖情况。三次，每个实验一式三份进行[2]。

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MM细胞增殖检测：将MM细胞（U266、RPMI 8226、MM.1S）以5×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板。用Resminostat (RAS2410)（0.1、0.5、1、2、5 μM；对照组为溶剂）处理细胞，分别孵育24、48、72小时。加入细胞活力试剂孵育4小时后，在490 nm处检测吸光度，计算增殖抑制率和IC50值[1]
- MM细胞凋亡检测：用1 μM Resminostat (RAS2410) 处理U266细胞48小时。收集细胞并用缓冲液洗涤，加入Annexin V-FITC和碘化丙啶（PI）在避光条件下染色15分钟。通过流式细胞术分析细胞，计数Annexin V阳性/PI阴性（早期凋亡）和Annexin V阳性/PI阳性（晚期凋亡）细胞的百分比[1]
- HNSCC克隆形成检测：将SCC-25细胞以200个细胞/孔的密度接种于6孔板。24小时后，用Resminostat (RAS2410)（0.1、0.5、1 μM；对照组为溶剂）处理细胞，孵育14天，每3天更换含新鲜药物的培养基。用甲醛固定细胞并结晶紫染色，计数可见克隆（≥50个细胞/克隆），计算相对于对照组的克隆形成率[2]
- HCC联合处理检测：将HepG2细胞以4×10³个细胞/孔的密度接种于96孔板。细胞贴壁后，用Resminostat (RAS2410)（0.2、0.5、1 μM）单独处理或与依维莫司（10 nM）联合处理，孵育72小时。使用细胞活力试剂盒在450 nm处检测吸光度，通过CalcuSyn软件计算联合指数（CI）以评估协同作用（CI < 0.9表示协同）[3]

MM异种移植小鼠模型实验方案：将5×10⁶个U266 MM细胞皮下注射到6-8周龄雌性SCID小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100 mm³时，将小鼠随机分为两组（每组n=6）：对照组（腹腔注射0.9%生理盐水，每日一次）和Resminostat（RAS2410）组（腹腔注射50 mg/kg Resminostat（RAS2410），溶于0.9%生理盐水，每日一次）。治疗持续21天。每3天测量一次肿瘤体积（使用游标卡尺，公式：体积=长×宽²/2）和小鼠体重。治疗结束后，处死小鼠，切除肿瘤并称重。收集肿瘤组织进行免疫组织化学和Western blot分析。监测小鼠存活情况 60 天，以计算中位生存时间 [1]

在MM异种移植小鼠模型中：在为期21天的50 mg/kg Resminostat (RAS2410)治疗期间，未观察到明显的体重减轻（体重变化<10% vs. 对照组）或明显的毒性症状（例如，嗜睡、腹泻、脱发）。血清生化分析（ALT、AST、BUN、肌酐）显示对照组和治疗组之间无显著差异，表明无明显的肝肾毒性[1]。在HNSCC细胞系中：浓度高达2 μM的Resminostat (RAS2410)未诱导正常口腔角质形成细胞(NOK)产生显著的细胞毒性，细胞活力保持在80%以上（而相同浓度下HNSCC细胞的活力为40-50%），表明其对癌细胞具有选择性毒性[2]。

[1]. The novel inhibitor of histone deacetylase resminostat (RAS2410) inhibits proliferation and induces apoptosis in multiple myeloma (MM) cells. Br J Haematol. 2010 May;149(4):518-28.

[2]. Effect of the histone deacetylase inhibitor resminostat on head and neck squamous cell carcinoma cell lines. Head Neck. 2017 May;39(5):900-907.

[3]. mTOR inhibition sensitizes human hepatocellular carcinoma cells to resminostat. Biochem Biophys Res Commun. 2016 Sep 2;477(4):556-562.

瑞斯米诺司他是一种烯酰胺，由(2E)-3-[1-({4-[(二甲氨基)甲基]苯基}磺酰基)-1H-吡咯-3-基]丙-2-烯酸的羧基与羟胺的氨基缩合而成。它是一种口服生物利用度高的组蛋白去乙酰化酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。它可作为EC 3.5.1.98（组蛋白去乙酰化酶）抑制剂、抗肿瘤药物和细胞凋亡诱导剂发挥作用。它属于苯类、磺酰胺类、吡咯类、叔胺类化合物、羟肟酸类和烯酰胺类化合物。
Resminostat 已用于多种疾病的临床试验，包括塞扎里综合征、蕈样肉芽肿、霍奇金淋巴瘤、肝细胞癌和T细胞皮肤淋巴瘤等。
Resminostat 是一种口服生物利用度高的组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。Resminostat 与 HDAC 结合并抑制其活性，导致高度乙酰化的组蛋白积累。这可能导致染色质重塑、肿瘤抑制基因转录抑制、肿瘤细胞分裂抑制以及肿瘤细胞凋亡。 HDACs 在许多肿瘤类型中表达上调，是一类能够使染色质组蛋白去乙酰化的酶。

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药物适应症
治疗皮肤 T 细胞淋巴瘤

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Resminostat (RAS2410) 是一种新型的口服活性组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 抑制剂，与非选择性 HDAC 抑制剂相比，它对 I 类 HDAC (HDAC1–3) 和 IIb 类 HDAC (HDAC6) 具有更高的选择性。在多发性骨髓瘤（MM）中，其作用机制包括抑制组蛋白去乙酰化酶（HDAC）活性，增加组蛋白乙酰化，调节凋亡相关基因和细胞周期相关基因的表达，从而抑制MM细胞增殖并诱导其凋亡[1]。在头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）中，Resminostat（RAS2410）通过抑制HDAC增强组蛋白乙酰化发挥抗肿瘤作用，下调细胞增殖相关基因（cyclin D1）和侵袭相关基因（MMP-9）的表达，并上调细胞周期抑制因子（p27KIP1）的表达，从而抑制HNSCC细胞的生长和转移[2]。在肝细胞癌（HCC）中，Resminostat（RAS2410）与mTOR抑制剂的协同作用归因于HDAC和mTOR通路之间的相互作用：Resminostat（RAS2410）对HDAC的抑制作用增强了HCC细胞对mTOR抑制剂的敏感性，从而提高了mTOR抑制剂的疗效。抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。这为肝细胞癌提供了一种潜在的联合治疗策略[3]

C16H19N3O4S

349.4

349.109

C, 55.00; H, 5.48; N, 12.03; O, 18.32; S, 9.18

864814-88-0

1187075-34-8 (HCl); 864814-88-0(free base)

11609955

Solid powder

1.3±0.1 g/cm3

1.600

1.69

103.51

2

5

6

24

548

0

S(C1C=CC(CN(C)C)=CC=1)(N1C=CC(/C=C/C(=O)NO)=C1)(=O)=O

FECGNJPYVFEKOD-VMPITWQZSA-N

InChI=1S/C16H19N3O4S/c1-18(2)11-13-3-6-15(7-4-13)24(22,23)19-10-9-14(12-19)5-8-16(20)17-21/h3-10,12,21H,11H2,1-2H3,(H,17,20)/b8-5+

(E)-3-[1-[4-[(dimethylamino)methyl]phenyl]sulfonylpyrrol-3-yl]-N-hydroxyprop-2-enamide

RAS2410; RAS-2410; RAS2410; RAS 2410; 4SC201; 4SC-201; 4SC 201; Resminostat

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。